專(zhuān)利名稱：植物性保肝劑及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物性保肝劑及其制造方法，特別是關(guān)于一種從羽萼木(Colerbrookea oppositifolia)的植物分離具有高度肝臟保護(hù)作用的純麥角甾苷(Acteoside)的方法，此方法的步驟包括干燥植物地花莖葉；將干燥部分磨成粉末；利用水或乙醇將粉末浸提3～4次以獲得萃出物；過(guò)濾萃出物以清除懸浮顆粒而獲得上清液；約45至55℃下干燥上清液以獲得殘留物；依續(xù)以氯仿、醋酸乙酯和丁醇分餾殘留物；將甲醇加入分餾液之后取丁醇分餾液進(jìn)行SiO2的吸附層析；將經(jīng)吸附的分餾液置入玻璃管柱內(nèi)；以漸增極性的甲醇∶氯仿的溶劑洗提管柱而獲得進(jìn)一步的分餾液并重復(fù)一次此步驟；將此分餾液進(jìn)行管柱層析而獲得分餾液；在減壓下濃縮分餾液而獲得麥角甾苷的殘留物，以及利用羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，此方法的步驟包括投與病人適當(dāng)?shù)蛣┝康柠溄晴捃铡?br> 背景技術(shù)：
根據(jù)報(bào)告苯乙醇(phenylethanoids)是存在于植物如肉蓯蓉(Cistanche deserticola)和揚(yáng)波(Buddleja species)內(nèi)的化合物(QuanboXing，Koji Hase等人，Planta Medica，64，120～125(1998)；Peter J.Houghton和Hiroshi Hikino，Planta Medica，第55卷，123～126(1989))。
作者第一次從羽萼木中分離出苯乙醇—毛蕊花糖苷(verbascoside)(亦稱為麥角甾苷或臭梧桐苷(kusaginin))并且發(fā)現(xiàn)其在極低的劑量下(1.25和2.5毫克/公斤之間)對(duì)大鼠和小白鼠具有極強(qiáng)的抗肝毒/肝保護(hù)活性。
從羽萼木的文獻(xiàn)中已報(bào)告存在多種的類(lèi)黃酮(flavonoids)和類(lèi)黃酮醇(glycoflavonoids)[S.Aziz Ahmed，S.A.Siddiqui和Asif Zaman，Indian J.Chemistry 121327～28(1974)；S.A.Patwardhan和A.S.Gupta，Indian J.Chemistry，20B，627(1981)；Fan Yank，Xing-Li，HAN-Qing Wang和Chong-Ren Yang，Phytochemistry 42867～69(1996)]。然而，第一次報(bào)告從這些植物中發(fā)現(xiàn)麥角甾苷。
較早曾報(bào)告此植物以睪丸細(xì)胞族群活動(dòng)力作為參考對(duì)雄性大鼠具有抗生殖活性(R.S.gupta，R.J.Yadav，V.P.Dixit和M.P.Dobhal，F(xiàn)itoterapia，72236～45(2001))。
但是亦報(bào)告可從其它兩種植物即肉蓯蓉和揚(yáng)波分離出具有肝保護(hù)/抗肝毒活性的麥角甾苷(毛蕊花糖苷)。(Quanbo Xing，Koji Hase等人，Planta Medica，64120～125(1998)；Peter J.Houghton和HiroshiHikino，Planta Medica，第55卷，123～126(1989))，然而本發(fā)明報(bào)告其不僅可取自不同的來(lái)源即羽萼木亦可在大鼠中使用1.5至2.5毫克/公斤的極低劑量即獲得所需的活性。
已報(bào)告麥角甾苷在活體外及體內(nèi)均具有如上述的肝保護(hù)/抗肝毒活性(Quanbo Xing，Koji Hase等人，Planta Medica，64120～125(1998))。但是本發(fā)明分離自迄今未曾報(bào)告的來(lái)源的麥角甾苷則為具有低于先前技術(shù)約12至25倍劑量的抗肝毒性/肝保護(hù)活性的化合物(Quanbo Xing，Koji Hase等人，Planta Medica，64120～125(1998))；Peter J.Houghton和Hiroshi Hikino，Planta Medica，第55卷，123～126(1989))。此外，先前報(bào)告中的評(píng)估參數(shù)僅限于ALT(體內(nèi))和AST和MDA(活體外)而本發(fā)明則使用可明確判定任何影響麥角甾苷對(duì)肝保護(hù)或抗肝毒性產(chǎn)品的效果的全部重要參數(shù)。
