專利名稱：疫苗的改進(jìn)或者與疫苗有關(guān)的改進(jìn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及疫苗生產(chǎn)中的改進(jìn)，和對(duì)滅活穩(wěn)定的疫苗組合物。
背景技術(shù)：
含有病毒顆粒或細(xì)菌細(xì)胞或通過(guò)重組技術(shù)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)抗原的疫苗廣泛用于預(yù)防人類和動(dòng)物以及水產(chǎn)養(yǎng)殖中的疾病。在疫苗中使用的病毒顆粒和細(xì)菌通常減毒，或者用一種或多種試劑處理，以降低或者除去它們的致病性。可以進(jìn)行遺傳操作，以產(chǎn)生低致病性或無(wú)致病性的病毒或細(xì)菌。
也為支原體(micoplasma)介導(dǎo)的疾病，以及通過(guò)其它一些病原體(包括，例如，后生動(dòng)物和原生動(dòng)物)介導(dǎo)的疾病，研制了疫苗。
眾所周知，生物材料，包括溶液中的生物材料，易被熱、氧化劑、鹽等滅活。在環(huán)境溫度下放置短時(shí)間后，疫苗中使用的病毒顆粒、細(xì)菌和其它傳染物可能被輕易滅活。滅活可導(dǎo)致傳染性喪失、活疫苗的傳染性損失，或者低溫貯存，或者免疫原性的喪失。許多病毒顆粒，例如人流感病毒、人肝炎病毒、禽支氣管炎病毒，在4℃下只可短時(shí)間存活。
疫苗，例如，用來(lái)免疫人或動(dòng)物對(duì)抗疾病的含病毒疫苗，通常需要在4℃或更低的溫度如-20℃下貯存。這些疫苗在生產(chǎn)后可能只穩(wěn)定相對(duì)較短的一段時(shí)間，如2-14天。對(duì)低溫貯存的要求產(chǎn)生了處理和運(yùn)輸方面的問(wèn)題。低溫貯存是昂貴的。低溫下的短期疫苗活性限制了疫苗的應(yīng)用，提高了疫苗的成本，并且限制了疫苗的分配，特別是在不發(fā)達(dá)的第三世界國(guó)家。
許多市售疫苗，例如用于人類和動(dòng)物衛(wèi)生的疫苗，是完整顆?；蚧诩?xì)胞的產(chǎn)物，以在疫苗施用后提供最大保護(hù)性。這些疫苗可以是致病性減弱或者缺乏的活疫苗。如上所述，這些產(chǎn)品具有嚴(yán)格的冷藏要求，因此貯存期較短。
在真空下冷凍干燥(凍干)已經(jīng)用來(lái)制備疫苗。例如，EP-A-290197描述了冷凍干燥的四價(jià)疫苗。
冷凍干燥方法傳統(tǒng)上包括冷凍一種含有免疫原(如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或者來(lái)自它們的蛋白質(zhì)抗原)的溶液，并且在真空下將冰晶轉(zhuǎn)化為水蒸汽(升華)。遺憾的是，該方法能夠損傷蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)，破壞細(xì)菌細(xì)胞的病毒顆粒。因此，對(duì)免疫原的不利作用可能損害或者破壞免疫原性。
冷凍干燥也是具有大量變量的一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，可能難以可再現(xiàn)地進(jìn)行。
冷凍干燥在疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域的另外一個(gè)問(wèn)題是加工的要求。濃縮小體積高劑量的疫苗材料是不可能的。實(shí)際上，在冷凍干燥過(guò)程中，大表面積的液體可以與真空接觸是至關(guān)重要的。由于只有冷凍材料的頂部與真空接觸，因此疫苗需要在大容器中冷凍干燥，為冷凍干燥提供最大的表面積。因此，這些方法必需的裝置占地面積大且效率低。因此冷凍干燥的疫苗生產(chǎn)起來(lái)通常昂貴。
美國(guó)專利5,616,329描述了一種方法，其中一種微生物懸液的氣溶膠暴露于高溫下，使得只有該微生物懸液的熱穩(wěn)定成分保持免疫原性。根據(jù)美國(guó)專利5,616,329的熱滅活步驟使用100-160℃的溫度。根據(jù)這個(gè)方案，不耐熱成分的免疫原性丟失，因此該方法在許多疫苗應(yīng)用中不被接受。
本發(fā)明針對(duì)疫苗領(lǐng)域的許多問(wèn)題，包括成本和生產(chǎn)的困難性，處理和貯存限制，和疫苗的穩(wěn)定性以及免疫原性的保持。
發(fā)明概述此處公開(kāi)的本發(fā)明一方面提供生產(chǎn)疫苗的方法，該疫苗含有一種或多種免疫原，如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒或人類、動(dòng)物或水生生物種中的其它一些病原體，致病生物(如病毒或細(xì)菌)的抗原性產(chǎn)物，和核酸序列。本發(fā)明的方法穩(wěn)定免疫原，防止滅活和免疫原性的喪失。
根據(jù)本發(fā)明的最廣泛的方面，提供了一種生產(chǎn)不穩(wěn)定免疫原的穩(wěn)定化疫苗組合物的方法，其中在約25℃-約50℃下，優(yōu)選地在約30℃-46℃下，將含有一種或多種免疫原的流體噴射到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)，該反應(yīng)器內(nèi)含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的流態(tài)化顆粒，使得免疫原在流態(tài)化條件下包被顆粒，并且在顆粒上干燥，之后從該反應(yīng)器中收集干燥的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w的含免疫原顆粒，產(chǎn)生一種穩(wěn)定化疫苗組合物。
根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供了一種穩(wěn)定化疫苗組合物，其優(yōu)選地在環(huán)境溫度下穩(wěn)定，含有一種藥學(xué)可接受的水溶性材料的免疫原包被的顆粒，該組合物的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w。
優(yōu)選地，免疫原包含病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它一些微生物、真核細(xì)胞或者它們的抗原性產(chǎn)物。該免疫原可以含有兩種或多種不同的病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它一些微生物或者它們的抗原性產(chǎn)物等，產(chǎn)生一種多價(jià)疫苗組合物。
優(yōu)選地，該病毒顆粒包含一種或多種人類和動(dòng)物病毒。
人類病毒的例子包括甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒；1型和2型單純皰疹病毒；水痘-帶狀皰疹病毒；巨細(xì)胞病毒；EB病毒；人皰疹病毒6和人皰疹病毒7；流感病毒；呼吸道合胞病毒；副流感病毒；腺病毒和鼻病毒；人免疫缺陷病毒和慢病毒；人乳頭瘤病毒；麻疹病毒；流行性腮腺炎病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；風(fēng)疹病毒；人輪狀病毒；痘病毒(如天花病毒)；蟲(chóng)媒病毒傳播的疾病，如日本腦炎；蜱傳腦炎和狂犬病病毒；黃熱病毒；西尼羅河病毒；和登革病毒。
禽病毒的例子包括雞流感病毒、新城疫病毒、禽鼻氣管炎病毒、禽皰疹病毒、禽痘病毒、禽腦脊髓炎、傳染性支氣管炎、傳染性囊病(Gumboro)、馬萊克氏病病毒、禽呼腸病毒、禽喉氣管炎、產(chǎn)蛋量下降綜合征病毒。
豬病毒的例子包括豬生殖呼吸綜合征、口蹄疫病毒、豬流感病毒、豬細(xì)小病毒、假狂犬病病毒和豬輪狀病毒、豬流感病毒。
貓病毒的例子包括貓皰疹病毒、貓免疫缺陷病毒、貓白血病病毒、貓傳染性粒細(xì)胞缺乏癥、貓病毒性鼻氣管炎、貓杯狀病毒、貓病毒性鼻氣管炎、貓冠狀病毒和狂犬病。
犬病毒的例子包括犬瘟熱病毒、犬腺病毒、副流感、犬細(xì)小病毒、犬肝炎病毒、犬皰疹病毒和狂犬病。
馬病毒的例子包括馬腦炎病毒(東方、西方和委內(nèi)瑞拉馬病毒性腦脊髓炎)、馬流感和馬皰疹病毒(馬鼻肺炎)。
牛病毒的例子包括傳染性牛鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉病毒、牛呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、口蹄疫病毒和副流感。
優(yōu)選地，病毒顆粒是活病毒顆粒。由于根據(jù)本發(fā)明的疫苗組合物是自由流動(dòng)的粉末，含有不同免疫原的疫苗能夠簡(jiǎn)單地混合在一起，而沒(méi)有常規(guī)液體疫苗混合物可能出現(xiàn)的相容性問(wèn)題。因此，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面是含有兩種或多種不同疫苗組合物的多價(jià)疫苗組合物。
