專利名稱：：用于治療慢性病個體的質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充的制作方法相關(guān)申請本申請要求號為60/339,610的美國臨時專利申請的優(yōu)先權(quán)，其名稱為“質(zhì)粒介導(dǎo)的治療貧血，消瘦(wasting)，免疫功能障礙以及延長慢性疾病個體生命的療法”，申請日為2001年11月12日(12/11/2001)，在此將其全文并入作為參考。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及用于質(zhì)粒介導(dǎo)補(bǔ)充的組合物及方法。本發(fā)明涉及組合物和方法，用于抑制不正常細(xì)胞的生長率，減少腫瘤發(fā)展，防止腎衰竭，減少癌轉(zhuǎn)移，提高存活率，以及治療其它通常與癌癥動物相關(guān)的病癥。本發(fā)明的一些實施例可如下完成將有效量的編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送至個體組織，并使編碼基因在該個體體內(nèi)表達(dá)。例如，當(dāng)這種核酸序列被遞送到個體組織的特定細(xì)胞中時可以獲得特定的組成型表達(dá)。另外，可通過誘導(dǎo)型啟動子實現(xiàn)GHRH或者其功能性生物等同物基因的外部調(diào)控，所述啟動子由施用給個體的分子開關(guān)分子調(diào)控。編碼GHRH或其功能性生物等同物序列的組成型或誘導(dǎo)型核酸的優(yōu)選遞送方法是通過體內(nèi)電穿孔手段直接遞送到個體細(xì)胞。另外，通過將重組GHRH或其功能性生物等同物遞送到個體體內(nèi)實現(xiàn)抑制腫瘤生長，抑制惡病質(zhì)或通常與腫瘤相關(guān)的消瘦的治療。貧血，消瘦，腫瘤生長，免疫功能障礙，腎衰竭，癌癥，預(yù)期壽命縮短，以及其它病癥都可能與特定的癌癥，腫瘤，疾病或疾病治療作用相關(guān)。本發(fā)明涉及質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充，用于1)治療貧血個體；2)提高個體體內(nèi)總紅細(xì)胞量；3)降低癌癥個體內(nèi)的腫瘤生長；4)防止或逆轉(zhuǎn)個體消瘦；5)逆轉(zhuǎn)個體不正常的體重降低；6)治療免疫功能障礙；7)預(yù)防腎衰竭發(fā)?。?)預(yù)防癌轉(zhuǎn)移發(fā)生和/或發(fā)展；9)逆轉(zhuǎn)個體內(nèi)的淋巴生成抑制；和/或10)延長慢性病個體的預(yù)期壽命并提高其存活率。本發(fā)明涉及組合物和方法，用于抑制癌癥個體體內(nèi)不正常細(xì)胞的生長率，減少腫瘤發(fā)展，防止腎衰竭，減少轉(zhuǎn)移，提高存活率?？傊景l(fā)明的實施例可通過將有效量的編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送至個體組織，并使該編碼基因在該個體體內(nèi)表達(dá)而完成。例如，當(dāng)這種核酸序列被遞送到個體組織的特定細(xì)胞中時得到特定的組成型表達(dá)。并且，可通過利用誘導(dǎo)型啟動子實現(xiàn)GHRH或者其功能性生物等同物基因的外部調(diào)控，所述啟動子由施用給個體的分子開關(guān)分子調(diào)控。編碼GHRH或其功能性生物等同物質(zhì)序列的組成型或誘導(dǎo)型核酸的優(yōu)選遞送方法是通過體內(nèi)電穿孔手段直接遞送到個體細(xì)胞。另外，通過將重組GHRH或其功能性生物等同物遞送到個體體內(nèi)而抑制不正常細(xì)胞的生長以及腫瘤的生長。貧血，消瘦，腫瘤生長，免疫功能障礙，腎衰竭，癌癥，預(yù)期壽命縮短，以及其它疾病都可能與特定的癌癥，腫瘤，疾病或疾病治療作用相關(guān)。GHRH也可以作為蛋白，通過靜脈，皮下或鼻內(nèi)給藥或者利用緩釋泵(slowreleasepump)直接進(jìn)行遞送。貧血貧血指血流中紅血球數(shù)目或體積或者血紅蛋白總量有所降低，從而導(dǎo)致個體面色蒼白，全身無力等癥狀的疾病。已知哺乳動物中紅細(xì)胞的產(chǎn)生即為紅細(xì)胞生成。紅細(xì)胞生成主要由一種酸性糖蛋白——促紅細(xì)胞生成素(“EPO”)調(diào)控。EPO能夠促進(jìn)生成新的紅細(xì)胞來替代那些由于衰老過程而喪失的紅細(xì)胞。另外，在缺氧條件下可以促進(jìn)EPO的產(chǎn)量，在這種條件下，盡管組織中灌注了足量的血液，但組織的氧氣供應(yīng)量減少，低于正常的生理水平。能夠?qū)е氯毖醯挠谐鲅?，輻射誘導(dǎo)紅細(xì)胞損傷，各種貧血癥，海拔過高，或長期昏迷。受到缺氧壓力的組織會產(chǎn)生應(yīng)答，EPO會促進(jìn)骨髓中原始前體細(xì)胞轉(zhuǎn)換成原成紅細(xì)胞，隨后原成紅細(xì)胞成熟，合成血紅蛋白，并作為血細(xì)胞被釋放到循環(huán)中，從而提高紅細(xì)胞的產(chǎn)量。EPO通常以較低濃度存在于血漿中，其在血漿中足以維持正常血細(xì)胞損失(即，由于衰老而導(dǎo)致)與紅細(xì)胞生成之間的平衡。貧血是由紅細(xì)胞的產(chǎn)量降低或損失量增加而導(dǎo)致的紅細(xì)胞量減少。EPO補(bǔ)充目前用于治療各種疾病相關(guān)的貧血，如晚期腎衰竭(Cremagnani等，1993；Diez等，1996)和艾滋病(“AIDS”)(Sowade等，1998)，特別是接受疊氮胸苷(“AZT”)治療的個體。EPO還可用于改善癌癥化療相關(guān)的貧血(Vansteenkiste等，2002)。另一組貧血癥被稱為血紅蛋白病，每組都由遺傳性球蛋白產(chǎn)量異常引起。血紅蛋白病包括許多疾病，可基本分為兩種類型。第一種類型是由球蛋白鏈上的遺傳性結(jié)構(gòu)改變而引起，例如鐮狀細(xì)胞貧血癥。這些病癥可產(chǎn)生異常血紅蛋白分子(Papassotiriou等，2000)。第二種血紅蛋白病的主要部分是地中海貧血癥，是由于一個或多個球蛋白鏈合成率的遺傳性缺陷導(dǎo)致。這導(dǎo)致無效的紅細(xì)胞生成，溶血作用，以及由于紅細(xì)胞產(chǎn)量不足而引起的各種程度貧血。相應(yīng)地，EPO可用于治療貧血，例如以貧乏性或缺陷性紅細(xì)胞生產(chǎn)和/或紅細(xì)胞損傷增加為特征的血紅蛋白病(Makis等，2001；Payen等，2001)。另外的現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)說明用重組人生長激素(“GH”)治療垂體功能性減退的貧血癥個體，可以提高其EPO水平(Sohmiya和Kato，2000)，所述垂體功能性減退病癥中，盡管用甲狀腺和腎上腺皮質(zhì)激素進(jìn)行了適當(dāng)?shù)奶鎿Q，但血紅蛋白(“Hb”)濃度僅維持在11.0g/dl的低水平。在12個月內(nèi)持續(xù)地皮下注射重組人GH，會導(dǎo)致血漿促紅細(xì)胞生成素(”EPO”)水平增長接近一倍，且伴隨Hb濃度提高。當(dāng)中斷施用人GH時，血漿EPO水平和Hb濃度都有所降低。在人GH給藥之前和給藥過程中，血漿GH和EPO水平之間相關(guān)性很高。在人GH給藥之前和給藥過程中，血漿GH水平和Hb濃度緊密相關(guān)。血漿IGF-I水平也與Hb濃度相關(guān)，但與血漿EPO水平不相關(guān)。美國專利US5,846,528(“‘528專利”)和6,274,158(“‘158專利”)指出可通過主動提高促紅細(xì)胞生成素(“EPO”)水平來治療貧血癥。另外，‘528專利還教導(dǎo)在貧血癥的治療中使用重組腺伴隨病毒(“AAV”)病毒粒子將編碼EPO的DNA分子遞送到肌細(xì)胞和組織?！?28專利顯示直接體內(nèi)注射重組AAV病毒粒子到肌肉組織(例如通過肌肉注射)和體外轉(zhuǎn)導(dǎo)肌細(xì)胞，隨后將該肌細(xì)胞導(dǎo)入個體進(jìn)行治療。這樣，持續(xù)高水平表達(dá)遞送的EPO編碼核酸序列，從而自轉(zhuǎn)導(dǎo)的肌細(xì)胞體內(nèi)分泌，進(jìn)行系統(tǒng)遞送?！?58專利教導(dǎo)了皮下、靜脈或口服給藥重組人EPO作為止血劑來治療或預(yù)防任何器官或身體部位出血，所述出血由良性或惡性病變，外科創(chuàng)傷，無法治愈或難以治療的損傷，或輻射損傷而引發(fā)。簡言之，貧血癥可由特定疾病，環(huán)境因素，或疾病治療的作用引起。正如所討論的，EPO循環(huán)水平可被直接(如注射重組EPO)或間接提高(如注射重組GH)。盡管不期望被理論束縛，相關(guān)技術(shù)暗示可通過使用能夠提高EPO循環(huán)水平的方法或組合物成功地治療貧血癥。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知生物體系是不可測復(fù)合體，本領(lǐng)域技術(shù)人員不能精確地預(yù)測什么方法或組合物能夠引發(fā)特定生物反應(yīng)。只有通過不斷的實驗才能找到治療貧血癥的組合物或方法。消廋個體的消瘦可以定義為體重至少降低個體最小理想體重的5-10％，其特征在于脂肪組織及肌肉量顯著減少，這使得患有進(jìn)行性疾病(如癌癥，AIDS等)的個體特別難以增加體重。消瘦或惡病質(zhì)是一類經(jīng)典的臨床現(xiàn)象，其能夠令人想起病床和“消耗型”病人的典型形象。在希臘語中，它僅僅意味著“惡劣的條件”。在癌癥，AIDS，或肺結(jié)核，以及其它慢性疾病中會加快骨骼肌的損失(Barber等，1999；Weinroth等，1995)。體重降低是與癌癥相關(guān)的消瘦的最明顯表現(xiàn)(Nelson，2000)。其它臨床表現(xiàn)包括厭食，肌肉漸減，和/或脂肪組織減少以及疲勞，這就導(dǎo)致身體機(jī)能狀況極差(Davis和Dickerson，2000)。由于體重降低，腫瘤組織，和不良的機(jī)能狀況會導(dǎo)致預(yù)后不良，所以消瘦可成為死亡的直接因素。與單純的饑餓相比，用大量進(jìn)食來治療體重降低是不夠的。所以體重降低還不能夠完全歸因于攝入量少，而是基礎(chǔ)能量消耗提高的結(jié)果。消瘦存在于一多半臥床的癌癥個體中，代表了慢性病個體治療中的一個嚴(yán)重問題。盡管不希望被理論束縛，但假定細(xì)胞因子的釋放和/或活化以及幾種腫瘤衍生物質(zhì)的釋放引發(fā)了消瘦綜合癥。相關(guān)技術(shù)教導(dǎo)已評價許多物質(zhì)用于治療消瘦的效果，但只有孕激素物質(zhì)獲得了一般效果(Barber等，1999；Nelson，2001)。相反，重組生長激素(“GH”)，胰島素樣生長因子I(“IGF-I”)和IGF結(jié)合蛋白3(“IGFBP-3”)療法卻在治療癌惡病質(zhì)中取得了療效(Bartlett等，1994)。這樣，相關(guān)技術(shù)說明可用能夠提高GH，IGF-I或IGFBP-3循環(huán)水平的方法或組合物來治療消瘦。但不幸的是，生物系統(tǒng)的復(fù)雜性使得不可能精確預(yù)測什么方法或組合物能夠引起特定生物反應(yīng)。所以，只有通過細(xì)致的實驗，本領(lǐng)域技術(shù)人員才能夠闡明治療消瘦的有效物質(zhì)或方法。癌癥和腫瘤生長在美國和全世界，癌癥是導(dǎo)致發(fā)病和死亡的首先因素之一。在過去的20年中，癌癥的年平均發(fā)病率有所提高，在1999年達(dá)到了475比100000。由于人口增長和衰老，預(yù)期從2000年到2050年，癌癥個體的數(shù)量會加倍，從130萬增長到260萬。另外，預(yù)測患有癌癥的老年人的數(shù)量和比例將會急劇增加從2000年新診斷出患有惡性腫瘤的389,000個75歲及更年老人，到2050年的1,102,000人，癌癥人口將增加30％到42％(Edwards等，2002)。由于并發(fā)因素如年紀(jì)大而厭食，胃腸系統(tǒng)的改變，leptin水平提高作用，特別是男性中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)的各種變化，老年癌癥個體預(yù)后不良。約70歲之后體重會下降。這包括脂肪組織和肌肉量的減少。老年人的肌肉量減少稱為sarcopenia。疾病導(dǎo)致細(xì)胞因子增加，該細(xì)胞因子能夠產(chǎn)生厭食并導(dǎo)致蛋白消耗。許多導(dǎo)致老年人惡病質(zhì)的起因是可以治療的(Morley，2001；Yeh和Schuster，1999)。通過提高癌癥個體體內(nèi)細(xì)胞因子及其它病理學(xué)改變能夠促進(jìn)腫瘤生長，但校正惡病質(zhì)，貧血，改進(jìn)免疫功能和陽性氮平衡能夠減少腫瘤生長及其并發(fā)癥(Demetri，2001；Koo等，2001)。因此，針對多數(shù)這些并發(fā)癥的療法對于個體而言極為有益。腎衰竭預(yù)測患有腎衰竭和晚期腎病的個體數(shù)量給保健提供系統(tǒng)(Hostetter和Listing，2002)帶來了極重的負(fù)擔(dān)。為減小這個負(fù)擔(dān)，必須采取措施來改進(jìn)腎病檢測，還要針對那些風(fēng)險最高的疾病采取預(yù)防手段(Crook等，2002)。重要的危險因素包括高血壓，糖尿病，肥胖和癌癥(AlSuwaidi等，2002；Nampoory等，2002)。血清肌酸酐，蛋白尿和微清蛋白尿(microalbuminuria)作為疾病的檢測指標(biāo)至關(guān)重要，但能夠推遲或預(yù)防腎衰竭的療法對于個體和醫(yī)療系統(tǒng)均具有顯著意義(LeBrun等，2002；Sakhuja等，2000)。生長激素(“GH”)以及免疫功能生長激素的主要功能是控制人類和其它脊椎動物身體的生長，并且已知調(diào)節(jié)垂體分泌GH的生理相關(guān)途徑。GH生成途徑由一系列相互依賴的基因構(gòu)成，這些基因的產(chǎn)物是正常生長所必需的。GH途徑基因包括(1)配體，如GH和胰島素樣生長因子-I(“IGF-I”)；(2)轉(zhuǎn)錄因子如pit1的預(yù)言者(prophet)，或者prop1，和pit1；(3)激動劑和拮抗劑，分別例如生長激素釋放激素(“GHRH”)和促生長素抑制素(“SS”)和(4)受體，例如GHRH受體(“GHRH-R”)和GH受體。這些基因在不同的組織和器官中表達(dá)，包括下丘腦，垂體，肝臟和骨。有效且受調(diào)控的GH途徑表達(dá)對于優(yōu)化線性生長，以及體內(nèi)碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂代謝的動態(tài)平衡是必要的。GH的合成以及從垂體前葉的分泌由GHRH刺激，并由促生長素抑制素抑制，這兩種激素都是下丘腦激素。GH會提高主要在肝臟以及其它靶器官中的IGF-I的產(chǎn)生。IGF-1和GH反過來會反饋抑制下丘腦和垂體中GHRH和GH的釋放。GH既可直接又可間接地引發(fā)外周組織的運(yùn)作，間接的效果主要是通過IGF-I介導(dǎo)。免疫功能由IGF-I調(diào)節(jié)，IGF-I對B細(xì)胞發(fā)育有兩個主要作用增強(qiáng)(potentiation)和成熟，及作為B細(xì)胞增殖輔助因子與白介素-7(“IL-7”)共同發(fā)揮作用。這些活性通過使用抗IGF-I抗體，IGF-I反義序列以及使用重組IGF-I進(jìn)行活性替換而被鑒定。有證據(jù)表明巨噬細(xì)胞是IGF-I的豐富來源。用重組IGF-I對小鼠的治療證實了這些觀察結(jié)果它可提高小鼠骨髓中前B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞的數(shù)目(Jardieu等，1994)。對IGF-I仍保持敏感的成熟B細(xì)胞因為免疫球蛋白生產(chǎn)也會被IGF-I體外和體內(nèi)刺激(Robbins等，1994)。在過去的20年中重組蛋白的產(chǎn)生為多種疾病的治療提供了有效工具。例如，矮個兒童中的GH缺陷，燒傷、敗血癥和AIDS個體中的合成代謝物質(zhì)。但是，有報道顯示在營養(yǎng)不良和感染中有GH抗性。對轉(zhuǎn)基因動物和經(jīng)歷GH治療的個體進(jìn)行的長期研究顯示GH和IGF-I療法與癌癥發(fā)展之間不相關(guān)。GH替代療法在臨床廣泛使用，作用良好，但是該療法具有幾個不利因素GH必須數(shù)月內(nèi)或通常數(shù)年內(nèi)，每天一次到一周3次經(jīng)皮下或肌肉給藥；胰島素抗性和受損的葡萄糖耐受性；兒科個體中骨骺生長加速以及閉合(closure)(Blethen和MacGillivray，1997；Blethen和Rundle，1996)。相反，關(guān)于重組GHRH療法的報道中則沒有副作用。顱外分泌的GHRH，作為成熟肽或截短的分子(如郎格罕氏島(pancreaticislet)細(xì)胞腫瘤及各種局部良性腫瘤中見到的)通常具有生物活性，甚至能夠產(chǎn)生肢端肥大癥(Esch等，1982；Thomer等，1984)。對GH缺陷兒童或成人施用重組GHRH增加IGF水平，提高GH分泌(這種提高呈GHRH劑量依賴性)，但仍引發(fā)對大劑量的重組GHRH產(chǎn)生的反應(yīng)(Bercu等，1997)。這樣，施用GHRH代表著一種更符合生理學(xué)的提高亞正常GH和IGF-I水平的替代療法。GH以獨特的脈動模式釋放，該模式對其生物活性相當(dāng)重要(Argente等，1996)。GHRH可以促進(jìn)GH的分泌，而抑生長素(somatostatin)則抑制GH的分泌，兩種皆為下丘腦激素(Thorner等，1990)。GH脈動由GHRH的分泌引起，而GHRH的分泌與抑生長素分泌量的減少和消退相關(guān)。另外，脈動發(fā)生器的機(jī)制由GH-負(fù)反饋定時調(diào)控。GH分泌的內(nèi)源性節(jié)律會隨外源性GH給藥強(qiáng)加的節(jié)律調(diào)整。有效且受調(diào)節(jié)的GH表達(dá)和胰島素樣生長因子I(“IGF-I)途徑對于優(yōu)化線性生長，碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂代謝的動態(tài)平衡，以及提供陽性氮平衡都非常必要(Murray和Shalet，2000)。許多關(guān)于人、綿羊或豬的研究都顯示持續(xù)注射重組GHRH蛋白能夠恢復(fù)正常的GH模式，而無需脫敏GHRH受體或耗盡GH供給，因為該系統(tǒng)能夠進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)，而在GH治療中該反饋調(diào)節(jié)被消除(Dubreuil等，1990a；Vance，1990；Vance等，1985)。盡管重組GHRH蛋白療法引發(fā)并刺激正常循環(huán)GH分泌且沒有副作用，但是由于GHRH在體內(nèi)半衰期很短，必須進(jìn)行頻繁的靜脈，皮下或鼻內(nèi)(劑量需要提高300倍)給藥(每天1到3次)。這樣，作為一種慢性治療，施用重組GHRH蛋白并不實用。在人(Frohman等，1984)和家畜中，野生型GHRH在循環(huán)系統(tǒng)中具有相對較短的半衰期。在血漿中孵育60分鐘后，95％的GHRH(1-44)NH2被降解，而在類似的條件下孵育該激素的較短形式(1-40)OH，經(jīng)過60分鐘的孵育后，顯示只有77％的多肽被降解(Frohman等，1989)。在治療性核酸載體中引入編碼特定蛋白酶抗性的GHRH類似物的cDNA，可以產(chǎn)生在血清中具有更長半衰期，效力更強(qiáng)的分子，并且引起質(zhì)粒注射動物體內(nèi)釋放更多的GH(Draghia-Akli等，1999，在此，將其引入作為參考)。將對蛋白酶敏感的氨基酸取代的突變延長了GHRH分子的血清半衰期。并且，通過使用超級-活性類似物可以提高GHRH的生物活性，該類似物可以提高其與特異性受體的結(jié)合親合性(Draghia-Akli等，1999)。顱外分泌的GHRH，作為經(jīng)過加工的蛋白種類，GHRH(1-40)羥基或GHRH(1-44)酰胺，甚至作為更短的截短分子，都具有生物活性(Thorner等，1984)。有報道稱血液中提供的低水平GHRH(100pg/ml)可以刺激GH的分泌(Corpas等，1993)。直接質(zhì)粒DNA基因轉(zhuǎn)移是目前許多新治療方法的基礎(chǔ)，其不需要病毒基因或脂顆粒(Aihara和Miyazaki，1998；Muramatsu等，1998)。骨骼肌是靶組織，因為肌纖維具有很長壽命，并且能夠用環(huán)狀DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)，其中該質(zhì)粒能夠在免疫活性宿主中表達(dá)幾個月或幾年(Davis等，1993；Tripathy等，1996)。