專利名稱：一種治療心絞痛的藥物及該藥物的制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥領域。特別是一種治療心絞痛的藥物，具體地說是以中草藥為原料制備的中成藥，本發(fā)明還涉及該藥物的制備方法及其該藥物在制備治療心絞痛、血脂異常、抗動脈粥樣硬化藥中的應用。

背景技術：
高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病及心絞痛是臨床常見多發(fā)病。流行病學資料證實，我國冠心病(CHD)的發(fā)病率、死亡率正逐年升高，發(fā)病年齡提前，發(fā)病率隨著血總膽固醇(TC)水平和血壓升高而增高。研究證實動脈粥樣硬化病(ASD)是可致殘、致死的全身性疾病，其導致嚴重后果中的腦卒中、心肌梗死，是威脅人民健康與生命的首要病征。ASD和CHD的多重危險因素(高血壓、血脂異常、糖尿病、吸煙、肥胖及代謝綜合征等)幾乎一致。CHD的心肌梗死(MI)病理基礎系ASD的動粥樣硬化斑塊；同樣ASD的發(fā)病主要與血脂異常密切相關。貫徹循證醫(yī)學原則，重視ASD的預防是防治CHD的關鍵，而防治脂質(zhì)異?？蓽p少ASD的發(fā)生，無疑有益于CHD的防治。
現(xiàn)代醫(yī)學認為脂質(zhì)異常(高脂血癥)是冠心病、動脈粥樣硬化病及心絞痛最重要的危險因素，反映了多基因缺陷和飲食習慣生活方式及環(huán)境因素之間相互作用。自脂質(zhì)異常、動脈粥樣硬化發(fā)展至累及冠狀動脈病程冗長而隱匿，多是病始于幼年而發(fā)病于中老年。
硝酸酯類、鈣拮抗劑、β-阻斷劑及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)等是直接針對冠心病、心絞痛等病機的有效藥物。但近年對硝酸酯類，尤其是對鈣拮抗劑的短時和長效的治療作用爭議頗多。除此類藥各自的禁忌證外，硝酸酯類不良反應有體位性低血壓，反射性地興奮交感神經(jīng)而使心肌收縮力加強、心率加快，心肌耗氧量增加，因而減弱了硝酸甘油降低心肌耗氧量的作用；鈣拮抗劑的不良反應多與擴張外周血管作用有關，如頭痛、眩暈、顏面潮紅和體位性低血壓等；β-阻斷劑常見的不良反應有竇性心動過緩，誘發(fā)心功能不全、低血壓及末梢循環(huán)障礙等；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑久用可引起咳嗽，提高了咳嗽反射的敏感性等；另外還需關注心律失常，傳導阻滯、心功能不全甚至促心肌缺血等負面作用；還可產(chǎn)生AS斑塊穩(wěn)定性，脂質(zhì)異常、糖耐量低下等不良作用。同樣抗血小板藥效不理想，抗凝血酶藥物選擇和應用混亂，個體對治療反應差異很大，繼發(fā)出血的致命反應，使藥量難以維持理想的抗凝強度而影響療效，凝血酶直接抑制劑的遠期益處尚待認可。
而心肌缺血或缺血后再灌注損傷(MRI)過程易致心肌頓抑(stunning)、心肌無復流(no-reflowing)、再灌注心律失常及心肌細胞凋亡(apoptosis)、及心肌細胞壞死等損傷，對后續(xù)發(fā)生慢性心力衰竭密切相關。資料表明與脂質(zhì)過氧化造成血管內(nèi)皮功能損傷，再灌后加重NO/NOS系統(tǒng)的異常，NO釋放減少是重要環(huán)節(jié)。
中醫(yī)將脂質(zhì)代謝異常，動脈粥樣硬化歸屬于“痰濁”“瘀血”范疇心絞痛。心肌梗塞屬“胸痹”“心痛”，其發(fā)生多與飲食不節(jié)，情志失調(diào)，年老體虛或肌腑虛衰有關。痰瘀產(chǎn)生的基礎來自肝、脾、腎功能失調(diào)。脾失健運，肝氣郁結(jié)，則痰濕內(nèi)盛，漸至痰濕脾阻血脈，痰瘀互結(jié)，阻滯脈道，冠狀動脈硬化并繼續(xù)發(fā)展為心肌缺血，加重則現(xiàn)“胸痹”“心癰”，遂惡性循環(huán)。由此可見，治療冠狀動脈硬化、冠心病及心絞痛藥物僅用調(diào)脂或單用護心藥物均有偏頗之弊，難奏標本兼治之效。
而目前市場上治療冠心病心絞痛癥藥物同具調(diào)脂、護心功效者甚少。故心血管藥物雖眾，但療效不能滿意。尤其如長期使用化學藥治療心血管疾病其不良反應亦不容忽視。社會對療效更好、更安全的心血管疾病防治藥物存在迫切的需求。


發(fā)明內(nèi)容
鑒于動脈粥樣硬化是痰瘀互結(jié)的病理產(chǎn)物，冠心病是痰凝血瘀病，當以通絡之法祛痰化瘀為治。即將脂質(zhì)異常，動脈硬化冠心病統(tǒng)置于“痰瘀同治”的治則，但組成方劑需顧及病變動態(tài)的全過程和不同階段病癥各異的多數(shù)患者，中藥合理組方能充分發(fā)揮此多途徑、多靶點和調(diào)整機體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的功效。
通過檢索，至今為止，還沒有發(fā)現(xiàn)任何有關本發(fā)明的藥物組合物的報道。本發(fā)明人經(jīng)反復研究并通過動物的反復驗證，研究出具有更好效果，更安全的防治高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病及其心血瘀阻、氣滯血瘀證和痰阻心脈證的心絞痛的中藥，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明目的之一是提供一種安全性高，無毒副作用可長期服用的，防治高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病及其心絞痛的中成藥。
本發(fā)明的另一個目的是提供該治療心絞痛的藥物的制備方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供該治療心絞痛的藥物在制備預防、治療心絞痛藥中的應用。
本發(fā)明的另一個目的是提供該治療心絞痛的藥物在制備預防、治療動脈粥樣硬化癥藥中的應用。
本發(fā)明的另一個目的是提供該治療心絞痛的藥物在制備預防、治療血脂異常癥藥中的應用。
本發(fā)明的另一個目的是提供該治療心絞痛的藥物在制備預防、治療冠心病藥中的應用。
本發(fā)明的解決方案是
本發(fā)明藥物選擇蒲黃(生)、法半夏、丹參、陳皮進行組合，將這些藥物組合使各藥物功效產(chǎn)生協(xié)同作用，從而旨夠有效防治高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病及其心血瘀阻、氣滯血瘀證和痰阻心脈證的心絞痛。其中，蒲黃歸心肝經(jīng)，生用能涼血活血，止心腹諸痛，該藥“專入血分”以清香之氣兼以氣分，能導瘀而治氣血凝滯痛。丹參為心與包絡之血分藥，輔蒲黃以養(yǎng)血活血祛瘀、涼血消痛；法半夏入太陰脾經(jīng)，辛溫善燥濕化痰寬胸，俾去濕脾旺痰之由生；陳皮為脾肺氣分藥，配之理氣燥濕化痰，壯脾順氣，四藥合用，健脾消痰，祛瘀通絡，有效解決痰挾瘀血癥的痰瘀互根，相互轉(zhuǎn)化，共同消長問題。祛瘀則“痰”亦治，消痰則瘀亦去，從而防治脂質(zhì)異常(高脂血癥)、動脈粥樣硬化、冠心病。
為了取得好的療效，本發(fā)明藥物還與制首烏、川芎進行組合。其中制首烏，養(yǎng)血益肝腎和氣血，不寬不燥，為培本扶正之良臣。川芎血中氣藥，辛溫引散，佐以氣行血調(diào)，加強通達氣血祛瘀止痛之功效。
為取得更好療效，本發(fā)明藥物還與制首烏、川芎、昆布、澤瀉、生山楂、決明子、枸杞子組合，其中制首烏，養(yǎng)血益肝腎和氣血，不寬不燥，為培本扶正之良臣。川芎血中氣藥，辛溫引散，佐以氣行血調(diào)，加強通達氣血祛瘀止痛之功效。昆布軟堅破積、消痰飲。山楂味酸，佐以消食健脾、活血散瘀，有散有收，祛不傷正。枸杞佐補肝腎，加澤瀉以淡滲，免有補無瀉之虞，佐以除濕。決明子益肝明目、祛痰濁。以上七藥助前四味主輔藥物，健脾滲濕，補益肝腎，行瘀血消痰濁，使本藥物組合物，防治脂質(zhì)異常、動脈粥樣硬化、冠心病作用更為顯著。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量為下述重量份范圍都具有較好的療效
蒲黃3～12份 法半夏2～12份 丹參5～18份 陳皮2～12份
本發(fā)明藥物的優(yōu)選組分用量為蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份 陳皮5～8份；
本發(fā)明藥物的最佳組分用量為蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份；
本發(fā)明藥物各組分用量還可以是蒲黃3～12份 法半夏2～12份 丹參5～18份 陳皮2～12份 制首烏4～15份 川芎2～12份
本發(fā)明藥物的優(yōu)選組分用量為蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份陳皮5～8份 制首烏6～10份 川芎4～8份；
本發(fā)明藥物的最佳組分用量為蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份 制首烏7份 川芎6份
本發(fā)明藥物進一步各組分用量為蒲黃3～12份 法半夏2～12份 丹參5～18份 陳皮2～12份 制首烏4～15份 川芎2～12份 昆布3～15份 澤瀉3～12份枸杞子3～15份 決明子6～18份 生山楂6～15份；
本發(fā)明藥物的優(yōu)選組分用量為蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份陳皮5～8份 制首烏6～10份 川芎4～8份 昆布6～10份 澤瀉5～8份 枸杞子5～10份 決明子8～12份 生山楂7～10份；
本發(fā)明藥物的最佳組分用量為蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份 制首烏7份 昆布8份 川芎6份 澤瀉6份 枸杞子7份 決明子9份 生山楂8份
本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服制劑。例如可以將這些原料藥研成粉末混合均勻制成散劑沖服；但是為了使該藥物的各原料更好的發(fā)揮藥效，優(yōu)選對原料藥中的蒲黃、丹參進行了特殊提取如乙醇提取，對陳皮或陳皮和川芎進行了水蒸汽蒸餾提取其揮發(fā)油，但是這些不能用于限制本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明藥物活性組分的制備方法如下
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參和陳皮，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與所述重量配比的法半夏、陳皮加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液濾過，濃縮至相對密度為1.15～1.20(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥的得有效成分。
如果原料藥還與制首烏和川芎組合，其制備方法為
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參、陳皮、制首烏和川芎，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與其余四味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15～1.2(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
如果還與昆布、澤瀉、枸杞子、決明子和生山楂組合，其制備方法如下
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參、陳皮、制首烏、川芎、昆布、澤瀉、枸杞子、決明子和生山楂，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與其余九味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15～1.2(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
上述制備方法中，優(yōu)選步驟c)中藥物加水煎煮提取時，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，每次煎煮1小時。
上述制備方法中，優(yōu)選步驟c)中藥物加水煎煮提取時，水煎煮藥液濃縮至相對密度為1.03～1.08(80℃熱測)，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.14～1.18(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
上述制備方法中，優(yōu)選步驟b)中將藥材加乙醇提取時，第一次加8倍藥材量的乙醇提取，第二次加6倍藥材量的乙醇提取，各煎煮1小時。
上述制備方法中，還可在步驟c)中將陳皮或陳皮和川芎二味藥材先加10～15倍量水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油和水煎液①備用，藥渣再與其余藥材一起加水煎煮，濾液與水煎液①合并，濃縮，再與蒲黃、丹參乙醇提濃縮液混勻，得清膏，加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟c)中收集的揮發(fā)油，混勻，制成顆粒劑。
本發(fā)明的藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料以常規(guī)的方法制備成任何一種常用口服劑型，如顆粒劑、丸劑、散劑、片劑、膠囊劑等。
本發(fā)明藥物具有下述優(yōu)點
1、可同時治療心絞痛、抗動脈粥樣硬化及血脂異常。無化學甜味劑，對人體無毒無害；
2、有抗心肌缺血作用及保護心肌缺血后再灌注損傷；
3、可抑制血小板聚集，抗血栓生成和改善血液高凝狀態(tài)；
4、調(diào)整異常血脂及一定程度消退動脈粥樣硬化斑塊、減緩動脈粥樣硬化發(fā)生；
5、抗氧自由基、干預內(nèi)源性抗氧化酶的調(diào)節(jié)，抑制脂質(zhì)過氧化作用；
6、保護血管內(nèi)皮細胞功能，可能與改善NO/NOS系統(tǒng)，增加NO釋放有關。
本發(fā)明的治療心絞痛的藥物可應用于制備預防、治療心絞痛的藥中。
本發(fā)明的治療心絞痛的藥物可應用于制備預防、治療動脈粥樣硬化癥的藥中。
本發(fā)明的治療心絞痛的藥物可應用于制備預防、治療血脂異常癥的藥中。
本發(fā)明的治療心絞痛的藥物可應用于制備預防、治療冠心病的藥中。
本發(fā)明具健脾消濁，行氣活血，祛瘀通絡，滋腎養(yǎng)肝。適用于胸痹之心血瘀阻證，氣滯血瘀證和痰阻心脈證，西醫(yī)稱之為冠心病、心絞痛、抗動脈粥樣硬化，血脂異常等癥。
本發(fā)明用法與用量口服，一日3次。開水沖服，每次6g，

具體實施例方式
實施例1本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃3g、法半夏2g、丹參5g和陳皮2g，備用；
b)將上述重量配比的丹參、蒲黃加55％～65％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與法半夏2g、陳皮2g二味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，分裝于膠囊中，即得。
實施例2本發(fā)明藥物的顆粒劑制備
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、陳皮各12g，丹參18g，備用；
b)將18g的丹參和12g的蒲黃加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將上述重量的陳皮加150g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加7倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
d)將步驟b)的藥渣與12g法半夏加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液和溶液1合并，濃縮至相對密度為1.18，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟c)中收集的揮發(fā)油，混勻，制成顆粒劑。
實施例3本發(fā)明藥物的片劑制備
a)稱取蒲黃6g、法半夏5g、丹參9g、陳皮5.5g，備用；
b)將6g蒲黃和9g丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將步驟b)的藥渣與5g法半夏和5.5g陳皮加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液濃縮至相對密度為1.2，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
d)加入輔料，制成顆粒，并干燥，壓制成片劑。
實施例4本發(fā)明藥物的顆粒劑制備
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、陳皮各5g，丹參7g，備用；
b)將5g蒲黃和7g的丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將5g的陳皮加75g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加7倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