優(yōu)選地，細(xì)菌細(xì)胞含有一種或多種來(lái)自細(xì)菌屬的細(xì)菌，包括埃希氏菌屬(Escherichia)，如大腸桿菌，包括腸毒性、腸道病原性、腸侵襲性和腸聚集性大腸桿菌；沙門(mén)氏菌屬(Salmonella)，如傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella Typhi)和腸炎沙門(mén)氏菌(Salmonella enteritidis)；嗜血菌屬(Haemophilus)，如流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)，包括流感嗜血菌血清型B，副豬嗜血菌(Haemophilis parasuis)，睡眠嗜血菌(Heamophilis somnus)和副雞嗜血菌(Haemophilis paragallinarum)(傳染性鼻炎)；衣原體，如肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae)和沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)；奈瑟氏球菌屬(Neisseria)，如腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)；弧菌屬(Vibrio)，如霍亂弧菌(Vibrio cholera)；A組和B組鏈球菌屬(Streptococcus)，如肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)(肺炎球菌)和豬鏈球菌(Streptococcus suis)；軍團(tuán)菌屬(Legionella)，如嗜肺軍團(tuán)菌(Legionella pneumophila)；芽孢桿菌屬(Bacillus)，如炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)；分枝桿菌屬(Mycobacterium)，如麻風(fēng)分枝桿菌(Mycobacterium leprae)和副結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium paratuberculosis)；梭菌屬(Clostridium)，如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringengens)和艱難梭菌(Clostridiun Difficile)；巴斯德氏菌屬(Pasteurella)，如多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)和溶血巴斯德氏菌(Pasteurella haemolytica)；博德特氏菌屬(Bordetella)，如支氣管炎博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)和百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)；放線桿菌屬(Actinobacillus)，如大葉性肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)和豬放線桿菌(Actinobacillussuis)；和包括下列的細(xì)菌豬紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)；鉤端螺旋體屬(Leptospira)；布氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferi)；幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori)；和白喉棒桿菌(Corynebacteium diphtheriae)。
本發(fā)明可以使用支原體，如豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae)、雞敗血支原體(Mycoplasma gallisepticum)、關(guān)節(jié)液支原體(Mycoplasma synoviae)和肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae)。
優(yōu)選地，該免疫原含有來(lái)自致病病毒、細(xì)菌和/或其它致病微生物的抗原性產(chǎn)物。這些抗原性產(chǎn)物包括病毒亞顆粒、不含核酸內(nèi)容物的病毒顆粒、病毒蛋白質(zhì)、細(xì)菌蛋白質(zhì)、細(xì)菌脂多糖、糖蛋白、碳水化合物或兩種或多種上述抗原性產(chǎn)物?？乖援a(chǎn)物可以是含有氨基酸序列的表位，或多糖，通過(guò)重組DNA技術(shù)等產(chǎn)生的抗原，其來(lái)源于病毒和/或細(xì)菌蛋白質(zhì)和/或碳水化合物和/或脂序列，任選地與載體(如肽或蛋白質(zhì))偶聯(lián)。
優(yōu)選地，該疫苗組合物是一種自由流動(dòng)的顆粒狀組合物。
優(yōu)選地，藥學(xué)可接受的水溶性材料的免疫原包被包含其它組分，如氨基酸、蛋白質(zhì)、螯合劑、緩沖劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、乳化劑、增塑劑和潤(rùn)滑劑。
優(yōu)選地，該免疫原包被包含一種佐劑，如鋁鹽(明礬)，胞壁酰肽和類似物或衍生物，皂苷(例如Quillaja皂苷)或含有皂苷的化合物(例如ISCOM)，多核苷酸或合成核酸衍生物(如多核糖核苷酸)，含硫化合物(如左旋咪唑)，聚合物和雜環(huán)和芳香化合物(如Divema和多聚醇)，含胺及含脂化合物，阿夫立定，二甲基十八烷基-溴化銨，多聚磷酸，細(xì)胞因子(如干擾素)或可生物降解的油包水乳劑(如乳化的石蠟)。也可以使用具有免疫刺激或免疫調(diào)節(jié)或抗原呈遞性質(zhì)的其它一些佐劑或試劑，和商業(yè)產(chǎn)品Impran、Emunade、Emulsigen和/或Amphigen。
優(yōu)選地，該疫苗組合物是一種活疫苗，即免疫原在免疫的對(duì)象中通過(guò)模擬天然病毒感染能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答?；钜呙缃M合物在4℃和環(huán)境溫度下，例如在25℃下，可以穩(wěn)定達(dá)30天或更長(zhǎng)的貯存時(shí)間。例如，當(dāng)免疫原是病毒顆粒時(shí)，在這個(gè)過(guò)程完成時(shí)，病毒顆?？赡苁腔畹那揖哂袀魅拘?，而在室溫貯存下穩(wěn)定。這樣產(chǎn)生的活疫苗組合物在環(huán)境溫度下，例如在25℃下，可以穩(wěn)定達(dá)30天或更長(zhǎng)的貯存時(shí)間。
優(yōu)選地，含有一種或多種免疫原的流體含有免疫原(如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它一些微生物、真核細(xì)胞或病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它一些微生物的抗原性產(chǎn)物)的懸液或分散液。
含有一種或多種免疫原的流體可以是含有免疫原的培養(yǎng)基或含水液體或介質(zhì)。該流體可以包含一種或多種另外的組分，如氨基酸、蛋白質(zhì)、螯合劑、緩沖劑、鹽、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、乳化劑、增塑劑和潤(rùn)濕劑。
附圖描述

圖1是一張條線圖，對(duì)于活禽疫苗組合物，對(duì)以logEID50值測(cè)定的病毒活性的降低(距初始活性)作圖。ND-VB是指根據(jù)本發(fā)明的一種穩(wěn)定化新城疫疫苗。ND-FD是指一種冷凍干燥的新城疫疫苗。IB H120-VB是指根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的一種傳染性支氣管炎疫苗。IB H120-FD是指一種冷凍干燥的傳染性支氣管炎疫苗。IBD-VB是指根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的一種穩(wěn)定化傳染性囊病疫苗。IBD-FD是指一種冷凍干燥的傳染性囊病疫苗。樣品在25℃下貯存30天。
發(fā)明詳述本發(fā)明在不同的實(shí)施方案中提供了生產(chǎn)疫苗組合物和穩(wěn)定化疫苗組合物的方法。本發(fā)明的方法適于生產(chǎn)含有病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒、人類、動(dòng)物或水生生物種中的其它病原體或者病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒或其它病原體的抗原性產(chǎn)物的疫苗。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法產(chǎn)生在室溫下長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的高效活疫苗，及其生產(chǎn)方法。這些疫苗組合物迄今為止尚且未知。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種生產(chǎn)疫苗的方法，該疫苗含有一種或多種免疫原，如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒、人類、動(dòng)物或水生生物種中的其它病原體或者它們的抗原性產(chǎn)物。本發(fā)明的方法穩(wěn)定免疫原防止滅活和免疫原性的喪失。在這個(gè)方面，本發(fā)明提供一種方法，用于生產(chǎn)免疫原，特別是不穩(wěn)定免疫原的穩(wěn)定化疫苗組合物，其中在約25℃-約50℃下，優(yōu)選地在約30℃下，將含有一種或多種免疫原的流體噴射到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)，該反應(yīng)器內(nèi)含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的流態(tài)化顆粒，使得免疫原在流態(tài)化條件下包被顆粒，并且在顆粒上干燥，之后從該反應(yīng)器中收集干燥的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w的含免疫原顆粒，從而產(chǎn)生一種穩(wěn)定化疫苗組合物。
