專利名稱：一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健生物制劑，具體地說(shuō)是一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑。
背景技術(shù)：
心血管疾病是目前中國(guó)人群死因之首，約占總死亡人口的34％-40％，心臟病患者超過3000萬(wàn)人，其中全國(guó)每年死于冠心病人數(shù)多達(dá)110萬(wàn)人，1988年至1997年的十年間城市居民因血管疾病死亡年上升達(dá)25％；而血清中膽固醇、血脂水平高是引起心肌梗塞的主要原因。中老年人尤為居多，近來(lái)青年人高膽固醇癥群也在日益增多；另則，中老年胃腸功能的減弱或手術(shù)后活動(dòng)量減少或由于社會(huì)工作節(jié)奏的改變，人體的緊張和工作壓力增加，造成的便秘癥群增多。
國(guó)外已有用天然的卵葉車前子種子和殼的粉作為降低膽固醇、通便的產(chǎn)品(文獻(xiàn)1Park et al Cereal Chemistry 1997，74207-211；文獻(xiàn)2Aygustinand Dwyer Topics in Clinical Nutrations 1999，101-13；文獻(xiàn)3Jensen et al J.of the Am.Col of Nutrations 1993，12147-154；文獻(xiàn)4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文獻(xiàn)5Rezaeipoor et al J Ethnopharmacol.2000Sep；72(1-2)283-6.)；因?yàn)樵摦a(chǎn)品富集大量天然多糖、寡聚糖、水溶性纖維素和多種氨基酸、微量活性植物蛋白質(zhì)及微量元素，據(jù)美國(guó)FDA要求，通便、降膽固醇的功能食品中可加這一食用纖維素(成人攝入量10克/天，如果是聲明降膽固醇的功能食品)。但是市場(chǎng)上該產(chǎn)品的主要缺點(diǎn)是其高度親水性和膠化性，使得該品很難在常見食品和飲料的配方中使用；除高度吸水性和膠化性之外，產(chǎn)品口感極差，始終伴有污穢粘土的味道；加之服用時(shí)因攝水不足導(dǎo)致食道或胃腸道梗塞的例子，所以急需要求改進(jìn)這一不良反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種口感好、應(yīng)用范圍廣的用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為以卵葉車前子生物酶促反應(yīng)產(chǎn)品為活性成份。
所述生物酶促反應(yīng)是以卵葉車前子的籽或殼的干粉為原料，經(jīng)液相或固相酶促反應(yīng)生產(chǎn)改良卵葉車前子的生物制劑；具體操作過程為車前子粉碎，烘干，在乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑(濃度為10～50mM，0.1～0.5ml/克)存在下進(jìn)行生物酶促反應(yīng)，淬滅酶失活，得產(chǎn)品；酶促反應(yīng)中所用的酶是以紅曲霉與纖維素修飾酶單用或合用，可以加入其他的纖維素修飾的單酶或復(fù)合酶(降纖酶)，多聚半乳糖全酸內(nèi)切酶、戊糖聚酶、或真菌戊糖聚酶果膠酶等；酶促反應(yīng)條件PH為5.0；溫度23～50℃，反應(yīng)2～7天，濕度50～80％；反應(yīng)中較佳的酶用量為1～20活性單位/克干粉(約為0.05～0.5克/克干粉)；干粉與緩沖液重量比為1∶5～1∶10；酶促反應(yīng)在液相條件下操作時(shí)卵葉車前子的重量百分含量為10～50％；固相酶促反應(yīng)經(jīng)干燥、粉碎進(jìn)一步得到干粉；液相酶促反應(yīng)所得酶促反應(yīng)的產(chǎn)品直接用于飲料的制備；所述的車前子最好為纖維素含量高的藏車前子或歐車前子；粉碎可采用粉碎機(jī)或納米粉碎機(jī)，粉碎的目數(shù)可以為40目；60目；80目；100目；200目及小于400納米的顆粒；所述淬滅酶失活是指高溫80～110℃，0.5～3小時(shí)滅活或用微波1～10分鐘取得；固相酶促反應(yīng)還可采用75％～95％食品級(jí)/藥品級(jí)乙醇1-20ml/g使干粉終止酶促反應(yīng)；本發(fā)明中的固相酶促反應(yīng)可以是上述單酶或復(fù)合酶；其中紅曲霉與真菌降纖酶連用為佳；戊糖降纖酶和紅曲霉連用也可取得較好效果，但所得干粉的硬度仍然較大；干粉溶脹率均不小于50ml/g，給細(xì)目下的干粉可與1∶5～1∶10的檸檬酸鈉緩沖液溶解(脹)；加入酶20～50℃下，攪拌8～100h，酶的加入量以干粉中量計(jì)約為0.05～0.5g/g。