前期的報道說明，通過可注射的生肌表達(dá)載體，人GHRHcDNA可被運(yùn)送到小鼠體內(nèi)的肌肉中，在肌肉中該cDNA可短暫地在多于兩個星期的時間內(nèi)促進(jìn)GH分泌(Draghia-Akli等，1997)。已經(jīng)報道施用新型GHRH類似物蛋白(美國專利5,847,066；5846,936；5,792,747；5,776,901；5,696,089；5486505；5,137,872；5,084,442；5,036,045；5,023,322；4,839,344；4,410,512；RE33,699)或者合成的或天然存在的GHRH的肽片段(美國專利4,833,166；4,228,158；4,228,156；4,226,857；4,224,316；4,223,021；4,223,020；4,223,019)以達(dá)到提高生長激素釋放量目的。還報道了含有下述突變的GHRH類似物(美國專利5,846,936)位置1Tyr變?yōu)镠is；位置2Ala變?yōu)閂al或其它氨基酸；位置8Asn變?yōu)镚ln，Ser或Thr；位置15Gly變?yōu)锳la或Leu；位置27Met變?yōu)镹le或Leu；位置28Ser變?yōu)锳sn。GHRH類似物是美國專利申請09/624,268(“‘268專利申請”)的主題，該申請教導(dǎo)了含突變的GHRH類似物的應(yīng)用，其中所述突變提高引發(fā)生長激素釋放的能力。另外，該‘268專利申請涉及生長缺陷的治療，生長性能的改善；促進(jìn)動物體內(nèi)生成高于正常生長水平的生長激素；以及通過施用生長激素釋放激素類似物提高生長，在此將該申請并入作為參考。美國專利5,061,690涉及通過提供給受孕雌性哺乳動物一定有效量的人GHRH或其類似物10-20天，來提高出生體重和乳汁產(chǎn)量。類似物的應(yīng)用僅在哺乳期持續(xù)。但是，提出了復(fù)合給藥，并未公開關(guān)于將生長激素釋放激素(或因子)作為DNA分子來施用，例如用質(zhì)粒介導(dǎo)的治療技術(shù)。美國專利5,134,120(“‘120專利”)和5,292,721(“‘721專利”)教導(dǎo)了從妊娠期的最后兩個星期內(nèi)到3星期的哺乳期，人為地提高母豬體內(nèi)的生長激素，導(dǎo)致新生小豬出生后禁食時具有顯著增強(qiáng)的維持乳糖和游離脂肪酸血漿濃度的能力。另外，該120專利和721專利還表明在哺乳期內(nèi)治療母豬會導(dǎo)致初乳的乳脂增多并且乳汁產(chǎn)量也有所提高。這些效果對于提高新生小豬的存活力和增加斷乳前體重十分重要。但是120專利和721專利都沒有提供關(guān)于以DNA形式施用生長激素釋放激素的教導(dǎo)?；蜻f送和體內(nèi)表達(dá)最近，已證明有可能以某種方式將特定基因遞送到體細(xì)胞組織，以糾正先天性或后天性缺陷和失調(diào)(Herzog等，2001；Song等，2001；Vilquin等，2001)?；蚧A(chǔ)的藥物遞送相較于施用重組蛋白具有很多優(yōu)點。這些優(yōu)點包括天然蛋白結(jié)構(gòu)的保守性，改進(jìn)的生物活性，避免了系統(tǒng)毒性，避免了感染和有毒雜質(zhì)。另外，核酸載體療法延長了治療范圍內(nèi)對蛋白的暴露，因為新分泌的蛋白在血液循環(huán)中持續(xù)地存在。在某些情況下，簡易質(zhì)粒注射后獲得的相對較低的表達(dá)水平已足夠使分泌多肽的生物活性達(dá)到生理可接受水平(Danko和Wolff，1994；Tsurumi等，1996)。施用重組蛋白的首要限制是在施用后有限的蛋白利用率。使用可注射DNA質(zhì)粒載體進(jìn)行的核酸載體療法克服了這個缺陷，因為向個體骨骼肌進(jìn)行的單次注射可允許長時期的生理表達(dá)(WO99/05300和WO01/06988)。載體的注射以更近似于天然過程的方式，促進(jìn)動物體內(nèi)酶和激素的產(chǎn)生。并且，在體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移的非病毒技術(shù)中，直接將質(zhì)粒DNA注射到肌肉組織中更加簡單，低廉且安全。在質(zhì)粒介導(dǎo)的表達(dá)系統(tǒng)中，非病毒核酸載體除了包含編碼治療性基因產(chǎn)物的核酸外，還可以包含合成的核酸遞送系統(tǒng)。通過這種方式，可以避免使用大多數(shù)病毒載體的風(fēng)險。由于使用“種特異”組份進(jìn)行核酸遞送，非病毒表達(dá)載體通常會產(chǎn)生較低的毒性，這樣將通常與病毒載體相關(guān)的免疫原性風(fēng)險降到最低。另外，目前還沒有在體內(nèi)將質(zhì)粒序列整合到宿主細(xì)胞的報道，所以這種類型的核酸載體療法應(yīng)該既不會活化致癌基因也不會消除腫瘤抑制基因的活性。由于游離基因體系存在于染色體外，質(zhì)粒具有確定的藥代動力學(xué)和消除曲線，導(dǎo)致基因在靶組織中進(jìn)行表達(dá)的時間有限。為提高質(zhì)粒DNA到細(xì)胞的運(yùn)輸，已通過物理方法做了多種努力，包括電穿孔，聲穿孔(sonoporation)和壓力。利用電穿孔進(jìn)行給藥涉及電脈沖領(lǐng)域的應(yīng)用，其可在細(xì)胞膜上產(chǎn)生瞬時小孔而不會給細(xì)胞帶來永久損害。因此可以導(dǎo)入外源分子(Smith和Nordstrom，2000)。通過調(diào)整電穿孔體系產(chǎn)生的電脈沖，核酸分子可以通過由該方法在細(xì)胞上產(chǎn)生的通道或小孔。美國專利5,704,908描述了用于在個體體腔的選定位置遞送分子到達(dá)細(xì)胞的電穿孔儀。這些脈沖電壓注射設(shè)備在US5,439,440和5,702,304以及WO96/12520，96/12006，95/19805和97/07826中也有描述。最近，使用電穿孔來提高質(zhì)粒的體內(nèi)遞送獲得了令人矚目的成就。電穿孔已成功地用于在注射質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞(Lucas等，2002；Matsubara等，2001)或者在人體內(nèi)遞送抗腫瘤藥物博萊霉素到皮膚或皮下腫瘤(Geh1等，1998；Heller等，1996)。電穿孔還被廣泛應(yīng)用于在小鼠(Lesbordes等，2002；Lucas等，2001；Vilquin等，2001)，大鼠(Terada等，2001；Yasui等，2001)和狗(Fewell等，2001)體內(nèi)運(yùn)輸編碼各種激素、細(xì)胞因子或酶的治療性基因。我們使用生長激素釋放激素(“GHRH”)進(jìn)行的前期研究顯示用電穿孔進(jìn)行的質(zhì)粒治療頗具潛力并且提出了一種前景看好的方法來誘導(dǎo)大動物和人類體內(nèi)產(chǎn)生蛋白及調(diào)控其分泌(Draghia-Akli等，1999；Draghia-Akli等，2002)。如上所述，電穿孔提高骨骼肌攝取質(zhì)粒的能力已被完全證實。另外，已觀察到用聚-L-谷氨酸鹽(“PLG”)或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)配制的質(zhì)粒能提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率并由此表達(dá)目的轉(zhuǎn)基因。陰離子聚合物PLG鈉能夠增強(qiáng)低質(zhì)粒濃度下質(zhì)粒的攝入，同時減少該方法可能帶來的任何組織損傷。如前所述，電穿孔提高骨骼肌攝取質(zhì)粒的能力已被完全證實。PLG是種穩(wěn)定的化合物，可抵抗相對較高的溫度(Dolnik等，1993)。以前PLG用于提高疫苗制劑穩(wěn)定性(Matsuo等，1994)而不增加其免疫原性。其還用作后抗原吸入(post-antigeninhalation)或針對臭氧的抗-毒素(Fryer和Jacoby，1993)。另外，用PLG或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)制備的質(zhì)粒能提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)染并由此在小鼠，大鼠和狗骨骼肌中將目的轉(zhuǎn)基因的表達(dá)提高10倍(Fewell等，2001；Mumper等，1998)。PLG已經(jīng)用于提高抗癌藥物的穩(wěn)定性(Li等，2000)并且作為“膠”用以封閉傷口或者在傷口和組織修復(fù)過程中防止組織流血(Otani等，1996；Otani等，1998)。盡管不希望被理論束縛，但是PLG會在電穿孔過程中增強(qiáng)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染，不僅是由于穩(wěn)定了質(zhì)粒DNA并促進(jìn)通過細(xì)胞膜孔進(jìn)行的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，還由于一種活性機(jī)制。例如，細(xì)胞上帶正電的表面蛋白可以通過蛋白-蛋白相互作用結(jié)合帶負(fù)電的PLG，該P(yáng)LG與質(zhì)粒DNA相連。當(dāng)使用電場時，蛋白的表面翻轉(zhuǎn)方向然后主動將該DNA分子包容于其內(nèi)，該方法能夠顯著地提高轉(zhuǎn)染效率。而且，PLG可以預(yù)防體內(nèi)質(zhì)粒運(yùn)輸相關(guān)的肌肉損傷(Draghia-Akli等，2002a)并能夠在注射前提高質(zhì)粒體外穩(wěn)定性可直接注射的DNA質(zhì)粒載體的應(yīng)用在過去是被限制的。在簡易地直接注射后，肌肉纖維對于DNA攝入效率低，導(dǎo)致相對較低的表達(dá)水平(Prentice等，1994；Wells等，1997)。另外，轉(zhuǎn)基因表達(dá)的持續(xù)時期很短(Wolff等，1990)。以前最成功的臨床應(yīng)用限于疫苗領(lǐng)域(Danko和Wolff，1994；Tsurumi等，1996)。盡管本領(lǐng)域有針對用線性DNA電穿孔真核細(xì)胞的參考文獻(xiàn)(McNally等，1988；Neumann等，1982)(Toneguzzo等，1988)(Aratani等，1992；Nairn等，1993；Xie和Tsong，1993；Yorifuji和Mikawa，1990)，這些實例說明了對細(xì)胞懸浮液，細(xì)胞培養(yǎng)物等的轉(zhuǎn)染作用，但在體細(xì)胞組織中并不存在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。美國專利4,956,288涉及制備重組宿主細(xì)胞的方法，該宿主細(xì)胞含有大量外源DNA的拷貝，該方法是在外源DNA的存在下，電穿孔細(xì)胞群，培養(yǎng)細(xì)胞，然后破壞這些含有較低外源DNA拷貝數(shù)目的細(xì)胞。美國專利5,874,534(“‘534專利”)和美國專利5,935,934(“‘934專利”)描述了突變的類固醇受體，其應(yīng)用方法和一種核酸載體療法的分子開關(guān)，將這兩篇文獻(xiàn)并入本文作為參考。用于在核酸載體療法中調(diào)節(jié)表達(dá)的分子開關(guān)例如GeneSwitch以及在人，動物，轉(zhuǎn)基因動物及植物中利用該分子的方法在‘534專利和‘934專利中描述。該分子開關(guān)描述為一種調(diào)節(jié)核酸載體療法中異源核酸序列盒表達(dá)的方法，其由修飾的類固醇受體構(gòu)成，該修飾的類固醇受體包含一個天然類固醇受體DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)合結(jié)構(gòu)域與修飾的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域相連。修飾的結(jié)合結(jié)構(gòu)域通常只結(jié)合非天然配體，抗-激素或非自然配體。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知天然配體并不輕易地結(jié)合修飾的配體-結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所以對核酸盒所含基因的調(diào)節(jié)和/或表達(dá)幾乎沒有影響?？傊瑢τ谙褙氀?，消瘦和免疫功能障礙這類疾病的治療均不經(jīng)濟(jì)且在范圍上有所限制。相關(guān)技術(shù)已顯示可以使用重組蛋白技術(shù)以有限能力治療那些不同的疾病，但是這些治療具有一些顯著的缺陷。還教導(dǎo)了對于頻繁的注射和傳統(tǒng)重組治療的高消費(fèi)而言，編碼重組蛋白的核酸表達(dá)構(gòu)建體不失為一種可行的解決方法。對于生產(chǎn)比野生型對應(yīng)物的體內(nèi)穩(wěn)定性更好的蛋白而言，向編碼的重組蛋白中導(dǎo)入突變位點無疑邁進(jìn)了一步。不幸的是，在指定重組蛋白中每個氨基酸的改變必須獨立地評價，因為相關(guān)的技術(shù)并沒有教導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員精確地預(yù)測如何在結(jié)構(gòu)(如氨基酸序列)上進(jìn)行改變將會導(dǎo)致重組蛋白的功能(如提高或降低的穩(wěn)定性)發(fā)生改變。所以，編碼表達(dá)蛋白的核酸表達(dá)構(gòu)建體的有益效果只有通過直接的實驗才能確定。本領(lǐng)域渴望一種擴(kuò)展療法，該療法使用遞送到個體體內(nèi)并在體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)治療性蛋白的核酸表達(dá)構(gòu)建體對個體進(jìn)行治療。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于延緩異常細(xì)胞生長，減少腫瘤發(fā)展，預(yù)防腎衰竭，減少癌轉(zhuǎn)移，以及提高癌癥動物存活率的組合物和方法。本發(fā)明的方法包括用質(zhì)粒介導(dǎo)的基因補(bǔ)充治療個體。本方法包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織，如肌肉組織。本發(fā)明的具體實施例針對各種類型的腫瘤，例如腺瘤；惡瘤；白血??；淋巴瘤；肺腫瘤；肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；和實體腫瘤。在個體體內(nèi)中GHRH或其功能性生物等同物的隨后體內(nèi)表達(dá)足夠延緩腫瘤生長，防止腎衰竭，并提高癌癥動物存活率。還可按下述增強(qiáng)本方法在選定組織中安置多個電極，然后在插入電極的區(qū)域?qū)⒑怂岜磉_(dá)構(gòu)建體遞送到選定的組織中，對選定組織的選定區(qū)域內(nèi)，對選定組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖，所述選定組織的選定區(qū)域是核酸表達(dá)構(gòu)建體被遞送的區(qū)域。在具體實施例中也使用了電穿孔，直接注射，基因槍，或金顆粒轟擊來遞送編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體體內(nèi)。本發(fā)明所述的個體包括哺乳動物，例如人，和家畜。本發(fā)明的組合物包括有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體，其中GHRH或其功能性生物等同物向個體組織中的遞送和隨后的表達(dá)作用足以延緩腫瘤生長并延緩惡病質(zhì)或通常與腫瘤生長相關(guān)的消瘦作用。還描述了本發(fā)明核酸表達(dá)構(gòu)建體的具體元件。例如，該構(gòu)建體含有組織特異性啟動子；GHRH或其功能性生物等同物；和操作性連接的3’非翻譯區(qū)(“3’UTR”)。本發(fā)明核酸表達(dá)構(gòu)建體包括一個基本上不含病毒骨架的構(gòu)建體。還提供了本發(fā)明所用的核酸表達(dá)構(gòu)建體的具體實例。編碼的GHRH功能性生物等同物包含與GHRH多肽相比具有類似的或改進(jìn)的生物活性的多肽。本發(fā)明應(yīng)用的由核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含具有下述通用序列的氨基酸結(jié)構(gòu)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQHQGA-OH其中通式具有下述特征X1是D-或L-異構(gòu)體酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)；X2是D-或L-異構(gòu)體丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)；X3是D-或L-異構(gòu)體丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)；X4是D-或L-異構(gòu)體蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)；X5是D-或L-異構(gòu)體絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)，或以上組合。列出了可用于本發(fā)明的GHRH或其功能性生物等同物氨基酸序列的具體實例。在一個具體實施例中，編碼的GHRH或其功能性生物等同物在接受核酸表達(dá)構(gòu)建體的個體中促進(jìn)生長激素(“GH”)分泌。在本發(fā)明的具體實施例中，提高組織吸收核酸表達(dá)構(gòu)建體能力的轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含一個帶電荷的多肽，例如聚-L-谷氨酸鹽。本發(fā)明的一個實施方案涉及質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充方法用于治療貧血；提高個體體內(nèi)總紅細(xì)胞量；逆轉(zhuǎn)消瘦；逆轉(zhuǎn)異常體重降低；治療免疫功能障礙；逆轉(zhuǎn)淋巴生成的抑制；或者延長慢性病個體的壽命。這可利用有效量的含有組成型啟動子和生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物編碼序列的核酸表達(dá)構(gòu)建體來完成。當(dāng)該核酸序列被遞送到個體的特定細(xì)胞(如體細(xì)胞，干細(xì)胞，或生殖細(xì)胞)中時，獲得GHRH的組織特異性和組成型表達(dá)。組成型啟動子和GHRH或其功能性生物等同物編碼序列的優(yōu)選遞送方法是通過體內(nèi)電穿孔方法直接遞送到個體細(xì)胞。電穿孔可涉及外部應(yīng)用的電極，或當(dāng)使用針的情況下，當(dāng)細(xì)胞是在個體組織中時，內(nèi)部應(yīng)用的電極幫助目的核苷酸序列進(jìn)入個體細(xì)胞。本發(fā)明的另一實施方案涉及通過利用調(diào)節(jié)GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)的能力，進(jìn)行質(zhì)粒介導(dǎo)的方法來治療貧血；消瘦；免疫功能障礙和慢性病個體的壽命。所述調(diào)節(jié)可如下獲得將第一核酸序列和第二核酸序列遞送到個體細(xì)胞，然后再將分子開關(guān)遞送到個體細(xì)胞；其中第一核酸序列含有誘導(dǎo)型啟動子和生長激素釋放激素或其類似物的編碼區(qū)域(“誘導(dǎo)型-GHRH”)，第二核酸序列具有組成型啟動子和無活性調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域。通過將分子開關(guān)分子(如米非司酮(mifepistone))遞送到個體體內(nèi)，無活性的調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚缘鞍撞⒃趥€體體內(nèi)起始誘導(dǎo)型-GHRH的轉(zhuǎn)錄。通過修飾細(xì)胞在個體體內(nèi)GHRH或其功能性生物等同物的外部調(diào)控、表達(dá)和確保釋放，可治療貧血癥，消瘦，免疫功能障礙和提高慢性疾病個體的壽命。可通過體內(nèi)電穿孔方法將能夠?qū)HRH或其功能性生物等同物類似物進(jìn)行外部調(diào)節(jié)的核酸序列直接遞送到個體細(xì)胞。本發(fā)明的另一實施方案涉及通過將特定重組GHRH生物等同蛋白導(dǎo)入個體體內(nèi)的療法來治療貧血，消瘦，免疫功能障礙和提高慢性疾病個體的壽命。以下附圖構(gòu)成本說明書的一部分，從某些方面進(jìn)一步說明本發(fā)明?？梢越Y(jié)合這些附圖和本說明書具體實施方案的詳細(xì)描述以便更好地理解本發(fā)明。