所述免疫原可以含有病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它一些微生物或真核細(xì)胞或者它們的抗原性產(chǎn)物。該免疫原也可以含有兩種或多種不同的病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它一些微生物或者它們的抗原性產(chǎn)物，從而產(chǎn)生多價(jià)疫苗。
本發(fā)明可以使用任何類型的病毒顆?；蚣?xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒或人類、動(dòng)物或水生生物種中的其它病原體，或者病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、支原體、朊病毒或其它病原體的抗原性產(chǎn)物。
優(yōu)選地，該免疫原含有病毒顆粒。優(yōu)選的病毒顆粒包括甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒；1型和2型單純皰疹病毒；水痘-帶狀皰疹病毒；巨細(xì)胞病毒；EB病毒；人皰疹病毒6和人皰疹病毒7；流感病毒；呼吸道合胞病毒；副流感病毒；腺病毒和鼻病毒；人免疫缺陷病毒和慢病毒；人乳頭瘤病毒；麻疹病毒；流行性腮腺炎病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；風(fēng)疹病毒；人輪狀病毒；痘病毒(如天花病毒)；蟲(chóng)媒病毒傳播的疾病，如日本腦炎；蜱傳腦炎和狂犬病病毒；黃熱病毒；西尼羅河病毒；登革病毒；禽病毒；豬病毒；貓病毒；犬病毒；馬病毒；和牛病毒。
優(yōu)選地，細(xì)菌細(xì)胞含有一種或多種來(lái)自細(xì)菌屬的細(xì)菌，包括埃希桿菌屬，如大腸桿菌，包括腸毒性、腸道病原性、腸侵襲性和腸聚集性大腸桿菌；沙門(mén)氏菌屬，如傷寒沙門(mén)氏菌和腸炎沙門(mén)氏菌；嗜血菌屬，如流感嗜血菌，包括流感嗜血菌血清型B，副豬嗜血菌，睡眠嗜血菌和副雞嗜血菌(傳染性鼻炎)；衣原體，如肺炎衣原體和沙眼衣原體；奈瑟氏球菌屬，如腦膜炎奈瑟氏球菌；弧菌屬，如霍亂弧菌；A組和B組鏈球菌屬，如肺炎鏈球菌(肺炎球菌屬)和豬鏈球菌；軍團(tuán)菌屬，如嗜肺軍團(tuán)菌；芽孢桿菌屬，如炭疽芽孢桿菌；分枝桿菌屬，如麻風(fēng)分枝桿菌和副結(jié)核分枝桿菌；梭菌屬，如肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和艱難梭菌；巴斯德氏菌屬，如多殺巴斯德氏菌和溶血巴斯德氏菌；博德特氏菌屬，如支氣管炎博德特氏菌和百日咳博德特氏菌；放線桿菌屬，如大葉性肺炎放線桿菌和豬放線桿菌；和包括下列的細(xì)菌豬紅斑丹毒絲菌；鉤端螺旋體屬；布氏疏螺旋體；幽門(mén)螺桿菌；和白喉棒桿菌。
本發(fā)明可以使用支原體，如豬肺炎支原體、雞敗血支原體、關(guān)節(jié)液支原體和肺炎支原體。
病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它微生物或其它免疫原可以是活的或完整的，不被熱處理或其它處理殺死。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案的方法適于生產(chǎn)含有活免疫原(如病毒顆粒)的疫苗組合物。在對(duì)受試者施用后，無(wú)論是人、動(dòng)物還是水生生物種，含有活病毒顆粒或其它免疫原的疫苗組合物都引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。
此外，病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞、其它微生物或其它免疫原，可以被熱處理或以其它方式處理殺死，使得它們?cè)谒拗髦胁荒芊敝?。例如，病毒顆?；蚣?xì)菌細(xì)胞級(jí)分的亞單位或其它抗原性產(chǎn)物也可以在本發(fā)明中使用，同樣可以使用它們的抗原，如肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類、脂多糖、糖蛋白，或兩種或多種上述抗原性產(chǎn)物。抗原性產(chǎn)物可以是含有氨基酸序列的表位，或多糖等，其來(lái)源于病毒和/或細(xì)菌蛋白質(zhì)和/或碳水化合物和/或脂序列，任選地與載體(如肽或蛋白質(zhì))偶聯(lián)。
在一個(gè)備選實(shí)施方案中，免疫原可以是一種核酸序列，如DNA或RNA，例如基于病毒或細(xì)菌或其它微生物核酸序列，例如，可以在根據(jù)本發(fā)明穩(wěn)定的病毒載體(如豬或禽腺病毒或禽痘病毒或另外一些病毒載體)中輸送。
在本發(fā)明的方法方面，一種或多種免疫原包含于一種流體中。該流體優(yōu)選地含有免疫原(如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或另外一些微生物或真核細(xì)胞)的懸液或分散液。該流體可以是含有免疫原的培養(yǎng)基或其它流體或介質(zhì)，任選地用一種稀釋劑稀釋，該免疫原在該稀釋劑中穩(wěn)定(即不被滅活)。稀釋劑在病毒學(xué)和微生物學(xué)領(lǐng)域公知，包括，例如無(wú)菌水、磷酸緩沖液(PBS)、tris緩沖鹽液(TBS)、含有蔗糖和脫脂牛奶的無(wú)菌水(一個(gè)例子是5％蔗糖、5％脫脂乳和90％無(wú)菌水)。稀釋劑也可以含有一種或多種明膠、葡聚糖、EDTA、氨基酸(如甘氨酸)和卵白蛋白、無(wú)機(jī)鹽(如硫酸鎂、氯化鈣和磷酸鈣)等。
在本發(fā)明的一個(gè)有利方面，市售的疫苗，無(wú)論是用于人、動(dòng)物、禽類還是其它種的，都可以被對(duì)滅活穩(wěn)定化，例如在環(huán)境溫度下貯存。在這點(diǎn)上，市售的活疫苗，或者不同類型的病毒顆?；蚣?xì)菌細(xì)胞，或者不同類型的細(xì)菌細(xì)胞，可以用病毒或細(xì)菌在其中穩(wěn)定的稀釋劑稀釋，從而產(chǎn)生一種流體，其中含有適合根據(jù)本發(fā)明的方法穩(wěn)定的一種或多種免疫原。
人用疫苗的全球市場(chǎng)在2001年估計(jì)達(dá)到50-60億美元。用于人類健康的大多數(shù)活病毒或細(xì)菌疫苗都是減毒的，例如非致病株，或有限致病株，例如通過(guò)重組DNA技術(shù)或其它方法產(chǎn)生的。其它一些市售疫苗包括病毒或細(xì)菌蛋白質(zhì)，或其衍生的蛋白質(zhì)/肽，如表位疫苗，它含有任選地與載體(如另外一種肽、蛋白質(zhì)或其它試劑)例如通過(guò)共價(jià)鍵合或以其它方法結(jié)合的致病病毒、細(xì)菌或其它生物的肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白或其它表位。
申請(qǐng)人認(rèn)為，市售的所有疫苗都可以根據(jù)本發(fā)明被穩(wěn)定化。例如，一種市售疫苗可以用適當(dāng)?shù)南♂寗┫♂?，接種的生物(如一種或多種不同的病毒顆粒，或者一種或多種不同的細(xì)菌細(xì)胞)在該稀釋劑中穩(wěn)定，從而產(chǎn)生一種含有免疫原的流體。然后可以根據(jù)本發(fā)明的方法將這種含有免疫原的流體噴射到一個(gè)含有流態(tài)化顆粒的反應(yīng)器中。本發(fā)明中可以使用的疫苗的例子包括來(lái)自下列廠商的疫苗人用疫苗Aventis Pasteur●無(wú)細(xì)胞百日咳和/或Hib兒科組合，產(chǎn)品名稱包括Tripedia/Tripacel、Quadracel/Tetravac、Tetract-Hob、Pentact-Hob/Pentacel/Pentavac、Hexavac●TyphinVi/ Menomune/Avaxim/Venorab/Stamaril，用于旅行者/流行地區(qū)●Vaxirip/Fluzone/Mutagrip，用于流感●GenHevac B Pasteur，用于乙型肝炎●IPOL/Imovax Polio，注射用脊髓灰質(zhì)炎疫苗●破傷風(fēng)/白喉疫苗GlaxoSmithKline●Havrix，用于甲型肝炎●Engerix-B，用于乙型肝炎●Twinrix，用于甲型和乙型肝炎(成人和兒科)●Infanrix，兒科白喉/破傷風(fēng)/百日咳●Infanrix PeNta，用于兒科乙型肝炎/脊髓灰質(zhì)炎●InfanHeXa，用于兒科乙型嗜血菌流感(Hib)●Priorix，用于麻疹/流行性腮腺炎/風(fēng)疹●Typherix，用于傷寒癥●Varilirix，用于水痘(禽痘)●Simplirix，用于單純皰疹病毒(2型)(生殖器皰疹)(研制中)●登革熱疫苗(研制中)●EB病毒疫苗(研制中)
●人乳頭瘤病毒疫苗(研制中)●乙型腦膜炎(古巴)疫苗(腦膜炎球菌B)(研制中)●肺炎鏈球菌疫苗(研制中)●腦膜炎奈瑟氏球菌疫苗(研制中)●丙型肝炎疫苗(研制中)Wyeth●Pnu-Imune 23，肺炎球菌疫苗，多價(jià)，用于腦膜炎和血液感染●Prevnar，肺炎球菌7價(jià)結(jié)合疫苗(白喉CRM197蛋白質(zhì)偶聯(lián)物)。不同于其它市售的肺炎球菌疫苗，能夠在兩年內(nèi)在易患侵入性肺炎球菌疾病的兒童中誘導(dǎo)免疫。