d)將步驟b)的藥渣與5g法半夏加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液和溶液1合并，濃縮至相對密度為1.16，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟c)中收集的揮發(fā)油，混勻，制成顆粒劑。
實施例5本發(fā)明藥物的片劑制備
a)稱取蒲黃9g、法半夏9g、丹參12g、陳皮8g，備用；
b)將9g蒲黃和12g丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將步驟b)的藥渣與9g法半夏和8g陳皮加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液濃縮至相對密度為1.18，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
d)加入輔料，制成顆粒，并干燥，壓制成片劑。
實施例6本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃3g、法半夏2g、丹參5g、陳皮2g、制首烏4g和川芎2g，備用；
b)上述重量的蒲黃和丹參加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與上述重量的法半夏、陳皮、制首烏和川芎加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
d)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，分裝于膠囊中，即得。
實施例7本發(fā)明藥物的顆粒劑制備
a)稱取各原料藥蒲黃12g、法半夏12g、丹參18g、陳皮12g、制首烏15g和川芎12g，備用；
b)將上述重量的陳皮加150g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加7倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)將步驟c)的藥渣與12g法半夏、15g制首烏和12g川芎加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.05，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.15，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，混勻，制成顆粒劑。
實施例8本發(fā)明藥物的片劑制備
a)稱取蒲黃6g、法半夏5g、丹參9g、陳皮5.5g、制首烏7g和川芎6g，備用；
b)將上述重量的陳皮加66g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)步驟c)的藥渣與上述重量的法半夏、制首烏和川芎加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.07，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.16，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，壓制成片劑。
實施例9本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃5g、法半夏5g、丹參7g、陳皮5g、制首烏6g和川芎4g，備用；
b)將上述重量的蒲黃、丹參加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與法半夏5g、陳皮5g、制首烏6g和川芎4g四味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.16，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
d)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，分裝于膠囊中，即得。
實施例10本發(fā)明藥物的片劑制備
a)稱取蒲黃9g、法半夏9g、丹參12g、陳皮8g、制首烏10g和川芎8g，備用；
b)將上述重量的陳皮和川芎加160g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)將步驟c)的藥渣與上述重量的法半夏、制首烏和川芎加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.07，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.16，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，壓制成片劑。
實施例11本發(fā)明藥物的顆粒劑制備
a)稱取蒲黃3g、法半夏2g、丹參5g、陳皮2g、制首烏4g、川芎2g、昆布3g、澤瀉3g、枸杞子3g、決明子6g、生山楂6g，備用；
b)將上述重量的陳皮加25g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)將步驟c)的藥渣與其余藥材加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.05，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.15，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，制成顆粒劑。
實施例12本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃12g、法半夏12g、丹參18g、陳皮12g、制首烏15g、川芎12g、昆布15g、澤瀉12g、枸杞子15g、決明子18g、生山楂15g；備用；
b)將上述重量的陳皮加180g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)步驟c)的藥渣與其余藥材加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.06，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.18，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，制成顆粒，分裝于膠囊中，即得。
實施例13本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃6g、法半夏5g、丹參9g、陳皮5.5g、制首烏7g、川芎6g、昆布8g、澤瀉6g、枸杞子7g、決明子9g、生山楂8g，備用；
b)將上述重量的陳皮和川芎加120g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)步驟c)的藥渣與其余藥材加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.08，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.18，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，壓制成片劑。
實施例14本發(fā)明藥物的顆粒劑制備
a)稱取蒲黃5g、法半夏5g、丹參7g、陳皮5g、制首烏6g、川芎4g、、昆布6g、澤瀉6g、枸杞子5g、決明子8g、生山楂7g，備用；
b)上述重量的陳皮和川芎加100g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)將步驟c)的藥渣與其余藥材加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.05，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.15，與醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，整粒，并干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，制成顆粒劑。
實施例15本發(fā)明藥物的膠囊劑制備
a)稱取蒲黃9g、法半夏9g、丹參12g、陳皮8g、制首烏10g、川芎8g、昆布10g、澤瀉8g、枸杞子8g、決明子12g、生山楂10g；備用；
b)將上述重量的陳皮加130g水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油備用，藥渣再加6倍量水煎煮一次，水煎煮藥液與蒸餾后的藥液合并為溶液1備用；
c)將上述重量的蒲黃、丹參加70％～90％乙醇回流提取2次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
d)將步驟c)的藥渣與其余藥材加水煎煮三次，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，各煎煮1小時，合并水煎煮液，將水煎煮藥液與溶液1合并，濃縮至相對密度為1.06，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.18，與c)、d)醇提濃縮液混勻，得清膏；
e)加入輔料，制成顆粒，干燥，再加入步驟b)中收集的揮發(fā)油，制成顆粒，分裝于膠囊中，即得。
為證明本發(fā)明藥物對防治高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病、心絞痛(尤其是心血瘀阻、氣滯血瘀證和痰阻心脈證的心絞痛)的預防及治療作用，經(jīng)大量動物試驗，測得的試驗數(shù)據(jù)表明
(試驗例1)本發(fā)明藥物家兔實驗性高脂血癥及AS的影響。
試驗材料選本發(fā)明藥物提取清膏，10g生藥/g膏。舒降之(20mg/片)杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，批號010506。膽固醇北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)，批號010428。花生油市售。總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒北京中生生物工程高技術公司生產(chǎn)，批號分別為010601、010617、010403、010504。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)試劑盒南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號分別為20010809、20010813、20011215、20011209、20011108。過氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、脂蛋白a(LP(a))試劑盒上海榮盛生物技術有限公司生產(chǎn)，批號分別為010801，010702。
試驗方法
取日本大耳白家兔，雄性，體重2.11±0.17kg，根據(jù)血脂、相關生化指標水平及體重，將家兔分為①正常對照組(8只)，②高脂造模組(40只)。正常對照組家兔僅飼予普通顆粒飼料，高脂造模組家兔則每天上午每只給予75g高脂顆粒飼料(1)(在普通飼料中加2％膽固醇和10％花生油)，然后飼以普通顆粒飼料。喂養(yǎng)至4周末，稱體重、普測血脂，然后將高脂造模組40只家兔隨機分為5組(每組8只)(1)高脂對照組，(2)舒降之2mg/kg劑量組，(3)本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組，(4)本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組，(5)本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組。按所述劑量開始給各組家兔灌胃給藥，正常對照組和高脂對照組家兔分別灌胃等體積蒸餾水，直至12周末試驗結(jié)束。給藥期間，除正常對照組外，其余各組家兔繼續(xù)喂飼高脂飼料。試驗前、給藥前(即高脂4周)、給藥4周(即高脂8周)、給藥8周(即高脂12周)均測血液中血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、NO、ox-LDL、LP(a)、SOD、MDA水平并稱體重。試驗結(jié)束時采用氣栓法處死動物，解剖檢查主動脈及心臟病變(病理學檢查)、分級、并取主動脈及肝臟勻漿，測定組織脂質(zhì)含量(TC、TG)，肝臟組織還測定MDA、GSH、NO含量和SOD、GSH-Px活性。
試驗結(jié)果表明
一.試驗期間動物健康狀況良好，各組動物進食量基本一致，體重均有所增長。由表1可見，試驗前、給藥前、給藥4周、給藥8周，各組間家兔體重均無明顯差異(p＞0.05)。
表1.本發(fā)明藥物對家兔體重的影響(kg，X±SD，n＝8)
分組劑量(/kg)0周 4周8周12周
正常對照組 2.15±0.13 2.46±0.12 2.84±0.15 3.25±0.24
高脂對照組 2.14±0.11 2.40±0.20 2.81±0.16 3.15±0.22
舒降之組2mg 2.16±0.14 2.43±0.17 2.83±0.21 3.21±0.34
本發(fā)明藥物組2g生藥 2.06±0.16 2.39±0.20 2.75±0.19 3.09±0.25
本發(fā)明藥物組4g生藥 2.05±0.17 2.38±0.15 2.78±0.23 3.19±0.31
本發(fā)明藥物組8g生藥 2.09±0.17 2.41±0.19 2.85±0.21 3.13±0.23
二.本發(fā)明藥物對家兔血清脂質(zhì)含量的影響
由表2可見，試驗前各組間血清脂質(zhì)各項指標均無明顯差異。試驗進行至4周末，高脂對照組TC、LDL-C、VLDL-C、TC/HDL-C比值及TG均較正常對照組明顯升高，差異非常顯著(P＜0.01～0.001)，HDL-C則無明顯變化，本發(fā)明藥物各劑量組及舒降之組前述指標與高脂對照組比較均無明顯差異。第5周開始給藥，給藥4周(即高脂8周)，高脂對照組血清脂質(zhì)各項指標(HDL-C除外)水平均顯著高于正常對照組(P＜0.001)，本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4g生藥/kg劑量組和舒降之組TC、LDL-C及TC/HDL-C比值均明顯低于高脂對照組(P＜0.05～0.01)，舒降之組TG亦明顯低于高脂對照組(P＜0.05)，其他指標與高脂對照組比較均無明顯差異。給藥8周(即高脂12周)，高脂對照組血清脂質(zhì)各項指標(HDL-C除外)仍顯著高于正常對照組(P＜0.001)，HDL-C水平則明顯低于正常對照組(P＜0.05)，本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4g生藥/kg劑量組及舒降之組TC、TG、LDL-C、VLDL-C及TC/HDL-C比值均明顯低于高脂對照組(P＜0.05～0.01)，本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組TG、LDL-C亦明顯低于高脂對照組(P＜0.05)。各給藥組HDL-C水平與高脂對照組比較均有升高趨勢。
表2.本發(fā)明藥物對家兔血清脂質(zhì)含量的影響(X±SD，n＝8)
注與高脂對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
三.本發(fā)明藥物對家兔血清SOD、MDA、LP(a)、NO及血漿ox-LDL的影響
由表3可見，試驗前各組間血清SOD活性、MDA、LP(a)、NO及血漿ox-LDL含量均無明顯差異。給藥前(即高脂4周)，與正常對照組比較，高脂對照組血清MDA、LP(a)含量均明顯增加(P＜0.01)，SOD活性明顯降低(P＜0.05)，血清NO和血漿ox-LDL含量均無明顯變化，各給藥組前述指標與高脂對照組比較均無明顯差異。給藥4周(即高脂8周)，與正常對照組比較，高脂對照組血清MDA、LP(a)含量均顯著增加(P＜0.001)，SOD活性明顯降低(P＜0.001)，血清NO和血漿ox-LDL含量仍均無明顯變化；與高脂對照組比較，舒降之組LP(a)含量明顯降低(P＜0.05)，其它指標均無明顯變化；本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組MDA含量明顯降低((P＜0.05)，其它指標亦均無明顯變化；本發(fā)明藥物4g生藥/kg、2g生藥/kg劑量組前述指標與高脂對照組比較均無明顯差異。給藥8周(即高脂12周)，與正常對照組比較，高脂對照組血清MDA、LP(a)含量均持續(xù)增加(P＜0.001)，血清NO含量、SOD活性均明顯降低(P＜0.01～0.001)，血漿ox-LDL含量無明顯變化。本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組和舒降之組血清MDA、LP(a)含量均明顯低于高脂對照組(P＜0.05)，SOD活性、NO含量均明顯高于高脂對照組(P＜0.05～0.01)；本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組血清MDA、LP(a)含量亦明顯低于高脂對照組(P＜0.05)，血漿NO含量明顯高于高脂對照組(P＜0.05)；本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組各項指標與高脂對照組比較均無明顯差異；各給藥組血漿ox-LDL含量與高脂對照組比較無明顯差異。