所述的生物制劑可以在藥品、功能食品、飲料、綠色食品、糕點(diǎn)中的應(yīng)用。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明通過生物技術(shù)手段修飾了車前子屬的天然植物產(chǎn)品的理化性質(zhì)和口感，消除現(xiàn)有市售產(chǎn)品的缺點(diǎn)；改良后的卵葉車前子產(chǎn)品主要含有降解的天然多糖、寡聚糖、水溶性纖維素、食用色素；并且比原藥的硬度降低66％～69％，粘度降低69％，吸水性降低～50％(測(cè)定方法參見文獻(xiàn)13Paraskevopoulou et al J.of Food Science 1997，62208-211)。
2.作為食品添加劑或功能食品，成人每天攝入10克左右本發(fā)明的產(chǎn)品，無(wú)任何可觀察毒性，長(zhǎng)期服用沒有副作用及不良反應(yīng)，安全可靠。
3.本發(fā)明把生物工程技術(shù)運(yùn)用于中(西)草藥的開發(fā)，通過固相(半固相)或液相的方法改造中草藥的理化性質(zhì)，同時(shí)從中藥中生產(chǎn)具有天然降血脂、降膽固醇的洛伐他汀，含量可達(dá)3.5％；改良后的產(chǎn)品，具有優(yōu)良的通便、減肥、降膽固醇、降血脂作用；動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，每次攝入20～100毫克/公斤含有本品的口服制劑，每日三次，一個(gè)療程降膽固醇作用達(dá)24～30％，降血脂作用達(dá)50％；大大改進(jìn)天然產(chǎn)品。
4.本發(fā)明提供了一種由卵葉車前子的種子或殼，經(jīng)酶促反應(yīng)(固或液相)的生產(chǎn)方法，其可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。


圖1為車錢子原料電鏡圖片。
圖2為紅曲霉改良后的產(chǎn)品電鏡圖片。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)例詳述本發(fā)明實(shí)施例1紅曲霉和降纖酶連用試驗(yàn)卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)置于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，紅曲霉(100克)和真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入醋酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應(yīng)5～7天。其后，用95％的食品級(jí)酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進(jìn)一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實(shí)施例2 真菌降纖酶單用試驗(yàn)方法同實(shí)施例1同。唯獨(dú)不同條件是單獨(dú)使用真菌降纖酶(1升)。反應(yīng)5～7天后，酶促反應(yīng)在90℃加熱半小時(shí)滅活。熱空氣干燥直至衡重。粉碎過篩(80～200目)得所需干粉。
卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應(yīng)5～7天。用95％的食品級(jí)酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進(jìn)一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實(shí)施例3紅曲霉與戊糖聚合酶連用試驗(yàn)方法同實(shí)施例1。在紅曲霉之外再加戊糖聚合酶(500克)。
卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，真菌降纖酶(1升，500000FUX)加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應(yīng)5～7天。其后，用95％的食品級(jí)酒精(20升)處理，過濾、使酶滅活。出料后，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進(jìn)一步粉碎至100目、150目和200目不等。