比較先前技術(shù)中的報(bào)告低劑量麥角甾苷即具有活性的理由為使用特殊的分離方法以產(chǎn)生較高純度的產(chǎn)品。已知植物化學(xué)物質(zhì)內(nèi)的污染物會(huì)嚴(yán)重影響純活性化合物的活性，雖然其可能為協(xié)同作用，然而，在先前技術(shù)中并未述及或指示。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的為從羽萼木(Colerbrookea oppositifolia)的植物分離出肝臟保護(hù)劑。
本發(fā)明的另一目的為提供一種從羽萼木的植物分離麥角甾苷(Acteoside)的方法。
又本發(fā)明的另一目的為提供一種利用羽萼木保護(hù)病人肝臟的方法。
具有上述優(yōu)點(diǎn)的本件植物性保肝劑及其制造方法，是為一種從羽萼木植物分離具有高度肝臟保護(hù)作用的純麥角甾苷的方法，該方法的步驟包括干燥植物的花莖葉；將干燥部分磨成粉末；利用水或乙醇將粉末浸提3～4次以獲得萃出物；過(guò)濾萃出物以清除懸浮顆粒而獲得上清液；約45至55℃下干燥上清液以獲得殘留物；依續(xù)以氯仿、醋酸乙酯和丁醇分餾殘留物；將甲醇加入分餾液之后取丁醇分餾液進(jìn)行SiO2的吸附層析；將經(jīng)吸附的分餾液置入玻璃管柱內(nèi)；以漸增極性的甲醇∶氯仿的溶劑洗提管柱而獲得進(jìn)一步的分餾液并重復(fù)一次此步驟；將此分餾液進(jìn)行管柱層析而獲得分餾液；在減壓下濃縮分餾液而獲得麥角甾苷的殘留物，以及利用羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，該方法的步驟包括投與病人適當(dāng)?shù)蛣┝康柠溄晴捃铡?br> 在本發(fā)明的一具體例中，其中從羽萼木植物分離具有高度肝臟保護(hù)作用的純麥角甾苷的方法包括下列步驟
●干燥植物的花莖葉；
●將干燥部分磨成粉末；
●利用水或乙醇將粉末浸提3～4次以獲得萃出物；
●過(guò)濾萃出物以清除懸浮顆粒而獲得上清液；
●約45至55℃下干燥上清液以獲得殘留物；
●依續(xù)以氯仿、醋酸乙酯和丁醇分餾殘留物；
●將甲醇加入分餾液之后取丁醇分餾液進(jìn)行SiO2的吸附層析；
●將經(jīng)吸附的分餾液置入玻璃管柱內(nèi)；
●以漸增極性的甲醇∶氯仿的溶劑洗提管柱而獲得進(jìn)一步的分餾液并重復(fù)一次此步驟；
●將此分餾液進(jìn)行管柱層析而獲得分餾液；
●在減壓下濃縮分餾液而獲得麥角甾苷的殘留物。
在本發(fā)明的另一具體例中，其中藉由此方法獲得的麥角甾苷比較從其它來(lái)源獲得者顯示具有低于12至25倍劑量的肝保護(hù)活性。
又本發(fā)明的另一具體例中，其中萃出物為水和酒精萃出物。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷占總萃出物約1.0％(重量)。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中利用羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，該方法的步驟包括投與病人適當(dāng)?shù)蛣┝康柠溄晴捃铡?br> 在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中投與劑量為0.5至10.0毫克/公斤體重。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷是從經(jīng)口(P.O.)的途徑投與。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低血清麩醯胺酸丙酮酸轉(zhuǎn)化酶(GPT)的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低血清麩醯胺酸草酸轉(zhuǎn)化酶(GOT)的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低血清堿性磷酸酶(ALP)的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低血清膽紅素的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低血清三酸甘油酯(TG)的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可降低脂肪過(guò)氧化酶(LP)的濃度的異常上升。