表3.本發(fā)明藥物對家兔SOD、MDA、LP(a)、ox-LDL及NO的影響(X±SD，n＝8)
注與高脂對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
四.本發(fā)明藥物對家兔主動脈病變的影響
主動脈AS面積大體觀察可見，正常對照組家兔主動脈內(nèi)膜表面光滑，無AS斑塊、條紋及脂點出現(xiàn)，高脂對照組家兔主動脈內(nèi)膜出現(xiàn)彌漫性奶酪樣斑塊，主動脈弓處及胸主動脈為甚，蘇丹III染色呈紅色，各給藥組家兔主動脈病變類似高脂對照組，但本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4g生藥/kg劑量組及舒降之組家兔主動脈病變面積百分比均明顯小于高脂對照組(P＜0.05)；本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組家兔主動脈病變面積百分比與高脂對照組比較無明顯差異。結(jié)果見表4。
表4.本發(fā)明藥物對家兔主動脈斑塊面積、厚度的影響(X±SD，n＝8)
劑量 斑塊面積 厚度
分組
(/kg) AS％分級 (μm)
正常對照組 ---
高脂對照組 34.61±16.47 II234.5±78.5
舒降之組 2mg 21.10±6.13* I 145.8±74.8*
本發(fā)明藥物組 2g生藥30.18±8.90 II203.3±104.8
本發(fā)明藥物組 4g生藥21.15±5.65* I 160.5±55.5*
本發(fā)明藥物組 8g生藥19.24±4.28* I 157.3±47.0*
注與高脂對照組比較*P＜0.05
表5.本發(fā)明藥物對泡沫細胞形成的影響
泡沫細胞形成等級
組別劑量(/kg) 動物數(shù)(n)
P值
+ ++ +++ ++++
正常對照組 8-- - -
高脂對照組 802 3 3
舒降之組 2mg 842 1 1＜0.05
本發(fā)明藥物組 2g生藥 812 2 3＞0.05
本發(fā)明藥物組 4g生藥 813 3 1＞0.05
本發(fā)明藥物組 8g生藥 833 1 1＜0.05
注1.等級+、++、+++、++++分別表示極輕、輕、中、重度；2.與高脂對照組比較(參比差值法)
組織學觀察光鏡下可見，正常對照組家兔主動脈內(nèi)膜為正常組織結(jié)構(gòu)，高脂對照組家兔主動脈內(nèi)膜增厚，形成明顯的粥樣斑塊，有大量泡沫細胞聚集；本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組和舒降之組主動脈斑塊厚度及斑塊內(nèi)泡沫細胞生成程度均明顯輕于高脂對照組(P＜0.05)；本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組主動脈斑塊厚度亦明顯輕于高脂對照組(P＜0.05)，斑塊內(nèi)泡沫細胞生成程度有減輕趨勢；本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組斑塊厚度及斑塊內(nèi)泡沫細胞生成程度與高脂對照組比較均無明顯差異，見表4～5。
主動脈脂質(zhì)含量給藥至8周末(即試驗結(jié)束時)，高脂對照組家兔主動脈TC、TG含量均顯著高于正常對照組(P＜0.01～0.001)，本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組和舒降之組主動脈TC、TG含量均明顯低于高脂對照組(P＜0.05～0.001)，本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組主動脈TC含量明顯低于高脂對照組(P＜0.05)。見表6。
表6.本發(fā)明藥物對家兔主動脈脂質(zhì)含量的影響(mg/g組織濕重，X±SD，n＝8)
劑量 主動脈
分組
(/kg) TC TG
正常對照組1.18±0.71*** 4.55±1.87***
高脂對照組4.20±0.88 9.57±3.30
舒降之組2mg 2.34±0.62*** 6.05±1.65*
本發(fā)明藥物組2g生藥3.98±1.57 8.71±3.69
本發(fā)明藥物組4g生藥3.05±1.18*8.54±4.54
本發(fā)明藥物組8g生藥2.89±1.17*6.38±1.84*
注與高脂對照組比較*P＜0.05，***P＜0.001
五.本發(fā)明藥物對冠狀動脈病變的影響
表7.本發(fā)明藥物對家兔冠狀動脈的影響(n＝8)
豬油市售。總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒北京中生生物工程高技術公司生產(chǎn)，批號分別為011005、011012、011018、011015。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號分別為20010928、20011007。內(nèi)皮素(ET)、降鈣素基因相關肽(CGRP)試劑盒北京福瑞生物工程公司生產(chǎn)。批號分別為011006、011008。
試驗方法
取朝鮮種鵪鶉71只，雄性，體重103.6±8.3g，根據(jù)血脂、相關生化指標水平及體重，將鵪鶉分為①正常對照組(13只)，②高脂造模組(58只)。正常對照組鵪鶉飼予普通雞飼料，高脂造模組鵪鶉則飼予高脂飼料(1)(在普通雞飼料中加1％膽固醇和14％豬油)，鵪鶉飼養(yǎng)于40×35×20cm鐵絲籠里，室溫23±3℃，每日光照14h，進食量每天每只20g，分上下午各1次，每次10g，飲水自由。喂養(yǎng)至12周正常對照組隨機解剖3只，高脂造模組隨機解剖8只，取主動脈、左右頭臂動脈、心臟及肝臟，觀察病變情況，確定動脈粥樣硬化形成后，換喂普通雞飼料，并將余下的50只高脂造模組鵪鶉隨機分組(每組10只)(1)模型對照組，(2)舒降之4mg/kg劑量組，(3)本發(fā)明藥物3g生藥/kg劑量組，(4)本發(fā)明藥物6g生藥/kg劑量組，(5)本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組。按所述劑量開始給各組鵪鶉灌胃給藥，正常對照組和高脂對照組鵪鶉分別灌胃等體積蒸餾水，直至24周試驗結(jié)束。試驗前(即試驗0周)、給藥前(即試驗12周)、給藥4周(即試驗16周)、給藥8周(即試驗20周)、給藥12周(即試驗24周)均測血液中血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、ET、CGRP水平，給藥前每4周稱一次體重，給藥后每2周稱一次體重。試驗結(jié)束時斷頸處死動物，解剖檢查主動脈、左右頭臂動脈及心臟病變(病理學檢查)、分級，并取肝臟勻漿，測定組織脂質(zhì)含量(TC、TG)、MDA含量及SOD活性。
1、試驗12周鵪鶉AS病變檢查
正常對照組鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈內(nèi)膜表面光滑，無斑塊、脂紋及脂點出現(xiàn)；造模組鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈內(nèi)膜較粗糙，有脂點、脂紋及斑塊，蘇丹III染色呈紅色，AS面積達22.96±11.65％，斑塊厚度為93.8±31.0nm。組織學觀察可見，正常對照組鵪鶉主動脈內(nèi)膜為正常組織結(jié)構(gòu)，造模組鵪鶉主動脈內(nèi)膜增厚，形成明顯的粥樣斑塊，有泡沫細胞聚集。正常對照組鵪鶉冠狀動脈大、中、小支均無病變，無脂質(zhì)浸潤，管壁薄，管腔較大；造模組鵪鶉冠狀動脈大、中支無明顯病變，小支有脂質(zhì)浸潤，內(nèi)膜增厚，管腔狹窄，病變率為21.3％。正常對照組鵪鶉肝臟色澤紅潤，表面光滑；造模組鵪鶉肝臟表面呈乳黃色，欠光滑。前述結(jié)果顯示，高脂喂養(yǎng)12周，成功誘發(fā)了鵪鶉AS病變模型。
試驗期間動物健康狀況良好，各組動物進食量基本一致，體重均有所增長。試驗0周、4周、8周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周，各組間鵪鶉體重均無明顯差異(p＞0.05)。見表9。
表9.本發(fā)明藥物對鵪鶉體重的影響(g，X±SD，n＝10)
組 別
試驗時間
舒降之 本發(fā)明藥物 本發(fā)明藥物 本發(fā)明藥物
正常對照 模型對照
4mg/kg 3g生藥/kg 6g生藥/kg 12g生藥/kg
0周 103.1±9.8 100.9±4.6 101.4±6.5 101.8±8.8 101.8±5.7 102.4±7.1
4周 117.8±4.6 115.2±4.6 115.2±4.6 114.4±4.6 117.0±4.6 118.8±4.6
8周 124.4±9.6 126.1±6.4 126.6±8.3 127.9±3.4 123.6±8.7 126.3±9.7
12周127.8±5.7 126.0±6.5 129.4±8.5 128.9±4.6 126.5±9.7 128.5±8.5
14周127.0±9.1 128.1.±4.5 130.7±9.1 129.0±7.5 127.0±9.1 128.3±9.2
16周128.6±7.8 127.9±6.0 131.1±6.7 129.9±6.1 126.8±10.2 128.8±9.3
18周129.7±8.9 128.9±6.4 131.5±7.6 130.4±6.2 128.6±8.0 128.9±8.5
20周131.6±7.6 130.0±7.2 132.8±6.8 129.9±6.6 130.1±9.1 131.9±7.7
22周134.6±6.4 132.6±6.3 134.3±8.3 132.9±9.3 134.8±8.6 133.3±7.0
24周134.2±8.2 134.4±6.8 133.4±8.0 135.0±6.5 132.7±7.8 133.2±7.3
2、本發(fā)明藥物對鵪鶉血清脂質(zhì)含量的影響
由表10可見，試驗前各組間血清脂質(zhì)各項指標均無明顯差異。試驗進行至12周末，模型對照組、本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組TC、LDL-C、VLDL-C、TC/HDL-C比值及TG均較正常對照組明顯升高，差異非常顯著(P＜0.05～0.001)，HDL-C則無明顯變化，本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組前述指標與模型對照組比較均無明顯差異。第13周改喂普通雞飼料并開始給藥，給藥4周(即試驗16周)，模型組及各給藥組HDL-C無明顯變化，其它血清脂質(zhì)指標均下降，各組除TG均降至正常對照組水平外，其它各項血清脂質(zhì)指標仍高于正常對照組(P＜0.05～0.001)；
本發(fā)明藥物12g生藥/kg、6g生藥/kg劑量組及舒降之組TC和LDL-C下降較快，其值均明顯低于模型對照組(P＜0.05～0.01)，舒降之組VLDL-C水平亦明顯低于模型對照組(P＜0.05)，本發(fā)明藥物12g生藥/kg、6g生藥/kg劑量組的VLDL-C有低于模型對照組的趨勢；模型組TC/HDL-C比值顯著高于正常對照組，本發(fā)明藥物12g生藥/kg、6g生藥/kg劑量組及舒降之組TC/HDL-C比值均顯著低于模型對照組(P＜0.01～0.001)，本發(fā)明藥物3g生藥/kg血清脂質(zhì)各項指標及TC/HDL-C比值與
注與高脂對照組比較**P＜0.01
鏡下觀察可見，正常對照組冠狀動脈無病變，無脂質(zhì)浸潤，管壁薄，管腔較大；高脂對照組冠狀動脈病變主要是小支，中支次之，大支較輕，病變冠狀動脈有脂質(zhì)浸潤，內(nèi)膜增厚致管腔狹窄；各給藥組冠狀動脈病變與高脂對照組相似，但本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4生藥/kg劑量組及舒降之組管腔狹窄程度均明顯輕于高脂對照組(見照片8～13)。結(jié)果分析顯示，本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4生藥/kg劑量組及舒降之組冠狀動脈病變程度的平均得分均明顯低于高脂對照組(P＜0.01)，各給藥組冠狀動脈病變率與高脂對照組比較均無明顯差異(見表7)。
六.本發(fā)明藥物對肝臟脂質(zhì)含量、相關生化指標及肝系數(shù)的影響
給藥至8周末(即試驗結(jié)束時)，正常對照組家兔肝臟色澤紅潤，表面光滑，高脂對照組家兔肝臟表面呈乳黃色，欠光滑，肉眼觀察未見各給藥組家兔肝臟色澤與高脂對照組有明顯差別(照片14)。脂質(zhì)含量及相關生化指標結(jié)果顯示(見表8)，高脂對照組家兔肝臟TC、TG及MDA含量均明顯高于正常對照組(P＜0.05～0.001)，SOD活性、GSH含量及NO含量均顯著低于正常對照組(P＜0.01～0.001)，GSH-Px活性與正常對照組比較無明顯差異；本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組和舒降之組TC和MDA含量均明顯低于高脂對照組(P＜0.05～0.01)，SOD活性、GSH及NO含量均明顯高于高脂對照組(P＜0.05～0.01)；本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組TC、MDA含量均明顯低于高脂對照組(P＜0.05)，GSH和NO含量均明顯高于高脂對照組(P＜0.05)；本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組前述指標與高脂對照組比較均無明顯差異；各給藥組GSH-Px活性及TG含量與高脂對照組比較均無明顯差異；高脂對照組肝系數(shù)顯著高于正常對照組(P＜0.001)，各給藥組肝系數(shù)與高脂對照組比較均無明顯差異。
表8本發(fā)明藥物對家兔肝臟TC、TG、MDA、GSH、NO含量、SOD、GSH-Px
活性及肝系數(shù)的影響(n＝8)
注與高脂對照組比較*P＜0.05，**P＜0.05，***P＜0.001
上述結(jié)果表明本發(fā)明藥物明顯降低家兔血清TC、TG、LDL-C、VLDL-C濃度及TC/HDL-C比值，明顯降低血清MDA、LP(a)含量，明顯升高血清SOD活性和NO含量，對肝臟TC和MDA含量有明顯降低作用，對肝臟SOD活性、GSH和NO含量有明顯升高作用，對家兔主動脈TC、TG含量有降低作用；此外，本發(fā)明藥物能明顯減少主動脈斑塊面積、厚度及泡沫細胞形成量，對反映冠狀動脈管腔狹窄程度的平均得分有減少作用。提示本發(fā)明藥物具有調(diào)節(jié)血脂、清除自由基及抑制脂質(zhì)過氧化的作用，同時在一定程度上具有防治AS的作用。
(試驗例2)本發(fā)明藥物對鵪鶉動脈粥樣硬化影響
試驗材料本發(fā)明藥物，試驗用該藥提取清膏，10g生藥/g膏。舒降之(20mg/片)杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，批號010506。膽固醇北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)，批號010428。模型對照組比較均無明顯差異。給藥8周(即試驗20周)，模型對照組及各給藥組TG、HDL-C無明顯變化，其它各項脂質(zhì)指標仍在下降，除模型對照組TC、LDL-C、VLDL-C水平仍明顯高于正常對照組(P＜0.05～0.01)外，各給藥組TC、LDL-C、VLDL-C均接近正常對照組水平，其中本發(fā)明藥物12g生藥/kg、6g生藥/kg劑量組及舒降之組TC、VLDL-C水平均明顯低于模型對照組(P＜0.05～0.01)；模型對照組TC/HDL-C比值明顯高于正常對照組(P＜0.05)，本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組TC/HDL-C比值均明顯低于模型對照組。給藥12周(即試驗24周)，各組間TG、HDL-C均無明顯差異，模型對照組TC、LDL-C水平仍明顯高于正常對照組(P＜0.05)，VLDL-C水平、TC/HDL-C比值有高于正常對照組趨勢，各給藥組TC、LDL-C、VLDL-C水平及TC/HDL-C均有低于模型對照組的趨勢，而與正常對照組比較均無明顯差異。
表10.本發(fā)明藥物對鵪鶉血清脂質(zhì)含量的影響(X±SD，n＝10)
注與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與正常對照組比較+P＜0.05，++P＜0.01，+++P＜0.001
3、本發(fā)明藥物對鵪鶉血漿ET和CGRP含量的影響