實(shí)施例4紅曲霉單用方法同實(shí)施例1。卵葉車前子80目(5公斤，98％純度)至于50升的常規(guī)發(fā)酵罐中，紅曲霉(200克)，加入檸檬酸鈉緩沖液(50毫爾，15升)，反應(yīng)5～7天。其后，用95％的食品級(jí)酒精(100升)處理，過濾、使酶滅活。出料，熱空氣干燥或真空干燥過夜或至衡重。所得干粉粉碎后過80目篩。根據(jù)需要，也可進(jìn)一步粉碎至100目、150目和200目不等。
應(yīng)用例查爾斯河鼠(每組10只老鼠)，兩組分別在3～4周內(nèi)喂50～100克/公斤的實(shí)例1中所得產(chǎn)品的糊劑，水份占50％，一組服用100克/公斤5％的纖維素，和100克麥麩，10％烘炒的麥麩，克分別測(cè)定相應(yīng)組別中老鼠血液中的膽固醇和甘油三脂。
1.小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，與空白試驗(yàn)對(duì)照，結(jié)果表明每天服用該品的小鼠(50～100毫克/公斤)，總膽固醇下降為7.87％，LDL下降為12.6％，由此可見，該品可降低導(dǎo)致動(dòng)脈硬化的功用。
2.動(dòng)物試驗(yàn)表明，該品對(duì)降低血清中的膽固醇和血脂均有良好的效果；三-四周內(nèi)可以降低膽固醇24-30％，降血脂30-50％。
3.急毒試驗(yàn)和長(zhǎng)毒試驗(yàn)均顯示該品無(wú)明顯副作用，安全性可靠；每天服用(100-200毫克/公斤)未見任何副作用，安全可靠。
4.本發(fā)明所得干粉與對(duì)照組藥物(洛法他汀，26％)相比，其具有保護(hù)腸內(nèi)壁不受微生物的侵害，調(diào)節(jié)腸道蠕動(dòng)活動(dòng)，降低膽酸對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的親和力的是葡萄糖(92％)；果膠(79％)，該品(53％)；這表明該品產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸的可能性最小，而且其中寡糖、多糖、單糖為非天然糖份，從而減少油脂和膽固醇的產(chǎn)生；由于對(duì)腸內(nèi)壁有保護(hù)作用，具有抑制亞硝基化合物的形成和蓄積所至的腸道癌癥。
應(yīng)用結(jié)論分析本發(fā)明所得產(chǎn)品具有降低膽固醇，通過調(diào)節(jié)膽酸池大小和組份及鈉粒子依賴性膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)，增加膽固醇7-羥基酶(CYPTA)的mRNA的水平(10-15％)，減少腸肝循環(huán)中的單酸疏水性，引起糞便膽酸水平增加從而消除過盛的膽固醇和甘油酸三脂的含量；此外，所形成的干粉還有增加胰島素的敏感性及骨骼肌中Glut-4蛋白質(zhì)的表達(dá)，在30-60分鐘內(nèi)起到降低血糖濃度。服用由該產(chǎn)品干粉所制成的沖劑，可以減少膽結(jié)石的作用(文獻(xiàn)4Romero et al J Nutr.2002 Jun；132(6)1194-8.；文獻(xiàn)5Rezaeipoor et al JEthnopharmacol.2000 Sep；72(1-2)283-6.；文獻(xiàn)6Fernandez et al J PharmacolExp Ther.1998 Aug；286(2)870-4.；文獻(xiàn)7Anderson et al Am J Clin Nutr2000 Feb；71(2)472-9；文獻(xiàn)8Cohen etal J Natl Cancer Inst 1996 Jul3；88(13)899-907；文獻(xiàn)9Schwesinger et al Am J Surg 1999Apr；177(4)307-10；文獻(xiàn)10Daggy et al J Lipid Res 1997Mar；38(3)491-502)。
本發(fā)明的產(chǎn)品含有有效成分在體內(nèi)通過脫乙?；?文獻(xiàn)14Tomodaet al Chem Pharm Bull(Tokyo)1991 Aug；39(8)2068-71)使得網(wǎng)狀上皮組織和堿性磷酸酶的活性增加；但對(duì)胃腸道各種有益蛋白酶的活性不產(chǎn)生負(fù)面影響；抑制淋巴細(xì)胞對(duì)抗原的抵抗力從而不易被破壞。
電鏡研究表明未改良的車前子表面較粗造，改良后的表面光滑均勻。