圖1顯示GHRH或其生物等同物的氨基酸序列。圖2顯示接受了不同濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的健康狗體內(nèi)IGF-I水平上升的百分比。圖3顯示在第0天接受了100mcg/kg而總量不超過1000mcgpSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的癌癥狗體內(nèi)，在注射后9-27和28-56天IGF-I水平上升的百分比。圖4顯示接受了不同濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的健康狗體重增加的百分比。圖5顯示用GHRH質(zhì)粒療法進(jìn)行治療的患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗體內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量，以癌癥狗作為對照。圖6顯示用GHRH質(zhì)粒療法進(jìn)行治療的患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗體內(nèi)血紅蛋白數(shù)值，以癌癥狗作為對照。圖7顯示用GHRH質(zhì)粒療法進(jìn)行治療的患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗體內(nèi)血球容積水平，以癌癥狗作為對照。圖8顯示用GHRH質(zhì)粒療法進(jìn)行治療的患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗體內(nèi)淋巴細(xì)胞的百分比，以癌癥狗作為對照。圖9顯示依賴米非司酮的GHRH/GeneSwitch系統(tǒng)的示意圖。質(zhì)粒p1633編碼GeneSwitch調(diào)節(jié)蛋白，該蛋白是酵母GAL4DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(“GAL4”)、截短的人黃體酮受體配體-結(jié)合結(jié)構(gòu)域(“hPRLBD”)以及人NF-κB的p65亞基的活化結(jié)構(gòu)域(“p65”)的嵌合蛋白。該蛋白以無活性的單體合成。與米非司酮的結(jié)合引發(fā)構(gòu)象變化，該構(gòu)象變化會導(dǎo)致活化作用和二聚化作用。被活化的同二聚體與誘導(dǎo)型啟動子GAL4位點結(jié)合并刺激GHRH基因的轉(zhuǎn)錄。圖10顯示在左肋腹接受了2X106Lewis肺腺癌細(xì)胞的免疫活性C57/B16小鼠體內(nèi)腫瘤體積的發(fā)展。被治療的動物在腫瘤細(xì)胞植入后第1天接受20毫克表達(dá)人生長激素釋放激素的質(zhì)粒，而對照接受了對照β-半乳糖苷酶質(zhì)粒。GHRH治療的腫瘤動物中腫瘤發(fā)育和進(jìn)展明顯緩慢。圖12顯示在左肋腹接受了2X106Lewis肺腺癌細(xì)胞的免疫活性C57/B16小鼠的腎臟大小。被治療的動物在腫瘤細(xì)胞植入后第1天接受20毫克表達(dá)人生長激素釋放激素的質(zhì)粒，而對照接受了對照β-半乳糖苷酶質(zhì)粒。對照動物的腎臟明顯更小，是腎衰竭的跡象。圖13顯示對照動物與GHRH-治療動物相比其中增加了轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)標(biāo)記，組織病理學(xué)報告顯示對照動物中的轉(zhuǎn)移遠(yuǎn)比接受治療的動物中多。圖14顯示在接受質(zhì)粒介導(dǎo)的生長激素釋放激素(組成型活性pGHRH或受調(diào)節(jié)的GeneSwitch系統(tǒng)GHRH-IS+/-MFP)治療的裸鼠中腫瘤生長并沒有增加。NCI——人肺腺癌細(xì)胞系。在治療后33天，以組成型活性GHRH治療的動物與對照相比腫瘤更小(p＜0.02)。其它組與對照相比差異不顯著。圖15顯示在注射后56天，狗體內(nèi)的蛋白代謝。圖16顯示在注射后56天，狗體內(nèi)的血液值。圖17顯示在注射后56天，狗體內(nèi)的骨代謝。圖19顯示癌癥狗體內(nèi)的血液值。圖20顯示老年健康狗體內(nèi)的血液值。優(yōu)選實施方案詳述定義術(shù)語“一個”或“一”在本說明書中可以指一個或多個。當(dāng)用于權(quán)利要求中時，當(dāng)與“包含”相連使用時，“一個”或“一”表示一個或不止一個。這里所用的“另一個”可以指至少第二個或更多。這里所用術(shù)語“異常體重降低”指體重至少降低個體最小理想體重的5-10％，個體顯現(xiàn)出脂肪組織及肌肉量顯著降低的特征。這里所用的術(shù)語“AIDS治療”指治療艾滋病(“AIDS”)，可用任何醫(yī)學(xué)或物理方法，這些方法包括但不限于抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑，核苷類似物，非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制物(NNRTI)，蛋白酶抑制劑，和/或其它用于提高免疫系統(tǒng)的藥物。這里所用的術(shù)語“類似物”指GHRH的任何突變型，或合成的或天然存在的GHRH多肽片段，例如HV-GHRH(SeqID#1)，TI-GHRH(SeqID#2)，TV-GHRH(SeqID#3)，15/27/28-GHRH(SeqID#4)，(1-44)NH2(SeqID#5)，或(1-40)OH(SeqID#6)形式，或更短的但不少于(1-29)氨基酸的形式。這里所用的術(shù)語“貧血癥”指血流中紅血球數(shù)目或體積或者血紅蛋白的總量降低，從而導(dǎo)致個體面色蒼白，全身無力等癥狀的疾病。這里所用的術(shù)語“非病毒治療”指一組藥物，其可分為3種主要類型，包括核苷類似物藥物，蛋白酶抑制劑藥物，和非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥物(NNRTI)。這里所用的術(shù)語“身體脂肪比例”指身體脂肪質(zhì)量除以總體重。這里所用的術(shù)語“癌癥治療”指治療癌癥，可用任何醫(yī)學(xué)或物理方法，這些方法包括但不限于外科手術(shù)，免疫療法，化學(xué)療法，輻射療法，過熱和/或光力學(xué)療法。這里所用的術(shù)語“惡病質(zhì)”指骨骼肌的喪失加快。這里所用的術(shù)語“盒”指一個或多個轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體。這里所用的術(shù)語“細(xì)胞-轉(zhuǎn)染脈沖”指力量的傳送，該力量可引起載體——例如線性DNA片段——轉(zhuǎn)染到細(xì)胞。在一些實施方案中，該力量是來自電力，如在電穿孔中，或者該力量來自血管壓力。這里所用的術(shù)語“慢性病個體”指患有慢性阻塞性肺病，慢性心衰竭，中風(fēng)，癡呆，臀部骨折后復(fù)原，慢性腎衰竭，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，和老年個體多發(fā)性紊亂，且在至少2年時間內(nèi)，每個月要看醫(yī)生和/或住院的個體。這里所用的術(shù)語“編碼序列”指DNA序列的任何部分，該DNA序列能夠轉(zhuǎn)錄成信使RNA(mRNA)然后翻譯成具有特定肽特征的氨基酸序列。這里所用的術(shù)語“編碼序列”指DNA序列的任何部分，該DNA序列能夠轉(zhuǎn)錄成信使RNA(mRNA)然后翻譯成具有特定肽特征的氨基酸序列。這里所用的術(shù)語“遞送”或“運(yùn)輸”指將材料導(dǎo)入組織，個體，細(xì)胞或任何受體的方法，該方法是在有或沒有壓力的情況下，利用化學(xué)或生物方法，注射，混合，電穿孔，聲納穿孔，或其組合。這里所用的術(shù)語“DNA片段”或“核酸表達(dá)構(gòu)建體”指實質(zhì)上雙鏈的DNA分子。盡管可用本領(lǐng)域公知的常規(guī)分子生物方法產(chǎn)生片段，但是在一些實施例中，該DNA片段或表達(dá)構(gòu)建體是通過對親代DNA分子進(jìn)行限制性酶消化而得到。術(shù)語“表達(dá)載體”，“表達(dá)盒”或“表達(dá)質(zhì)?！痹诖丝梢曰Q使用。盡管親代分子可以是任何常規(guī)分子生物DNA物質(zhì)，但在一些實施方案中親代DNA分子是質(zhì)粒。這里所用的術(shù)語“供體個體”指動物界的任何物種，其中細(xì)胞已被取出并在其體外，在任意長時期內(nèi)維持可存活狀態(tài)。這里所用的術(shù)語“供體-細(xì)胞”指任何被取出的細(xì)胞，并且其在供體個體體外，在任意長時期內(nèi)維持可存活狀態(tài)。這里所用的術(shù)語“有效量”指施用給人，動物或組織培養(yǎng)物中的足夠量的核酸表達(dá)構(gòu)建體或編碼蛋白，以生成足夠水平的蛋白，RNA，或激素。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知足夠水平的蛋白或RNA依賴于所應(yīng)用的特定核酸表達(dá)構(gòu)建體。這些水平可根據(jù)給藥和治療或接種的類型而不同。這里所用的術(shù)語“電穿孔”指應(yīng)用電脈沖將核酸序列遞送到細(xì)胞的方法。這里所用的術(shù)語“電脈沖”和“電穿孔”指對組織或細(xì)胞施加電流來達(dá)到吸收核酸分子到細(xì)胞內(nèi)的目的。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知這些術(shù)語是與術(shù)語“脈沖的電場”“脈沖的電流設(shè)備”和“脈沖的電壓設(shè)備”相聯(lián)系的。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知電脈沖的量和時間是依賴于組織，大小和受體個體的總健康狀況，并且可進(jìn)一步知道憑經(jīng)驗如何確定這些參數(shù)。這里所用的術(shù)語“編碼的GHRH”是生物活性的生長激素釋放激素多肽。這里所用的術(shù)語GHRH“功能性生物等同物”是一種多肽，該多肽氨基酸序列不同于野生型GHRH多肽，并且相較于GHRH多肽，同時具有類似的或改進(jìn)的生物活性。功能性生物等同物可以天然存在或經(jīng)人工修飾。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知這里所用的類似的或改進(jìn)的生物活性指促進(jìn)和/或釋放生長激素或其它垂體激素。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知在一些實施方案中，編碼的GHRH功能性生物等同物是被改造而含有不同的氨基酸序列并且相較于GHRH多肽同時還具有類似的或改進(jìn)的生物活性的多肽。本領(lǐng)域公知的操作這種序列的方法包括定點突變。這里所用的術(shù)語“生長激素釋放激素”(”GHRH”)指一種激素，其能夠促進(jìn)或刺激釋放生長激素，以及更小范圍內(nèi)其它垂體激素，如促乳激素。這里所用的術(shù)語“生長激素”(“GH”)指與生長相關(guān)，并作為化學(xué)信使在靶細(xì)胞上行使功能的激素。這里所用的術(shù)語“GeneSwitch”(ValentisInc.的注冊商標(biāo)，(Burlingame，CA))指米非司酮-誘導(dǎo)型異源核酸序列編碼調(diào)節(jié)蛋白，GHRH，功能性生物等同物或其組合的技術(shù)。這種技術(shù)在圖1和圖9中用示意圖表示。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知米非司酮的替代物抗黃體酮物質(zhì)是可獲得的，包括onapristone，ZK112993，ZK98734和5α-孕烷-3，2-二酮。這里所用的術(shù)語“生長激素”(“GH”)指與生長相關(guān)，并作為化學(xué)信使在靶細(xì)胞上行使功能的激素。在一個具體實施方案中，該生長激素通過生長激素釋放激素的作用而釋放。這里所用的術(shù)語“生長激素釋放激素”(”GHRH”)指一種激素，其能夠促進(jìn)或刺激釋放生長激素，以及更小范圍內(nèi)其它垂體激素，如促乳激素。這里所用的術(shù)語“異源核酸序列”指含有不同調(diào)節(jié)和表達(dá)元素的DNA元件。這里所用的術(shù)語“免疫功能障礙”指個體免疫系統(tǒng)異常的，削弱的，或不完全的功能，如通過免疫特異性標(biāo)記(如IGF-I水平，或％淋巴細(xì)胞)間接或直接側(cè)定的。這里所用的術(shù)語“免疫療法”指促進(jìn)或提高機(jī)體免疫系統(tǒng)的治療，來建造保護(hù)性抗體，該抗體可減少醫(yī)療病癥和/或減少藥療法的需要。這里所用的術(shù)語“瘦體重”(“LBM”)指動物體中非脂肪組織如肌肉所引起的質(zhì)量。這里所用的術(shù)語“慢性病個體的壽命延長”指與未接受治療的個體相比，接受了治療的個體的實際預(yù)期壽命有所增加。這里所用的術(shù)語“淋巴生成”指淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生。這里所用的術(shù)語“腎衰竭”指腎臟局部缺血性或毒性損傷而導(dǎo)致的腎小球過濾率急性或慢性降低，包括腎小球毛細(xì)管通透性降低，腎小球過濾的后部泄漏(back-leak)，管狀梗塞，和腎內(nèi)血管收縮。這里所用的術(shù)語“修飾的細(xì)胞”指來自個體的細(xì)胞，該個體的細(xì)胞被導(dǎo)入額外的核酸序列。這里所用的術(shù)語“修飾的供體細(xì)胞”指任何含有運(yùn)輸?shù)腉HRH編碼核酸序列的供體細(xì)胞。這里所用的術(shù)語“分子開關(guān)”指被運(yùn)輸?shù)絺€體中的能夠調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的分子。這里所用的術(shù)語“核酸表達(dá)構(gòu)建體”指任何類型的含有編碼可轉(zhuǎn)錄RNA的核酸的遺傳性構(gòu)建體。術(shù)語“表達(dá)載體”可在此與之互換使用。在具體實施例中，核酸表達(dá)構(gòu)建體包含啟動子；目的核苷酸序列；3’非翻譯區(qū)域；其中啟動子，目的核苷酸序列和3’非翻譯區(qū)域是操作性連接；并且目的核苷酸序列的體內(nèi)表達(dá)由啟動子調(diào)節(jié)。這里所用的術(shù)語“操作性連接”指核酸序列中的元件或構(gòu)建體，其連接是通過可操作的能力而不是物理位置。該元件或構(gòu)建體能夠、或者說其特征在于，完成目的操作。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知核酸序列中各元件或構(gòu)建體的操作性連接不一定必須是串聯(lián)或鄰近的順序。這里所用的術(shù)語“聚-L-谷氨酸鹽”(“PLG”)指生物可降解的L-谷氨酸鹽，其適于在電穿孔或無電穿孔情況下在DNA到細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中用作載體或輔劑。這里所用的術(shù)語“注射后”指將含有編碼GHRH或其功能性生物等同物的異源核酸序列的核酸序列盒導(dǎo)入個體細(xì)胞之后，且當(dāng)修飾的細(xì)胞在活有機(jī)體內(nèi)時允許該編碼基因表達(dá)的時期。這里所用的術(shù)語“質(zhì)?！蓖ǔＶ负腥旧w外遺傳物質(zhì)——通常是環(huán)狀二倍體DNA——的構(gòu)建體，該DNA能夠在染色體外獨立復(fù)制。質(zhì)粒或其片段可用作載體。質(zhì)粒是存在于或可衍生自細(xì)菌和其它微生物(較少)的雙鏈DNA分子。但是通常排除線粒體和葉綠體DNA，酵母殺手(yeastkiller)或其它情況。這里所用的術(shù)語“質(zhì)粒介導(dǎo)的基因補(bǔ)充”指在體內(nèi)利用核酸表達(dá)構(gòu)建體使個體接受延長的治療性蛋白療程的方法。這里所用的術(shù)語“脈沖電壓設(shè)備”或“脈沖電壓注射設(shè)備”指通過對細(xì)胞發(fā)射定位脈沖，能夠?qū)е潞怂岱肿颖晃盏接袡C(jī)體細(xì)胞的儀器。然后細(xì)胞膜變得不穩(wěn)定，會形成通道或孔。這種類型的常規(guī)設(shè)備都被校準(zhǔn)到可以選擇或調(diào)整期望脈沖電壓振幅以及脈沖電壓的時間。脈沖電壓設(shè)備最基本的意義是能夠促進(jìn)本發(fā)明組合物特別是線性DNA片段被遞送到有機(jī)體細(xì)胞。這里所用的術(shù)語“質(zhì)粒骨架”指通常含有細(xì)菌起始復(fù)制位點和細(xì)菌抗生素選擇基因的DNA序列，該選擇基因?qū)τ谥辉试S那些用適當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的細(xì)菌的特定生長非常必要。但是，還有一些質(zhì)粒，稱為迷你環(huán)，缺少抗生素抗性基因和復(fù)制起始位點(Darquet等，1997；Darquet等，1999；Soubrier等，1999)。體內(nèi)擴(kuò)增表達(dá)質(zhì)粒DNA(即非病毒表達(dá)體系)的應(yīng)用避免了病毒載體相關(guān)的風(fēng)險。由于應(yīng)用了“種-特異性”成分進(jìn)行基因運(yùn)輸，將病毒載體相關(guān)的風(fēng)險最小化，所以非病毒表達(dá)體系產(chǎn)物通常具有低毒性。本發(fā)明的一個特點是質(zhì)粒骨架不含有病毒核苷酸序列。這里所用的術(shù)語“啟動子”指能夠指導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列。啟動子可以指導(dǎo)原核或真核基因的轉(zhuǎn)錄。啟動子可以是“誘導(dǎo)型”，響應(yīng)誘導(dǎo)物質(zhì)而起始轉(zhuǎn)錄，或者，相反，啟動子可以是“組成型”，由此誘導(dǎo)物質(zhì)并不能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄速度。啟動子可以組織特異性或組織優(yōu)選性的方式被調(diào)節(jié)，這樣只在特定組織類型中的操作性連接編碼區(qū)域的轉(zhuǎn)錄中具有活性。這里所用的術(shù)語“輻射療法”指對癌癥個體進(jìn)行的輻射治療，能夠損傷癌癥細(xì)胞中的DNA，其通常導(dǎo)致癌癥細(xì)胞死亡。這里所用的術(shù)語“復(fù)制元件”包括能夠在特定宿主中引起質(zhì)粒復(fù)制的核酸序列。分子生物領(lǐng)域技術(shù)人員公知這種復(fù)制元件可以包括但不限于選擇性標(biāo)記基因啟動子，核糖體結(jié)合位點，選擇性基因序列，和復(fù)制起始位點。這里所用的術(shù)語“殘余線性質(zhì)粒骨架”包括在制備線性核酸表達(dá)質(zhì)粒過程的末期所殘留的任何質(zhì)粒骨架片段。這里所用的術(shù)語“受體個體”指可以導(dǎo)入來自供體者的修飾供體細(xì)胞的動物界中任何動物品種。這里所用的術(shù)語個體“紅細(xì)胞量”(“RBC-量”)用下述3種測試之一來進(jìn)行測定1)血細(xì)胞比容血漿中紅細(xì)胞的百分比；2)紅細(xì)胞(“RBC”)計數(shù)血漿中紅細(xì)胞的數(shù)目；和3)血紅蛋白個體紅細(xì)胞中攜氧蛋白的水平。這里所用的術(shù)語“調(diào)節(jié)蛋白”指任何可用于調(diào)控基因表達(dá)的蛋白。這里所用的術(shù)語“調(diào)節(jié)蛋白”指對誘導(dǎo)物產(chǎn)生反應(yīng)從而提高轉(zhuǎn)錄率的蛋白。這里所用的術(shù)語“個體”或“動物”指動物界的任何動物品種。在優(yōu)選實施方案中，更具體指人和用作寵物(如貓，狗等)、勞力(如馬等)、食物(奶牛，雞，魚，羊，豬等)的家畜；以及本領(lǐng)域公知的所有其它動物。這里所用的術(shù)語“組織”指類似細(xì)胞以及環(huán)繞其周圍的細(xì)胞間物質(zhì)的集合。技術(shù)人員公知組織是行使特定功能的特征類似細(xì)胞集合。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，該術(shù)語組織并不指細(xì)胞系，細(xì)胞懸浮液或細(xì)胞培養(yǎng)物。在一個具體實施方案中，組織在體內(nèi)被電穿孔。在另一實施方案中，該組織并非植物組織。技術(shù)人員公知在體內(nèi)有四種基本組織1)上皮2)結(jié)締組織包括血液、骨和軟骨；3)肌肉組織；以及4)神經(jīng)組織。在一個具體實施方案中，該方法和組合物涉及通過電穿孔將線性DNA轉(zhuǎn)移到肌肉組織。這里所用的術(shù)語“治療元件”包括可導(dǎo)致編碼基因產(chǎn)物體內(nèi)表達(dá)的核酸序列。