由表11可見，試驗前各組間ET、CGRP含量及ET/CGRP比值均無明顯差異。給藥前(即試驗12周)模型對照組、本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組ET含量和ET/CGRP比值均較正常對照組顯著升高(P＜0.001)，CGRP含量均無明顯變化；本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組ET、CGRP含量及ET/CGRP比值與模型對照組比較均無明顯差異。給藥4周(即試驗16周)，模型對照組、本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組ET含量及ET/CGRP比值均下降，其中ET/CGRP比值接近正常對照組水平，而ET含量仍明顯高于正常對照組(P＜0.05)，CGRP含量均無明顯變化；本發(fā)明藥物三個劑量組及舒降之組ET、CGRP含量及ET/CGRP比值與模型對照組比較均無明顯差異。給藥8周(即試驗20周)，模型對照組、本發(fā)明藥物三個劑量組ET含量仍均明顯高于正常對照組(P＜0.05)，CGRP含量和ET/CGRP比值均無明顯變化；本發(fā)明藥物三個劑量組ET、CGRP含量及ET/CGRP比值與模型對照組比較均無明顯差異；舒降之組ET、CGRP含量及ET/CGRP比值與正常對照組及模型組比較均無明顯差異。給藥12周(即試驗24周)，各組間ET、CGRP含量及ET/CGRP比值均無明顯差異。
表11.本發(fā)明藥物對鵪鶉血漿ET、CGRP及ET/CGRP比值的影響(X±SD，n＝10)
注與正常對照組比較+P＜0.05，+++P＜0.001。
4、發(fā)明藥物對鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈病變的影響
表12.本發(fā)明藥物對鵪鶉主動脈斑塊面積、厚度的影響(X±SD，n＝10)
劑量斑塊面積 厚度
分組
(/kg)AS％ 分級 (μm)
正常對照 ---
模型對照 31.57±17.70 II 106.8±38.3
舒降之 4mg 17.74±7.49* I71.8±28.5*
本發(fā)明藥物 3g生藥32.04±15.59 II 103.3±41.5
本發(fā)明藥物 6g生藥 18.66±4.74*I79.3±31.0
本發(fā)明藥物 12g生藥 17.60±5.90*I70.8±31.0*
注與模型對照組比較*P＜0.05
大體觀察可見，正常對照組鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈內(nèi)膜表面光滑，未見明顯異常，模型對照組鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈內(nèi)膜較粗糙，有脂點、脂紋及斑塊，蘇丹III染色呈紅色，各給藥組鵪鶉主動脈及左右頭臂動脈病變類似高脂對照組，但本發(fā)明藥物12g生藥/kg、6g生藥/kg劑量組及舒降之組鵪鶉AS面積百分比均明顯小于模型對照組(P＜0.05)；本發(fā)明藥物3g生藥/kg劑量組鵪鶉AS面積百分比與模型對照組比較無明顯差異(見表12)。
顯微鏡下可見，正常對照組鵪鶉主動脈內(nèi)膜為正常組織結(jié)構(gòu)(見照片8)，模型對照組鵪鶉主動脈內(nèi)膜增厚，形成明顯的粥樣斑塊，有泡沫細胞聚集；本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組和舒降之組主動脈斑決厚度均明顯輕于模型對照組(P＜0.05)，斑塊內(nèi)泡沫細胞生成程度與模型對照組比較均無明顯差別，本發(fā)明藥物6g生藥/kg和3g生藥/kg劑量組斑塊厚度及斑塊內(nèi)泡沫細胞生成程度與模型對照組比較均無明顯差異(見表12、13)。
表13.本發(fā)明藥物對泡沫細胞形成的影響
劑量 動物數(shù) 泡沫細胞形成等級
組別
P值
(/kg)(n)++++++ ++++
正常對照 10 -- - -
模型對照 10 25 3 0
舒降之4mg 10 45 1 0 ＞0.05
本發(fā)明藥物3g生藥 10 34 3 0 ＞0.05
本發(fā)明藥物6g生藥 10 35 2 0 ＞0.05
本發(fā)明藥物12g生藥 10 53 2 0 ＞0.05
注1.等級+、++、+++、++++分別表示極輕、輕、中、重度；2.與模型組比較(參比差值法)
5、本發(fā)明藥物對冠狀動脈病變的影響
給藥前(即試驗12周)成功誘發(fā)了鵪鶉AS病變，主要是冠狀動脈小支發(fā)生病變，冠狀動脈大、中支無明顯病變，小支由于其組織結(jié)構(gòu)的原因，其斑塊容易消退。給藥24周(即試驗24周)，各組均未觀察到有病變的冠狀動脈，可能是由于內(nèi)膜增厚或形成斑塊的冠狀動脈小支已消退，恢復正常。
6、發(fā)明藥物對肝臟的影響
表14.本發(fā)明藥物對鵪鶉肝臟TC、TG、MDA含量、SOD活性及肝系數(shù)的影響
(X±SD，n＝10)
注與模型對照組比較*P＜0.05；與正常對照組比較+P＜0.05
給藥12周(即試驗24周)，各組鵪鶉肝臟色澤紅潤，表面光滑，肉眼觀察未見各組鵪鶉肝臟色澤有明顯差別。脂質(zhì)含量、MDA含量及SOD活性測定結(jié)果顯示(見表14)，模型對照組TG和MDA含量均明顯高于正常對照組(P＜0.05)，SOD活性與正常對照組比較無明顯差異，本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組和舒降之組TG、MDA含量均明顯低于模型對照組(P＜0.05～0.01)，與正常對照組比較均無明顯差異；本發(fā)明藥物6g生藥/kg劑量組TG含量明顯低于模型對照組(P＜0.05)，與正常對照組比較無明顯差異，MDA含量與正常對照組、模型對照組比較均無明顯差異；融斑通脈3g生藥/kg劑量組TG、MDA含量與正常對照組比較均無明顯差異；舒降之組SOD活性明顯高于正常對照組和模型對照組(P＜0.05)；融斑通脈三個劑量組SOD活性與正常對照組、模型對照組比較均無明顯差異；各組間TC含量和肝系數(shù)均無明顯差異。
上述結(jié)果表明本發(fā)明藥物明顯加速AS模型鵪鶉血清TC、LDL-C、VLDL-C濃度及TC/HDL-C比值趨于正常，對肝臟TG和MDA含量有明顯降低作用，明顯減少主動脈斑塊面積和厚度。提示本發(fā)明藥物具有調(diào)節(jié)血脂、抑制脂質(zhì)過氧化的作用，同時在一定程度上具有促進動脈粥樣硬化斑塊消退的作用。
(試驗例3)本發(fā)明藥物對血瘀模型大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響。
試驗材料
本發(fā)明藥物，試驗用該藥提取清膏，10g生藥/g膏，由無錫山禾藥業(yè)股份有限公司提供，批號20010801，試驗用蒸餾水配成所需濃度。阿司匹林腸溶片(25mg/片)北京市曙光制藥廠生產(chǎn)，批號010640。鹽酸腎上腺素注射液(1mg/ml/支)，北京永康制藥廠生產(chǎn)，批號20010826。
試驗方法
取健康雄性Wistar大鼠60只，體重218.1±7.0g。血瘀模型制備給大鼠皮下注射0.1％鹽酸腎上腺素0.8ml/kg共2次，間隔4h，在兩次之間(前后各間隔2h)將大鼠置冰水中浸泡5min，第2次注射后禁食，18h后形成血瘀模型。
動物分組及給藥將大鼠隨機分為6組(每組10只)①正常對照組(蒸餾水，10ml/kg)，②模型組(蒸餾水，10ml/kg)，③阿司匹林50mg/kg劑量組，④本發(fā)明藥物3g生藥/kg劑量組，⑤本發(fā)明藥物6g生藥/kg劑量組，⑥本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組。各組動物按所述劑量以10ml/kg的體積灌胃給藥，正常對照組、模型組灌胃等體積蒸餾水，每日1次，連續(xù)給藥7日。灌藥最后一日，第②～⑥組按前述方法造模，第①組以同法間隔4h注射等量生理鹽水兩次。造模18h后再灌胃給藥一次，末次給藥后1h，3.5％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，切開腹腔暴露腹主動脈，取血2ml用于體外血栓形成測定，取血3ml(肝素抗凝)用于血液粘度測定。
體外血栓形成測定用硅化注射器穿刺腹主動脈取血2ml，按照Chandler體外法，立刻將血注入旋轉(zhuǎn)環(huán)內(nèi)，注入的血量充滿旋轉(zhuǎn)環(huán)1/2以下(1.8ml)，迅速密封，置血栓形成儀上，旋轉(zhuǎn)10min(實驗溫度為37℃)，傾出血栓，生理鹽水洗滌，測量長度，稱量濕重，將血栓條置80℃烘箱3h，恒重后稱其干重。
血液粘度測定從3ml血(肝素抗凝)中取0.8ml用于全血粘度測定，余血于650×g離心10min，取上清0.8ml用于血漿粘度測定。
試驗結(jié)果
1.對體外血栓形成的影響
表15本發(fā)明藥物對血瘀模型大鼠體外血栓形成的影響(X±SD)
劑量 鼠數(shù) 血栓
組別
(kg) (只)長度(mm) 濕重(mg) 干重(mg)
正常對照 10 21.1±3.1***111.1±29.7*** 20.9±3.2***
10 34.8±5.2225.5±45.5 42.0±10.4
阿司匹林 50mg 10 27.9±2.2** 191.3±18.4* 31.0±5.0**
本發(fā)明藥物3g生藥 10 32.3±5.4220.3±42.8 35.6±8.5
本發(fā)明藥物6g生藥 10 30.3±3.8* 199.6±47.4 32.8±8.1*
本發(fā)明藥物12g生藥 10 27.5±3.0** 190.1±25.1* 31.3±7.2*
注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
由表15可見，與正常對照組比較，模型組血栓長度、濕重及干重均顯著增加(P＜0.001)，提示動物出現(xiàn)典型的“血瘀”表現(xiàn)。與模型組比較，本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組的血栓長度顯著縮短(P＜0.01)、血栓濕重和干重均明顯減輕(P＜0.05)；本發(fā)明藥物6g生藥/kg劑量組血栓長度亦明顯縮短(P＜0.05)，血栓干重亦明顯減輕(P＜0.05)；本發(fā)明藥物3g生藥/kg劑量組的血栓長度、血栓濕重及干重與對照組比較均無明顯差異。與模型組比較，阿司匹林組的血栓長度顯著縮短(P＜0.01)，血栓濕重和干重均顯著減輕(P＜0.05～0.01)。
2.對血液粘度的影響
表16本發(fā)明藥物對血瘀模型大鼠血液粘度的影響(n＝10，X±SD)
組別 劑量 全血粘度(CP) 血漿粘度
(mg/kg) 高切(200S-1) 中切(100S-1)中切(30S-1)低切(5S-1) (CP)
正常對照 4.07±0.55***4.56±0.61*** 5.84±0.75*** 8.19±1.06** 1.29±0.11
模型組 5.51±0.856.72±1.30 10.36±3.22 17.61±8.00 1.93±0.98
阿司匹林 50mg 4.83±0.825.51±1.00*7.33±1.52*10.75±2.56* 1.70±0.06
本發(fā)明藥物3g生藥 5.17±0.676.11±1.09 8.79±2.79 14.08±6.35 1.89±0.63
本發(fā)明藥物6g生藥 4.86±0.725.70±1.25 7.66±2.17*11.39±3.92* 2.03±0.86
本發(fā)明藥物12g生藥 4.90±0.495.68±0.76* 7.76±1.65*11.49±3.04* 1.89±0.60
注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，****P＜0.001。
由表16可見，與正常對照組比較，模型組大鼠的血液粘度在各切變率下均顯著增加(P＜0.01～0.001)，提示動物出現(xiàn)典型的“血瘀”表現(xiàn)。與模型組比較，本發(fā)明藥物12g生藥/kg劑量組大鼠的全血粘度在切變率100S-1、30S-1、5S-1下均明顯降低(P＜0.05)，在切變率200S-1下有降低趨勢；本發(fā)明藥物6g生藥/kg劑量組大鼠的全血粘度在切變率30S-1、5S-1下均明顯降低(P＜0.05)，在切變率100S-1、200S-1下有降低趨勢；本發(fā)明藥物3g生藥/kg劑量組大鼠的全血粘度在各切變率下與模型組比較均無明顯差異。與模型組比較，阿司匹林組大鼠的全血粘度在切變率100S-1、30S-1、5S-1下均明顯降低(P＜0.05)。各組間的血漿粘度均無明顯差異。
上述結(jié)果表明連續(xù)7天灌胃給藥，本發(fā)明藥物明顯縮短血瘀模型大鼠的體外血栓長度(P＜0.05～0.01)、明顯降低血栓濕重和干重(P＜0.05)；明顯降低切變率100S-1、30S-1、5S-1下的全血粘度(P＜0.05～0.01)，對切變率200S-1下的全血粘度有降低趨勢。提示本發(fā)明藥物具有抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。
(試驗例4)為證明本發(fā)明藥物具有抑制血小板聚集的作用測得的試驗數(shù)據(jù)表明
試驗材料本發(fā)明藥物，試驗用該藥提取清膏，10g生藥/g膏。試驗用蒸餾水配成所需濃度。阿司匹林腸溶片(25mg/片)北京市曙光制藥廠生產(chǎn)，批號010640。二磷酸腺苷(ADP)二鈉鹽中國科學院上海生物化學研究所生產(chǎn)，批號9209258，用生理鹽水配制成1.0mM/L的溶液，4℃保存?zhèn)溆?。花生四烯?AA)Fluka AG產(chǎn)品，臨用時用1.0M/L NaOH配制成鈉鹽，濃度為5.0g/L。膠原(100μg/ml)KOKEN公司產(chǎn)品。
試驗方法給藥前穿刺耳中動脈取血測定血小板聚集率，根據(jù)血小板聚集率水平及體重將40只家兔隨機分為5組(每組8只)①對照組(蒸餾水，2.0ml/kg)，②本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組，③本發(fā)明藥物4g生藥/kg劑量組，④本發(fā)明藥物2g生藥/kg劑量組，⑤阿司匹林25mg/kg劑量組。給藥組按所述劑量灌胃給藥，對照組灌胃等體積蒸餾水，每日一次，連續(xù)給藥7日，末次給藥后1h，穿刺耳中動脈取血，測定血小板聚集率。
血小板聚集率測定方法用硅化注射器穿刺耳中動脈取血，3.8％枸櫞酸鈉溶液抗凝(血∶抗凝劑＝9∶1)，200×g離心8分鐘，取上清部分即富血小板血漿(PRP)，剩余部分2200×g離心10分鐘，取上清部分即貧血小板血漿(PPP)。PRP中血小板計數(shù)為4.0×105/mm3左右。按照Born氏比濁法，將盛有200ulPRP及1小磁棒的比濁管置于血小板聚集儀中，37℃保溫1分鐘，經(jīng)PPP標定后，在攪拌情況下加入誘導劑誘導聚集。所用誘導劑的終濃度為ADP(47.6μM/L)、AA(782.0μM/L)、膠原(4.8mg/L)。根據(jù)儀器自動打印出來的聚集曲線及最大聚集率分析藥物對血小板聚集的影響。最大聚集率計算公式如下
表17本發(fā)明藥物對家兔血小板聚集率的影響(n＝8)
聚集率(％X±SD)
誘導劑 組別 劑量(/kg)
藥前 藥后 差值
對照組 59.63±8.0459.66±8.150.02±6.87
阿司匹林 25mg 60.89±10.34 12.01±16.76 -48.88±15.07***
膠原本發(fā)明藥物 2g生藥 58.18±6.2157.08±7.80-1.11±6.14
本發(fā)明藥物 4g生藥 59.89±7.8250.39±7.84-9.49±7.54*
本發(fā)明藥物 8g生藥 62.80±10.45 48.02±10.62 -14.77±7.49**
對照組 62.51±8.1562.21±9.46-0.29±8.23
阿司匹林 25mg 63.01±8.7550.13±6.02-12.80±6.90**
ADP
本發(fā)明藥物 2g生藥 64.81±8.6562.65±10.81 -2.17±10.79
本發(fā)明藥物 4g生藥 64.64±9.8452.84±7.41-11.81±8.52*
本發(fā)明藥物 8g生藥 62.54±8.5750.02±12.60 -12.52±9.50*
對照組 64.79±8.7662.59±11.44 -2.21±6.82
阿司匹林 25mg 64.14±8.646.66±15.31-57.48±10.98***
AA 本發(fā)明藥物 2g生藥 64.02±5.4763.20±9.97-0.82±9.31
本發(fā)明藥物 4g生藥 64.85±7.3258.28±15.22 -6.57±10.37
本發(fā)明藥物 8g生藥 62.78±6.8253.66±4.86-9.13±7.85
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；差值＝給藥后聚集率-給藥前聚集率。
由表17可見，①當膠原誘導聚集時，給藥前各組間血小板聚集率無明顯差異，給藥后本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4g生藥/kg劑量組的血小板聚集率明顯低于對照組(P＜0.05～0.01)，阿司匹林組的血小板聚集率顯著低于對照組(P＜0.001)。②當ADP誘導聚集時，給藥前各組間血小板聚集率無明顯差異；給藥后本發(fā)明藥物8g生藥/kg、4g生藥/kg劑量組的血小板聚集率均明顯低于對照組(P＜0.05)，阿司匹林組血小板聚集率與對照組比較顯著降低(P＜0.01)。③當AA誘導聚集時，給藥前各組間血小板聚集率無明顯差異；給藥后本發(fā)明藥物8g生藥/kg劑量組的血小板聚集率與對照組比較有降低趨勢，阿司匹林組的血小板聚集率顯著低于對照組(P＜0.001)。
血小板聚集試驗結(jié)果表明，家兔連續(xù)灌7天胃給藥，本發(fā)明藥物明顯降低膠原、二磷酸腺苷(ADP)誘導的家兔血小板聚集率(P＜0.05～0.01)，對花生四烯酸(AA)誘導的家兔血小板聚集率有降低趨勢。提示本發(fā)明藥物具有抑制血小板聚集的作用。