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可增加白蛋白的濃度的異常降低。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷可增加還原型麩胺基硫(GSH)的濃度的異常降低。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷的藥效約為市售肝臟保護(hù)劑的10至20倍。
在仍為本發(fā)明的另一具體例中，其中麥角甾苷對(duì)抗肝毒性約提供40～85％的保護(hù)作用。
本發(fā)明是關(guān)于第一次從從羽萼木的植物分離出及報(bào)告在極低的劑量下具有抗肝毒/肝保護(hù)活性的稱為毛蕊花糖苷的苯乙醇—亦稱為麥角甾苷或臭梧桐苷。
本發(fā)明述及分離毛蕊花糖苷的特殊方法以及說(shuō)明其在極低劑量下對(duì)抗不同毒素的抗肝毒/肝保護(hù)活性。
本發(fā)明的作者第一次報(bào)告從羽萼木的植物分離出麥角甾苷(毛蕊花糖苷)的活性化合物。以類(lèi)似文獻(xiàn)中(Phytochemistry 211123～1127(1982))報(bào)告的1H；和13C核磁共振儀(NMR)確認(rèn)作者所分離的麥角甾苷的可靠性。
實(shí)施例的附件-1中說(shuō)明從各種植物萃出物(95％酒精；50％酒精及水)分離麥角甾苷的方法。
確認(rèn)純度的HPLC圖形揭示于圖1。
利用附件-2的綜合性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)生物學(xué)檢測(cè)化合物的肝保護(hù)/抗肝毒活性。在生物學(xué)檢測(cè)中利用檢測(cè)套組(意大利Clonital公司和占那市Accurex生物醫(yī)藥公司)以試驗(yàn)參數(shù)測(cè)定其生物學(xué)效力及最適劑量。各種參數(shù)列舉于附件-2。附件-3為就不同參數(shù)比較水飛薊素(silymarin)和甘草甜素(glycyrrhizin)的標(biāo)準(zhǔn)藥物而言的劑量反應(yīng)圖。
各種劑量的麥角甾苷比較標(biāo)準(zhǔn)藥物即水飛薊素和甘草甜素，及所需對(duì)照的生物學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)附于本發(fā)明的表1。圖2和表1清楚顯示投與肝毒素CCl4之后受影響的全部參數(shù)以劑量1.25毫克至5毫克/公斤的麥角甾苷可使其恢復(fù)至正常的濃度。參考本發(fā)明使用的全部參數(shù)麥角甾苷提供的整體保護(hù)的百分比通常為從40～80％，并且其甚至優(yōu)于10～20倍麥角甾苷劑量的水飛薊素。
本發(fā)明的麥角甾苷可達(dá)到保護(hù)作用的最適劑量為介于1.25毫克/公斤至2.5毫克/公斤之間。在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，除1.25毫克/公斤和5毫克/公斤的劑量比較數(shù)據(jù)之外，三種劑量即1.25、2.5和5毫克/公斤之間并無(wú)顯著性意義(表2)。較高劑量即2.5毫克/公斤和5毫克/公斤之間無(wú)可觀察的統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性意義。同時(shí)，在1.25和2.5毫克/公斤之間以類(lèi)似的方法觀察均具有極佳的劑量效應(yīng)。


請(qǐng)參閱以下有關(guān)本發(fā)明一較佳實(shí)施例的詳細(xì)說(shuō)明及其附圖，將可進(jìn)一步了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容及其目的功效；有關(guān)該實(shí)施例的附圖為
圖1為確認(rèn)純度的HPLC圖2為麥角甾苷、水飛薊素和甘草甜素的肝保護(hù)活性(％)的比較；