●HibTiter，B型嗜血菌結(jié)合疫苗(白喉CRM197蛋白質(zhì)偶聯(lián)物)，用于兒科B型嗜血菌流感●FluShield，流感病毒疫苗，三價(jià)，A型和B型(純化的亞病毒體)●Meningitec，用于C組腦膜炎球菌Merck●Vaqta，針對(duì)甲型肝炎的滅活疫苗●Meruvax II，針對(duì)風(fēng)疹的活疫苗●M-M-R II，針對(duì)麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹的活疫苗●Varivax，針對(duì)水痘的活疫苗●Recombivax HB，針對(duì)乙型肝炎的重組疫苗●Pedvax HIB，B型嗜血菌結(jié)合疫苗(腦膜炎球菌蛋白質(zhì)偶聯(lián)物)●Comvax，針對(duì)B型嗜血菌偶聯(lián)物和乙型肝炎的疫苗●Pneumovax 23，肺炎球菌疫苗，多價(jià)●人乳頭瘤病毒疫苗，用于子宮頸癌和生殖器疣(研制中)●輪狀病毒疫苗(研制中)Chiron(Powderiect)
●Menjugate，針對(duì)C型腦膜炎球菌疾病的結(jié)合疫苗●Fluad，含佐劑的流感疫苗●Begrivac，第一種不含防腐劑的流感疫苗●Encepur，針對(duì)蜱傳腦炎的疫苗●針對(duì)脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、兒科白喉/破傷風(fēng)/百日咳、麻疹/流行性腮腺炎/風(fēng)疹的疫苗●Fluvirin，用于流感●Dukoral，用于旅行腹瀉和霍亂(口服疫苗)●Arilvax，用于黃熱病●用于結(jié)核病的BCG疫苗●Nathav，針對(duì)甲型肝炎的滅活疫苗●B型腦膜炎球菌(新西蘭)疫苗(研制中)●腦膜炎球菌多價(jià)(ACYW)疫苗(研制中)●丙型肝炎疫苗(研制中)Baxter●C型腦膜炎球菌結(jié)合疫苗●流感疫苗(研制中)●蜱傳腦炎疫苗根據(jù)本發(fā)明也可以使用獸用疫苗。市售疫苗按照生產(chǎn)廠商分包括Merial●Nemovac，用于預(yù)防禽鼻氣管炎●Gallimune，滅活疫苗類●4種活疫苗和6種滅活疫苗，包括Lyomarex、Avinew、Dur706、Bioral H 120和Haemovax(無(wú)活性)，用于最常見(jiàn)的家禽病，由GlaxoIndia銷售●LT-Blan，用于禽皰疹所致喉氣管炎
●Hyoresp(滅活疫苗)，用于主動(dòng)免疫對(duì)抗豬肺炎支原體引起的感染和疾病肺損傷●Parvoruvax/Parvovax/Parvoject/Ruvax，用于主動(dòng)免疫對(duì)抗豬細(xì)小病毒和豬丹毒●Neocolipor(含有滅活大腸桿菌株)，用于減少仔豬中的新生腸毒素中毒●FMD，含有佐劑的滅活口蹄疫病毒Intervet家禽疫苗產(chǎn)品活疫苗用于預(yù)防新城疫、傳染性支氣管炎、球蟲(chóng)病、禽痘、禽霍亂、呼腸病毒誘導(dǎo)的腱鞘炎(病毒性關(guān)節(jié)炎)、禽喉氣管炎、禽腦脊髓炎、傳染性囊病(IBD)、馬萊克氏病和雞敗血支原體感染的產(chǎn)品。產(chǎn)品變種包括ReoST 1133、AE Pox、Gumboro、Rismavac、Lasota、Clone 30、H120、IBMA5、ILT OVO-Diptherin、MG6/85。
SG9R，冷凍干燥的活疫苗，對(duì)抗雞的雞沙門(mén)氏菌(Salmonellagallinarum)和腸炎沙門(mén)氏菌(Salmonella enteriditis)感染滅活疫苗用于新城疫、鼻炎、產(chǎn)蛋量下降綜合征、傳染性支氣管炎、雞敗血支原體感染和呼腸病毒誘導(dǎo)的腱鞘炎(病毒性關(guān)節(jié)炎)的產(chǎn)品。產(chǎn)品變種包括Newcavac、Coryza、EDS76、IB+ND、REO IB+G+ND、REO INAC、MG INAC。
豬疫苗產(chǎn)品一類15種滅活的和冷凍干燥的減毒活疫苗產(chǎn)品，包括聯(lián)合制劑，對(duì)抗大葉性肺炎放線桿菌、萎縮性鼻炎、偽狂犬病、豬丹毒、細(xì)小病毒、大腸桿菌腸毒素中毒、豬肺炎支原體。產(chǎn)品名稱是Porcilis或ProSystem。破傷風(fēng)血清也有市售。
Pfizer●Stellamune Once/RespiSure-ONE，用于豬中的豬肺炎支原體。這種一劑產(chǎn)品是銷售最多的豬疫苗(全球3億劑)●RespiSurePleuroguard-4，用于豬流感●ER Bac/ER Bac Plac，用于丹毒●FarrowSure/FarrowSureB/FarrowSure B-PRV/FarrowSure PRV，用于豬細(xì)小病毒、鉤端螺旋體株、丹毒和偽狂犬病●PR-Vas Plus/PR-Vac，用于偽狂犬病●LiterGuard/LitterGuard LT/LitterGaurd LT-C，用于大腸桿菌和C型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸毒素中毒。LT變種包括不耐熱的類毒素(LTb)，刺激對(duì)大腸桿菌產(chǎn)生的腸毒素的保護(hù)●對(duì)抗球蟲(chóng)病的家禽疫苗Wyeth/Fort Dodge Animal Health家禽疫苗產(chǎn)品●Bursine-2，保護(hù)雞傳染性囊病的活疫苗●Poulvac H120/Poulvac IBMM/IB Primer/IBMM+ARK，用于家禽中的傳染性支氣管炎●AEVac/AE Poxine，用于禽腦脊髓炎、禽痘的修飾活疫苗●LTVac，用于禽傳染性喉氣管炎的活疫苗●MD Vac Lyo，冷凍干燥的活火雞皰疹病毒疫苗，對(duì)抗馬萊克氏病●ND Hitchner/ND La Sota，對(duì)抗新城疫的冷凍干燥的修飾疫苗●VAChick Vac/VA Vac，對(duì)抗腱鞘炎(病毒性關(guān)節(jié)炎)的冷凍干燥的修飾活疫苗一系列滅活疫苗，用于傳染性囊病、新城疫、傳染性支氣管炎、產(chǎn)蛋量下降綜合征、傳染性鼻炎(副雞嗜血菌)、雞敗血支原體、關(guān)節(jié)液支原體和禽呼腸孤病毒。產(chǎn)品名稱包括Bursine K、Chick NK、Coryza Vac、EDS New Bronz、EDS Vac、MG Bac、MS Bac、New Bronz、New BronzMG、Newcastle K、Coryza Oil 3、Provac 3、Provac 4Tri Reo。
豬疫苗產(chǎn)品●Suvaxyn Respifend/RespiFend MH，一種含有佐劑的滅活菌苗，用于保護(hù)豬中的豬肺炎支原體●Suvaxyn EC4/Maternafend4，大腸桿菌●Suvaxyn P/Gestfend 1，細(xì)小病毒●Suvaxyn L/Gestafend 5，5株鉤端螺旋體●Suvaxyn/Gestafend 5+B，Bratislava的鉤端螺旋體●Suvaxyn E/Herdfend Thrix，豬丹毒的丹毒絲菌(Erysipelothrix)●Suvaxyn PL/Suvaxyn PLE/Suvaxyn PLE+B/Gestafend 6、Gestafend 7、Gestafend 7+B，細(xì)小病毒、鉤端螺旋體和丹毒絲菌的聯(lián)合疫苗●Suvaxyn AR/T/E，支氣管炎博德特氏菌、多殺巴斯德氏菌、丹毒絲菌，用于萎縮性鼻炎、肺炎和丹毒。
Boehringer Ingelheim豬疫苗產(chǎn)品●Ingelvac PRRS MLV，第一種對(duì)抗豬生殖呼吸綜合征(PRRS)的修飾活疫苗●Ingelvac DART，保護(hù)對(duì)抗博德特氏菌屬的產(chǎn)毒株和A型和D型multocida●Ingelvac M.hyo，一劑120天疫苗，用于預(yù)防豬肺炎支原體引起的肺炎●Ingelvac-HPE，對(duì)抗副豬嗜血菌和丹毒的疫苗●Ingelvac Aujeszky MLV，對(duì)抗奧爾斯基病(假狂犬病)的修飾活疫苗
●ReproCyc PRRS-PLE，對(duì)抗PRRS、細(xì)小病毒、鉤端螺旋體和丹毒的聯(lián)合疫苗●Ingelvac PRRS ATP，對(duì)抗非典型PRRS的高度減毒的修飾活疫苗●Ingelvac PRRS HP/Ingelvac PRRS HPE，對(duì)抗PRRS和副豬嗜血菌和丹毒的聯(lián)合疫苗●Ingelvac AR4，對(duì)抗支氣管炎博德特氏菌和D型多殺巴斯德氏菌引起的萎縮性鼻炎的疫苗家禽疫苗產(chǎn)品一系列單價(jià)和多價(jià)修飾活疫苗和減毒疫苗，用于新城疫、支氣管炎和鼻炎的不同株和變體，商標(biāo)名為Volvac。
Schering Plough豬疫苗產(chǎn)品●Scourmune/Scourmune-C/Scourmune-CR，大腸桿菌(只是針對(duì)1型菌毛的疫苗)，以及與產(chǎn)氣莢膜梭菌和輪狀病毒A組血清型4和5的聯(lián)合產(chǎn)品，用于腹瀉●SS Pac，豬鏈球菌，用于預(yù)防腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎和敗血癥。
●Parapac，副豬嗜血菌，用于預(yù)防格拉塞氏病●Pneu Pac/Pneu Parapac+ER/Pneu Pac-ER，大葉性肺炎放線桿菌血清型1、5、7產(chǎn)品，與豬紅斑丹毒絲菌或副豬嗜血菌的組合，用于預(yù)防肺炎和丹毒/格拉塞氏病。