(試驗例5)本發(fā)明藥物對麻醉犬心肌缺血、心肌梗塞及冠脈血流量、心肌耗氧量和血液生化指標的影響
試驗材料本發(fā)明藥物提取清膏，10g生藥/g膏；合心爽(鹽酸地爾硫片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)，批號0010107；0.9％氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號011204212；內(nèi)皮素(ET)放免藥盒，北京福瑞生物工程公司，批號0203；血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1a)放免藥盒，北京福瑞生物工程公司批號0203。硝基藍四唑(N-BT)解放軍軍事醫(yī)學科學院藥材供應站，批號971120；肌酸激酶(CK)試劑盒，北京中生生物工程高技術公司提供，批號020201；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，北京中生生物工程高技術公司提供，批號020201。
試驗方法健康成年犬25只，雌雄兼用，體重13.36±2.28kg。試驗共分五組
(1)空白對照組，生理鹽水3ml/kg，n＝5；(2)合心爽組，5mg/kg，n＝5；(3)本發(fā)明藥物1.5g/kg劑量組，n＝5；(4)本發(fā)明藥物3.0g/kg劑量組，n＝5；(5)本發(fā)明藥物6.0g/kg劑量組，n＝5。試驗藥物用蒸餾水配制成同體積(3ml/kg)，經(jīng)十二指腸給藥。
動物經(jīng)戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接電動呼吸機；左側(cè)第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動脈左旋支，放置電磁流量計探頭，測定心臟冠脈血流量(CCBF)；分離冠狀動脈前降支中段，穿線以備結(jié)扎，造成急性實驗性心肌缺血模型；縫置多點固定式心外膜電極，連接多道生理記錄儀，描記心外膜電圖(EEG)<1>。結(jié)扎冠脈15min，進行記錄，作為給藥前對照值，經(jīng)十二指腸給予試驗藥物或生理鹽水，于藥后15、30、45、60、90、120、180min記錄30個標測點心外膜電圖，以S-T段升高大于2mv為判斷標準，計算心肌缺血程度(S-T段升高總mv數(shù)∑-ST)及心肌缺血范圍(S-T段升高總點數(shù)N-ST)。經(jīng)頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇，于缺血前、缺血15min(藥前)、藥后、30、60、90、120、180min取血，以血氧儀(AVL912型，瑞士)測定冠狀靜脈血氧含量；頸總動脈插管，測定動脈血氧含量，與冠脈血流量共同計算心肌耗氧量(MOC)心肌耗氧量＝(動脈血氧含量-冠狀靜脈血氧含量)×冠脈血流量/100。按上述時間點取血以全自動生化分析儀(RA-1000型，美國)測定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)；全自動γ記數(shù)儀(FT-630G型，北京)放免法測定血漿內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a)。
藥后180min記錄完畢，立即取下心臟，生理鹽水沖洗，稱重，心臟結(jié)扎線以下，心臟心室部分切片(5片)，置于N-BT染液中，常溫染色15min。以多媒體彩色病理圖象分析系統(tǒng)(MPIAS-1000型，北京)測量每片心肌雙側(cè)的梗塞區(qū)(N-BT非染色區(qū))與非梗塞區(qū)(N-BT染色區(qū))，計算每片心肌的面積，心室總面積和梗塞區(qū)總面積。計算梗塞區(qū)占心室及占全心臟的百分比<2>。
試驗結(jié)果進行統(tǒng)計學處理，以t檢驗判斷其顯著性。
試驗結(jié)果
(一).對犬心肌缺血(心外膜電圖標測)的影響
1.對心肌缺血程度(∑-ST)的影響
表18各給藥組對犬急性心肌缺血程度(∑-ST)的影響(心外膜電圖標測) (X±SD)
注與藥前自身比較#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001；與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01 ***P＜0.001
結(jié)果見表18。對照組生理鹽水藥后心肌缺血程度(∑-ST)無明顯變化；鈣拮抗劑合心爽藥后可迅速降低∑-ST，可持續(xù)至藥后180min。經(jīng)十二指腸給入本發(fā)明藥物三個劑量組劑量組均有明顯減輕心肌缺血程度(∑-ST)的作用。藥后120、180min，本發(fā)明藥物3.0g生藥/kg劑量組動物∑-ST由藥前327.20±44.08mv降至209.60±43.28mv及179.60±55.65mv，分別下降了35.69±11.74％及44.35±14.20％，與藥前及對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)，6.0g生藥/kg劑量組動物∑-ST從藥后30min開始下降，藥物作用隨給藥時間的延長而增加，180min時，動物∑-ST由藥前354.20±93.92mv降至140.00±65.39mv，下降了58.64±22.98％，與藥前及與對照組比較差異顯著(P＜0.05和0.01)。
2.對心肌缺血范圍(N-ST)的影響
表19各給藥組對犬急性心肌缺血范圍(N-ST)的影響(心外膜電圖標測)
(X±SD)
注與藥前自身比較#P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05
結(jié)果見表19。對照組給入生理鹽水后，心肌缺血范圍(N-ST)無明顯改變。合心爽藥后可減小心肌缺血范圍(N-ST)，180min作用明顯，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)；本發(fā)明藥物6.0g生藥/kg劑量組藥后120、180min也有明顯降低N-ST的作用。
心外膜電圖(EEG)標測的試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對實驗性急性犬心肌缺血有明顯的改善作用，可顯著減輕心肌缺血程度(∑-ST)，減小心肌缺血范圍(N-ST)。
(二)、對犬急性心肌梗塞范圍(N-BT)染色法測定)的影響
表20各給藥組對犬急性心肌梗塞范圍的影響(n＝5(X±SD))
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
結(jié)果見表20，以定量組織學N-BT染色法顯示心肌梗塞范圍，生理鹽水對照組動物心肌梗塞區(qū)分別占心臟及心室的6.52±1.05％和17.04±3.02％；陽性對照藥合心爽及本發(fā)明藥物三個劑量組可明顯縮少動物心肌梗塞區(qū)面積，其中6.0g生藥/kg組心肌梗塞區(qū)面積分別占心臟及心室的2.88±0.47％、6.32±0.810％，分別較生理鹽水對照組降低了55.82％和62.91％，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.001)。
(三)對試驗性心肌缺血犬冠脈血流量的影響
表21 各給藥組對犬冠脈血流量(ml/100g·min-1)的影響(X±SD)
注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001與藥前自身比較#P＜0.05##P＜0.01 ###P＜0.001
結(jié)果見表21，結(jié)扎犬冠狀動脈形成心肌缺血后，冠脈血流量出現(xiàn)短時代償性增加，增加幅度10％左右。合心爽和本發(fā)明藥物三個劑量組藥后均有顯著增加缺血心臟冠脈血流量的作用，3.0和6.0g生藥/kg劑量組藥后60～120min冠脈血流量增加，分別增加了17.48±6.52％，16.74±5.48％和14.41±7.13％，與藥前及對照組組比較，均有顯著性差異(均P＜0.05-0.01)。
(四)、對實驗性心肌缺血犬動、靜脈血氧含量及心肌耗氧量的影響
表22.各給藥組對犬動脈血氧含量(AO2ml％)、靜脈血氧含量(VO2ml％)的影響
(X±SD)
注與藥前自身比較#P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01
表23.各給藥組對犬心肌耗氧量(ml/100g·min-1)的影響 (X±SD)
注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01
結(jié)果見表22、23，對照組生理鹽水給藥前后動脈、冠狀靜脈竇血氧含量及心肌耗氧量均無明顯改變；合心爽可明顯增加靜脈竇血氧含量的同時顯著降低心肌耗氧量。本發(fā)明藥物3.0g生藥/kg和6.0g生藥/kg劑量組藥后有明顯增加靜脈竇血氧含量的作用，增加幅度可達70％，與對照組比較差異顯著(P＜0.05-0.01)。本發(fā)明藥物6.0g/kg在180min時可明顯降低動物心肌耗氧量，與對照組相比差異顯著(P＜0.05)。
(五)、對實驗性心肌缺血犬血液生化學指標的影響
1.對血清肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性的影響
結(jié)果見表24，動物心肌缺血前血清CK、LDH含量分別為260.36±101.77u/L和73.64±25.15u/L(n＝25)，結(jié)扎冠脈形成急性心肌缺血后，血中CK、LDH含量明顯升高，分別為362.32±120.89u/L和84.04±23.97u/L，與缺血前比較CK含量增加了45.30％，LDH含量增加了26.16％；CK、LDH活性隨著冠脈結(jié)扎時間的延長進一步增加，生理鹽水組藥后30、60、90、120、180min與藥前相比較，CK分別增加183.59％、324.33％、330.49％、428.64％及530.00％；LDH分別增加67.30％、99.10％、104.30％、132.51％及120.23％；陽性藥合心爽能明顯抑制心肌缺血引起CK、LDH活性升高。本發(fā)明藥物有部分抑制CK、LDH活性的作用。
表24各給藥組對犬血清CK(U/L)、LDH(U/L)的比較(X±SD)
注與對照組比較*P＜0.05
2.對血漿內(nèi)皮素(ET)、血栓素(TXB2)及6-酮-前列腺素(6-Keto-PGF1a)活性的影響
表25各給藥組對犬血漿ET(pg/ml)、TXB2(pg/ml)的比較(X±SD)
注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001與藥前自身比較#P＜0.05##P＜0.01 ###P＜0.001
表26各給藥組對犬血漿6-Keto-PGF1α(pg/ml)、6-Keto-PGF1α/TXB2的比較
(X±SD)
注與藥前自身比較#P＜0.05；與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
結(jié)果見表25、26，持續(xù)結(jié)扎犬冠狀動脈過程中，生理鹽水對照組動物血漿內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)含量明顯升高；6-酮-前列腺素(6-Keto-PGF1a)及6-酮-前列腺素/血栓素B2比值明顯下降。本發(fā)明藥物對心肌缺血、心肌梗塞引起的血漿血栓素(TXB2)活性亦有明顯抑制作用，同時升高6-酮-前列腺素(6-Keto-PGF1a)及與TXB2的比值。
本試驗采用心外膜電圖標測心肌缺血范圍及程度，定量組織學(N-BT染色法)測定心肌梗塞范圍，同時測定冠脈血流量、心肌耗氧量及血清CPK、LDH和血漿ET、TXB2、6-Keto-PGF1α活性的變化，研究了本發(fā)明藥物消化道(十二指腸)給藥對實驗性犬急性心肌缺血、心肌梗塞及相關指標的影響。
試驗結(jié)果證實，本發(fā)明藥物具有明顯改善犬急性心肌缺血和心肌梗塞的作用，減輕由心外膜電圖標測的心肌缺血程度(∑-ST)，降低心肌缺血范圍(N-ST)，減小經(jīng)N-BT染色所顯示的梗塞區(qū)。
由不同病因造成局部冠狀動脈狹窄或冠狀動脈閉塞形成心肌缺血或心肌梗塞時，其它冠狀動脈分支代償性擴張和開放，可使心肌缺血或心肌梗塞得到緩解。當心肌發(fā)生大面積缺血和廣泛性梗塞、這種代償能力“得不償失”時，則造成心肌壞死和不可逆損傷。試驗觀察到本發(fā)明藥物可明顯增加心肌缺血和心肌梗塞時的冠脈血流量，明顯降低心肌耗氧量，表明其可擴張冠脈血管，促進側(cè)支循環(huán)的開放，改善缺血心肌的供血供氧。
肌酸激酶(CK)廣泛存在于胞漿中，尤以心肌細胞為多。當心肌細胞損傷時CK溢出，使其在血清中活性提高，血清CK活性越高，反映心肌損傷越重<3>。乳酸脫氫酶(LDH)在心肌梗塞時從組織細胞內(nèi)大量釋放于體液中，測定冠狀靜脈竇血中其活性，亦反映心肌損傷的程度。本試驗觀察到持續(xù)結(jié)扎犬冠狀動脈CK和LDH活性持續(xù)增加。試驗觀察到本發(fā)明藥物抑制CK、LDH活性升高的作用。
前列環(huán)素(prostacyclin，PGI2)、內(nèi)皮素(endothelin，ET)、血栓素A2(thromboxaneA2，TXA2)均為內(nèi)皮細胞分泌的血管活性物質(zhì)，其中PGI2為舒血管物質(zhì)，ET和TXA2為縮血管物質(zhì)。本試驗通過測定ET、6-keto-PGF1α(PGI2的終末代謝產(chǎn)物)及TXB2(TXA2的終末代謝產(chǎn)物)等活性物質(zhì)，觀察持續(xù)結(jié)扎犬冠狀動脈形成心肌缺血和心肌梗塞過程中的變化以及觀察藥物對其影響。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對心肌缺血、心肌梗塞引起的血栓素(TXB2)活性有明顯抑制作用，同時可明顯升高6-Keto-PGF1a的水平。
上述結(jié)果表明，本發(fā)明藥物可明顯改善犬急性心肌缺血和心肌梗塞的病理表現(xiàn)，減輕心肌缺血程度，減小心肌梗塞面積；同時可增加冠脈血流量，降低心肌耗氧量；抑制TXB2的釋放；同時可明顯升高6-酮-前列腺素(6-Keto-PGF1a)的水平。
(試驗例6)本發(fā)明藥物對對缺血再灌注所致心肌梗塞范圍及相關生化指標血清SOD、MDA值的影響
試驗材料本發(fā)明藥物提取清膏，10g生藥/g膏。合心爽片(鹽酸地爾硫俋緩釋片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司，批號9804031。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20020508。
試驗方法取Wistar種大鼠48只，雄性，體重240～260g，隨機分為6組假手術組(取血清作正常對照)，模型組，合心爽16mg/kg組，本發(fā)明藥物3.0、6.0、12.0g生藥/kg組。藥物以生理鹽水溶至所需濃度，給藥體積為3ml/kg，給藥途徑為十二指腸。
動物以戊巴比妥鈉腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，以PlowerLab/8sp生理記錄儀監(jiān)測標準II導聯(lián)心電圖；切開氣管，插入氣管插管，接呼吸機進行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；開胸，斷3～5肋，打開心包膜，暴露心臟，于冠狀動脈左前降支根部穿線(0號縫合線)，備結(jié)扎用；分離十二指腸準備給藥；穿線后穩(wěn)定10分鐘，將一塑料凹管與血管并列，結(jié)扎(無ST段及T波改變者淘汰)，給入受試藥物后關腹；40分鐘后，沿凹槽剪斷結(jié)扎線，使前降支實現(xiàn)再灌注；縫合胸壁，恢復自主呼吸。
打開結(jié)扎2小時后，腹主動脈取血，比色法測定血清SOD、MDA含量；心臟結(jié)扎線以下橫切5片，N-BT染色，采用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)(MPIAS-500)，以固定象距測量總心肌面積及梗塞心肌面積，觀察心肌梗塞程度；結(jié)果進行統(tǒng)計學處理(t檢驗)。
1、本發(fā)明藥物對心肌梗塞程度的影響
表27.本發(fā)明藥物對心肌梗塞程度的影響(X±SD)
劑量心肌總面積mm2 梗塞心肌面積mm2 梗塞區(qū)重量 梗塞區(qū)占梗塞區(qū)占
分組 n
/kgg 心室％ 心臟％
模型組 8 275.38±16.8497.35±8.04 0.258±0.02935.2±1.5 30.2±1.3
合心爽組 8 16.0mg 284.02±21.1869.99±13.21** 0.184±0.031** 24.7±3.6** 21.1±3.1**
本發(fā)明藥物組 8 3.0g283.81±18.5983.98±12.01*0.211±0.034* 29.5±3.2** 24.8±2.8**
本發(fā)明藥物組 8 6.0g289.37±18.9270.41±11.81** 0.180±0.036* 24.3±3.9** 20.7±3.4**
本發(fā)明藥物組 8 12.0g 280.92±25.4373.31±16.19** 0.191±0.046** 26.2±5.9** 22.2±4.9**
*、**與模型組比較P＜0.05、P＜0.01.