表1為麥角甾苷在嚙齒類(lèi)預(yù)防中對(duì)抗CCl4導(dǎo)致的肝損傷的肝臟保護(hù)效力圖表；
表2為麥角甾苷各種劑量間的顯著性分性圖表。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
將干燥羽萼木植物的花莖葉(500公克)研磨成粗粉末。以95％乙醇浸提粉末14小時(shí)。利用總量為9公升的95％乙醇(3.0+2.0+2.0+2.0公升，四次萃取)重復(fù)四次萃取過(guò)程。收集全部四次萃出物并過(guò)濾以清除懸浮顆粒。在50±5℃下將上清液于刮膜式蒸發(fā)器上蒸發(fā)干燥。獲得萃取值為12％的60.0公克殘留物(編號(hào)RJM/0862/P08/A001)。依續(xù)以CHCl3、EtOAc和n-BuOH(各2×1公升)分餾萃取。在溶于少量甲醇內(nèi)之后將15.0公克n-BuOH的萃取物在SiO2凝膠的100～200網(wǎng)孔(100公克)上進(jìn)行吸附層析。完全移除溶劑而獲得流體物質(zhì)。將經(jīng)吸附的分餾液置入37.5毫米玻璃管柱內(nèi)。以CHCl3內(nèi)漸增MeOH百分率的溶劑洗提管柱。收集各100毫升的105件分餾液并利用8∶1∶1的EtOAc∶HCOOH∶H2O作為流動(dòng)相進(jìn)行薄膜色層分析(TLC)。噴灑新鮮制備的硼酸鹽-PEG 4000溶液[MeOH內(nèi)2-胺乙基聯(lián)苯硼酸鹽的1％溶液及EtOH內(nèi)聚乙二醇4000的5％溶液(噴灑前以1∶1體積/體積比例混合)使其顯影。收集七件具有相同TLC圖形的分餾液，干燥并利用100～200網(wǎng)孔的凝膠管柱(1∶20比例)再進(jìn)行層析及以漸增極性的CHCl3∶MeOH混合物進(jìn)行洗提。收集各200毫升的全部60件分餾液。干燥在TLC上收集的八件分餾液并再一次進(jìn)行管柱色層分析。收集各100毫升的30件分餾液。在減壓下濃縮六件分餾液。利用MeOH/CHCl3結(jié)晶殘留物而獲得可溶于MeOH的無(wú)色非晶形粉末。在Rf值0.42(溶劑系統(tǒng)EtOAc∶HCOOH∶H2O為8∶1∶1)發(fā)現(xiàn)的化合物編號(hào)為862-II。利用下列的操作環(huán)境以HPLC測(cè)定862-II的純度
管柱RP-18e(E-Merck公司，5微米，4.6×250毫米)，于流動(dòng)相乙腈(B)∶水內(nèi)的1.5％醋酸(A)；
流速1毫升/分鐘；
λmax335奈米。
此化合物為根據(jù)NMR(1H和13C)及FABMS數(shù)據(jù)所確認(rèn)的麥角甾苷。
實(shí)施例2
研磨羽萼木植物的干燥花莖葉(500公克)并以50％含水乙醇浸提四次(50％EtOH，4×2.5公升)分別為每次14小時(shí)。收集全部四次的萃出物。離心收集的含水萃出物，在50±5℃下將透明上清液于刮膜式蒸發(fā)器上蒸發(fā)干燥。殘留物(90公克)編號(hào)為RJM/0862/P08/A002(萃取值18％)然后依續(xù)以CHCl3、EtOAc和n-BuOH進(jìn)行分餾。n-BuOH萃出物在CHCl3內(nèi)以梯度MeOH的硅凝膠管柱(60～120網(wǎng)孔)進(jìn)行層析。將CHCl3∶MeOH(5∶1)析出物利用CHCl3-MeOH∶H2O(6∶1∶0.1)作為溶劑以硅凝膠(100～200網(wǎng)孔)管柱再次進(jìn)行層析。收集TLC上均質(zhì)化的分餾液，干燥并置于葡聚糖凝膠Sephadex LH-20管柱以MeOH浸提而產(chǎn)生各500毫升的分餾液。將含主要標(biāo)的化合物(862-II)的第二種分餾液進(jìn)一步在Sephadex LH-20上純化。以MeOH∶H2O(3∶2)浸提的管柱產(chǎn)生一分餾液，其利用MeOH/CHCl3結(jié)晶而產(chǎn)生可溶于MeOH的無(wú)色非晶形粉末，Rf值為0.42(溶劑系統(tǒng)EtOAc∶HCOOH∶H2O為8∶1∶1)。利用下列的操作環(huán)境根據(jù)862-II的HPLC進(jìn)行萃出物RJM/0862/P08/A002的標(biāo)準(zhǔn)化
管柱RP-18e(E-Merck公司，5微米，4.6×250毫米)，于
流動(dòng)相乙腈(B)∶水內(nèi)的1.5％醋酸(A)；