分子生物領(lǐng)域技術(shù)人員公知治療元件可以包括但不限于，啟動子序列，轉(zhuǎn)基因，多聚腺苷序列，或者3’或5’UTR。這里所用的術(shù)語“轉(zhuǎn)染”指將核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞。在一些實施方案中，該細(xì)胞不是植物組織或酵母細(xì)胞。這里所用的術(shù)語“載體”指任何能夠?qū)⒑怂徇f送到細(xì)胞或有機(jī)體的媒介。包括質(zhì)粒載體，病毒載體，脂質(zhì)體，或陽離子脂類。這里所用的術(shù)語“病毒骨架”指核酸序列，該序列不含有啟動子，基因，3’多聚腺苷信號，或未翻譯序列，但含有一些元件，該元件包括但不限于點特異性染色體組整合Rep和反向末端重復(fù)序列(“ITR”)或tRNA引物逆轉(zhuǎn)錄的結(jié)合位點，或核苷酸序列成份，該成份被體內(nèi)插入時，可誘導(dǎo)病毒免疫原性，允許整合，影響組織特異性啟動子的特異性和活性，引起轉(zhuǎn)錄沉默或給個體帶來安全性風(fēng)險。這里所用的術(shù)語“血管壓力脈沖”指來自大體積液體的壓力來促進(jìn)細(xì)胞吸收載體。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知血管壓力脈沖的大小和時間依賴于組織，大小和受體個體的總健康狀況，并且可進(jìn)一步知道憑經(jīng)驗如何確定這些參數(shù)。這里所用的術(shù)語“載體”指含有遺傳材料的構(gòu)建體，該遺傳材料被設(shè)計成通過將核酸序列運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞而指導(dǎo)靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。載體可以含有多個元遺傳元件，這些元件在位置上和序列上與其他必要的元件相關(guān)，這樣，誘導(dǎo)的核酸序列盒可被轉(zhuǎn)錄，且如果有必要，在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中可被翻譯。術(shù)語“表達(dá)載體”指含有信息的DNA質(zhì)粒，該信息指在異源細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生重組蛋白所必需的所有信息。這里所用的術(shù)語“消瘦”指體重降低，特點是脂肪組織及肌肉量顯著降低，這就使得患有進(jìn)行性疾病如癌癥，AIDS等的個體增加體重十分困難。消瘦可與疾病本身或針對疾病的治療作用相關(guān)，或與這二者都相關(guān)。本發(fā)明一方面涉及用于延緩癌癥個體中異常細(xì)胞生長，促進(jìn)減少腫瘤進(jìn)展的方法。本發(fā)明方法包括用質(zhì)粒介導(dǎo)的基因補(bǔ)充來治療個體。本發(fā)明包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織，如肌肉組織中。本發(fā)明的具體實施方案是針對各種類型的腫瘤(例如腺瘤；惡瘤；白血病；淋巴瘤；肺腫瘤；肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；和實體腫瘤)。在個體體內(nèi)GHRH或其功能性生物等同物的隨后表達(dá)足夠延緩腫瘤生長，預(yù)防腎衰竭，延緩惡病質(zhì)或通常與腫瘤生長相關(guān)的消瘦作用。還可以如下增強(qiáng)本方法在選定組織中安置多個電極，然后在插入電極的區(qū)域?qū)⒑怂岜磉_(dá)構(gòu)建體遞送到選定的組織中，對選定組織的選定區(qū)域施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖(如電脈沖)，所述選定組織的選定區(qū)域是核酸表達(dá)構(gòu)建體被遞送到的區(qū)域。但是，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖不一定必須為電脈沖，還可使用血管壓力脈沖。在一些具體實施方案中使用電穿孔，直接注射，基因槍，或金顆粒轟擊來遞送編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體體內(nèi)。本發(fā)明所述的個體包括哺乳動物(例如人，豬，馬，母牛，小鼠，大鼠，猴，綿羊，山羊，狗或貓)。還描述了本發(fā)明核酸表達(dá)構(gòu)建體的具體元件。例如，該構(gòu)建體含有組織特異性啟動子；GHRH或其功能性生物等同物；和操作性連接的3’非翻譯區(qū)(“3’UTR”)。本發(fā)明核酸表達(dá)構(gòu)建體包括一個基本上不含病毒骨架的構(gòu)建體。在一些具體實施方案中，組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子(如SPc-12(SeqID#7))，且核酸構(gòu)建體的3’UTR包含人生長激素3’UTR(SeqID#8)，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV-40多聚腺苷酸化信號。本發(fā)明核酸表達(dá)構(gòu)建體包括一個基本上不含病毒骨架的構(gòu)建體。本發(fā)明所用的核酸表達(dá)構(gòu)建體的具體實例包括具有SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，和SeqID#14的質(zhì)粒。編碼的GHRH功能性生物等同物包含相較于GHRH多肽而言，具有類似的或改進(jìn)的生物活性的多肽。本發(fā)明應(yīng)用的由核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含具有下述通用序列的氨基酸結(jié)構(gòu)(SeqID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是D-或L-異構(gòu)體酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)；X2是D-或L-異構(gòu)體丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)；X3是D-或L-異構(gòu)體丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)；X4是D-或L-異構(gòu)體蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)；X5是D-或L-異構(gòu)體絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)，或以上組合。用于本發(fā)明的GHRH或其功能性生物等同物氨基酸序列的具體實例示于SeqID#2；SeqID#3；SeqID#4；和SeqID#10。在一個具體實施方案中，編碼的GHRH或其功能性生物等同物在接受核酸表達(dá)構(gòu)建體的個體中促進(jìn)生長激素(“GH”)分泌。盡管不希望被理論束縛，但是可以用轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽來提高組織細(xì)胞吸收核酸表達(dá)構(gòu)建體能力。在本發(fā)明的具體實施例中，轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含一個帶電荷的多肽，例如聚-L-谷氨酸鹽。本發(fā)明另一方面涉及組合物和方法，用于延緩癌癥動物中異常細(xì)胞的生長，減少腫瘤發(fā)展，防止腎衰竭，降低癌轉(zhuǎn)移，提高存活率。本發(fā)明的組合物包括有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體，其中在個體體內(nèi)GHRH或其功能性生物等同物的遞送和隨后的表達(dá)足夠延緩異常細(xì)胞的生長，促進(jìn)減少腫瘤發(fā)展的作用，預(yù)防腎衰竭，提高癌癥動物的存活率。本發(fā)明的具體實施方案針對特定類型的癌癥和腫瘤(例如腺瘤；惡瘤；白血?。涣馨土?；肺腫瘤；肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；和實體腫瘤)GHRH或其功能性生物等同物的隨后表達(dá)足夠延緩異常細(xì)胞的生長，促進(jìn)減少腫瘤發(fā)展的作用，預(yù)防腎衰竭，提高癌癥動物的存活率。還可以如下增強(qiáng)本發(fā)明組合物(即核酸表達(dá)構(gòu)建體)的吸收在選定組織中安置多個電極，然后在插入電極的區(qū)域?qū)⒑怂岜磉_(dá)構(gòu)建體遞送到選定的組織中，對選定組織的選定區(qū)域施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖(如電脈沖)，所述選定組織的選定區(qū)域核酸表達(dá)構(gòu)建體被遞送到的區(qū)域。但是，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖不一定必須為電脈沖，還可使用血管壓力脈沖。在一些具體實施方案中使用電穿孔，直接注射，基因槍，或金顆粒轟擊來遞送編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體體內(nèi)。本發(fā)明所述的個體包括哺乳動物(例如人，豬，馬，母牛，小鼠，大鼠，猴，綿羊，山羊，狗或貓)。另外，本發(fā)明涉及用質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充方法以治療慢性疾病個體貧血，消瘦，腫瘤生長，免疫功能障礙，腎衰竭和/或延長壽命。貧血指血流中紅血球數(shù)目、體積或二者都減少，或血紅蛋白的總量降低，從而導(dǎo)致面色蒼白，全身無力等癥狀的疾病。個體的消瘦可定義為體重降低，特點是脂肪組織及肌肉量顯著降低，這就使得患有進(jìn)行性疾病(如癌癥，AIDS等)的個體增加體重十分困難。貧血，消瘦，腫瘤生長，免疫功能障礙，腎衰竭和預(yù)期壽命降低可與特定疾病或疾病的治療效果相關(guān)。更具體地，本發(fā)明涉及將編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的異源核酸序列運(yùn)動到個體細(xì)胞中(如體細(xì)胞，干細(xì)胞，或生殖細(xì)胞)，并當(dāng)修飾的細(xì)胞在個體體內(nèi)時，使編碼的GHRH或其功能性生物等同物基因表達(dá)。GHRH或其功能性生物等同物的隨后表達(dá)由組織特異性啟動子(如肌肉)，和/或含有修飾配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(如分子開關(guān))的調(diào)節(jié)蛋白進(jìn)行調(diào)控，所述調(diào)節(jié)蛋白只有當(dāng)正確修飾的配體(如米非司酮)被外部施用給個體時，才具有活性。修飾細(xì)胞在個體體內(nèi)顱外表達(dá)和確保釋放GHRH或其功能性生物等同物可治療慢性疾病個體的貧血癥，消瘦，免疫功能障礙和延長壽命。將GHRH或其功能性生物等同物遞送到個體細(xì)胞的優(yōu)選方法是電穿孔。重組GH替代療法在臨床廣泛應(yīng)用，具有良好效果，但是其用量通常超過生理范圍。重組GH的這種高劑量與有害的副作用相關(guān)，例如，接受達(dá)30％該重組GHRH治療的個體會顯示出更高頻率的胰島素抗性(Blethen，1995；Verhelst等，1997)，或者在兒科個體中的骨骺的生長加速以及閉合現(xiàn)象(Blethen和Rundle，1996)。另外，循環(huán)的GH的分子異質(zhì)性還與生長和動態(tài)平衡非常相關(guān)，其可導(dǎo)致GH的效力降低，這樣該GH刺激催乳激素受體的能力就會降低(Satozawa等，2000；Tsunekawa等，1999；Wada等，1998)。這些不利的副作用是因為這種現(xiàn)象用重組的外源GH蛋白進(jìn)行的治療會提高GH的基礎(chǔ)水平并消除GH的天然陣發(fā)式脈沖。相反，重組GHRH治療則未見有副作用的報道。在垂體門靜脈循環(huán)中，正常GHRH水平約為150-800pg/ml，而在體循環(huán)中該激素的值約為100-500pg/ml。顱外腫瘤所引起的肢端肥大癥個體體內(nèi)具有將近10倍的水平(如50ng/ml免疫反應(yīng)性GHRH)(Thorner等，1984)。使用重組GHRH治療兒童和成人的長期研究(1-5年)表明不存在經(jīng)典的GH副作用，例如禁食性葡萄糖濃度的改變，或在兒科個體中的骨骺的生長加速以及閉合現(xiàn)象或頭狀股骨骺移位松脫(Chevalier等，2000)(Duck等，1992；Vittone等，1997)。對人，綿羊或豬的大量研究顯示，持續(xù)地注入重組GHRH蛋白可無需脫敏GHRH受體或耗盡GH供給而成恢復(fù)正常的GH模式(Dubreuil等，1990)。由于該系統(tǒng)能夠引起一定程度的在GH治療中被消除的反饋抑制，所以GHRH重組蛋白治療可能比GH治療更符合生理學(xué)。但是，由于GHRH在體內(nèi)半衰期很短，必須進(jìn)行頻繁的靜脈，皮下或鼻內(nèi)(劑量需要提高300倍)給藥(每天1到3次)(Evans等，1985；Thorner等，1986)。這樣，作為一種慢性治療，施用重組GHRH蛋白并不實用。但是基因轉(zhuǎn)移技術(shù)可以克服GHRH應(yīng)用的這個缺陷。而且，很寬范圍內(nèi)的劑量都可用于治療。選擇GHRH用于基因治療應(yīng)用基于以下有利事實豬和其它物種的基因、cDNA以及天然和幾種突變分子已被鑒定(Bohlen等，1983；Guillemin等，1982)，并且療效的測定簡單明確。在體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移的非病毒技術(shù)中，將質(zhì)粒DNA直接注射到肌肉組織十分簡單、低廉且安全。在簡易直接注射后，DNA到肌纖維的低吸收率導(dǎo)致相對較低的表達(dá)水平(Prentice等，1994；Wells等，1997)。另外，轉(zhuǎn)基因表達(dá)的持續(xù)時間很短(Wolff等，1990)。以前最成功的臨床應(yīng)用是在疫苗領(lǐng)域(Danko和Wolff，1994；Tsurumi等，1996)。最近，利用電穿孔技術(shù)獲得了提高質(zhì)粒體內(nèi)遞送以及隨后得到生理水平的分泌蛋白的顯著進(jìn)步。最近，使用電穿孔來提高質(zhì)粒體內(nèi)遞送已取得巨大進(jìn)步。已經(jīng)成功地應(yīng)用電穿孔在注射質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞(Lucas等，2002；Matsubara等，2001)或在人體內(nèi)遞送抗腫瘤藥物博萊霉素到皮膚和皮下腫瘤(Gehl等，1998；Heller等，1996)。電穿孔還被廣泛用于小鼠(Lesbordes等，2002；Lucas等，2001；Vilquin等，2001)，大鼠(Terada等，2001；Yasui等，2001)，和狗(Fewell等，2001)來遞送編碼各種激素、細(xì)胞因子或酶的治療性基因。我們使用生長激素釋放激素(“GHRH”)進(jìn)行的前期研究顯示用電穿孔進(jìn)行質(zhì)粒治療頗具潛力并且代表誘導(dǎo)蛋白在大動物和人類體內(nèi)產(chǎn)生并受調(diào)節(jié)分泌的有希望的方法(Draghia-Akli等，1999；Draghia-Akli等，2002)。電穿孔還廣泛用于嚙齒動物和其它小動物(Bettan等，2000；Yin和Tang，2001)。已知電極的構(gòu)造能夠影響電場分布以及隨后的結(jié)果(Gehl等，1999；Miklavcic等，1998)。預(yù)實驗顯示，對于大動物模型，針式電極比外部卡尺電極更能持續(xù)產(chǎn)生重復(fù)性好的結(jié)果。如上所述，電穿孔提高骨骼肌攝取質(zhì)粒的能力已被完全證實。另外，已觀察到用PLG或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)配制的質(zhì)粒在小鼠，大鼠，和狗骨骼肌中提高基因轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)基因表達(dá)提高10倍(Fewell等，2001；Mumper等，1998)。盡管不希望被理論束縛，但是PLG會在電穿孔過程中增強(qiáng)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染，不僅通過穩(wěn)定質(zhì)粒DNA，促進(jìn)其通過細(xì)胞膜上的孔進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，還通過一種活性機(jī)制。例如，細(xì)胞上帶正電的表面蛋白可以通過蛋白-蛋白相互作用結(jié)合帶負(fù)電的PLG，該P(yáng)LG與質(zhì)粒DNA相連。當(dāng)使用電場時，蛋白的表面翻轉(zhuǎn)方向然后主動地將該DNA分子包容于其內(nèi)，該方法能夠顯著地提高轉(zhuǎn)染效率。這里所述的用質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充方法來治療貧血，消瘦，腫瘤生長，免疫功能障礙，腎衰竭和延長慢性病個體的壽命，與直接注射重組GH或GHRH的限制相比，具有幾個優(yōu)點。血清蛋白酶抗性的新型GHRH功能性生物等同物的表達(dá)可由表達(dá)質(zhì)粒來指導(dǎo)，該質(zhì)粒由合成的肌特異性啟動子調(diào)節(jié)。通過肌肉注射以及體內(nèi)電穿孔將編碼序列遞送到個體細(xì)胞內(nèi)之后，這種GHRH或其功能性生物等同物的表達(dá)會引發(fā)個體體內(nèi)高水平的GH和IGF-I。盡管體內(nèi)電穿孔是將異源核酸編碼體系遞送到個體細(xì)胞內(nèi)的優(yōu)選方法，但還存在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它方法(如電穿孔，lipofectamine，磷酸鈣，體外轉(zhuǎn)化，直接注射，DEAE葡聚糖，超聲處理輸入(sonicationloading)，受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，微彈轟擊(microprojectilebombardment)等)。例如，可通過如下步驟直接向個體細(xì)胞導(dǎo)入編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸序列首先從個體或供體者體內(nèi)取出該細(xì)胞，在培養(yǎng)基中維持該細(xì)胞，然后通過各種方法(如電穿孔，lipofectamine，磷酸鈣，體外轉(zhuǎn)化，直接注射，DEAE葡聚糖，聲處理輸入(sonicationloading)將該核酸編碼體系導(dǎo)入，最后將該修飾的細(xì)胞再導(dǎo)入原始個體或其它宿主個體(體外方法)。GHRH序列可克隆到腺或腺病毒載體相關(guān)載體中，并通過簡單的肌肉注射或者靜脈或動脈注射來遞送。攜帶GHRH序列的質(zhì)粒可與陽離子脂類或脂質(zhì)體復(fù)合，然后肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)或皮下遞送。這里所用的給藥是指將DNA載體或攜帶體導(dǎo)入體內(nèi)的路徑。給藥可以直接遞送到靶組織或在系統(tǒng)給藥后定向遞送到靶組織。特別地，本發(fā)明可通過對身體施用載體來進(jìn)行疾病的治療，在組織內(nèi)以用于質(zhì)粒介導(dǎo)補(bǔ)充的特定水平建立任何特定核酸序列的受控表達(dá)。施用載體的優(yōu)選方法和遞送方法的應(yīng)用如上所述。在簡單地將DNA顆粒作為溶液，懸浮液或膠體注射到肌肉中后，肌細(xì)胞具有獨特的從細(xì)胞外空間吸收DNA的能力。通過這種方法進(jìn)行的DNA表達(dá)可以維持幾個月。應(yīng)用體內(nèi)電穿孔進(jìn)一步提高DNA到肌肉細(xì)胞內(nèi)的吸收。制劑的DNA載體的遞送涉及將DNA并入大分子復(fù)合物，該復(fù)合物會經(jīng)歷靶細(xì)胞的內(nèi)吞作用。這種復(fù)合物可包括脂類，蛋白，碳水化合物，合成的有機(jī)化合物，或無機(jī)化合物。這些用載體形成的化合物的特征(大小，電荷，表面特征，組成)決定了該載體在體內(nèi)的生物利用率。制劑的其它元素作為能夠與細(xì)胞表面或內(nèi)部特異性受體反應(yīng)的配體來發(fā)揮作用。合成的其它元素的功能在于促進(jìn)進(jìn)入細(xì)胞，從內(nèi)涵體釋放以及進(jìn)入核。