試驗結(jié)果見表27，模型組梗塞區(qū)占心室及心臟百分比分別為35.2及30.2％；對照藥合心爽組心肌梗塞程度明顯減輕，梗塞面積減小，梗塞區(qū)重量減輕，梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)；本發(fā)明藥物12.0、6.0、3.0g/kg組有同樣作用，梗塞面積減小，梗塞區(qū)重量減輕，梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05～P＜0.01)。
2、本發(fā)明藥物對血清SOD活性及MDA含量的影響
試驗結(jié)果表28證實，模型組SOD值降低，MDA升高，與假手術組比較均有顯著性差異(P＜0.05～P＜0.01)；合心爽16mg/kg組及本發(fā)明藥物12.0g/kg組SOD活性明顯升高，本發(fā)明藥物6.0g/kg組MDA值明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。
表28.本發(fā)明藥物對血清SOD及MDA值的影響(X±SD)
分組n劑量/kg SOD(NU/ml)MDA(nmol/ml)
假手術組8360.92±52.93 9.48±1.13
模型組 8238.55±31.35## 12.34±3.42#
合心爽組816mg277.63±39.59* 9.90±1.75
本發(fā)明藥物組83.0g242.86±73.06 9.46±2.71
本發(fā)明藥物組86.0g273.86±49.37 9.40±1.93*
本發(fā)明藥物組812.0g 290.03±49.21* 10.38±1.86
注##與正常對照組比較P＜0.01；*、**與模型組比較P＜0.05、P＜0.01.
試驗表明，心肌缺血后再灌注損傷，臨床常發(fā)生于冠脈搭橋術后及溶栓術治療心梗后。研究證實，心肌缺血一定時間造成心肌損傷后，再灌注不僅無益于心臟功能的恢復，反而加重已有的心肌損傷，從而導致心肌梗塞的發(fā)生或進一步加重。
本試驗以大鼠心肌缺血再灌注損傷模型觀察藥物作用。試驗觀察到，心肌缺血再灌注導致心肌梗塞發(fā)生，N-BT染色后心梗斑塊明顯，占心室總面積的35.2％；同時SOD活性降低，MDA含量增加，間接反映了氧自由基對再灌性心肌損傷的參與。
本發(fā)明藥物明顯減輕心肌梗塞程度，縮小心梗面積，減輕梗塞區(qū)重量，血清SOD活性增加，MDA含量降低，對心肌缺血再灌注損傷有明確的保護作用。
(試驗例7)本發(fā)明藥物對對麻醉開胸犬心臟血流動力學及心肌耗氧量的影響，研究其對心臟功能的藥理作用及作用機制
試驗材料本發(fā)明藥物提取浸膏，10g生藥/g膏；合心爽(鹽酸地爾硫俋片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)(批號0010107)；0.9％氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(批號011207122)。
試驗方法健康成年雜種犬25只，體重15.16±0.99kg，雌雄兼用，將試驗藥物，均在試驗前用生理鹽水配制成等體積(3ml/kg)，經(jīng)十二指腸給藥。試驗動物用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接電動人工呼吸機。施左側(cè)第四肋間開胸術，暴露心臟，剪開心包，做心包床，分離冠狀動脈左旋支及主動脈根部，放置電磁流量計探頭，分別測量冠脈血流量及心輸出量。左心室尖部插管，連接壓力換能器，經(jīng)載波放大器測定左室內(nèi)壓，再經(jīng)微分器(ED-601G)計算左室內(nèi)壓上升最大速率(dp/dtmax)。頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇<1>，頸動脈插管，以血氧儀分別測定冠狀靜脈竇血氧含量及動脈血氧含量，計算心肌耗氧量。股動脈插管測定動脈血壓，以肢體導聯(lián)觀測標準II導心電圖計算心率及相關心電圖參數(shù)。公式計算其它血流動力學指標心搏出量、耗氧指數(shù)、冠脈阻力、總外周阻力及氧利用率等<2>。將上述各項指標同步記錄于多道生理記錄儀。
施腹部手術，分離十二指腸，插管，以備給予所試藥物。
試驗共分五組(1)空白對照組，生理鹽水3ml/kg，n＝5；(2)合心爽組，5mg/kg，n＝5；(3)本發(fā)明藥物1.5g/kg劑量組，n＝5；(4)本發(fā)明藥物3.0g/kg劑量組，n＝5；(5)本發(fā)明藥物6.0g/kg劑量組，n＝5。
手術完畢，待所觀察指標穩(wěn)定后，記錄藥前值，十二腸給入所試藥物。并于藥后15、30、45、60、90、120分鐘進行記錄。將各項觀測指標及推導參數(shù)進行統(tǒng)計學處理，以不同觀察時間的實測值進行給藥前后自身比較，其變化百分率進行組間比較，以t檢驗判斷其顯著性。
1、對犬動脈血壓、心率及心電圖的影響
表29 各給藥組對犬血壓(mmHg)的影響x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
表30各給藥組對犬標準肢體II導心電圖的影響 x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
表31 各給藥組對犬標準肢體II導心電圖的影響 x±SD
結(jié)果見表29、30、31。合心爽藥后有明顯降低血壓和減慢心率的作用；本發(fā)明藥物3.0g/kg組試驗犬動脈血壓有部分降低，3.0g/kg可減慢動物心率。藥后動物標準II心電圖PR間期、QRS間期、QT間期及T波等參數(shù)均無明顯改化。
2、對犬冠脈血流量及冠脈阻力的影響
表32各給藥組對犬冠脈流量(ml/100g·min-1)、冠脈阻力(mmHg/ml·100g-1·min-1)
的影響 x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
結(jié)果見表32。生理鹽水給藥前后冠脈血流量、冠脈阻力均無明顯變化。本發(fā)明藥物各給藥組藥后15min冠脈血流量開始有所增加，45-60min時間段內(nèi)作用最為明顯，6.0g/kg組45和60min時冠脈流量由藥前82.20±15.11ml/100g·min-1，分別增加到96.84±14.26和97.46±16.72ml/100g·min-1，增加幅度為19.17±9.01％和18.96±8.39％，與藥前及對照組相比有顯著性差異(P＜0.01)。同時本發(fā)明藥物能不同程度的降低冠脈阻力(P＜0.05～0.01)，幅度在20％左右。鈣拮抗劑合心爽亦可明顯增加冠脈血流量和降低冠脈阻力。
3、對左室收縮力、左室作功的影響
表33各給藥組對犬左室收縮力(mm)、左室作功(L·min-1/m2·mmHg)的影響x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
結(jié)果見表33。各試驗組給藥后動物左室收縮力和左室作功未見明顯變化。
4、對犬左室內(nèi)壓、左室內(nèi)壓最大上升速率的影響
表34 各給藥組對犬左室內(nèi)壓(mmHg)、左室壓最大上升速率(dp/dtmax)
的影響x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###＜0.001
結(jié)果見表34。本發(fā)明藥物三個劑量組對左室內(nèi)壓無明顯影響。各組動物藥后左室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax)與對照組比較均無顯著性差異。
5、對犬心輸出量、心搏出量及總外周阻力的影響
表35 各給藥組對犬心輸出量(L/min)、心搏出量(ml/beat)及總外周阻力
(mmHg/L·min-1)的影響x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
結(jié)果見表35。本發(fā)明藥物三個劑量組給藥后，動物心輸出量和心搏出量均有明顯增加，同時可降低總外周阻力。
6、對犬動脈血氧含量、靜脈血氧含量的影響
表36各給藥組對犬動脈血氧含量(g/100ml)、靜脈血氧含量(g/100ml)的影響x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
結(jié)果見表36。本發(fā)明藥物各動物藥后，與藥前比較動脈血氧含量無明顯變化。合心爽組動物冠狀靜脈竇血氧含量均明顯增加，與生理鹽水對照組比較均有明顯差異(P＜0.05-0.001)。本發(fā)明藥物6.0g/kg組動物藥后，冠狀靜脈竇血氧含量明顯升高。
7、對犬心肌耗氧量、耗氧指數(shù)及氧利用率的影響
表37各給藥組對犬心肌耗氧量(ml/100g·min-1)、氧利用率(％)及耗氧指數(shù)
(beat/min·mmHg)的影響 x±SD
注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；自身藥前比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001
結(jié)果見表37。陽性對照藥合心爽經(jīng)十二指腸給藥后，心肌耗氧量、耗氧指數(shù)和氧利用率均明顯降低；本發(fā)明藥物6.0g/kg組動物心肌耗氧量有所降低，60-90min過程中可降低氧利用率。
試驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物可明顯擴張冠脈血管及外周血管，增加冠脈流量和心輸出量，降低冠脈阻力和總外周阻力；改善左室作功，調(diào)整心臟血管的順應性，并可改善心肌氧代謝，降低心肌耗氧量及心肌氧利用率，對心血管系統(tǒng)起到調(diào)整和改善作用。
(試驗例8)本發(fā)明藥物的毒性
試驗材料提取10g生藥/克本發(fā)明藥物清膏。
一、急性毒性試驗
根據(jù)中藥新藥研究的有關規(guī)定，對融斑通脈顆粒進行了小鼠急性毒性試驗觀察，因無法測出LD50，故進行了最大給藥量的測定。小鼠灌胃給藥，累積劑量為350g生藥/kg，是臨床用藥量的188.5倍。動物未發(fā)現(xiàn)不良反應及死亡。
二、長期毒性試驗
試驗方法取Wistar種大鼠，雌雄各半，體重87.14±7.89g，隨機分為四組，雌雄各半。
本發(fā)明藥物臨床用量130g生藥/日/人，按70kg體重計算臨床用量為1.857g生藥/kg。對照組，灌服同體積常水；本發(fā)明藥物大劑量組94g生藥/kg；中劑量組47g生藥/kg；小劑量組23.5g生藥/kg(分別為臨床用量的50、25、12.5倍)。連續(xù)給藥26周(于給藥12周及26周及停藥2周時各處死1/3動物進行觀察)。每周稱體重并調(diào)整藥量。每月連續(xù)稱飼料一周，計算大鼠100g體重每日平均攝食量。
一)檢測項目及方法
每日觀察動物給藥后的反應，包括精神狀態(tài)、一般行為、運動功能、呼吸狀態(tài)、毛色、攝食、二便、耳鼻眼等有無異常分泌物等。于給藥3個月(12周)時，各組動物取10只，雌雄各半，戊巴比妥鈉麻醉，用XQ-2型心電圖儀記錄標準II導聯(lián)心電圖，定標電壓1mv＝15mm，計算PR間期、QRS間期、QT間期、T波波幅、心率等指標。腹主動脈取血，應用6318K型全自動血球計數(shù)儀測定血紅蛋白(HGB)、紅細胞總數(shù)(RBC)、白細胞總數(shù)(WBC)及分類、血小板(PLT)等血液學指標；測定凝血時間，分離血清，應用RA-1000型全自動生化分析儀測定天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALb)、血糖(GLU)、總膽紅素(T-Bili)、總膽固醇(T-CHO)等十項指標(試劑為中生生物工程高技術公司產(chǎn)品，批號020201)；解剖取心、肝、脾、肺、腎、胃、十二指腸、大腸、腦、垂體、甲狀腺、胸腺、胰腺、腎上腺、子宮、卵巢、睪丸、前列腺、脛骨做病理學檢查，其中對心、肝、脾、肺、腎、腦、垂體、子宮、卵巢、睪丸稱重，計算臟器指數(shù)。所獲得的實驗結(jié)果均進行統(tǒng)計學處理(t檢驗)。各組繼續(xù)給藥至26周，每組取10只同前處理。各組動物，于停藥2周后再取10只同前處理，觀察藥物的毒性反應、可逆程度及可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應。
實驗結(jié)果顯示
1、本發(fā)明藥物對動物一般狀況及體重的影響
動物一般狀況連續(xù)給藥26周及停藥2周后，各組動物活動及精神狀態(tài)良好，給藥期間動物二便正常，毛色白有光澤，未出現(xiàn)中毒性死亡。對體重的影響給藥三個月時大劑量組雄性動物體重與對照組比較有所下降(P＜0.05)，三個月后體重變化與對照組比較無明顯差異。中、小劑量組與對照組比較亦無明顯差異。
表38 給藥前后各組雄性大鼠體重(X±SD)
表39給藥前后各組雌性大鼠體重(X±SD)
表40 給藥前后各組雄性大鼠體重差值的比較(X±SD)
注差值＝藥后體重-藥前體重 *與對照組比較P＜0.05
表41給藥前后各組雌性大鼠體重差值的比較(X±SD)
注差值＝藥后體重-藥前體重 *與對照組比較P＜0.05
2、本發(fā)明藥物對動物攝食量的影響
表42給藥不同時間各組動物攝食量的比較(n＝36，g/100g體重/天，X±SD)
分組性別 給藥4周 給藥8周 給藥12周
雄9.53±0.475.95±0.694.47±0.06
對照組
雌8.83±0.826.84±0.735.62±0.28
雄9.15±0.906.15±0.624.82±0.75
小劑量組
雌9.22±1.136.46±0.325.40±0.15
雄8.01±1.295.43±0.424.23±0.28
中劑量組
雌8.67±1.377.08±0.495.06±0.42
雄8.51±0.825.47±0.814.30±0.51
大劑量組
雌9.15±2.135.91±0.705.21±0.51
表43.給藥不同時間各組動物攝食量的比較(n＝24，g/100g體重/天，X±SD)
分組性別給藥16周給藥20周 給藥24周
雄 4.55±0.14 4.45±0.05 3.47±0.08
對照組
雌 5.59±0.01 4.62±0.16 4.97±0.06
雄 4.44±0.21 4.38±0.10 3.55±0.14
小劑量組
雌 5.46±0.52 4.77±0.40 4.80±0.59
雄 4.39±0.23 4.32±0.33 3.30±0.10
中劑量組
雌 5.41±0.18 4.50±0.62 4.94±0.21
大劑量組
雄 4.44±0.13 4.53±0.59 3.74±0.60
雌5.48±0.564.26±0.214.45±1.07
實驗結(jié)果表明，在給藥4、8、12、16、20、24周，各劑量組攝食量與對照組比較無顯著性差異。
3、本發(fā)明藥物對凝血時間的影響
表44 各組凝血時間的比較 (X±SD)
凝血時間測定結(jié)果表明，給藥3個月、6個月及停藥2周各給藥組凝血時間與對照組比較均無明顯差異。
4、本發(fā)明藥物對血液學指標的影響