流速1毫升/分鐘；
λmax335奈米。
此化合物為根據(jù)NMR(1H和13C)及FABMS數(shù)據(jù)所確認(rèn)的麥角甾苷。萃出物RJM/0862/P08/A002內(nèi)862-II的百分率為0.86。
實(shí)施例3
將干燥羽萼木植物的花莖葉(500公克)研磨成粗粉末然后在98±1℃下以去離子水萃取2小時(shí)。利用全部的水(1+3×0.7公升，四次萃取)重復(fù)四次萃取過(guò)程。收集全部四次萃出物。離心收集的萃出物，冷凍干燥透明的濾過(guò)物而獲得淡黃色非晶形粉末(產(chǎn)量為95公克)。編號(hào)為RJM/0862/P08/A003的含水萃取殘留物(萃取值19％)依續(xù)以CHCl3、EtOAc和n-BuOH進(jìn)行分餾。將n-BuOH萃出物在SiO2凝膠的60～120網(wǎng)孔(150公克)上進(jìn)行吸附層析。完全移除溶劑而獲得流體物質(zhì)。將1.5時(shí)直徑的玻璃管柱裝填在EtOAc內(nèi)的60～120網(wǎng)孔的100公克SiO2凝膠。將經(jīng)吸附的分餾液置入管柱內(nèi)。以EtOAc及漸增百分率的MeOH洗提管柱。收集各100毫升的全部120件分餾液并置于TLC進(jìn)行層析(8∶1∶1的EtOAc∶HCOOH∶H2O作為顯像溶劑)。噴灑新鮮制備的硼酸鹽-PEG 4000溶液[MeOH內(nèi)2-胺乙基聯(lián)苯硼酸鹽的1％溶液及EtOH內(nèi)聚乙二醇4000的5％溶液(噴灑前以1∶1體積/體積比例混合]使其顯影。在EtOAc及10％MeOH內(nèi)洗提的分餾液顯示具有相同的TLC圖形。收集這些分餾液，干燥然后溶解于最少量的MeOH內(nèi)。藉由甲醇溶液內(nèi)加入少量的CHCl3進(jìn)行結(jié)晶化而產(chǎn)生被鑒定為862-II的無(wú)色非晶形粉末。
利用下列的操作環(huán)境根據(jù)862-II的HPLC進(jìn)行萃出物RJM/0862/P08/A003的標(biāo)準(zhǔn)化
管柱RP-18e(E-Merck公司，5微米，4.6×250毫米)，于
流動(dòng)相乙腈(B)∶水內(nèi)的1.5％醋酸(A)；
流速1毫升/分鐘；
λmax335奈米。
此化合物為根據(jù)NMR(1H和13C)及FABMS數(shù)據(jù)所確認(rèn)的麥角甾苷。萃出物RJM/0862/P08/A003內(nèi)862-II的百分率為0.22。
已發(fā)現(xiàn)熔點(diǎn)145～146℃，[α]21-85.6[C0.5％MeOH]，MSFABMS，[M+Na]+m/z 647的862-II非晶形粉末為習(xí)知的苯丙醇，即毛蕊花糖苷(麥角甾苷)；[β-(3’，4’-二羥基苯基)乙基-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→3)-β-D-(4-O-咖啡醯基)-吡喃葡萄糖苷]。藉由1H和13C的核磁共振(NMR)最后已確認(rèn)其構(gòu)造類(lèi)似已報(bào)告的文獻(xiàn)(Andary C.，Wylde，R.，Laffite C.，Privat G.和Winternitz F.；Laboratie de Botanique etCryptogamie，F(xiàn)aculte de Pharmacie公司，34000 Montpellier法國(guó)；Phytochemistry，21(5)1123～1127(1982)。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)
1.動(dòng)物雌雄大白鼠(Albino rats)(韋斯研究所，150～180公克)及雌雄小白鼠(Albino mice)(瑞士，25～30公克)；
2.肝毒素四氯化碳(CCl4)；
3.試驗(yàn)預(yù)防；
4.治療方法投與毒素48、24、2小時(shí)之前及6小時(shí)之后；最后一投與測(cè)試/參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)之后18小時(shí)采集血液和肝臟樣本；
5.劑量
麥角甾苷 經(jīng)口投與0.625、1.25、2.5和5.0毫克/公斤
水飛薊素 經(jīng)口投與50毫克/公斤
甘草甜素 經(jīng)口投與100毫克/公斤