該品的異質(zhì)染色體缺乏交叉，與正常營(yíng)養(yǎng)成分有本質(zhì)的差別。本發(fā)明除可以用于新藥生產(chǎn)外(片劑和散劑)；還可以用于功能食品，諸如通便沖劑(文獻(xiàn)11Diaz；et al US Pat.5,891,441(1999)；文獻(xiàn)12Pellar US Pat.5,73,232(1998))，降脂沖劑，減肥沖劑，降膽固醇沖劑，也可制成餅干、桃酥、花生糊、芝麻糊、豆奶沖飲。
飲料瓶裝或聽裝；含本發(fā)明原料3～5克，每天兩瓶，可達(dá)到清除體內(nèi)毒素和垃圾、控制體重、增進(jìn)腸道蠕動(dòng)、防止便秘的作用；同時(shí)可與人體常用的必須營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為伍，補(bǔ)充必須的維生素和礦物質(zhì)；其按口味可以添加到蘋果、香蕉、大棗汁、草莓、櫻桃、桔汁等飲料中。
權(quán)利要求
1.一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑，其特征在于以卵葉車前子生物酶促反應(yīng)產(chǎn)品為活性成份。
2.一種權(quán)利要求1所述的生物制劑的制備方法，其特征在于卵葉車前子粉碎，烘干，在乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑存在下進(jìn)行生物酶促反應(yīng)，淬滅酶失活，得產(chǎn)品。
3.按照權(quán)利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶是指紅曲霉和/或纖維素修飾酶。
4.按照權(quán)利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶是指紅曲霉與真菌降纖酶或戊糖降纖酶與紅曲霉。
5.按照權(quán)利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述酶促反應(yīng)條件為，PH為5.0，溫度23～50℃，反應(yīng)2～7天，濕度50～80％。
6.按照權(quán)利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述反應(yīng)中酶的加入量為1～20活性單位/克干粉；干粉與緩沖液重量比為1∶5～1∶10；酶促反應(yīng)在液相條件下操作時(shí)卵葉車前子的重量百分含量為10～50％。
7.按照權(quán)利要求6所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述緩沖液為乙酸鈉、檸檬酸鈉或富馬酸鈉緩沖試劑，其濃度為10～50mM。
8.按照權(quán)利要求2所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述的車前子為纖維素含量高的藏車前子或歐車前子。
9.按照權(quán)利要求1所述的生物制劑的制備方法，其特征在于所述淬滅酶失活是指高溫80～110℃，0.5～3小時(shí)滅活或用微波1～10分鐘取得；固相酶促反應(yīng)還可采用75％～95％食品級(jí)/藥品級(jí)乙醇1～20ml/g干粉終止酶促反應(yīng)。
10.按照權(quán)利要求1所述的生物制劑在藥品、功能食品、飲料、綠色食品、糕點(diǎn)中的應(yīng)用。
全文摘要
一種用于通便、減肥、降膽固醇、降血脂的生物制劑，該生物制劑以卵葉車前子生物酶促反應(yīng)產(chǎn)品為活性成分；由卵葉車前子的種子或殼為原料，以紅曲霉、多聚半乳糖全酸內(nèi)切酶、果膠酶、或其復(fù)合物固(液)相酶解修飾，產(chǎn)生可供食用的草藥原料。該法在半固相中進(jìn)行酶促反應(yīng)，通過原料干燥、粉粹、配制的降解酶在pH緩沖溶液下反應(yīng)；調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度和時(shí)間，經(jīng)加熱終止酶促反應(yīng)、反應(yīng)濕基烘干、再經(jīng)超細(xì)粉碎等步驟所獲得的改良草藥。該發(fā)明的生物制劑可用于降膽固醇、降血脂、通便、減肥，具有優(yōu)于天然未改造的植物藥的作用，降低膠化60％，吸水性降低50％，改造后原料容易作為多種藥物制劑，食品添加劑，制備飲料，沖劑，散劑。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1517111SQ03110848
公開日2004年8月4日 申請(qǐng)日期2003年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月13日
發(fā)明者梅曉丹 申請(qǐng)人:大連百奧科技發(fā)展有限公司