表45 各組血液學指標的比較(3個月)(n＝10，X±SD)
RBC HGB PLT WBC 分類(％)
分組
(1012/L) (g/L) (109/L)(109/L)粒細胞(GR) 淋巴細胞(LY) 單核細胞(MO)
對照組 7.65±0.71128.20±7.25 905.70±116.37 4.62±1.19 17.17±5.86 81.62±5.94 1.21±0.39
小劑量 7.59±0.46126.20±5.09 881.10±141.07 4.25±0.72 13.61±3.96 85.43±4.01 0.96±0.28
中劑量 7.95±0.30127.30±5.46 879.10±91.36 4.75±1.06 17.79±5.58 81.12±5.63 1.09±0.44
大劑量 8.16±0.30131.22±3.38 879.00±168.97 4.93±1.41 15.90±4.14 83.18±4.31 0.92±0.27
表46 各組血液學指標的比較(6個月)(n＝10，X±SD)
分組 RBCHGBPLTWBC 分類(％)
(1012/L) (g/L)(109/L) (109/L)粒細胞(GR) 淋巴細胞(LY) 單核細胞(MO)
對照組 7.72±0.56 129.60±5.38 815.00±69.11 4.02±0.86 18.93±6.5780.09±6.730.98±0.19
小劑量 7.80±0.47 130.30±5.56 846.60±58.89 3.85±0.67 28.74±7.07** 69.82±7.49** 1.44±0.58*
中劑量 7.72±0.62 128.90±6.85 832.30±60.35 4.06±1.12 22.91±7.9375.81±8.131.28±0.28
大劑量 7.44±0.67 128.00±6.16 831.60±79.70 4.14±1.29 20.09±3.7978.87±3.891.04±0.20
*與對照組比較P＜0.05 **P＜0.01
表47 各組血液學指標的比較(停藥2周) (n＝10，X±SD)
RBC HGB PLT WBC 分類(％)
分組
(1012/L) (g/L)(109/L) (109/L) 粒細胞(GR) 淋巴細胞(LY) 單核細胞(MO)
對照組7.50±0.76126.50±7.35 766.70±89.79 4.08±1.4425.26±6.64 73.51±6.84 1.23±0.25
小劑量7.70±0.32129.60±3.37 778.10±45.83 3.54±0.7229.37±6.08 69.47±6.24 1.16±0.24
中劑量7.53±0.37127.00±6.16 757.30±73.68 3.68±0.9530.36±5.30 68.39±5.42 1.25±0.17
大劑量7.52±0.59126.60±10.28798.70±68.41 3.65±0.8228.95±5.99 69.84±6.05 1.21±0.22
血液指標測定結(jié)果表明，給藥6個月小劑量組白細胞分類與對照組比較有差異，但總數(shù)無顯著差異且均在正常范圍之內(nèi)。其他各組各項指標與對照組比較無統(tǒng)計學差異。停藥2周后各項指標各組間比較無顯著差異。
5、本發(fā)明藥物對血液生化指標的影響
表48 各組生化指標的比較(3個月)(n＝10，X±SD)
ALT AST ALP BUNCrea
分組
(IU/L)(IU/L)(IU/L) (mMol/L) (uMol/L)
對照組 36.40±18.22 125.20±31.65 54.40±18.36 6.76±2.50 102.61±11.04
小劑量組 37.70±18.42 131.80±16.54 57.40±25.29 7.53±2.16 106.19±12.38
中劑量組 33.50±13.43 116.30±13.27 66.20±25.55 6.79±2.70 111.70±11.97
大劑量組 35.80±8.11 105.80±21.47 59.20±23.38 7.88±3.86 107.67±10.31
表49 各組生化指標的比較(3個月)(n＝10，X±SD)
Chol GLU T-Bili TP Alb
分組
(mMol/L) (mMol/L) (uMol/L)(g/L) (g/L)
對照組 1.10±0.127.83±1.86 5.84±3.03 55.55±5.12 31.21±3.12
小劑量組1.25±0.248.33±2.29 4.88±1.2458.85±8.3033.27±4.93
中劑量組1.10±0.167.79±1.20 4.84±1.8858.53±5.7832.23±3.13
大劑量組1.15±0.157.31±1.43 6.26±3.0054.80±4.4830.82±2.35
表50 各組生化指標的比較 (6個月)(n＝10，X±SD)
ALT AST ALP BUN Crea分組
(IU/L) (IU/L) (IU/L) (mMol/L)(uMol/L)
對照組36.70±9.21 102.30±28.08 38.40±20.537.02±1.29 108.79±8.77
小劑量組 67.50±57.39 141.10±70.25 44.70±20.066.11±0.76 114.01±17.91
中劑量組 45.40±29.00 131.40±45.59 42.70±20.706.44±1.92 120.68±18.74
大劑量組 37.70±8.82 129.50±34.51 46.00±26.476.43±1.13 117.36±13.50
表51 各組生化指標的比較(6個月)(n＝10，X±SD)
Chol GLUT-Bili TPAlb
分組
(mMol/L) (mMol/L) (uMol/L) (g/L) (g/L)
對照組 1.30±0.15 7.92±1.13 6.27±2.7455.72±6.32 30.16±3.78
小劑量組 1.34±0.34 9.25±1.86 6.82±3.6959.96±9.20 32.66±5.34
中劑量組 1.44±0.31 9.04±1.94 8.28±4.3561.58±11.62 33.51±6.50
大劑量組 1.45±0.21 8.98±1.54 6.52±1.8260.41±7.34 32.85±4.54
表52 各組生化指標的比較 (停藥2周) (n＝10，X±SD)
ALT AST ALP BUN Crea
分組
(IU/L)(IU/L)(IU/L) (mMol/L) (uMol/L)
對照組 47.10±20.42 116.50±24.67 55.90±25.06 6.38±2.07123.49±11.14
小劑量組 35.50±8.81 100.00±12.81 42.90±20.46 7.95±1.31117.47±18.53
中劑量組 37.70±13.12 104.10±30.74 40.90±19.32 6.03±1.64108.71±18.98
大劑量組 43.60±17.14 119.40±33.09 36.20±17.73 6.98±1.93109.18±38.28
表53 各組生化指標的比較(停藥2周)(n＝10，X±SD)
分組 Chol GLU T-Bili TPAlb
(mMol/L)(mMol/L)(uMol/L) (g/L)(g/L)
對照組 1.45±0.18 9.64±1.68 5.56±2.7065.39±7.41 34.83±4.53
小劑量組1.42±0.27 10.73±2.44 6.07±3.4163.44±8.31 34.25±4.82
中劑量組1.32±0.25 9.85±1.74 5.22±1.4059.46±7.80 32.32±4.50
大劑量組1.23±0.17 8.43±2.24 5.17±2.4060.96±11.16 32.92±6.71
10項血液生化測定結(jié)果表明各給藥組3個月、6 個月及停藥2周各項指標與對照組比較均無明顯差異。
6、本發(fā)明藥物對心電圖的影響
表54 各組心電圖的比較(3個月) (n＝10，X±SD)
HR PR間期 QRS間期 QT間期 T波
分組
(beat/min) (s) (s) (s) (mv)
對照組402.00±31.20 0.048±0.0080.016±0.0030.067±0.0160.075±0.026
小劑量組 406.00±14.30 0.048±0.0100.017±0.0030.068±0.0150.062±0.024
中劑量組 406.00±17.76 0.048±0.0080.016±0.0030.080±0.0200.064±0.024
大劑量組 412.00±22.01 0.049±0.0100.016±0.0030.071±0.0200.063±0.024
表55 各組心電圖的比較(6個月) (n＝10，X±SD)
HR PR間期 QRS間期 QT間期 T波
分組
(beat/min) (s) (s) (s) (mv)
對照組410.00±18.86 0.052±0.0100.016±0.0030.073±0.0130.068±0.026
小劑量組 402.00±18.74 0.049±0.0100.016±0.0020.073±0.0130.070±0.028
中劑量組 402.00±22.01 0.051±0.0100.016±0.0020.077±0.0140.069±0.025
大劑量組 397.00±20.03 0.050±0.0110.016±0.0030.070±0.0180.068±0.026
表56 各組心電圖的比較(停藥2周)(n＝10，X±SD)
HR PR間期 QRS間期 QT間期 T波
分組
(beat/min) (s) (s) (s) (mv)
對照組374.00±47.19 0.048±0.0080.016±0.0030.078±0.0210.080±0.019
小劑量組 381.00±37.25 0.048±0.008 0.016±0.003 0.086±0.020 0.074±0.028
中劑量組 382.00±44.17 0.052±0.008 0.016±0.003 0.076±0.014 0.083±0.026
大劑量組 367.00±34.66 0.052±0.008 0.015±0.003 0.089±0.019 0.062±0.024
本發(fā)明藥物三個劑量組給藥3個月、6個月及停藥2周各組標準II導聯(lián)心電圖PR間期、QRS間期、QT間期、T波波幅、心率等指標與對照組比較均無顯著性差異。
7、本發(fā)明藥物對各組動物臟器指數(shù)的影響
表57 各組臟器指數(shù)的比較(3個月)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 心 肝 脾 肺 腎
對照組0.272±0.0322.691±0.289 0.186±0.034 0.506±0.101 0.316±0.039
小劑量組 0.272±0.0292.578±0.160 0.170±0.021 0.449±0.043 0.331±0.044
中劑量組 0.253±0.0172.495±0.126 0.172±0.018 0.431±0.056 0.287±0.030
大劑量組 0.260±0.0242.544±0.158 0.173±0.024 0.449±0.067 0.290±0.038
表58 各組臟器指數(shù)的比較(3個月)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 腦 垂體 腎上腺 睪丸 子宮 卵巢
對照組0.444±0.109 0.002±0.001 0.020±0.0060.467±0.051 0.256±0.069 0.035±0.007
小劑量組 0.443±0.107 0.003±0.001 0.016±0.0060.438±0.040 0.193±0.087 0.032±0.008
中劑量組 0.430±0.098 0.003±0.001 0.017±0.0070.426±0.052 0.194±0.029 0.032±0.008
大劑量組 0.448±0.110 0.003±0.001 0.016±0.0050.439±0.035 0.182±0.047 0.040±0.008
表59 各組臟器指數(shù)的比較(6個月)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 心 肝 脾 肺 腎
對照組0.273±0.0472.586±0.320 0.170±0.0380.423±0.0650.314±0.048
小劑量組 0.257±0.0372.456±0.234 0.150±0.0210.379±0.0700.276±0.036
中劑量組 0.295±0.0492.516±0.296 0.183±0.0510.386±0.1360.278±0.035
大劑量組 0.282±0.0352.559±0.325 0.179±0.0510.401±0.0980.296±0.046
表60 各組臟器指數(shù)的比較(6個月)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 腦 垂體腎上腺 睪丸 子宮卵巢
對照組0.396±0.1020.003±0.0010.017±0.0090.385±0.059 0.203±0.0460.027±0.010
小劑量組 0.371±0.1090.002±0.0010.015±0.0080.288±0.095 0.159±0.0290.022±0.014
中劑量組 0.364±0.1020.004±0.0040.013±0.0080.365±0.021 0.208±0.0450.022±0.006
大劑量組 0.399±0.1090.003±0.0010.015±0.0070.379±0.032 0.197±0.0180.025±0.006
表61 各組臟器指數(shù)的比較(停藥2周)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 心 肝 脾 肺 腎
對照組0.321±0.0572.784±0.5190.199±0.0390.459±0.0540.319±0.075
小劑量組 0.277±0.0382.482±0.3100.174±0.0290.422±0.0480.284±0.055
中劑量組 0.279±0.0392.417±0.2240.177±0.0350.418±0.0730.278±0.048
大劑量組 0.287±0.0282.455±0.2060.182±0.0570.414±0.0930.279±0.038
表62 各組臟器指數(shù)的比較(停藥2周)(g/100g體重，n＝10，X±SD)
分組 腦 垂體 腎上腺 睪丸子宮 卵巢
對照組0.461±0.1230.003±0.001 0.017±0.008 0.347±0.1600.210±0.034 0.032±0.021
小劑量組 0.378±0.1080.003±0.001 0.014±0.007 0.351±0.1240.200±0.034 0.024±0.007