●AR-Pac-PD+ER/AR-Parapac+ER，支氣管炎博德特氏菌與豬紅斑丹毒絲菌和多殺巴斯德氏菌，或者與副豬嗜血菌的組合，用于預(yù)防萎縮性鼻炎、肺炎、丹毒、格拉塞氏病●M+Pac，豬肺炎支原體，用于對(duì)抗豬中的肺炎●MaxiVac-Flu，殺死的A型病毒H1N1亞型，對(duì)抗豬流感●PRV-Marker Gold/PRV-Marker Gold-MaxiVac Flu，使用修飾的和殺死的病毒，用于偽狂犬病和豬流感●Prime Pac PRRSV，對(duì)抗豬流感的修飾活病毒家禽疫苗產(chǎn)品活疫苗和修飾活疫苗產(chǎn)品，用于預(yù)防新城疫、傳染性支氣管炎(不同株)、球蟲(chóng)病、禽痘、禽霍亂、呼腸病毒誘導(dǎo)的腱鞘炎(病毒性關(guān)節(jié)炎)、禽喉氣管炎、禽腦脊髓炎、傳染性囊病(IBD)和雞敗血支原體感染。產(chǎn)品名稱包括Shor-Bron-D、Ava-Bron、Broilerbron、Coccivac、Paracox、Monovax、Twin Vax、Polybron、Avichol、Enterovax、F Vax-MG、LT-Ivax、M-Ninevax、Ocuvax、Polyvax-TC、Trachivax、Univax、Variant vax-BD、PM-Onevax-C、Burs-Vac、Teno-Vaxin、Broilertrake、Ava-Trem、Ava-Pox。
Bioproperties Australia活疫苗Vaxsafe MG，用于控制家禽CRD的雞敗血支原體Vaxsafe MS，用于解決雞使用抗生素后的問(wèn)題的關(guān)節(jié)液支原體Salvax，用于控制家禽中大多數(shù)沙門(mén)氏菌屬的種的鼠傷寒沙門(mén)氏菌Mareks HVT，用于雞的火雞皰疹病毒Mareks Rispens，馬萊克氏病病毒的CVI 988株Eimeriavax4，4個(gè)艾美球蟲(chóng)屬(Eimeria)precocious株疫苗，用于控制雞的球蟲(chóng)病Vaxsafe IBD，雞的傳染性囊病Vaxsafe IB，家禽的傳染性支氣管炎病毒Vaxsafe PM，用于家禽中的禽霍亂的多殺巴斯德氏菌Yaxsafe MH，豬肺炎支原體疫苗疫苗的商標(biāo)名稱以上通常以斜體顯示。
上述疫苗生產(chǎn)商通常是在世界上多個(gè)國(guó)家運(yùn)營(yíng)的跨國(guó)公司。
上述疫苗組合物，或者其中所含的免疫原，可以在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中使用。此外，對(duì)抗上述一種或多種人類或動(dòng)物疾病/傳染物的疫苗也構(gòu)成本發(fā)明的另外一個(gè)實(shí)施方案。
根據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)方面，提供了一種在環(huán)境溫度下穩(wěn)定的疫苗組合物，它含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的免疫原包被的顆粒，該組合物的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w。該疫苗組合物可以按照如此處所述的本發(fā)明的方法生產(chǎn)。
在本發(fā)明的方法方面，在約25℃-約50℃下，優(yōu)選地在約30℃-約46℃下，將含有一種或多種免疫原的流體噴射到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)，該反應(yīng)器中含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的流態(tài)化顆粒，使得免疫原在流態(tài)化條件下包被顆粒，并且在顆粒上干燥，之后收集干燥的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w的含免疫原顆粒，產(chǎn)生穩(wěn)定化疫苗組合物。
含有一種或多種免疫原的流體優(yōu)選地是免疫原(如病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它一些微生物或真核細(xì)胞)的懸液或分散液。該流體可以是一種培養(yǎng)基，例如病毒顆粒在其中繁殖或貯存。例如，該流體可以是含有免疫原的培養(yǎng)基或其它液體介質(zhì)。例如，可以使用在細(xì)菌和/或病毒顆粒的冷凍干燥中常用的成分，如本領(lǐng)域公知的。例子包括蔗糖、脫脂乳和無(wú)菌水的混合物，或者pH7左右的磷酸緩沖介質(zhì)，例如含有EDTA二鈉、卵白蛋白和甘氨酸。含有免疫原的流體可以含有一種或多種氨基酸、蛋白質(zhì)、螯合劑、緩沖液、防腐劑、穩(wěn)定劑、金屬抗氧化劑和潤(rùn)滑劑。
優(yōu)選地。免疫原包被包含佐劑，如鋁鹽(明礬)，胞壁酰肽和類似物或衍生物，皂苷(例如Quillaja皂苷)或含有皂苷的化合物(例如ISCOM)，多核苷酸或合成核酸衍生物(如多核糖核苷酸)，含硫化合物(如左旋咪唑)，聚合物和雜環(huán)和芳香化合物(如Divema和多聚醇)，含胺及含脂化合物，阿夫立定，二甲基十八烷基-溴化銨，多聚磷酸，細(xì)胞因子(如干擾素)或可生物降解的油包水乳劑，如乳化的石蠟。也可以使用具有免疫刺激或免疫調(diào)節(jié)或抗原呈遞性質(zhì)的其它一些佐劑或試劑，和商業(yè)產(chǎn)品Impran、Emunade、Emulsigen和/或Amphigen。
本發(fā)明可以使用任何藥學(xué)可接受的水溶性材料或材料混合物?！八苄浴笔侵冈?0℃下1g材料溶解于1ml-10ml水中。藥學(xué)可接受的水溶性材料可以含有一種或多種單糖、二糖、多糖或碳水化合物。例子包括葡萄糖、甘露醇、果糖、多聚果聚糖、聚葡萄糖、糊精、葡萄糖、轉(zhuǎn)化糖、乳糖醇、乳糖、異麥芽糖、麥芽糖醇、麥芽糖、麥芽糊精、山梨糖醇、木糖醇、蔗糖、sucralose，甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、葡糖胺、半乳糖胺、鼠李糖、6-O-甲基-D-半乳糖、2-O-丙酮醇基-β-D-木糖、2-乙酰胺基-2-二氧-β-D-半乳糖-4-硫酸、N-乙酰葡糖胺、艾杜糖醛酸、甘露糖醛酸、甲基半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖、α-D-吡喃甘露糖和通過(guò)一種或多種單糖或二糖單位共價(jià)鍵合形成的生物聚合物。碳水化合物的例子包括藻酸鹽(酯)、直鏈淀粉、纖維素、角叉藻聚糖、果膠。為了方便起見(jiàn)，單糖、二糖、多糖和碳水化合物可以通稱為“糖”。
此外，藥學(xué)可接受的水溶性材料可以含有一種或多種水溶性肽(如酪蛋白水解物，或明膠，或明膠水解物)，無(wú)機(jī)鹽(如氫氧化鋁、氯化鈉、磷酸鈉、酸式磷酸鈉、EDTA鈉、氯化鎂、硫酸鎂)，或水溶性聚合物。水溶性聚合物在聚合鏈中通常含有至少10個(gè)單體單元，在水中形成水溶液。例子包括水溶性樹(shù)膠、果膠、羧甲基纖維素、甲基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素和羥丙基纖維素。
在制藥/獸醫(yī)領(lǐng)域公知的藥學(xué)可接受的水溶性賦形劑可以在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中使用，作為藥學(xué)可接受的水溶性材料。例如，Martindale，The Extra Pharmacopoeia，第33版，The PharmaceuticalPress，London，2002提供了藥學(xué)可接受的賦形劑的例子，在此引用作為參考。藥學(xué)可接受的水溶性賦形劑的例子包括可壓縮糖、糖果劑用糖、葡聚糖、氯化鉀或糖球?？梢允褂脙煞N或多種賦形劑。
藥學(xué)可接受的水溶性材料的顆粒優(yōu)選地具有20微米到1mm的顆粒大小。更優(yōu)選地，顆粒大小為約50微米-約200微米。
如本領(lǐng)域所知，本發(fā)明的方法可以在任何噴霧干燥反應(yīng)器或流態(tài)化床噴霧裝置中進(jìn)行。例子包括BWI Huttlin(Daimlerstrasse 7，D-79585，Steinen，Germany)生產(chǎn)的PLC(Programmable Logic Controller)Driven Turbojet Fluid Bed Coater，來(lái)自Niro，Inc(Columbia，MD 21045USA)的PSDTM制藥噴霧干燥器，和來(lái)自Glatt(Ramsay，NJ 07446，USA)或Vector-Freund(Marion，IA 52302，USA)的流態(tài)化床干燥器。
本發(fā)明與本領(lǐng)域公知的噴霧干燥方案的不同在于，含有免疫原的流體被噴射到流態(tài)化顆粒上，并在上面干燥。相反，在噴霧干燥技術(shù)中，將溶液或漿液噴射到氣流中，在重力下落過(guò)程中干燥。本發(fā)明的方法特別有利，因?yàn)樗谙鄬?duì)較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生疫苗組合物。例如，能夠在不到1小時(shí)內(nèi)生產(chǎn)一批2kg疫苗組合物。冷凍干燥類似量的材料可能需要1-3天或更長(zhǎng)。而且，本發(fā)明的組合物比冷凍干燥的疫苗更加穩(wěn)定。
含有一種或多種免疫原的流體優(yōu)選地通過(guò)噴嘴或噴頭噴射，該噴嘴或噴頭將噴射的流體輸送到反應(yīng)器內(nèi)。含有一種或多種免疫原的流體可以噴射到流態(tài)化顆粒的任意位置，例如從流態(tài)化床的流態(tài)化區(qū)的底部到頂部。噴嘴可以嵌入流態(tài)化床中，或者以其它方式位于反應(yīng)器內(nèi)，以將含有一種或多種免疫原的流體噴射到流態(tài)化顆粒上。
對(duì)于本發(fā)明，希望使用，但不是必須使用超過(guò)在反應(yīng)器中流態(tài)化床操作常用的條件的流態(tài)化條件。設(shè)備廠商通常不推薦超過(guò)流態(tài)化顆?；虿牧系募庸な业?0％w/v容量。而流態(tài)化顆粒可能含有反應(yīng)器的20/50％w/v容量，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的方法允許加工重量反應(yīng)器容積在50％w/v以上。