遞送還可以通過應(yīng)用DNA轉(zhuǎn)運(yùn)子(transporter)。DNA轉(zhuǎn)運(yùn)子指可以結(jié)合DNA載體并能夠被表皮細(xì)胞吸收的分子。DNA轉(zhuǎn)運(yùn)子包含能夠非共價地結(jié)合到DNA上并有效遞送該DNA通過細(xì)胞膜的分子復(fù)合物。優(yōu)選該轉(zhuǎn)運(yùn)子還可以遞送DNA通過核膜。例如參見下述申請，將這些申情(包括附圖)并入本文作為參考(1)Woo等，美國專利6,150,168，標(biāo)題“DNA轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及應(yīng)用方法；”(2)Woo等，PCT/US93/02725，標(biāo)題“核酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及應(yīng)用方法”，申請日1993年3月19日；(3)Woo等，美國專利6,177,554“核酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及應(yīng)用方法；”(4)Szoka等，美國專利5,955,365，標(biāo)題“自我組裝的多核苷酸遞送系統(tǒng)；”和(5)Szoka等，PCT/US93/03406，標(biāo)題“自我組裝的多核苷酸遞送系統(tǒng)”，申請日1993年4月5日。另一種遞送方法涉及DNA轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。該DNA轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)由各微粒構(gòu)成，這些微粒含有幾種獨立地且非共價連接到DNA上的元件。每種元件由配體構(gòu)成，該配體能夠識別特定受體或其它功能基團(tuán)，例如與陽離子基團(tuán)復(fù)合的蛋白，所述陽離子基團(tuán)能夠與DNA結(jié)合。可使用的陽離子實例為精胺，精胺衍生物，組蛋白，陽離子肽和/或聚賴氨酸。一個元件既能與DNA載體結(jié)合又能與靶細(xì)胞上的細(xì)胞表面受體結(jié)合。這些元件的實例是與脫唾液酸糖蛋白受體，葉酸受體，甘露糖-6-磷酸受體，或肉毒堿受體反應(yīng)的有機(jī)化合物。另一元件既能與DNA載體結(jié)合又能與核膜上的受體結(jié)合。核配體能夠識別并遞送轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)通過核膜。這種配體是例如來自SV40的大T抗原或組蛋白的核靶向序列。第三個元件既能結(jié)合DNA載體又能結(jié)合誘導(dǎo)游離體溶解的元件。實例包括無活性的病毒顆粒，例如腺病毒，流感病毒血球凝集素相關(guān)多肽，或上面引用的Skoka專利中描述的GALA多肽。給藥還可以涉及脂類。該脂類可形成脂質(zhì)體，其為中空的球形囊，由單層、雙層或多層形式排列的脂質(zhì)和內(nèi)部的水性空間構(gòu)成，該水性空間用于捕獲水溶性化合物，例如DNA，所述化合物直徑范圍0.05到幾微米。脂質(zhì)可無需形成脂質(zhì)體而應(yīng)用。具體實例包括應(yīng)用含有DOPE的陽離子脂質(zhì)和復(fù)合物，該DOPE與DNA和靶細(xì)胞膜反應(yīng)來促進(jìn)DNA進(jìn)入細(xì)胞?；蜻f送還可以通過移植遺傳改造的細(xì)胞來完成。例如，可使用稱為成肌細(xì)胞的未成熟肌細(xì)胞將基因遞送到肌肉纖維中。被遺傳改造以表達(dá)重組人生長激素的成肌細(xì)胞可以向動物血液中分泌生長激素。被插入基因的分泌可維持3個月以上。成肌細(xì)胞最終分化并合并到現(xiàn)有的肌肉組織。由于該細(xì)胞被并入到已存在的組織，其不僅被耐受而且還被提供營養(yǎng)。成肌細(xì)胞可通過從需要補(bǔ)充GHRH的個體中分離肌肉組織而簡易獲取，遺傳改造的細(xì)胞還可以被簡易地放回原處而不對個體產(chǎn)生任何損傷。類似的，角化細(xì)胞可用于向組織中遞送基因。大量的角化細(xì)胞可通過培養(yǎng)少量活組織而獲得。該培養(yǎng)物可被制備成層疊的細(xì)胞層，當(dāng)其被移植到人體，會產(chǎn)生表皮，該表皮在許多年內(nèi)會繼續(xù)改善組織型性質(zhì)。培養(yǎng)該角化細(xì)胞時，用適當(dāng)?shù)妮d體轉(zhuǎn)染角化細(xì)胞，將該角化細(xì)胞遺傳改造。盡管角化細(xì)胞通過分隔表皮和真皮的基膜而從循環(huán)中分離，但人角化細(xì)胞分泌產(chǎn)生蛋白到循環(huán)中。遞送還可涉及病毒載體的應(yīng)用。例如，可構(gòu)建腺病毒載體用本發(fā)明所述載體元件，包括啟動子，5’UTR，3’UTR和核酸盒，替換腺病毒基因組的E1區(qū)域，并將該重組基因組導(dǎo)入293細(xì)胞，該細(xì)胞會將該基因包裝為有傳染性的病毒顆粒。然后來自該細(xì)胞的病毒就可用于離體或體內(nèi)感染組織從而將載體導(dǎo)入組織，致使核酸盒中的基因表達(dá)。盡管不希望被理論束縛，但相信為提供在人體內(nèi)應(yīng)用這些異源核酸序列的可接受的安全系數(shù)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)體系應(yīng)該具有低水平的GHRH基本表達(dá)，并且仍保持高度的可誘導(dǎo)性。這樣，可通過合并分子開關(guān)的技術(shù)來調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，該技術(shù)如圖9的示意圖所示并在實施例1進(jìn)一步討論。相較于半衰期只有6-12分鐘的天然GHRH，HV-GHRH或其功能性生物等同物分子顯示出高度血漿穩(wěn)定性，其半衰期為6小時。這樣，通過將強(qiáng)有力的電穿孔DNA遞送法和穩(wěn)定的可調(diào)節(jié)GHRH或其功能性生物等同物的編碼核酸序列相結(jié)合，可進(jìn)行治療來逆轉(zhuǎn)慢性消瘦，使個體體重增加，并延長個體的預(yù)期壽命。I.載體這里所用的術(shù)語“載體”指導(dǎo)入細(xì)胞的核酸分子載體，該核酸分子中可插入核酸序列，其中，在一些實施方案中，該載體可復(fù)制。核酸序列可以是動物自身的，或者可以是“外源的”，這是指該核酸序列對載體被導(dǎo)入的細(xì)胞而言是外來的，或該序列與該細(xì)胞中的序列同源，但該序列通常未發(fā)現(xiàn)存在于宿主細(xì)胞核酸中。盡管在一個優(yōu)選實施方案中，載體基本不含有病毒序列，但載體包括質(zhì)粒，粘粒，病毒(噬菌體，動物病毒和植物病毒)，線性DNA片段，以及人工染色體(如YAC)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過常規(guī)重組技術(shù)構(gòu)建載體(例如參見Maniatis等，1988和Ausubel等，1994，均并入作為參考)。這里所用術(shù)語“表達(dá)載體”指含有編碼可被轉(zhuǎn)錄RNA的核酸的任何類型遺傳性構(gòu)建體。有時，RNA分子被翻譯成蛋白，多肽或肽。而在另外一些情況下，這些序列并不被翻譯，而是例如產(chǎn)生反義分子或核糖酶。表達(dá)載體可含有各種“調(diào)控序列”，其指操作性連接的編碼序列在特定宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄或可能的翻譯所必需的核酸序列。除控制轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)控序列外，載體和表達(dá)載體還可包含下述的起其它作用的核酸序列。II.質(zhì)粒載體在一些實施方案中，來自質(zhì)粒載體的線性DNA期望用于轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，特別是哺乳動物細(xì)胞。含有復(fù)制子和來源于宿主細(xì)胞相似物種的調(diào)控序列的質(zhì)粒載體通常與這些宿主聯(lián)合使用。該載體通常帶有復(fù)制位點，和能夠在被轉(zhuǎn)染細(xì)胞中產(chǎn)生表型選擇的標(biāo)記序列。在一個非限制性實施例中，通常用pBR322衍生物轉(zhuǎn)化大腸桿菌，該pBR322是來源于大腸桿菌物種的質(zhì)粒。pBR322含有氨卞青霉素和四環(huán)素抗性基因，這樣就提供了鑒定轉(zhuǎn)化細(xì)胞的簡易方法。該pBR質(zhì)粒，或其他微生物的質(zhì)?；蚴删w必須含有，或經(jīng)過修飾后含有，例如能夠被微生物應(yīng)用的啟動子，來表達(dá)其自身的蛋白。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知本領(lǐng)域的任何質(zhì)粒都可以被修飾而應(yīng)用于本發(fā)明方法。例如，在一個具體實施方案中，用于治療應(yīng)用的GHRH載體來自pBlueScriptKS+，并且具有卡那霉素抗性基因。另外，含有復(fù)制子和來源于宿主微生物相似物種的調(diào)控序列的噬菌體載體可作為轉(zhuǎn)化載體與這些宿主結(jié)合使用。例如，λ噬菌體GEMTM-11可用于制備重組噬菌體載體，該載體可用于轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，例如E.coliLE392。更多的有用質(zhì)粒載體包括pIN載體(Inouye等，1985)；和pGEX載體，產(chǎn)生谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(“GST”)可溶性融合蛋白用于隨后分裂片段的純化和分離。其它適當(dāng)?shù)娜诤系鞍资菐в笑?半乳糖苷酶、泛素等的那些。含有表達(dá)載體的細(xì)菌宿主細(xì)胞，例如大腸桿菌，可在任何適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基例如，LB中生長。如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，可通過將宿主細(xì)胞對特定啟動子特異的試劑接觸，例如向培養(yǎng)基中加入IPTG，或?qū)⑴囵B(yǎng)轉(zhuǎn)換到更高溫度而誘導(dǎo)某些載體中重組蛋白進(jìn)行表達(dá)。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)菌一段時間后，通常在2到24小時之間，離心收集細(xì)胞，然后清洗去除殘留的培養(yǎng)基。III.啟動子和增強(qiáng)子啟動子是控制基因產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄速度的一段核酸序列。其含有遺傳元件，調(diào)節(jié)蛋白和分子(例如RNA聚合酶和其它轉(zhuǎn)錄因子)能夠與該遺傳元件結(jié)合，而起始核酸序列的特異性轉(zhuǎn)錄。短語“操作性定位”，“操作性連接”，“受控”，和“受轉(zhuǎn)錄調(diào)控”指啟動子相對于一段核酸序列而言，位于正確的功能性位點和/或定位，能夠調(diào)控該序列的轉(zhuǎn)錄起始和/或表達(dá)。啟動子通常含有定位RNA合成起始位點功能的序列。最著名的例子是TATA序列盒，但是在一些缺乏TATA盒的啟動子中，例如，哺乳動物末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶基因的啟動子，以及SV40晚期基因的啟動子，自身覆蓋起始位點的不連續(xù)的元件能夠幫助固定起始位點。額外的啟動子元件調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始的頻率。典型地，這些元件位于距起始位點30-110bp的上游區(qū)域，盡管許多啟動子已顯示在起始位點的下游含有功能性元件。為使編碼序列處于啟動子的“調(diào)控下”，這些序列轉(zhuǎn)錄閱讀框的轉(zhuǎn)錄起始位點5’末端應(yīng)該定位于所選啟動子“下游”(即，在所選啟動子的3’端方向)?！吧嫌巍眴幼哟龠M(jìn)DNA的轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)編碼的RNA進(jìn)行表達(dá)。啟動子元件之間的距離常常是可變的，這樣，當(dāng)元件被相對翻轉(zhuǎn)或移動時，仍可保留啟動子的功能。在tk啟動子中，啟動子元件之間的距離可增加到50bp而啟動子的活性未降低。似乎單獨的元件可以聯(lián)合地，也可以獨立地活化轉(zhuǎn)錄，這要視不同的啟動子而定。啟動子可以與“增強(qiáng)子”聯(lián)合使用，也可以不與其聯(lián)合使用，增強(qiáng)子是指與核酸序列的轉(zhuǎn)錄活化相關(guān)的順式作用調(diào)控序列。啟動子可以天然地與核酸序列相連，如通過分離位于編碼區(qū)域上游的5’非編碼序列和/或外顯子而可獲得。這種啟動子可稱為“內(nèi)源的”。類似地，增強(qiáng)子可以天然地與核酸序列相連，位于該序列的上游或下游。或者，有利的做法是定位編碼核酸序列使其處于重組的、合成的或異源啟動子的調(diào)控之下，其中重組的、合成的或異源啟動子是指在該啟動子的天然環(huán)境中，正常情況下不與核酸序列相連的啟動子。重組的，合成的或異源增強(qiáng)子也指在其天然環(huán)境中正常情況下不與核酸序列相連的增強(qiáng)子。這種啟動子或增強(qiáng)子可包括其它基因的啟動子或增強(qiáng)子，以及分離自任何其它病毒，原核或真核細(xì)胞的啟動子或增強(qiáng)子，以及“天然”不存在的啟動子或增強(qiáng)子，即，含有不同轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域的不同元件，和/或改變表達(dá)的突變型。例如，最通常用于重組DNA構(gòu)建的啟動子包括β-內(nèi)酰胺酶(青霉素酶)，乳糖和色氨酸(trp)啟動子體系。除合成產(chǎn)生啟動子和增強(qiáng)子的核酸序列外，還可使用重組克隆和/或核酸擴(kuò)增技術(shù)，包括PCRTM，與這里公開的化合物(參見美國專利4,683,202和5,928,906，將這兩篇申請并入本文作為參考)結(jié)合，來產(chǎn)生序列。而且，可以預(yù)期，還可以應(yīng)用那些指導(dǎo)序列在如線粒體，葉綠體等非核細(xì)胞器內(nèi)轉(zhuǎn)錄和/或表達(dá)的調(diào)控序列。顯而易見地，使用能有效地指導(dǎo)DNA序列在被選擇用于表達(dá)的細(xì)胞器，細(xì)胞類型，組織，器官或有機(jī)體中表達(dá)的啟動子和/或增強(qiáng)子非常重要。分子生物領(lǐng)域技術(shù)人員公知啟動子，增強(qiáng)子和細(xì)胞類型結(jié)合用于蛋白表達(dá)(例如，參見Sambrook等，1989，并入作為參考)。所用的啟動子可以是組成型的，組織特異性的，誘導(dǎo)型的，和/或用于適當(dāng)條件下指導(dǎo)導(dǎo)入的DNA序列高水平表達(dá)的，這對大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白和/或多肽非常有利。該啟動子可以是異源或同源。另外，任何啟動子/增強(qiáng)子的組合(例如，按照真核啟動子數(shù)據(jù)庫(theEukaryoticPromoterDataBase)EPDB，http//www.epd.isb-sib.ch/)也可用于驅(qū)動表達(dá)。T3，T7或SP6細(xì)胞質(zhì)表達(dá)體系的應(yīng)用是另一可能的實施方案。如果提供適當(dāng)?shù)募?xì)菌聚合酶，真核細(xì)胞能夠支持從特定細(xì)菌的啟動子進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄，作為運(yùn)送復(fù)合物的一部分或者作為額外的遺傳表達(dá)構(gòu)建體。表1和2列出了可應(yīng)用于本發(fā)明來調(diào)節(jié)RNA表達(dá)的元件/啟動子非限制性實例。表2列出了誘導(dǎo)型元件的非限制性實例，該誘導(dǎo)型元件是能夠被特定刺激物活化的核酸序列。組織特異性啟動子或元件的鑒定，以及檢定其活性的試驗是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這些序列非限制性地包括人LIMK2基因(Nomoto等，1999)，生長激素抑制素受體2基因(Kraus等，1998)，鼠附睪視黃酸結(jié)合基因(Lareyre等，1999)，人CD4(zhao-Emonet等，1998)，鼠α2(XI)膠原(Liu等，2000；Tsumaki等，1998)，D1A多巴胺受體基因(Lee等，1997)，胰島素樣生長因子II(Dai等，2001；Wu等，1997)，和人血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(Almendro等，1996)。在一個優(yōu)選的實施例中，采用合成的肌啟動子，例如SPc5-12(Li等，1999)，其含有鄰近的來自骨骼α-肌動蛋白的血清反應(yīng)元件(“SRE”)，多元MEF-2位點，MEF-1位點和TEF-1結(jié)合位點，并極大地提高了天然生肌啟動子的轉(zhuǎn)錄潛能。這種合成啟動子的唯一性是一個巨大的改進(jìn)，例如相較于已發(fā)表的關(guān)于生肌啟動子及其應(yīng)用(如美國專利5,374,544)或核酸序列的成肌表達(dá)體系(如美國專利5,298,422)的專利。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明使用的啟動子的生物活性并不會因為內(nèi)源細(xì)胞工具或因子而失去或減少?？筛鶕?jù)本發(fā)明的該實施方案應(yīng)用其它元件，包括反式作用因子結(jié)合位點和增強(qiáng)子。在另一實施方案中應(yīng)用了天然生肌啟動子，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知如何從數(shù)據(jù)庫中獲取這種啟動子序列，所述數(shù)據(jù)庫包括NationalCenterforBiotechnologyInformation(”NCBI”)GenBankdatabase或者theNCBIPubMed站點。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知可利用這些數(shù)據(jù)庫來獲取與本發(fā)明相關(guān)的序列或相關(guān)文獻(xiàn)。IV.起始信號和內(nèi)部核糖體結(jié)合位點為有效翻譯編碼序列還需要一個特定的起始信號。這些信號包括ATG起始密碼子或鄰近的序列?？赡苄枰峁┩庠捶g調(diào)控信號，包括ATG起始密碼子。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠顯而易見地確定并提供必要的信號。公知起始密碼子必須是與目的編碼序列的閱讀框“符合讀框”來確保整個插入序列的翻譯。外源翻譯調(diào)控信號和起始密碼子可以是天然或合成的。表達(dá)的效率可通過容納合適的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子元件而提高。在本發(fā)明的一些實施方案中，內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(“IRES”)元件被用于產(chǎn)生多基因，或多順反子信使。IRES能夠繞過5’甲基化帽子依賴的翻譯的核糖體掃描模型并在內(nèi)部位點開始翻譯(Pelletier和Sonenberg，1988)。來自細(xì)小核糖核酸病毒科(脊髓灰質(zhì)炎和腦心肌炎)二個成員的IRES元件已被描述(Pelletier和Sonenberg，1988)，還有來自哺乳動物信使的IRES(Macejak和Sarnow，1991)。IRES元件可與異源開放閱讀框相連。多元開放閱讀框可被一起轉(zhuǎn)錄，由一個IRES彼此分隔，產(chǎn)生多順反子信息。通過IRES元件，每個開放閱讀框可以接近核糖體進(jìn)行有效翻譯?？墒褂脝为毜膯幼?增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄單一的信息有效表達(dá)多基因(參見美國專利5,925,565和5,935,819，在此將其并入本文作為參考)。V.