四氯化碳 經(jīng)口投與液態(tài)石蠟(1∶1)1毫升/公斤
6.參數(shù)
血清
膽紅素 Jendrassik法，利用供應(yīng)自意大利Clonital公司24030-Carvico(BG)的套組
三酸甘油酯 酵素GPO-POD法，利用供應(yīng)自占那市Accurex生物醫(yī)藥公司的套組
白蛋白 呈色BCG法，利用供應(yīng)自占那市Accurex生物醫(yī)藥公司的套組
轉(zhuǎn)化酶(ALT/AST)在和2，4-二硝基苯胼反應(yīng)之后利用分光光度計(jì)測(cè)定藉由轉(zhuǎn)胺反應(yīng)產(chǎn)生的丙酮酸(Reitman和Frankel，1957)
ALP利用對(duì)硝基苯磷酸鹽作為基質(zhì)以分光光度計(jì)測(cè)定堿性介質(zhì)內(nèi)形成的對(duì)硝基苯酚(Waler和Schutt，1974)
肝臟均質(zhì)物
GSH在脫蛋白化后利用和DTNB的反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定(Ellman 1959經(jīng)David 1987修訂)
脂肪過(guò)氧化藉由Buege和Aust(1978)法在535奈米的分光光度計(jì)測(cè)定硫巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)
肝臟保護(hù)活性
藉由下式計(jì)算肝臟保護(hù)活性(H)
H＝[1-(TC-V/VC-V)]×100
其中TC、VC和V分別為治療動(dòng)物的藥物+毒素、賦形劑+毒素及賦形劑對(duì)照組。
上列詳細(xì)說(shuō)明是針對(duì)本發(fā)明的一可行實(shí)施例的具體說(shuō)明，然而該實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明的專(zhuān)利范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所為的等效實(shí)施或變更，例如等變化的等效性實(shí)施例，均應(yīng)包含于本案的專(zhuān)利范圍中。
a代表各組中六只動(dòng)物平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差的值；
單位微莫耳丙酮酸/分鐘/公升；
b形成的對(duì)硝基苯酚微莫耳/分鐘/公升；
c脂肪過(guò)氧化(奈莫耳MDA/公克肝臟)；
d麩胺基硫(微莫耳GSH/公克肝臟)；括號(hào)內(nèi)為％保護(hù)；30微克、100微克、300微克和1毫克肌肉注射大鼠時(shí)不改變基線因此對(duì)血壓(BP)和呼吸無(wú)反應(yīng)；組織胺、血清素(5-HT)和乙醯膽堿引起的大鼠切除結(jié)腸的收縮不產(chǎn)生基線的變化。
表1
a代表各組中六只動(dòng)物平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差的值；
單位微莫耳丙酮酸/分鐘/公升；
b形成的對(duì)硝基苯酚微莫耳/分鐘/公升；
c脂肪過(guò)氧化(奈莫耳MDA/公克肝臟)；
d麩胺基硫(微莫耳GSH/公克肝臟)；
*p＜0.05；**p＜0.01；P＜0.001；p＞0.05代表劑量間Student t檢定[無(wú)顯著意義]
表權(quán)利要求
1.羽萼木植物分離具有高度肝臟保護(hù)作用的純麥角甾苷的方法，該方法的步驟包括
a.干燥植物的花莖葉；
b.將干燥部分磨成粉末；
c.利用水或乙醇將粉末浸提3～4次以獲得萃出物；
d.過(guò)濾萃出物以清除懸浮顆粒而獲得上清液；
e.約45至55℃下干燥上清液以獲得殘留物；
f.依續(xù)以氯仿、醋酸乙酯和丁醇分餾殘留物；
g.將甲醇加入分餾液之后取丁醇分餾液進(jìn)行SiO2的吸附層析；
h.將經(jīng)吸附的分餾液置入玻璃管柱內(nèi)；
i.以漸增極性的甲醇∶氯仿的溶劑洗提管柱而獲得進(jìn)一步的分餾液并重復(fù)一次此步驟；
j.將此分餾液進(jìn)行管柱層析而獲得分餾液；