在本發(fā)明的一個(gè)具體的非限制性實(shí)施方案中，可以將顆粒裝載到一個(gè)含有流態(tài)化床的反應(yīng)器中，例如改進(jìn)后含有流態(tài)化顆粒的噴霧包被裝置，使得例如以200-500m2/h的速度發(fā)生流態(tài)化。
流態(tài)化優(yōu)選地在約30℃-約46℃下進(jìn)行。
將希望量的含有一種或多種免疫原的流體噴射到藥學(xué)可接受的水溶性材料(例如糖)的流態(tài)化顆粒上。顆粒的包被和免疫原包被的干燥在流態(tài)化床的流態(tài)化條件下進(jìn)行。流態(tài)化速度和免疫原流體向流態(tài)化條件內(nèi)的流速是可以調(diào)節(jié)的變量，它可以使疫苗組合物干燥為希望的濕含量。該疫苗組合物的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w，產(chǎn)生穩(wěn)定化疫苗組合物。
應(yīng)當(dāng)理解，反應(yīng)器條件和免疫原流速，包括含有一種或多種免疫原的流體向(例如)含有流態(tài)化床的反應(yīng)器內(nèi)的噴射，可以容易地改變。例如，可以改變流態(tài)化空氣體積、液體噴射速度、噴射液體溫度、入口空氣濕度等。當(dāng)改變一個(gè)參數(shù)時(shí)，本發(fā)明涉及領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠容易地確定另外一個(gè)參數(shù)為了補(bǔ)償?shù)谝环N所述改變可能需要的任何相應(yīng)的調(diào)節(jié)。
材料的濕含量易于利用本領(lǐng)域公知的方法測(cè)定，包括紅外線濕度分析，如傅里葉變換-近紅外線(FT/NIR)光譜，例如來(lái)自Thermo ElectronCorporation，Waltham，MA，USA的Thermo Nicolet Antaris FT/NIR分析儀，鹵素加熱濕度分析儀(例如MB35或45濕度分析儀，來(lái)自O(shè)hausInc，Pine Brock，NJ，07058，USA)。
穩(wěn)定化疫苗組合物優(yōu)選地具有50-400微米，更優(yōu)選地50-200微米的顆粒大小。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)方面的方法可以生產(chǎn)含水量為約0.1％w/w-約10％w/w的疫苗組合物。優(yōu)選地，含水量為約0.1％w/w-約4％w/w，更優(yōu)選地約0.2％w/w-約1.5％w/w。冷凍干燥技術(shù)產(chǎn)生相對(duì)較高的濕含量，這是冷凍干燥技術(shù)的后果。冷凍干燥的疫苗的高濕含量可能導(dǎo)致貯存的困難和貯存后活性的喪失。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案生產(chǎn)的低濕含量疫苗，如0.1％w/w-約2％w/w含水量的疫苗，特別穩(wěn)定，在貯存后，包括在環(huán)境溫度，如15-37℃，一般25℃貯存30天后，仍然保持活性。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的穩(wěn)定化疫苗組合物含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的免疫原包被的顆粒，如上所述，該組合物的濕含量為約0.1％w/w-約10％w/w。該免疫原包被顆粒。用來(lái)包被顆粒的含免疫原的流體可以包含其它成分，包括一種或多種氨基酸、螯合劑、緩沖液、防腐劑、穩(wěn)定劑、無(wú)機(jī)鹽、抗氧化劑和潤(rùn)濕劑。
用來(lái)組成本發(fā)明的組合物的免疫原流體中的成分一般構(gòu)成顆粒的包被的一部分，除非在干燥過(guò)程中蒸發(fā)。
優(yōu)選地，免疫原包被包含佐劑，如鋁鹽(明礬)，胞壁酰肽和類似物或衍生物，皂苷(例如Quillaja皂苷)或含有皂苷的化合物(例如ISCOM)，多核苷酸或合成核酸衍生物(如多核糖核苷酸)，含硫化合物(如左旋咪唑)，聚合物和雜環(huán)和芳香化合物(如Divema和多聚醇)，含胺及含脂化合物，阿夫立定，二甲基十八烷基-溴化銨，多聚磷酸，細(xì)胞因子(如干擾素)或可生物降解的油包水乳劑(如乳化的石蠟)。也可以使用具有免疫刺激或免疫調(diào)節(jié)或抗原呈遞性質(zhì)的其它一些佐劑或試劑，和商業(yè)產(chǎn)品Impran、Emunade、Emulsigen和/或Amphigen。
本發(fā)明的組合物是一種穩(wěn)定化疫苗組合物。意思是，該疫苗組合物在25℃貯存30天后不被滅活，仍然有效，例如，產(chǎn)生保護(hù)性免疫。另一個(gè)實(shí)例是，一種病毒疫苗組合物對(duì)滅活穩(wěn)定，或者在25℃貯存30天后EID 50(50％胚感染劑量)下降不到1個(gè)log時(shí)穩(wěn)定。優(yōu)選地，該組合物在環(huán)境溫度下穩(wěn)定可達(dá)30天或更長(zhǎng)，例如在環(huán)境溫度下，例如在15-35℃下貯存1-7天，4-14天，7-30天，或者30-120天。與本領(lǐng)域公知的傳統(tǒng)疫苗組合物相比，穩(wěn)定化疫苗組合物可以在4℃下貯存更長(zhǎng)時(shí)間。例如，本發(fā)明的疫苗組合物在4℃下可以貯存達(dá)一年或者更長(zhǎng)時(shí)間。當(dāng)對(duì)受試者施用時(shí)，無(wú)論是人類、動(dòng)物、鳥(niǎo)類、魚(yú)類還是需要接種保護(hù)對(duì)抗疾病的其它受試者，對(duì)滅活穩(wěn)定的一種疫苗組合物在產(chǎn)生免疫應(yīng)答方面仍然具有活性。
本發(fā)明的方法和由此產(chǎn)生的疫苗組合物在一個(gè)實(shí)施方案中可以產(chǎn)生一種活疫苗，其中免疫原能夠在免疫的宿主中繁殖。例如，當(dāng)免疫原是病毒顆粒時(shí)，在本發(fā)明的方法完成時(shí)該病毒顆粒可能是活的且具有傳染性，在本發(fā)明的組合物方面，它具有傳染性并且對(duì)滅活穩(wěn)定。如上所述，本發(fā)明的活疫苗組合物在環(huán)境溫度下，例如在25℃下，可以穩(wěn)定達(dá)30天或更長(zhǎng)時(shí)間。
疫苗組合物，例如含有病毒顆?；蚣?xì)菌的疫苗組合物，可以作為(例如)在基因治療中輸送DNA或RNA序列的一種載體，或者作為疫苗。正在研制中的以及商業(yè)生產(chǎn)的許多疫苗是用作其它病毒或細(xì)菌蛋白質(zhì)的載體的減毒活病毒，或者是其它一些抗原，作為疫苗抗原。本發(fā)明包括減毒活病毒(包括病毒樣顆粒)、遺傳修飾的或重組病毒載體(例如重組痘苗、腺病毒、桿狀病毒)。這些類型的疫苗，除了疾病預(yù)防之外，還可以用于癌癥預(yù)防和治療。病毒載體疫苗也可以用于基因治療和給藥。
因此，所述免疫原可以是一種病毒顆粒或亞單位，或者細(xì)菌細(xì)胞，它在基因治療、給藥、癌癥治療或其它用途中作為(例如)一種核酸序列(如DNA或RNA序列)的載體。因此，該免疫原可能沒(méi)有免疫原性，而是一種載體。因此，如此處所用的術(shù)語(yǔ)“免疫原”包括能夠引起免疫應(yīng)答的實(shí)體，和不一定能夠引起免疫應(yīng)答，而是作為(例如)DNA或RNA或蛋白質(zhì)序列的載體或輸送系統(tǒng)的實(shí)體。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面的疫苗組合物優(yōu)選地是一種自由流動(dòng)的形式，如上所述的粉末樣形式。可以生產(chǎn)高度濃縮的疫苗。
不同的疫苗粉末可以混合在一起，產(chǎn)生多價(jià)疫苗，而沒(méi)有相容性問(wèn)題(當(dāng)疫苗是粉末時(shí))，具有極高的簡(jiǎn)單性和成本效率。因此，本發(fā)明在多價(jià)疫苗的生產(chǎn)中非常有利。
疫苗組合物可以容易地溶解在一種藥學(xué)可接受的或獸醫(yī)可接受的稀釋劑中，如緩沖鹽水或者適合對(duì)動(dòng)物施用的其它組合物，例如經(jīng)口施用、皮下施用、作為滴眼劑施用、氣溶膠或鼻腔噴霧，或本領(lǐng)域公知的其它疫苗施用方式。此外，疫苗組合物也可以制成膠囊，供受試者口服。這類些膠囊包括，例如，明膠膠囊或制藥和獸醫(yī)領(lǐng)域使用的其它標(biāo)準(zhǔn)膠囊。另外，疫苗組合物也可以制成片劑，任選地含有本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)壓片賦形劑和載體。在另外一個(gè)實(shí)施方案中，例如，可以用腸溶衣包被疫苗組合物，腸溶衣可以保護(hù)產(chǎn)品在胃中不被降解，和/或使其活性持續(xù)或緩慢地釋放。
自由流動(dòng)的疫苗粉末也可以透皮施用，例如，如本領(lǐng)域所知的，以細(xì)粉透過(guò)皮膚施用，例如使用加壓氣體，如氫或氦，使小顆粒穿過(guò)皮膚，例如使用PowderJectTMSystems，以前來(lái)自PowderJect PharmaceuticalsPLC，(Oxford，United Kingdom)，現(xiàn)在屬于Chiron Corporation(Emeryville，CA)。
在本說(shuō)明書(shū)和隨后的權(quán)利要求書(shū)中，除非內(nèi)容需要，否則單詞“包含”或者其變化應(yīng)當(dāng)理解為包括所述整體或步驟，或者整體或步驟的群體，而不排除其它任何整體或步驟，或者整體或步驟的群體。