多克隆位點[MCS]載體可包括MCS，MCS是含有多個限制性酶切位點的核酸序列，其中的限制性酶可與常規(guī)重組技術(shù)結(jié)合用于消化載體(例如，參見(Carbonelli等，1999；Cocea，1997；Levenson等，1998)，并入本文作為參考)?！跋拗菩悦盖小敝赣脙H在核酸分子特定位置起作用的酶對核酸分子催化切割。許多限制性酶都可商業(yè)獲得。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知這種酶的應(yīng)用。通常，使用在MCS內(nèi)部切割的限制性酶使載體呈線狀或片段以使外源序列能夠連接到載體上?！斑B接”指在兩個核酸片段之間形成磷酸二酯鍵的過程，其中這兩個核酸片段可以是互相連續(xù)的也可以不連續(xù)。VI.剪接位點多數(shù)被轉(zhuǎn)錄的真核RNA分子都會經(jīng)歷RNA剪接而從第一轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中去除內(nèi)含子。含有真核基因組序列的載體可能需要供體和/或受體剪接位點來確保蛋白表達(dá)所需要的正確的轉(zhuǎn)錄加工(參見，例如(Chandler等，1997)，將其并入本文作為參考。)。VII.終止信號本發(fā)明的載體或構(gòu)建體通常包括至少一個終止信號。一個“終止信號”或“終止子”包含一個DNA序列，該DNA序列與RNA聚合酶催化的RNA轉(zhuǎn)錄的特定終止子相關(guān)。這樣，在一些實施方案中，考慮終止RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物生成的終止信號。為獲取目的信息水平，終止子可能有必要存在于體內(nèi)。在真核體系中，終止子序列還可包含能夠使新轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在特定位點分裂的特定DNA序列，以使得多聚腺苷位點暴露出來。這給一種專門的內(nèi)源聚合酶傳遞一種信號，使該酶給轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3’末端加上一個約200個A殘基(“多聚A”)的延長序列。用該多聚A尾巴修飾的RNA分子似乎更穩(wěn)定，且能更有效地翻譯。這樣，在另一些涉及真核生物的實施例中，優(yōu)選終止子含有使RNA分裂的信號，更優(yōu)選終止子信號能促進(jìn)信使的多聚腺苷化。終止子和/或多聚腺苷化位點元件能夠提高信使水平并能最小化從該盒到其它序列的通讀。期望用于本發(fā)明的終止子包括這里描述的任何已知終止子或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的終止子，包括但不限于，例如，基因的終止序列如牛生長激素終止子，或病毒終止子序列如SV40終止子。在一些實施方案中，例如由于序列截短，該終止信號可能缺少可轉(zhuǎn)錄或可翻譯的序列。VIII.多聚腺苷化信號在表達(dá)體系特別是真核表達(dá)體系中，典型地可以包括一個多聚腺苷化信號來實現(xiàn)適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄產(chǎn)物多聚腺苷化。并不認(rèn)為多聚腺苷化信號的種類對于本發(fā)明的成功實施至關(guān)重要，可以使用任何這類序列。優(yōu)選的實施例包括SV40多聚腺苷化信號，骨骼α肌動蛋白3’UTR或人或牛生長激素多聚腺苷化信號，比較方便且已知能夠在各種靶細(xì)胞中很好的發(fā)揮作用。多聚腺苷化可以提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的穩(wěn)定性或促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的運(yùn)輸。IX.復(fù)制起始位點為使載體在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖，可以包含一個或多個復(fù)制起始位點(通常稱為“ori”)，其為起始復(fù)制的特定核酸序列?；蛘?，如果宿主細(xì)胞是酵母，也可以使用自主復(fù)制序列(“ARS”)。X.可選擇的或可篩選的標(biāo)記在本發(fā)明一些實施例中，含有本發(fā)明核酸構(gòu)建體的細(xì)胞可以通過將一個標(biāo)記包含在病毒載體中而進(jìn)行體外或體內(nèi)鑒定。這種標(biāo)記能夠賦予細(xì)胞可鑒別的改變從而能簡易地鑒別出含有表達(dá)載體的細(xì)胞。通常，可選擇標(biāo)記能夠給出可選擇的特性物質(zhì)。陽性選擇標(biāo)記是該標(biāo)記存在時，可以將其選出的標(biāo)記，而陰性選擇標(biāo)記是該標(biāo)記存在時，不能將其選出的標(biāo)記。陽性選擇標(biāo)記的一個例子是藥物抗性標(biāo)記。通常，包含藥物選擇標(biāo)記可以幫助克隆和鑒定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，例如，能夠賦予新霉素，嘌呤霉素，潮霉素，DHFR，GPT，zeocin和組氨醇抗性的基因都可以用作選擇標(biāo)記。除能在可執(zhí)行條件下提供轉(zhuǎn)化細(xì)胞可區(qū)分表型的標(biāo)記外，還預(yù)期其它的標(biāo)記類型，包括可篩選標(biāo)記如GFP，其依據(jù)是比色分析。或者，可以使用可篩選的酶，例如單純皰疹病毒胸苷激酶(“tk”)或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(“CAT”)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知如何使用免疫標(biāo)記，也可以與FACS分析結(jié)合。所用的標(biāo)記并不關(guān)鍵，只要其能夠與編碼核酸產(chǎn)物的核酸同時表達(dá)。其它的可選擇標(biāo)記和可篩選標(biāo)記是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。XI.電穿孔在本發(fā)明的一些實施例中，核酸是通過電穿孔被導(dǎo)入細(xì)胞器，細(xì)胞，組織或有機(jī)體內(nèi)。電穿孔涉及使細(xì)胞懸浮液和DNA接受高電壓的放電。在該方法的一些改變中，可應(yīng)用某些細(xì)胞壁降解酶，例如果膠降解酶，使靶受體細(xì)胞比未處理的細(xì)胞更加容易受到電穿孔轉(zhuǎn)化的作用(美國專利5,384,253，并入本文作為參考)?；蛘撸赏ㄟ^機(jī)械損傷和本領(lǐng)域公知的其它方法而使受體細(xì)胞更易受到電穿孔轉(zhuǎn)化的作用。使用電穿孔進(jìn)行的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染已獲巨大成功。已經(jīng)用人κ免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)染了小鼠前-B淋巴細(xì)胞(Potter等，1984)，還以該方法用氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染了大鼠肝細(xì)胞(Tur-Kaspa等，1986)。下面的電穿孔現(xiàn)象被認(rèn)為在所有情況下都相同，但是引起所見效果的精確機(jī)制還未闡明。盡管不希望被理論束縛，電穿孔作用的明顯表現(xiàn)為細(xì)胞接受電脈沖后，細(xì)胞膜瞬間地變?yōu)榇蠓肿油ㄍ感缘摹４嬖谕ㄟ^細(xì)胞壁的通道，該通道在正常情況下，通過施加雙向離子移動，維持約90mV的跨膜電位。盡管不希望被理論束縛，電穿孔利用相同的結(jié)構(gòu)，通過迫使高離子流通過這些結(jié)構(gòu)而開啟或擴(kuò)大通道?，F(xiàn)有技術(shù)中，金屬電極被設(shè)置成與組織接觸，并對其施加預(yù)定的電壓，所述電壓與電極之間的距離成比例。用于電穿孔的方案依據(jù)最后得到的電場強(qiáng)度而定，根據(jù)公式E＝V/d，其中(“E”)是電場，(“V”)是施加的電壓，(“d”)是電極之間的距離。現(xiàn)有技術(shù)中，設(shè)置用于遞送藥物或大分子到個體細(xì)胞的電穿孔工具時，電場強(qiáng)度是一個很重要的值。相應(yīng)地，通過施加預(yù)定電壓的脈沖，可以計算多種方案的任何電場強(qiáng)度，所述電壓是與電極之間距離成比例。但應(yīng)注意可以使用絕緣電極(即，離子流并非必須要產(chǎn)生電場)在組織中產(chǎn)生電場。盡管不希望被理論束縛，但電流是成功電穿孔的必要條件，而不是電場本身。在電穿孔中，產(chǎn)生的熱量是內(nèi)部電極阻抗、電流的平方和脈沖時間的乘積。熱量是在組織電穿孔過程中產(chǎn)生的，并且可以作為內(nèi)部電極電流、電壓和脈沖時間的乘積而推導(dǎo)出。目前所述用于電穿孔的方案依據(jù)最后得到的電場強(qiáng)度E而定義，E值依賴于不確定電流的短電壓脈沖。相應(yīng)地，電阻或組織中產(chǎn)生的熱量是無法測定的，這就導(dǎo)致用不同的脈沖電壓電穿孔方案得到不同的成功。限制對跨越電極細(xì)胞的生熱能力可以提高任何指定電穿孔電壓脈沖方案的效率。例如，現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)了6針電極矩陣的應(yīng)用，該6針電極矩陣使用了跨越反向電極對的預(yù)定電壓脈沖。這種狀況在電穿孔過程中，在能夠形成一致且交叉的重疊點的區(qū)域，導(dǎo)致集中的模式。在電穿孔過程中，過度地加熱細(xì)胞和組織會殺死細(xì)胞，并降低該方案的效率。但是，沒有相向?qū)Φ膶ΨQ設(shè)置的針式電極可以在電穿孔過程中在不能形成一致的電穿孔重疊點的區(qū)域，產(chǎn)生分散的模式?？刂齐姌O之間的電流可以測定細(xì)胞的相對供熱。這樣，任何指定方案隨后效率的決定因素是電流，而不是跨越電極的電壓。預(yù)定的電壓不產(chǎn)生預(yù)定的電流，并且現(xiàn)有技術(shù)并沒有提供一種方法來精確地測定電流，這就限制了該技術(shù)的應(yīng)用。這樣，將兩個電極間在組織中維持的電流控制在一定限度內(nèi)就可以改變脈沖條件，減少細(xì)胞供熱，降低細(xì)胞死亡率，并相較于預(yù)定的電壓脈沖，能更有效地將大分子合并到細(xì)胞內(nèi)。本發(fā)明的一個實施方案通過精確地控制沖擊細(xì)胞膜上通道的離子流，提供了一種有效地控制遞送到內(nèi)部電極空間細(xì)胞的電流量的方法，從而克服了上述問題。施加給組織的精確電流量可以作為電流水平、脈沖強(qiáng)度和被傳遞的脈沖數(shù)目的積而計算。這樣，本發(fā)明的具體實施方案可通過多元途徑，將導(dǎo)致電穿孔的電流傳遞給一定體積的組織，而不會在任何位點導(dǎo)致過量濃度的累積電流，從而避免了由于過度加熱組織而引起的細(xì)胞死亡。盡管不希望被理論束縛，待生成的電壓脈沖的特性由組織的特性、所選組織的大小以及電極之間的距離決定。期望電壓脈沖是盡可能均質(zhì)且具有適當(dāng)振幅。過量的電場強(qiáng)度會導(dǎo)致細(xì)胞裂解，而過低的電場強(qiáng)度會導(dǎo)致電穿孔效率降低。一些電穿孔設(shè)備利用電極之間的距離來計算電穿孔地電場強(qiáng)度和預(yù)定的電壓脈沖。這種對已知電極之間距離的依賴是設(shè)計電極的限制因素。因為可設(shè)計的電流脈沖控制器決定著兩個電極之間一定體積組織的阻抗，所以電極之間的距離對于確定合適的電流脈沖而言，不是至關(guān)重要的因素。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員在不背離本發(fā)明精神和范圍情況下，可設(shè)想任何數(shù)目的適當(dāng)?shù)膶ΨQ和非對稱的針式電極矩陣。在矩陣中以及目的組織中，每個獨立電極的深度可隨可比較的結(jié)果而變化。另外，大分子的多注射位點可被加入到針式電極矩陣中。XII.限制性酶在本發(fā)明的一些實施例中，線性DNA片段通過用限制性酶消化親代DNA分子而得到。以下提供了限制性酶的實例。名稱識別位點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這里所用的術(shù)語DNA的“限制性酶切”指只在DNA特定位點起作用的酶催化的DNA分裂。這種酶稱為限制性內(nèi)切酶，每種酶特異性的位點稱為限制性位點。這里所用的各種限制性酶都是商業(yè)可獲得，并且其反應(yīng)條件，輔助因子，和其它要求按酶供應(yīng)商的描述使用。通常限制性酶是利用簡稱命名，簡稱是由大寫字母和命名該特定酶的數(shù)字構(gòu)成，其中大寫字母后接代表每種限制性酶最初獲取自的微生物的其它字母。通常，在約20μl緩沖液中使用約1μg質(zhì)?；駾NA片段與約1-2單位酶。特定限制性酶的適當(dāng)緩沖液和基質(zhì)數(shù)量由制造商指定。通常是在37C孵育1小時，但可以根據(jù)供應(yīng)商的說明而有所改變。孵育后，用苯酚和氯仿抽提去除蛋白或多肽，然后用乙醇沉淀從液體部分收集消化的核酸。用限制性酶消化后，可用細(xì)菌堿性磷酸酶水解5’末端的磷酸化，來防止DNA片段的兩個限制性酶切分裂的末端“成環(huán)”或形成閉合環(huán)而阻礙另外的DNA片段在限制性酶切位點插入。除非另有說明，質(zhì)粒消化后，不進(jìn)行5’末端脫磷酸化。脫磷酸作用所用的方法和試劑是本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法和試劑。實施例以下實施例是為說明本發(fā)明優(yōu)選實施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能理解以下這些實施例中公開的技術(shù)表示本發(fā)明者發(fā)明的技術(shù)在本發(fā)明的實踐中作用良好，所以可以認(rèn)為構(gòu)成了實踐中的優(yōu)選模式。但是在本發(fā)明前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解在不背離本發(fā)明的精神和范圍情況下，在公開的具體實施例中可以有許多改變，仍可獲得同樣或類似的結(jié)果。實施例1DNA載體的構(gòu)建和動物個體中的方法為治療貧血；提高總紅細(xì)胞量；逆轉(zhuǎn)消瘦；逆轉(zhuǎn)異常體重降低；治療免疫功能障礙；逆轉(zhuǎn)淋巴細(xì)胞生成的抑制作用；或者延長慢性病個體的預(yù)期壽命，首先應(yīng)設(shè)計幾種GHRH表達(dá)構(gòu)建體。大體上，這些質(zhì)粒載體包含與豬野生型GHRH或類似物相連的肌特異性合成啟動子SPc5-12(Li等，1999)。GHRH類似物序列是按方法部分中所述，通過定點突變獲得的。將編碼GHRH或類似物的核酸序列克隆到pSPc5-12質(zhì)粒的BamHI/HindIII位點，來產(chǎn)生pSP-GHRH。質(zhì)粒中包含的其它元件包括如方法部分中所述的生長激素3’非翻譯區(qū)域和來自pSEAP-2BasicVector的SV403’UTR。圖1顯示了構(gòu)建體所應(yīng)用的獨特核酸分子。DNA構(gòu)建體含有肌特異性合成啟動子SPc5-12(SeqID#7)的質(zhì)粒載體已在前面描述(Li等，1999)。野生型和通過對GHRHcDNA(SeqID#9)進(jìn)行定點突變(改變的位點II體外突變體系(AlteredSiteIIinvitroMutangenesisSystem)，Promega，Madison，WI)而產(chǎn)生的突變豬GHRHcDNA，被克隆到pSPc5-12的BamHI/HindIII位點，分別產(chǎn)生pSP-wtGHRH(SeqID#15)，或pSP-HV-GHRH(SeqID#11)。生長激素的3’非翻譯區(qū)域(“3’UTR”)被克隆到GHRHcDNA的下游。所獲的質(zhì)粒含有突變的GHRH編碼序列，所獲的氨基酸序列并非天然地存在于哺乳動物中。盡管不希望被理論束縛，對于治療貧血；提高個體總紅細(xì)胞量；逆轉(zhuǎn)消瘦；逆轉(zhuǎn)異常體重降低；抑制腫瘤生長；預(yù)防腎衰竭；治療免疫功能障礙；逆轉(zhuǎn)淋巴細(xì)胞生成的抑制作用；或者延長慢性病個體的預(yù)期壽命的效果通過突變激素的循環(huán)水平最終測定。編碼不同突變GHRH或其功能性生物等同物的氨基酸序列的不同質(zhì)粒如下所示質(zhì)粒編碼的氨基酸序列wt-GHRHYADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMBRQQGERNQEQGA-OH(SEQID#10)HV-GHRHHVDAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGA-OH(SEQID#1)TI-GHRHYIDAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGA-OH(SEQID#2)TV-GHRHYVDAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGA-OH(SEQID#3)15/27/28-GHRHYADAIFTNSYRKVLAQLSARKLLQDILNRQQGERNQEQGA-OH(SEQID#4)通常，編碼的GHRH或其功能性生物等同物如下式所示-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH(SeqID#6)其中X1是選自酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是D-或L-異構(gòu)體氨基酸，該氨基酸選自丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)；X3是D-或L-異構(gòu)體氨基酸，該氨基酸選自丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)；X4是D-或L-異構(gòu)體氨基酸，該氨基酸選自蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)；X5是D-或L-異構(gòu)體氨基酸，該氨基酸選自絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)。使用的另一質(zhì)粒包括pSP-SEAP構(gòu)建體(SeqID#16)，其含有SacI/HindIIISPc5-12片段，SEAP基因和來自pSEAP-2BasicVector的SV403’UTR(ClontechLaboratories，Inc.；PaloAlto，CA)。上面描述的質(zhì)粒并不含有多位點接頭，IGF-I基因，骨骼α肌動蛋白啟動子或骨骼α肌動蛋白3’UTR/NCR。而且，這些質(zhì)粒如下面所述通過肌肉注射被導(dǎo)入，然后在體內(nèi)電穿孔。至于“功能性生物等同物”，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，“功能性生物等同物”蛋白和/或多核苷酸的定義中固有的概念是在維持分子具有可接受水平的同等生物活性情況下，在分子的規(guī)定部分可進(jìn)行的改變是有(或密碼子)限的。這樣功能性生物等同物在此就定義為在所選氨基酸位可被替換的那些蛋白(和多肽)。含有GHRH功能性生物等同物的多肽就是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列，但相較于GHRH，同時具有類似或改善的生物活性的多肽。例如，GHRH的一個生物活性是促進(jìn)個體體內(nèi)分泌生長激素(“GH”)。大動物研究健康狗將4只狗的組作為對照(2雄2雌)，用pSP-HV-GHRH體系注射3組8只狗的組(4雄4雌)。在卡尺電穿孔之后，僅用載體(對照)，或用200mcg，或600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射狗。癌癥狗15只患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗用于GHRH研究。用100mcg/kg到總量不超過1000mcg的pSP-HV-GHRH注射狗。質(zhì)粒注射后最初三天內(nèi)，有四只狗死于不相關(guān)的前置疾病并發(fā)癥，或者應(yīng)所有者的要求被安樂死。我們的研究中包含的條件是在注射后至少14天的存活率(為活化質(zhì)粒以及使GHRH從骨骼肌中表達(dá))，可以進(jìn)行第二次抽血。該項研究分析了11只狗。動物是使用化學(xué)療法，或輻射療法或組合療法特定治療的(參見圖1)。在治療前和注射后9-27及28-56天對動物稱重，抽血。每一時間點都用相同的獨立實驗室(AntechDiagnostics，Irvine，CA)來評估完全CBC和代謝情況。每一次訪問都由所有者填寫健康表格。