中劑量組 0.409±0.1190.003±0.001 0.014±0.006 0.324±0.1180.173±0.024 0.018±0.011
大劑量組 0.400±0.1050.005±0.0050.015±0.0090.391±0.0240.179±0.0290.022±0.010
解剖大體觀察各組動物臟器未發(fā)現(xiàn)異常改變，各給藥組臟器指數(shù)與對照組比較無顯著性差異。
8、大鼠長期毒性實驗病理檢查
實驗動物臟器病理檢查報告
實驗藥物本發(fā)明藥物
實驗分組對照組、小劑量組、中劑量組、大劑量組。
組織學制片10％福爾馬林固定，常規(guī)取材、脫水、浸蠟、包埋、切片、HE染色。
送檢臟器腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸、垂體、甲狀腺、胸腺、胰腺、腎上腺、子宮、卵巢、睪丸、前列腺。3個月、6個月及停藥2周三批組織。
大體標本檢查
各組動物以上臟器大體觀察，表面光滑，色澤正常，未見異常病灶。
顯微鏡下檢查
心灌胃給藥3個月、6個月，對照組心臟三層結(jié)構(gòu)清楚，中層肌纖維排列有序，未見變性、壞死及斷裂。間質(zhì)內(nèi)未見出血及炎性細胞浸潤。本發(fā)明藥物三個劑量組鏡下結(jié)構(gòu)同對照組。停藥2周后各給藥組未見中毒性病理變化。
肝灌胃給藥3個月、6個月，不同劑量的本發(fā)明藥物組、對照組及停藥2周后各給藥組，鏡下肝小葉結(jié)構(gòu)尚能辯出，肝細胞呈條索狀，圍繞中央靜脈以放射狀形式排列，肝竇清楚，肝細胞未見腫脹、變性及壞死，匯管區(qū)可見極少的炎性細胞，未見中毒性病理變化。
脾灌胃給藥3個月、6個月，對照組、不同劑量的本發(fā)明藥物組，鏡下被膜完整，內(nèi)有界限清楚的紅、白髓，停藥2周后各給藥組未見中毒性病變。
肺灌胃給藥3個月、6個月，對照組肺內(nèi)可見由支氣管上皮入肺不斷分支，形成支氣管樹，管腔由粗變細，粘膜上皮完整，個別粘膜下及小血管周圍可見少許炎性細胞浸潤，部分肺泡壁略有增厚，不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周各給藥組鏡下未見中毒性病變。
腎灌胃給藥3個月、6個月，對照組皮質(zhì)內(nèi)可見散在的圓形或卵圓形的腎小球，球內(nèi)毛細血管豐富，包文氏囊內(nèi)未見滲出液，腎小管上皮完整，未見腫脹、變性及壞死，管腔內(nèi)未見不同類型的管型。本發(fā)明藥物三個劑量組及停藥2周后各給藥組，鏡下同對照組大致相似，未見中毒性病理變化。
腦灌胃給藥3個月、6個月，對照組鏡下腦組織灰白質(zhì)界限清楚，內(nèi)有豐富的神經(jīng)細胞及膠質(zhì)細胞，間質(zhì)內(nèi)未見出血及炎性細胞浸潤。不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周后各給藥組鏡下結(jié)構(gòu)同對照組相似，未見中毒性病理變化。
胃灌胃給藥3個月、6個月，對照組及不同劑量的本發(fā)明藥物組，鏡下結(jié)構(gòu)基本相似，四層結(jié)構(gòu)明顯，粘膜層表面為單層柱狀上皮，其下方為排列整齊的單管狀腺體，細胞豐富，主細胞、壁細胞可見，粘膜下層較為疏松，肌層肥厚，以內(nèi)斜中環(huán)外縱排列，漿膜層可見，停藥2周后各給藥組未見中毒性病理性變化。
大腸灌胃給藥3個月、6個月，對照組大腸包括盲腸、升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸幾個部分，腸壁為四層，粘膜層表面為柱狀上皮和杯狀細胞，腸腺為管狀，以杯狀細胞居多，固有膜內(nèi)部分可見淋巴細胞，粘膜下及肌層明顯，漿膜層由結(jié)締組織及外被間皮構(gòu)成，三個劑量組的本發(fā)明藥物及停藥2周后，各給藥組鏡下同對照組一致，未見異常。
小腸灌胃給藥3個月、6個月，對照組四層結(jié)構(gòu)可見，由十二指腸、空腸、回腸構(gòu)成，腸粘膜表面為絨毛狀，主要為柱狀上皮細胞，杯狀細胞夾在其中，其下方為密集的腸腺，孤立的淋巴小結(jié)可見，肌層由內(nèi)環(huán)外縱的肌纖維構(gòu)成，漿膜層同大腸，三個劑量組的本發(fā)明藥物組及停藥2周后，各給藥組鏡下形態(tài)同對照組相似，未見特殊病變。
腎上腺灌胃給藥3個月、6個月，對照組、不同劑量的本發(fā)明藥物及停藥2周后各給藥組，鏡下結(jié)構(gòu)比較一致，皮髓質(zhì)界限清楚，皮質(zhì)內(nèi)球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶三個帶排列整齊，髓質(zhì)區(qū)血管豐富，未見中毒性病理性變化。
甲狀腺灌胃給藥3個月、6個月，對照組甲狀腺腺泡密集，大小不等，部分腺泡內(nèi)含粉染物質(zhì)，不同劑量的本發(fā)明藥物及停藥2周后各給藥組，鏡下同對照組相似，未見中毒性病理變化。
胸腺灌胃給藥3個月、6個月，對照組及三個劑量組的本發(fā)明藥物鏡下結(jié)構(gòu)相似，胸腺由分隔不完全的小葉構(gòu)成，形狀多樣，胸腺細胞顏色內(nèi)淺外深，未見出血及壞死，停藥2周后各給藥組未見中毒性病理變化。
胰腺灌胃給藥3個月、6個月，對照組胰腺小葉內(nèi)可見豐富的漿液性管狀腺泡，內(nèi)有界限清楚，形狀不規(guī)則，大小不等的淺色胰島，不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周后各給藥組，鏡下同對照組相似，未見中毒性病理變化。
垂體灌胃給藥3個月、6個月，不同劑量的本發(fā)明藥物與對照組及停藥2周后各給藥組，鏡下垂體結(jié)節(jié)部與神經(jīng)部間有分隔，結(jié)節(jié)部三種細胞高倍鏡下可辯出，其間血竇豐富，未見中毒性病理變化。
子宮給藥3個月、6個月，對照組子宮內(nèi)膜可見，腺體清楚，肌層明顯，不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周后各給藥組鏡下形態(tài)同對照組相似，未見中毒性病理變化。
卵巢灌胃給藥3個月、6個月，對照組卵巢被膜可見，皮質(zhì)區(qū)內(nèi)可見不同發(fā)育階段、生長良好的卵泡及黃體構(gòu)成。三個劑量組的融
斑通脈顆粒及停藥2周后各給藥組，鏡下同對照組較為一致，未見中毒性病理變化。
睪丸灌胃給藥3個月、6個月，對照組、不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周后各給藥組，可見睪丸表面由一層致密的纖維包繞，內(nèi)有圓形或卵圓形的曲細精管，排列有序，管腔內(nèi)由一系列生精細胞構(gòu)成。各組均未見中毒性病理變化。
前列腺灌胃給藥3個月、6個月，對照組、不同劑量的本發(fā)明藥物組及停藥2周后各給藥組，可見前列腺腺泡豐富，腺上皮大部分扁平或立方，腔大，部分腔內(nèi)面為鋸齒狀，部分腔內(nèi)含有粉染物質(zhì)，各組未見中毒性病理變化。
不同劑量的本發(fā)明藥物連續(xù)給大鼠灌胃給藥3個月、6個月及停藥2周后，各臟器大體及鏡下觀察，未見中毒性病理反應(病理報告附后)。
結(jié)果表明，本發(fā)明藥物94g生藥/kg、47g生藥/kg、23.5g生藥/kg(臨床用量的50、25、12.5倍)組動物連續(xù)灌胃給藥3個月、6個月及停藥2周后各組動物未見嚴重不良反應，部分數(shù)據(jù)與對照組有統(tǒng)計學差異，但均在正常范圍內(nèi)。病理檢查各臟器均未見該藥引起的明顯中毒性病理改變。
權(quán)利要求
1、一種治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃3～12份 法半夏2～12份 丹參5～18份 陳皮2～12份
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份 陳皮5～8份
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份
4、根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，包括以下步驟
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參和陳皮，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與所述重量配比的法半夏、陳皮加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液濾過，濃縮至相對密度為1.15～1.2(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心絞痛的藥物，其中原料藥還有制首烏4～15份 川芎2～12份
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份 陳皮5～8份 制首烏6～10份 川芎4～8份
7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份 制首烏7份 川芎6份
8、根據(jù)權(quán)利要求5至7中任一權(quán)利要求所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，包括以下步驟
a)稱取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參、陳皮、制首烏和川芎，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與其余四味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，將水煎煮藥液濾過，濃縮至相對密度為1.15～1.2(80℃熱測)，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
9、根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療心絞痛的藥物，其中原料藥還有昆布3～15份澤瀉3～12份 枸杞子3～15份 決明子6～18份 生山楂6～15份
10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃5～9份 法半夏5～9份 丹參7～12份 陳皮5～8份 制首烏6～10份 川芎4～8份 昆布6～10份 澤瀉5～8份 枸杞子5～8份 決明子8～12份 生山楂7～10份
11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的治療心絞痛的藥物，其特征在于它主要由下述重量配比的原料藥制成蒲黃6份 法半夏5份 丹參9份 陳皮5.5份 制首烏7份 昆布8份 川芎6份 澤瀉6份 枸杞子7份 決明子9份 生山楂8份
12、根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一權(quán)利要求所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，包括以下步驟
a)取各原料藥蒲黃、法半夏、丹參、陳皮、制首烏、川芎、昆布、澤瀉、枸杞子、決明子和生山楂，備用；
b)將所述重量配比的蒲黃、丹參二味加50％～90％乙醇回流提取2～3次，合并醇提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液，備用；
c)將b)的藥渣與其余九味藥材加水煎煮三次，每次加水以沒過藥面為宜，濾過，合并濾液，濃縮后與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
13、根據(jù)權(quán)利要求4、8或12所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，其中步驟c)中藥物加水煎煮提取時，第一次加水8倍，第二次加水6倍，第三次加水6倍，每次煎煮1小時。
14、根據(jù)權(quán)利要求4、8或12所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，其中步驟c)中藥物加水煎煮提取時，水煎煮藥液，濃縮至相對密度為1.03～1.08，加入澄清劑澄清，混勻，靜置，濾過，取濾液濃縮至相對密度1.15～1.20，與蒲黃、丹參醇提濃縮液混勻，得清膏，即本發(fā)明藥物的有效成分。
15、根據(jù)權(quán)利要求4、8、12所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，其中在步驟b)中將藥材加乙醇提取時，第一次加8倍藥材量的乙醇提取，第二次加6倍藥材量的乙醇提取，各煎煮1小時。
16、據(jù)權(quán)利要求4、8或12所述的治療心絞痛的藥物的制備方法，步驟c)中還可將陳皮或陳皮和川芎二味藥材先加10～15倍量水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油和水煎液①備用，藥渣再與其余藥材一起加水煎煮，濾液與水煎液①合并，濃縮，再與蒲黃、丹參乙醇提濃縮液混勻，得清膏，加入輔料，制成顆粒，并干燥，再加入步驟c)中收集的揮發(fā)油，混勻，制成顆粒劑。
17、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5、6、7、9、10或11權(quán)利所述的治療心絞痛的藥物在制備預防、治療心絞痛藥中的應用。
18、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5、6、7、9、10或11權(quán)利所述的治療心絞痛的藥物在制備預防、治療血脂異常藥中的應用。
19、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5、6、7、9、10或11權(quán)利所述的治療心絞痛的藥物在制備預防、治療動脈粥樣硬化藥中的應用。
20、根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5、6、7、9、10或11權(quán)利所述的治療心絞痛的藥物在制備預防、治療冠心病藥中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療心絞痛的藥物及該藥物的制備方法，以及在制備治療心絞痛、抗動脈粥樣硬化及血脂異常癥藥物中的應用。該藥物主要由生蒲黃、法半夏、丹參、陳皮等為原料，按一定的重量配比制備而成。本發(fā)明藥物具有行氣活血，祛瘀止痛的功能，可用于治療心絞痛、動脈粥樣硬化和高血脂癥。它可制備成任何一種常用的內(nèi)服劑型。
文檔編號A61P9/00GK1541671SQ03124340
公開日2004年11月3日 申請日期2003年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月30日
發(fā)明者王震華, 徐瑞珍, 余靈芝, 施仕紅, 張文威 申請人:無錫山禾藥業(yè)股份有限公司