本說(shuō)明書(shū)中關(guān)于任何現(xiàn)有技術(shù)的參考文獻(xiàn)，不是也不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或者以任何形式提示現(xiàn)有技術(shù)是澳大利亞公知常識(shí)的一部分。
現(xiàn)在參照下列實(shí)施例描述本發(fā)明的非限制性的說(shuō)明性方面。
實(shí)施例1改進(jìn)Huttlin Turbojet噴霧干燥器，以便產(chǎn)生顆粒的流態(tài)化床，用于接觸噴射的含免疫原的流體。具體而言，改進(jìn)Turbojet噴霧干燥器，使之具有提供流態(tài)化床的噴嘴，和從加工管底部向上噴射含免疫原流體的噴嘴。
市售的噴霧干燥裝置將一種溶液或漿液噴射到氣流內(nèi)，使材料在重力下降過(guò)程中干燥。隨后可以噴射該材料，產(chǎn)生團(tuán)塊。相反，在該實(shí)施例中，向噴霧干燥器中加入一種藥學(xué)可接受的水溶性材料的顆粒，產(chǎn)生流態(tài)化床。該流態(tài)化床用含免疫原的流體噴射。
干燥器在約35℃-42℃下操作。
實(shí)施例2將一水合葡萄糖或甘露醇形式的糖顆粒裝載到實(shí)施例1的流態(tài)化床內(nèi)，在35℃或42℃下用空氣流態(tài)化。流體空氣體積為200cm/小時(shí)。
一種市售的對(duì)抗禽傳染性支氣管炎病毒的疫苗H120用下列溶液1∶1稀釋(a)5％蔗糖，5％脫脂乳，加純化的無(wú)菌水至90％；或者(b)一種溶液，其中含有明膠、葡聚糖、pH7的磷酸緩沖液、EDTA二鈉、甘露醇、卵白蛋白和甘氨酸。
然后以每2kg批12g/min的噴射速度和200cm/小時(shí)的流體空氣體積，將產(chǎn)生的含有病毒顆粒的流體噴射到流態(tài)化的糖核心材料上。
從流態(tài)化床上回收疫苗組合物，利用紅外線濕度分析測(cè)定濕含量為0.1-8％。作為濕含量的另外一種量度，能夠測(cè)定水活度作為濕含量的終點(diǎn)。
然后在雞胚中測(cè)定病毒傳染性，方法包括用等量鹽水重建疫苗組合物，將該疫苗組合物注射到雞胚內(nèi)，之后測(cè)定胚感染劑量EID50。證明該疫苗組合物的病毒效能。根據(jù)在雞胚中的病毒傳染性檢測(cè)，該疫苗組合物在室溫(25℃)下貯存7天后穩(wěn)定并且具有傳染性。
H120病毒需要在-15℃到-20℃下貯存，對(duì)溫度極其敏感。因此該實(shí)施例顯示疫苗的穩(wěn)定性。
實(shí)施例3實(shí)施例3的方法用流態(tài)化的甘露醇顆粒進(jìn)行，噴射含有與等量穩(wěn)定介質(zhì)(b)混合的H120禽傳染性支氣管炎疫苗的一種流體。將獲得的流體噴射到流態(tài)化的甘露醇顆粒上。回收濕度水平為2.51％的自由流動(dòng)的顆粒狀組合物。該方法通常需要約20-30分鐘完成。
相同量的疫苗流體冷凍干燥需要3天以上。然后按照實(shí)施例2所述，通過(guò)在雞胚中測(cè)定病毒傳染性，檢測(cè)終產(chǎn)物的疫苗效能。結(jié)果在表1中顯示。
表1
兩種產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)有相同的效能。
該實(shí)施例證明，根據(jù)本發(fā)明的干燥的疫苗組合物在生產(chǎn)為冷凍干燥的疫苗后具有相同的效能。在這些試驗(yàn)中，這兩種組合物都用鹽水重建，然后在雞胚模型上檢測(cè)。
大約30分鐘后回收干燥的組合物。這與生產(chǎn)冷凍干燥材料所需的3天時(shí)間完全不同。
實(shí)施例4
該實(shí)施例檢測(cè)了疫苗組合物的效能，根據(jù)在25℃或35℃貯存后傳染性的喪失測(cè)定。
根據(jù)實(shí)施例3所述，用H120疫苗或針對(duì)禽傳染性囊病(IBD)的疫苗制備疫苗組合物。
該疫苗組合物與冷凍干燥的相應(yīng)制劑作比較。
在該實(shí)施例中，根據(jù)疫苗在雞胚中的傳染性測(cè)定疫苗的效能。
在35℃貯存7天后，本發(fā)明的疫苗組合物的效能(EID50)下降不到1log，在貯存后產(chǎn)生一種高效的疫苗。相反，對(duì)于冷凍干燥的H120病毒，冷凍干燥的疫苗下降3.12logs，冷凍干燥的IBD疫苗下降1.5logs。也檢測(cè)了在25℃貯存后的穩(wěn)定性。對(duì)于H120疫苗，在25℃下貯存30天后，本發(fā)明的疫苗組合物在貯存后下降不到1log。對(duì)于IBD疫苗組合物，本發(fā)明的疫苗組合物在貯存30天后效能下降0.85log。相反，使用冷凍干燥的IBD疫苗作對(duì)比，效能下降1.62logs。
結(jié)果在圖1中顯示，其中IBH120-VB和IBD-VB是指本發(fā)明的疫苗組合物，分別含有在25℃下貯存30天的禽傳染性支氣管炎H120疫苗和禽傳染性囊病疫苗。
該實(shí)驗(yàn)表明，根據(jù)疫苗的效能證明，與冷凍干燥的疫苗產(chǎn)品相比，根據(jù)本發(fā)明的疫苗的穩(wěn)定性提高。
實(shí)施例5-新城疫按照實(shí)施例3的方法，用新城疫病毒(“ND”，La Sota株)制備疫苗組合物。
該疫苗組合物在25℃下貯存30天，與在相同條件下貯存的相同病毒的冷凍干燥樣品相比較。30天后，根據(jù)實(shí)施例2在雞胚中測(cè)定病毒活性。本發(fā)明的組合物在30天后仍然穩(wěn)定且有效，顯示病毒活性只減少0.9logs。相反，冷凍干燥的組合物顯示在相同時(shí)間之后病毒活性下降1.7logs。這些結(jié)果在圖1中顯示。圖1對(duì)本發(fā)明的組合物(ND-VB)和冷凍干燥的新城疫病毒(ND-FD)的病毒活性相比初始活性的降低作圖。這個(gè)條線圖中的第一個(gè)和第二個(gè)影線柱對(duì)應(yīng)于該實(shí)驗(yàn)。
在25℃下貯存30天代表疫苗貯存的極端條件。甚至在這些條件下，本發(fā)明的疫苗組合物仍然顯示明顯的病毒活性，顯示在25℃下貯存30天后傳染性降低不到1log。
實(shí)施例6在雞中檢測(cè)實(shí)施例5的新城疫疫苗的免疫原性。該研究使用4天大的SPF雞。每組使用10只雞ND-VB(根據(jù)本發(fā)明的新城疫疫苗)、ND-FD(冷凍干燥的新城疫疫苗)和不接受疫苗的對(duì)照組。施用的EID50/2g(免疫感染劑量)冷凍干燥組合物比ND-VB組合物高0.8logs。每只雞經(jīng)鼻接受4mg指定疫苗。每7天收集一次血清樣品進(jìn)行血清學(xué)研究。按照一種標(biāo)準(zhǔn)微量(micro)法，用4HA50滴度的新城疫病毒(LaSota)和1％雞紅細(xì)胞溶液測(cè)定血清中的血細(xì)胞凝集抑制(HI)抗體滴度。(參考文獻(xiàn)Allen，W.H.和R.E.Gough.″新城疫的標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞凝集抑制檢測(cè)微量方法與大量方法的比較.″Vet.Rec.95120-123(1974))。
結(jié)果在表2中顯示。
表2
對(duì)照顯示可以忽略的抗新城疫病毒抗體滴度。本發(fā)明的組合物和冷凍干燥的組合物證明有顯著的抗新城疫病毒的特異性抗體滴度。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)不穩(wěn)定免疫原的疫苗組合物的方法，其中在約25℃-約50℃下，將含有一種或多種免疫原的流體噴射到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)，該反應(yīng)器內(nèi)含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的流態(tài)化顆粒，使得該免疫原在流態(tài)化條件下包被顆粒，并且在顆粒上干燥，之后從該反應(yīng)器中收集干燥含免疫原顆粒，其具有約0.1％w/w-約10％w/w的濕含量，從而產(chǎn)生穩(wěn)定化疫苗組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫原包含病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它微生物，或其抗原性產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述免疫原包含病毒顆粒或細(xì)菌細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述免疫原包含任選地與載體結(jié)合的病毒或細(xì)菌來(lái)源的免疫原，其選自蛋白質(zhì)、肽、糖蛋白或糖脂或多糖，該免疫原在免疫接種受試者后引起針對(duì)作為免疫原來(lái)源的病毒或細(xì)菌的免疫應(yīng)答。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中含有一種或多種免疫原的流體是與穩(wěn)定稀釋劑混合的病毒疫苗或細(xì)菌疫苗制品，以提供含有病毒顆?；蚣?xì)菌免疫原的流體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中溫度為約30℃-約46℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中濕含量為0.1％w/w-2.6％w/w。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中濕含量為0.2％w/w-1.5％w/w。