19只患有自發(fā)性惡性腫瘤的未注射狗在診所中以相同的時間窗口(window)接受治療，將其用作同時期的對照。接受治療的動物生活質(zhì)量有所提高。所有者沒有觀察到該治療帶來的反作用。3個所有者觀察到與注射前的狀況相比，接受治療的狗通常保持良好的狀態(tài)。電穿孔設(shè)備在所有實驗中都使用BTXT820發(fā)電機(jī)(BTX，GenetronicsInc.分公司，CA)遞送方形波脈沖。使用100V/cm的電壓條件，6次脈沖，60毫秒每次脈沖。使用兩針電極(BTX，GenetronicsInc.分公司，CA)傳遞體內(nèi)電脈沖。在所有的注射中，針都是完全插入到肌肉中。肌肉注射質(zhì)粒DNA到患病犬中四組健康受試犬(“狗”)，體重為8-12kg，用于研究生物分解毒理學(xué)。3組8只狗的組(4雄4雌)分別用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射。將4只狗的組作為對照(2雄2雌)。持續(xù)地監(jiān)測動物以觀察副作用。另外，使用兩組患癌癥(自發(fā)性惡性腫瘤)的狗。根據(jù)NIH指南，USDA和AnimalWelfareAct方針養(yǎng)狗，并經(jīng)BaylorCollegeofMedicineIACUC批準(zhǔn)。不含內(nèi)毒素的pSPc512-HV-GHRH質(zhì)粒(QiagenInc.，Chatsworth，CA，USA)制劑在pH7.4的PBS或水中稀釋到5mg/ml。在常規(guī)治療之前注射狗。對于化學(xué)療法的狗，在藥療前/后不少于5天時注射。用4-8mg/kgPropafol(AbbottLaboratories)將狗麻醉。麻醉后，使用3/10cc的胰島素注射器和29G1/2針(Becton-Dickinson，F(xiàn)ranklinLacks，NJ)將100g/kg到最多1mg的質(zhì)粒直接注射到狗半肌腱中。注射后2分鐘，如所述，使用BTXT820電穿孔儀和兩針電極(BTX，GenetronicsInc.分公司，CA)對注射的肌肉電穿孔，6次脈沖，100V/cm，60毫秒/脈沖。在所有的注射中，針都是完全插入到肌肉中。在動物與所有者重新在一起之前，使動物復(fù)原。盡管體內(nèi)電穿孔是將核酸構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞的優(yōu)選方法，但是仍認(rèn)為可用于本發(fā)明來轉(zhuǎn)化細(xì)胞器，細(xì)胞，組織或有機(jī)體的適當(dāng)核酸遞送方法實際上包括任何能夠?qū)⒑怂?例如DNA)導(dǎo)入細(xì)胞器，細(xì)胞，組織或有機(jī)體的方法，如本文所述或是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這些方法包括，但不限于，直接遞送DNA，例如通過離體轉(zhuǎn)染(Nabel等，1989；Wilson等，1989)，通過注射(美國專利5,994,624，5,981,274，5,945,100，5,780,448，5,736,524，5,702,932，5656,610，5,589,466和5,580,859，將每篇并入本文作為參考)，包括顯微注射(Harland和Weintraub，1985)(美國專利5,789,215，并入本文作為參考)；通過電穿孔(美國專利5,384,253，并入本文作為參考)；(Potter等，1984；Tur-Kaspa等，1986)；通過磷酸鈣沉淀(Chen和Okayama，1987；Graham和vanderEb，1973；Rippe等，1990)；通過使用DEAE-葡聚糖然后再使用聚乙二醇(Gopal，1985)；通過直接聲波加載(Fechheimer等，1987)；通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染(Hafez等，2001；Hamm等，2002；Madry等，2001；Raghavachari和Fahl，2002；Wiethoff等，2001)和受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染(Wu和Wu，1988a；Wu和Wu，1988b)；通過微彈轟擊(PCT申請WO94/09699和95/06128；美國專利5,610,042；5,322,7835,563,055，5,550,318，5,538,877和5,538,880，并且每篇都被并入本文作為參考)；通過與碳化硅纖維一起攪動((Johnson等，1992)；美國專利5,302,523和5,464,765，均并入作為參考)；通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染(美國專利5,591,616和5,563,055，將每篇并入本文作為參考)；通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染(Omirulleh等，1993)；(美國專利4,684,611和4,952,500，將每篇并入本文作為參考)；通過干燥/抑制介導(dǎo)的DNA吸收(Potrykus等，1985)，以及這些方法的任何組合。通過應(yīng)用這些技術(shù)，細(xì)胞器，組織或有機(jī)體可被穩(wěn)定地或瞬時地轉(zhuǎn)染。體重數(shù)據(jù)使用相同的校準(zhǔn)標(biāo)度在質(zhì)粒注射前和注射后第14，28和56天稱重動物。蛋白代謝，骨代謝和血液值在質(zhì)粒注射前和注射后第14，28和56天收集血液和尿樣，并進(jìn)行生化，代謝和激素分析。每一時間點都用相同的獨立實驗室(AntechDiagnostics，Irvine，CA)來評估完全CBC和代謝圖譜。質(zhì)粒IGF-I通過不同的人輻射免疫度量試驗(radioimmunometricassay)(DiagnosticsSystemLab.，Webster，TX)測定IGF-I水平。試驗的靈敏度為0.8ng/ml；試驗內(nèi)部和試驗間的變差分別為3.4％和4.5％。統(tǒng)計用STATISTICA分析插件(StatSoft，Inc.Tulsa，OK)分析數(shù)據(jù)。圖中顯示的數(shù)據(jù)是平均值±s.e.m。使用ANOVA進(jìn)行對比獲得了具體的P值。設(shè)置P＜0.05即達(dá)到統(tǒng)計顯著性水平。實施例2低電壓電穿孔用于DNA吸收及在受試動物中表達(dá)直接肌肉內(nèi)注射質(zhì)粒DNA然后再電穿孔是局部且受控遞送質(zhì)粒DNA到骨骼肌的方法。其優(yōu)點是使用較低的質(zhì)粒數(shù)量(低至0.1mg)，而不是被動運(yùn)輸形式典型使用的較高的質(zhì)粒數(shù)量。盡管不希望被理論束縛，但電穿孔引起質(zhì)粒吸收率提高的機(jī)制很可能是在有或沒有蛋白主動運(yùn)輸情況下，通過新產(chǎn)生的膜孔發(fā)生。已經(jīng)顯示肌細(xì)胞滲透性程度依賴于電場強(qiáng)度，脈沖長度，電極的形狀和類型(Bureau等，2000；Gilbert等，1997)，以及細(xì)胞大小(Somiari等，2000)。經(jīng)典的電極結(jié)構(gòu)——板式或電線電極對被設(shè)置成相距4mm——已顯示對嚙齒動物有效，但在大動物如豬或人中，皮膚阻抗增大，皮下脂肪組織加厚，并且如果電場強(qiáng)度按比例增加則關(guān)系到組織損傷，使得這些類型的電極不可用。豬或狗的肌纖維很大所以比嚙齒動物肌肉更加適用于電通透性研究。這里，我們表明用肌內(nèi)給藥器單獨注射各種劑量的GHRH或核酸序列類似物，然后再電穿孔，足以在大動物中產(chǎn)生治療性質(zhì)粒激素水平，對于治療貧血，逆轉(zhuǎn)消瘦，使個體體重增加，并延長慢性病個體的預(yù)期壽命等具有顯著生物效果。通過體內(nèi)電穿孔將pSP-HV-GHRH體系注射到左脛前肌(thelefttibialisanteriormuscle)中。將4只狗的組作為對照(2雄2雌)，用pSP-HV-GHRH體系注射3組8只狗的組(4雄4雌)。僅用載體(對照)，或用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射狗，然后電穿孔。GHRH和GH的系統(tǒng)水平有所提高的指標(biāo)是血清IGF-I濃度提高。所以，在注射后28天，收集僅用載體(對照)，或用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射的狗的血清，測定IGF-I水平。注射了600mcgpSP-HV-GHRHX的狗的IGF-I水平比對照(僅載體)治療動物高出3倍(圖2)。IGF-I水平的提高呈統(tǒng)計學(xué)差異顯著(p＜0.046)。盡管用200mcg和1000mcg質(zhì)粒注射的動物比對照IGF-I水平高，但其IGF-I水平低于用600mcg注射的動物。相應(yīng)于更高GHRH水平的有所增長的IGF-I水平與其它應(yīng)用重組的豬GH(“pGH”)在狗體內(nèi)進(jìn)行的研究相一致。例如，在pGH-治療的狗中存在劑量相關(guān)的IGF-I水平增長(約2-10倍)，這與血清GH水平的提高相關(guān)。盡管不希望被理論束縛，生長激素釋放激素(GHHR)能刺激垂體前葉產(chǎn)生并釋放生長激素(GH)，生長激素反過來可以刺激肝臟或其它靶器官產(chǎn)生IGF-I。這樣，提高的GHRH和GH系統(tǒng)水平的指標(biāo)是血清IGF-I濃度的提高。注射后28天，在用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射的健康狗體內(nèi)血清IGF-I水平都高于注射前的值。注射了600mcgpSP-HV-GHRHX的狗的IGF-I水平具有最高的統(tǒng)計學(xué)顯著增長(如高于90％，p＜0.046)，這說明600mcg可能是健康狗的最優(yōu)濃度。實施例3提高癌癥動物個體的存活11只接受注射的癌癥狗在注射后至少存活了56天，在所有的病例中收集全部數(shù)據(jù)。研究中登記的狗都處于其疾病相對嚴(yán)重的階段(從治療開始206天)。注射后的平均存活如圖18所示。當(dāng)準(zhǔn)備本申請時，這11只狗中的8只仍存活著(注射后平均存活150.6天)。19只對照狗處于疾病的較不嚴(yán)重的階段，在起始診斷后平均存活56天。相反，登記到本研究后，登記后平均存活162.5天。有5只對照動物在此期間死亡。接受治療者的生活質(zhì)量有所提高。所有者沒有觀察到該治療帶來的反作用。3個所有者觀察到與注射前的狀況相比，接受治療的狗一般健康狀態(tài)的很大提高。實施例4提高健康動物個體的體重為說明提高的GHRH或其生物等同物水平能夠改變大型健康動物體內(nèi)的代謝，測定體重。如圖4所示，與注射后56天的對照相比，接受治療的狗體重有所增長。盡管用200mcg和1000mcg質(zhì)粒注射的動物體重大于對照，但低于用600mcg注射的動物。這些結(jié)果有力地說明用pSP-HV-GHRH注射的狗體內(nèi)的代謝有所改變，這種改變是劑量依賴性的。另外，與GHRH產(chǎn)量提高相關(guān)的額外體重增加也指示GH的水平有所提高。這個觀察與其它應(yīng)用重組的豬GH(“pGH”)在狗體內(nèi)進(jìn)行的研究相一致。在這些研究之一，對狗施用重組pGH14周。與分別為0.4kg和0.8kg的對照和低劑量組相比，豬GH導(dǎo)致中高劑量組(分別為2.8kg和4.7kg)體重增加。實施例5GHRH或生物等同物療法能夠改進(jìn)健康狗體內(nèi)的蛋白利用圖15顯示用各種濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的健康狗體內(nèi)與蛋白代謝相關(guān)的各個數(shù)值的變化。在56天內(nèi)監(jiān)測指示蛋白代謝的多個值，這些值包括AST，ALT，T.膽紅素(T.bilirubin)，AlkPhos，GGT，總蛋白，清蛋白，球蛋白，A/G比率，膽固醇，BUN和肌氨酸酐。用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射8只狗的組(4雄4雌)。將4只狗的組作為對照(2雄2雌)。用200mcg和600mcg質(zhì)粒注射的動物體內(nèi)總蛋白水平有所提高。與對照相比，所有接受了注射的組尿素都稍有降低，這是蛋白利用有所改善的信號。實施例6GHRH或生物等同物療法不能影響健康動物體內(nèi)的葡萄糖代謝圖16顯示用各種濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的健康狗體內(nèi)與血液組份相關(guān)的各個數(shù)值的變化。簡寫如下WBC-白細(xì)胞；RBC-紅細(xì)胞；HGB-血紅蛋白；PCV-血細(xì)胞比容，或包裝細(xì)胞的體積；MCV-平均細(xì)胞體積；MCH-平均細(xì)胞血紅蛋白；MCHC-平均細(xì)胞血紅蛋白濃度；n％-嗜中性白細(xì)胞的％；lym％-淋巴細(xì)胞的％；momo％-單核細(xì)胞的％；eos％-嗜曙紅細(xì)胞的％；Bas％-嗜堿細(xì)胞的％；LDH-乳酸脫氫酶；Prothom-凝血酶原(prothrombine)；Qnt-定量；Plat-血小板；BUN-血液尿素氮/尿素。在56天內(nèi)監(jiān)測血液組份的多個值，包括WBC，RBC，HGB，PCV，MCB，MCH，MCHC，n％，lym％，mono％，eos％，Bas％，LDH，Prothom，Qnt.Plat。用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射8只狗的組(4雄4雌)。將4只狗的組作為對照(2雄2雌)。在實驗組和對照組之間沒有顯著差異。但是，隨著質(zhì)粒劑量的增加循環(huán)淋巴細(xì)胞有所減少，標(biāo)志在淋巴器中的淋巴細(xì)胞的多價螯合作用。重要的是，葡萄糖水平在所有的實驗組以及對照中都處于正常范圍，這說明我們的治療并不損害葡萄糖代謝。實施例7GHRH或生物等同物療法能夠影響骨重構(gòu)(boneremodeling)圖17顯示用各種濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的健康狗體內(nèi)與骨代謝相關(guān)的各個數(shù)值的變化。在注射后56天內(nèi)監(jiān)測磷、鈣和鈣/磷比率。用200mcg，600mcg或1000mcgpSP-HV-GHRH注射8只狗的組(4雄4雌)。將4只狗的組作為對照(2雄2雌)。接受了質(zhì)粒注射的狗Ca/PO4比率隨治療劑量成比例地提高，即代表著骨重構(gòu)。實施例8GHRH或生物等同物療法能夠延長慢性病個體的預(yù)期壽命圖18顯示注射了各種濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒的患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗的診斷、特定治療圖表以及存活。表明了研究項目，組，治療，劑量，狗的#，癌癥類型，和注射后存活天數(shù)。向各組患有自發(fā)性惡性腫瘤的狗注射100mcg/Kg體重到總量不超過1000mcg的pSP-HV-GHRH。另外，用pSP-HV-GHRH治療的狗生活質(zhì)量有所改善。實施例9GHRH或生物等同物療法能夠正面影響癌癥個體的免疫功能圖19顯示用各種濃度pSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的自發(fā)性癌癥狗體內(nèi)與血液組份相關(guān)的各個數(shù)值的變化。注射后監(jiān)測血液組份的多個值，包括WBC/HPF，RBC/HBF，HGB，％PCV，MCV，MCH，MCHC，n％，lym％，mono％，eos％，Bas％。對自發(fā)性癌癥狗組注射100-1000mcg/Kg體重的pSP-HV-GHRH。發(fā)現(xiàn)注射后2周，相較于未接受注射的狗而言，所有接受了pSP-HV-GHRH質(zhì)粒治療的狗中RBC血紅蛋白和血細(xì)胞比容水平都有所提高。另外，接受治療的狗中，循環(huán)白細(xì)胞水平(通常與淋巴器官中白細(xì)胞(WBC)的增長相關(guān))顯著降低，而淋巴細(xì)胞百分比卻有所提高。接受治療的動物在注射后早期時間點循環(huán)淋巴細(xì)胞顯著增加(15.11±2.81vs.12.5±2.41％，p＜0.046pst/pri)。在相應(yīng)時間點也測定對照動物淋巴細(xì)胞值(p＝0.32)。實施例10GHRH或生物等同物療法對老年健康狗顯示出良好效果圖20顯示用1000mcgpSP-HV-GHRH質(zhì)粒注射的老年健康狗體內(nèi)與血液組份相關(guān)的各個數(shù)值變化。在2周內(nèi)監(jiān)測血液組份的多個值，包括WBC，RBC，HGB，lym％，總蛋白，白蛋白，球蛋白，膽固醇，BUN，肌酸酐，磷，鈣，葡萄糖。對老年狗進(jìn)行pSP-HV-GHRH質(zhì)粒療法，在注射后2周RBC血紅蛋白和血細(xì)胞比容水平都高于注射前的值。另外，接受治療的狗的尿素水平顯著降低，總蛋白水平提高，葡萄糖水平正常。Ca/P比率的提高指示骨重構(gòu)。實施例11貧血癥的治療公知紅細(xì)胞的數(shù)目基本上由促紅細(xì)胞生成素(“EPO”)調(diào)節(jié)，但是受多種生長因子的影響。例如，垂體切除的大鼠顯示出較低的成紅細(xì)胞的、成脊髓的以及成淋巴細(xì)胞的血細(xì)胞數(shù)目，有大量的文獻(xiàn)顯示GH和IGF-I都對造血細(xì)胞系有作用(Kurtz等，1990；Kurtz等，1982；Claustres等，1987)。在真性紅細(xì)胞增多癥中，患者表現(xiàn)出成紅細(xì)胞系遠(yuǎn)祖細(xì)胞對IGF-I的靈敏度提高，IGFBP-1水平增強(qiáng)，并由此過量產(chǎn)生紅細(xì)胞(Mirza等，1997；Correa等，1994)。有證據(jù)證明是IGF-I而不是EPO在加速的生長或分解代謝過程中調(diào)節(jié)紅細(xì)胞生成，并由此控制體重和氧運(yùn)輸能力成比例增長(Kurtz等，1990)。IGF-I是調(diào)節(jié)尿毒癥個體體內(nèi)紅細(xì)胞生成的重要因子(Urena等，1992)。而且，已知重組人GH治療垂體功能減退的貧血個體的療效。用人GH治療后，血漿EPO水平加倍，伴隨Hb濃度增長到正常水平。當(dāng)人GH給藥被中斷時，血漿FPO和Hb濃度都有所降低。在接受注射的狗中，早在質(zhì)粒注射后2星期，就獲得了貧血的快速校正。9-27天紅細(xì)胞(RBC)增長了8.9％，與注射前(“pri”)的值相比正常的值一直維持到注射后(“pti”)56天(6.27±0.33，對5.75±0.39，p＜0.027)，而對照組在相同時期內(nèi)RBC水平降低了6％(6.00±0.2對5.5±0.2)(p＜0.006，與注射后對照相比)(圖5)。紅細(xì)胞水平(圖6)提高了6.8％(14.68±0.78對13.74±0.97g/lpti/pri)，而對照組在相同時期內(nèi)降低了5.7％(12.9±0.4對13.7±0.4g/l)，與注射后對照相比p＜0.01。紅細(xì)胞比容水平(圖7)顯著提高了8.26％(42.22±2.16對39±2.62，p＜0.032pst/pri)。在相同時期，對照值降低了7.6％(36.9±1.4對39.9±1.6，與pst相比p＜0.012)。在對癌癥狗的臨床前研究中，早在質(zhì)粒注射后2星期，就獲得了貧血的快速校正。在研究初期，個體處于分解代謝狀態(tài)，其血紅蛋白(Hb)，紅細(xì)胞比容(“PVC”)和紅細(xì)胞(“RBC”)值都顯著低于正常的狗。質(zhì)粒注射后，狗進(jìn)入了快速逆轉(zhuǎn)階段，轉(zhuǎn)變?yōu)樯铣纱x，模仿快速生長過程，如同前面所述的對幼齡大鼠在生長階段進(jìn)行的研究(“生長激素軸和免疫功能”)。Hb，PVC和RBC值增長了10-25％，數(shù)值差異統(tǒng)計上顯著，并在治療開始后兩周轉(zhuǎn)為正常。整個實驗所有的值都在正常界限內(nèi)。盡管不希望被理論束縛，我們的理論是GHRH-GH-IGF-I軸在分解代謝狀態(tài)下的刺激作用很可能是通過刺激促紅細(xì)胞生成素而促進(jìn)了紅細(xì)胞的生成。當(dāng)個體逆轉(zhuǎn)到正常的合成代謝狀態(tài)，天然GH的作用是誘導(dǎo)輕微程度的貧血。但是，這些個體患有癌癥，而該疾病的天然過程是朝向分解代謝的。通過這些對立的機(jī)制來維持個體的平衡，這樣，Hb，PVC和RBC值就可校正到正常水平，但是不可能超越正常水平的上限，如同我們研究所展現(xiàn)的。靶基因的表達(dá)還可通過結(jié)合分子開關(guān)技術(shù)進(jìn)行調(diào)節(jié)，該技術(shù)如圖9所示。