k.在減壓下濃縮分餾液而獲得麥角甾苷的殘留物，以及利用羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，該方法的步驟包括投與病人適當(dāng)?shù)蛣┝康柠溄晴捃铡?br> 2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中藉由此方法獲得的麥角甾苷，比較從其它來(lái)源獲得的，顯示具有低于12至25倍劑量的肝保護(hù)活性。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中萃出物為水和酒精萃出物。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中麥角甾苷占總萃出物約1.0％(重量)。
5.一種利用分離自如權(quán)利要求1所述的羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，該方法的步驟包括投與病人醫(yī)藥上有效劑量的麥角甾苷，其中該劑量為低于習(xí)知藥物所需的12至25倍。
6.如權(quán)利要求2所述的方法，其中投與劑量為介于0.5至10.0毫克/公斤體重之間。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷是從經(jīng)口(P.O.)的途徑投與。
8.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低血清麩醯胺酸丙酮酸轉(zhuǎn)化酶(GPT)的濃度的異常上升。
9.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低血清麩醯胺酸草酸轉(zhuǎn)化酶(GOT)的濃度的異常上升。
10.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低血清堿性磷酸酶(ALP)的濃度的異常上升。
11.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低血清膽紅素的濃度的異常上升。
12.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低血清三酸甘油酯(TG)的濃度的異常上升。
13.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可降低脂肪過(guò)氧化酶(LP)的濃度的異常上升。
14.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可增加白蛋白的濃度的異常降低。
15.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷可增加還原型麩胺基硫(GSH)的濃度的異常降低。
16.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷的藥效約為市售肝臟保護(hù)劑的10至20倍。
17.如權(quán)利要求2所述的方法，其中麥角甾苷對(duì)抗肝毒性約提供40～85％的保護(hù)作用。
全文摘要
一種從羽萼木(Colerbrookea oppositifolia)的植物分離具有高度肝臟保護(hù)作用的純麥角甾苷(Acteoside)的方法，此方法的步驟包括干燥植物的花莖葉；將干燥部分磨成粉末；利用水或乙醇將粉末浸提3～4次以獲得萃出物；過(guò)濾萃出物以清除懸浮顆粒而獲得上清液；約45至55℃下干燥上清液以獲得殘留物；依續(xù)以氯仿、醋酸乙酯和丁醇分餾殘留物；將甲醇加入分餾液之后取丁醇分餾液進(jìn)行SiO2的吸附層析；將經(jīng)吸附的分餾液置入玻璃管柱內(nèi)；以漸增極性的甲醇氯仿的溶劑洗提管柱而獲得進(jìn)一步的分餾液并重復(fù)一次此步驟；將此分餾液進(jìn)行管柱層析而獲得分餾液；在減壓下濃縮分餾液而獲得麥角甾苷的殘留物，以及利用羽萼木植物的純麥角甾苷有效保護(hù)病人的肝臟的方法，此方法的步驟包括投與病人適當(dāng)?shù)蛣┝康柠溄晴捃铡?br> 文檔編號(hào)A61P1/16GK1771048SQ0382654
公開(kāi)日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2003年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月31日
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