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中含有一種或多種免疫原的流體是免疫原的懸液或分散液，所述免疫原選自病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它微生物、真核細(xì)胞，或所述免疫原的抗原性產(chǎn)物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的方法，其中含有一種或多種免疫原的流體包含一種或多種氨基酸、蛋白質(zhì)、螯合劑、緩沖劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、無(wú)機(jī)鹽、金屬抗氧化劑、潤(rùn)滑劑和佐劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中培養(yǎng)基、疫苗組合物或其它流體中的病毒顆?；蚣?xì)菌細(xì)胞用稀釋劑稀釋。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述藥學(xué)可接受的水溶性材料的顆粒含有一種或多種單糖、二糖、多糖、碳水化合物、水溶性肽、無(wú)機(jī)鹽、水溶性聚合物或藥學(xué)可接受的水溶性賦形劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥學(xué)可接受的水溶性材料含有一種或多種糖。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥學(xué)可接受的水溶性材料包含大小為20μm-1mm的顆粒。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述顆粒大小為50微米到200微米。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的方法，其中所述反應(yīng)器是噴霧干燥反應(yīng)器或流態(tài)化床，在其中將含有免疫原的流體噴射到流態(tài)化顆粒上，并且在其上干燥。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中含有一種或多種免疫原的流體通過(guò)噴嘴或噴頭噴射，該噴嘴或噴頭將噴射的流體輸送到反應(yīng)器內(nèi)。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述顆粒在含有流態(tài)化床的反應(yīng)器內(nèi)以200-500m2/h的速度流態(tài)化。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述穩(wěn)定化疫苗組合物在25℃下貯存30天后仍然穩(wěn)定并且有效。
20.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疫苗組合物是自由流動(dòng)的顆粒狀物質(zhì)。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的方法，它還包括將兩種或多種含有不同免疫原的自由流動(dòng)的穩(wěn)定化疫苗組合物混合在一起，產(chǎn)生多價(jià)疫苗組合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述病毒顆?；蚣?xì)菌是輸送DNA序列、RNA序列或疫苗抗原的載體。
23.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述病毒顆?；蚣?xì)菌被遺傳修飾。
24.一種穩(wěn)定化疫苗組合物，其含有免疫原包被的藥學(xué)可接受的水溶性材料的顆粒，該組合物具有約0.1％w/w-約10％w/w的濕含量。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗組合物，其中所述免疫原含有病毒顆粒、細(xì)菌細(xì)胞或其它微生物或其抗原性產(chǎn)物。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗組合物，其中所述免疫原含有病毒顆?；蚣?xì)菌細(xì)胞。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的疫苗組合物，它含有能夠在被免疫的宿主中繁殖的活病毒顆粒。
28.根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗組合物，其中所述免疫原含有任選地與載體結(jié)合的病毒或細(xì)菌來(lái)源的免疫原，其選自蛋白質(zhì)、肽、糖蛋白或糖脂或多糖，該免疫原在免疫受試者后引起針對(duì)作為免疫原來(lái)源的病毒或細(xì)菌的免疫應(yīng)答。
29.根據(jù)權(quán)利要求24-28中任一項(xiàng)的疫苗組合物，它在25℃下貯存30天后仍然穩(wěn)定并且有效。
30.根據(jù)權(quán)利要求24-29中任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中所述藥學(xué)可接受的水溶性材料含有一種或多種單糖、二糖、多糖或碳水化合物、水溶性肽、明膠、無(wú)機(jī)鹽或水溶性聚合物或藥學(xué)可接受的水溶性賦形劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的疫苗組合物，其中所述水溶性材料含有一種或多種糖。
32.根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗組合物，它含有兩種或多種不同的免疫原包被的顆粒，以產(chǎn)生多價(jià)疫苗。
33.根據(jù)權(quán)利要求24-32中任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中所述免疫原是核酸序列或肽或多肽的載體。
34.根據(jù)權(quán)利要求24-33中任一項(xiàng)的疫苗組合物，其含有大小為50微米到400微米的顆粒。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的疫苗組合物，其中所述顆粒大小為50微米到200微米。
36.根據(jù)權(quán)利要求24-35中任一項(xiàng)的組合物，其中所述免疫原包被的顆粒包含一種或多種氨基酸、蛋白質(zhì)、螯合劑、緩沖劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、無(wú)機(jī)鹽、抗氧化劑、潤(rùn)滑劑和佐劑。
37.根據(jù)權(quán)利要求24的疫苗組合物，它是一種自由流動(dòng)的顆粒狀組合物。
38.根據(jù)權(quán)利要求24-37的疫苗組合物，在對(duì)動(dòng)物或人施用后是免疫原性的。
39.根據(jù)權(quán)利要求24-37的疫苗組合物，它是人用或動(dòng)物疫苗。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的組合物，它是家禽疫苗，用于預(yù)防新城疫、傳染性支氣管炎、球蟲(chóng)病、禽痘、禽霍亂、呼腸病毒誘導(dǎo)的腱鞘炎(病毒性關(guān)節(jié)炎)、禽喉氣管炎、禽腦脊髓炎、傳染性囊病(IBD)、馬萊克氏病、沙門(mén)氏菌感染、雞敗血支原體感染、禽鼻氣管炎、禽皰疹和豬肺炎支原體、產(chǎn)蛋量下降綜合征、傳染性鼻炎(副雞嗜血菌)、關(guān)節(jié)液支原體或禽呼腸病毒。
41.根據(jù)權(quán)利要求39的疫苗組合物，它是豬疫苗，用于預(yù)防或治療大葉性肺炎放線桿菌、萎縮性鼻炎、偽狂犬病、豬丹毒、豬細(xì)小病毒、大腸桿菌腸毒素中毒、豬肺炎支原體、流感、鉤端螺旋體、大腸桿菌感染、豬生殖呼吸綜合征(PRRS)、博德特氏菌和A型和D型multocida感染、副豬嗜血菌感染、產(chǎn)氣莢膜梭菌感染、輪狀病毒感染、豬鏈球菌感染、格拉塞氏病、肺炎、支氣管炎博德特氏菌感染。
42.據(jù)權(quán)利要求39的疫苗，它是人用疫苗，用于預(yù)防流感、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、單純皰疹病毒(2型)、脊髓灰質(zhì)炎、白喉、百日咳、B型流感嗜血菌(Hib)、麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、傷寒癥、水痘(禽痘)、登革熱、EB病毒感染、人乳頭瘤病毒感染、肺炎鏈球菌感染、腦膜炎奈瑟氏球菌感染、肺炎球菌感染、病毒性腦膜炎、輪狀病毒感染、蜱傳腦炎、旅行性腹瀉、霍亂、黃熱病或結(jié)核病。
全文摘要
描述了生產(chǎn)不穩(wěn)定免疫原的一種穩(wěn)定疫苗組合物的方法，其中在約25℃－約50℃下，將含有一種或多種免疫原的流體噴射到一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)，該反應(yīng)器內(nèi)含有藥學(xué)可接受的水溶性材料的流態(tài)化顆粒，使得該免疫原在流態(tài)化條件下包被顆粒，并且在顆粒上干燥，之后從該反應(yīng)器中收集干燥的含免疫原顆粒，其具有為約0.1％w/w－約10％w/w的濕含量。也描述了不穩(wěn)定免疫原的穩(wěn)定的疫苗組合物。
文檔編號(hào)A61P31/16GK1691962SQ03822632
公開(kāi)日2005年11月2日 申請(qǐng)日期2003年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月23日
發(fā)明者T－Y·王, A·W－C·索, T·S－Y·孔 申請(qǐng)人:維奧生物(香港)有限公司