用于配體-依賴性轉(zhuǎn)基因表達(dá)誘導(dǎo)的商業(yè)可獲得體系具有已注冊的GeneSwitch商標(biāo)名稱。GeneSwitch技術(shù)是基于合成的但不能結(jié)合其天然激動劑(如黃體酮)的C末端截短的黃體酮受體。該截短的黃體酮受體只能被抗黃體酮物質(zhì)活化，例如米非司酮(“MFP”)(Vegeto等，1992；Xu等，1996)。類似的體系用于GeneSwitch體系的嵌合調(diào)節(jié)蛋白，其由截短的人黃體酮受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和來自人NF-kBp65亞基的轉(zhuǎn)錄活化域(Abruzzese等，1999)構(gòu)成，其中黃體酮受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域已經(jīng)融合了酵母GAL4蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(其結(jié)合特定的17bp識別序列)。GeneSwitch調(diào)節(jié)蛋白的基因被插入到生肌表達(dá)載體，命名為pGS1633，其在肌特異性骨骼α-肌動蛋白(“SK”)啟動子的控制下組成型表達(dá)。GHRH質(zhì)粒，命名為p6xGal4/TATA-GHRH，或pGHRH1633，含有誘導(dǎo)型啟動子，該啟動子由融合了最小TATA盒啟動子的17-merGal4結(jié)合位點的6個拷貝構(gòu)成。GHRH編碼序列是超級豬突變GHRHcDNA的228-bp片段，稱為HV-GHRH(Draghia-Akli等，1999)。相較于半衰期只有6-12分鐘的天然GHRH，該HV-GHRH分子顯示出高度血漿穩(wěn)定性，其半衰期為6小時。該肌特異性GeneSwitch和誘導(dǎo)型GHRH質(zhì)粒都具有含合成的內(nèi)含子的5’非翻譯區(qū)域以及來自人GH基因的3’非翻譯區(qū)域/聚(A)位點。實施例12對正常動物個體施用外源GH的藥理學(xué)和毒理學(xué)作用由于豬GH(pGH)與犬GH結(jié)構(gòu)一致，所以使用pGH對狗進(jìn)行各種研究。在其中一項研究中，對狗施用pGH14周。與分別為0.4kg和0.8kg的對照和低劑量組相比，豬GH導(dǎo)致中和高劑量組(分別為2.8kg和4.7kg)體重增加。在pGH治療的狗中，皮膚厚度的增加在組織學(xué)上與皮膚膠原的增多密切相關(guān)。沒有肥大或水腫的組織形態(tài)學(xué)跡象。在pGH-治療的狗中存在劑量相關(guān)的IGF-I水平增長(約2-10倍)，這與血清GH水平的提高相關(guān)。另外，在整個研究中可觀察到中劑量組的血清胰島素水平提高。在高劑量組的狗中，胰島素水平在注射后24小時持續(xù)上升。禁食狗的血清葡萄糖水平維持在對照范圍內(nèi)，沒有血紅蛋白水平基礎(chǔ)上的慢性高血糖癥。腎小球的改變，明顯的多尿癥且伴隨尿比重降低，以及血清胰島素水平升高都說明狗已患有早期胰島素抗性糖尿病。pGH對狗體內(nèi)的血清T3，T4和氫化可的松水平有很小或沒有生物顯著效果。pGH治療的狗體內(nèi)其它血清生化改變包括尿素氮和肌氨酸酐降低，和鉀、膽固醇和甘油三酯提高。血清鈣和磷水平以及堿性磷酸酶活性(骨同功酶)的顯著提高與骨的組織學(xué)變化相關(guān)。在pGH治療的狗中，存在劑量相關(guān)的血色正常性的，正常紅細(xì)胞性的，非再生性的貧血。以上所述的變化都與高劑量GH的分解代謝作用相關(guān)，貧血除外(Prahalada等，1998)實施例13質(zhì)粒介導(dǎo)的GHRH運(yùn)輸減緩腫瘤生長，預(yù)防腎衰竭以及提高癌癥動物的存活力用腫瘤細(xì)胞系注射免疫活性的C57/B16小鼠或無免疫應(yīng)答的裸鼠(C57/B16移植Lewis肺大鼠腺癌細(xì)胞系，而裸鼠移植人肺小細(xì)胞腺癌細(xì)胞系)。腫瘤移植后1天，用組成型活性GHRH構(gòu)建體或誘導(dǎo)型GHRH構(gòu)建體治療小鼠，或用β半乳糖苷酶表達(dá)構(gòu)建體治療(作為陰性對照)。在GHRH治療的動物中腫瘤的產(chǎn)生更緩慢(圖10和圖14)，發(fā)展也較慢。由此，GHRH治療的動物比對照存活更長(圖11)，產(chǎn)生腎衰竭的可能更小(圖12)。產(chǎn)生轉(zhuǎn)移的可能也較小(圖13)。這里描述的本發(fā)明涉及幾種不同的GHRH或其生物等同物核酸序列的應(yīng)用?；谀壳皩Φ鞍?蛋白相互作用的理解，精確地推測含有一個點突變的GHRH序列在體內(nèi)的參數(shù)(如半衰期，療效，翻譯后修飾等)即非顯而易見也不可能，其中所述點突變是指多肽鏈中單一氨基酸有所改變。但是，在現(xiàn)有技術(shù)和本說明書的教導(dǎo)基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知道在特定組織中如何進(jìn)行質(zhì)粒介導(dǎo)補(bǔ)充實驗，鑒定變異和任何獨特核酸序列的排列以準(zhǔn)確評價對正?；蚵约膊€體的體內(nèi)效果。所以，應(yīng)用編碼GHRH或其功能性生物等同物或相應(yīng)重組蛋白的不同核酸序列作為質(zhì)粒介導(dǎo)的方法來治療貧血；提高總紅細(xì)胞量；逆轉(zhuǎn)消瘦；逆轉(zhuǎn)異常體重降低；治療免疫功能障礙；逆轉(zhuǎn)淋巴細(xì)胞生成的抑制作用；和/或延長慢性病個體的平均壽命，是不能基于推測而預(yù)知的。盡管不希望被理論束縛，但相信提高GHRH可以提高GH水平，這個提高的GH水平足以治療貧血；提高總紅細(xì)胞量；逆轉(zhuǎn)消瘦；逆轉(zhuǎn)異常體重降低；或延長慢性病個體的預(yù)期壽命。激素(如GHRH和GH)通常含有復(fù)雜的反饋調(diào)節(jié)途徑。在沒有將GHRH或生物等同物應(yīng)用于質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充的直接實驗或本發(fā)明所提供的教導(dǎo)情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員不能預(yù)測決定何種濃度的非天然編碼序列會產(chǎn)生目的效果。編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸序列的理想調(diào)節(jié)由于多核苷酸運(yùn)輸所用的組織而進(jìn)一步復(fù)雜化，如果沒有用不同序列在特定組織中進(jìn)行確實的實驗，那么對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言則不是顯而易見的。這里所述的本發(fā)明含有說明書和必要的實驗結(jié)果，這些實驗研究了編碼GHRH或其生物等同物的不同核酸序列的組織特異性和誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)，這在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上并非顯而易見。本發(fā)明大大地向前發(fā)展了大動物包括人的非病毒治療方法。為使基因治療從嚙齒動物轉(zhuǎn)向大哺乳動物，并最終用于人類，令人震驚的是極低數(shù)量的質(zhì)粒就可生效。這里顯示在合適電穿孔條件下，遞送低至0.2mg的質(zhì)粒就可在個體中產(chǎn)生重要的生物效果逆轉(zhuǎn)消瘦；提高體重，延長患病狗的壽命。該質(zhì)粒數(shù)量比理論值低100倍，并且不能從嚙齒動物中使用的相關(guān)劑量(平均1mg/kg)預(yù)測。對貧血癥，消瘦或免疫功能障礙的治療；總紅細(xì)胞量的提高；異常體重降低的逆轉(zhuǎn)；淋巴細(xì)胞生成抑制作用的逆轉(zhuǎn)；和/或慢性病個體預(yù)期壽命的延長都是個體體內(nèi)循環(huán)中存在的GHRH分子帶來的效果，不論遞送方式如何。例如，可以通過經(jīng)典重組蛋白治療或核酸轉(zhuǎn)移來遞送合適量的GHRH或其類似物，而獲得相同的效果。因此，成功的質(zhì)粒介導(dǎo)補(bǔ)充需要精確地將編碼序列遞送到個體細(xì)胞，使基因產(chǎn)物表達(dá)達(dá)到適于產(chǎn)生生物效果的水平。治療的過程可延長到貫穿疾病癥狀的病程，并可持續(xù)下去。由于遞送核酸序列到個體細(xì)胞的方法高度依賴于特定疾病和編碼基因，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員未經(jīng)本說明書的教導(dǎo)，不能預(yù)測何種方法和條件適用。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見地意識到本發(fā)明可進(jìn)行改變，仍然能夠?qū)崿F(xiàn)發(fā)明目的，獲得這里提及的結(jié)果和優(yōu)點。這里所述的方法，過程，技術(shù)和試劑盒是優(yōu)選實施方式的體現(xiàn)，僅為示范性的，而不是限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員可在不背離本發(fā)明的精神或不超出本發(fā)明限定的范圍情況下，對其進(jìn)行一些改變和其它應(yīng)用。參考文獻(xiàn)下述參考文獻(xiàn)提供了實驗細(xì)節(jié)或其它補(bǔ)充細(xì)節(jié)，特此引用。美國專利文獻(xiàn)U.S.PatentNo.5,847,066issuedonDecember8，1998withCoyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,846,936issuedonDecember8，1998withFelixetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,792,747issuedonAugust11，1998withSchallyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,776,901issuedonJuly7，1998withBowersetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,756,264issuedonMay26，1998withSchwartzetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,696,089issuedonDecember9，1997withFelixetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,486,505issuedonJanuary23，1996withBowersetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,292,721issuedonMarch8，1994withBoydetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,137,872issuedonAugust11，1992withSeelyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,134.120issuedonJuly28，1992withBoydetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,084,442issuedonJanuary28，1992withFelixetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,061,690issuedonOctober29，1991withKannetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,036,045issuedonJuly30，1991withThornerlistedastheinventor.U.S.PatentNo.5,023,322issuedonJune11，1991withKovacsetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,839,344issuedonJune13，1989withBowersetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,410,512issuedonOctober18，1983withBowersetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.RE33,699issuedonSeptember24，1991withDrenglerlistedastheinventor.U.S.PatentNo.4,833,166issuedonMay23，1989withGrosvenoretal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,228,158issuedonOctober14，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,228,156issuedonOctober14，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,226,857issuedonOctober7，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,224,316issuedonSeptember23，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,223,021issuedonSeptember16，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,223,020issuedonSeptember16，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,223,019issuedonSeptember16，1980withMomanyetal.listedasinventors.U.S.PatentNo.4,956,288issuedonSeptember11，1990withBarsoumlistedasinventor.U.S.PatentNo.5,704,908issuedonJanuary6，1998withHofmann，etal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,702,384issuedonDecember30，1997withUmeyama，etal.listedasinventors.U.S.PatentNo.5,439,440issuedonAugust8，1995withHofmannlistedasinventor.U.S.PatentNo.5,874,534issuedonFebruary23，1999withVegeto，etalasinventors.U.S.PatentNo.5,935,934issuedonAugust10，1999withVegeto，etalasinventors.U.S.PatentNo.5,789,215issuedonAugust4，1998withBerns，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,384,253issuedonJanuary24，1995withKrzyzek，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,994,624issuedonNovember30，1999withTrolinder，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,981,274issuedonNovember9，1999withTyrrell，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,945,100issuedonAugust31，1999withFickasinventor.U.S.PatentNo.5,780,448issuedonJuly14，1998withDavisasinventor.U.S.PatentNo.5,736,524issuedonApril7，1998withContent，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,702,932issuedonDecember30，1997withHoy，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,656,610issuedonAugust12，1997withShuler，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,589,466issuedonDecember31，1996withFelgner，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,580,859issuedonDecember3，1996withFelgner，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,610,042issuedonMarch11，1997withChang，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,322,783issuedonJune21，1994withTomes，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,563,055issuedonOctober8，1996withTownsend，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,550,318issuedonAugust27，1996withAdams，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,538,877issuedonJuly23，1996withLundquist，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,538,880issuedonJuly23，1996withLundquist，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,302,523issuedonApril12，1994withCoffee，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,464,765issuedonNovember7，1995withCoffee，etal.asinventors.U.S.PatentNo.5,591,616issuedonJanuary7，1997withHiei，etal.asinventors.U.S.PatentNo.4,684,611issuedonAugust4，1987withSchilperoort，etal.asinventors.U.S.PatentNo.4,952,500issuedonAugust28，1990withFinnerty，etal.asinventors.PCTPatentNo.WO94/09699publishedonMay11，1994withBrown，etal.listedasinventors.PCTPatentWO95/06128publishedonAugust24，1995withDams，etal.listedasinventors.REFERENCELISTAbruzzese，R.V.，Godin，D.，Burcin，M.，Mehta，V.，F(xiàn)rench，M.，Li，Y.，O′Malley，B.W.，andNordstrom，J.L.(1999).Ligand-dependentregulationofplasmid-basedtransgeneexpressioninvivo.Hum.GeneTher.10，1499-1507.Aihara，H.andMiyazaki，J.(1998).Genetransferintomusclebyelectroporationinvivo.Nat.Biotechnol.16，867-870.AlSuwaidi，J.，Reddan，D.N.，Williams，K.，Pieper，K.S.，Harrington，R.A.，Califf，R.M.，Granger，C.B.，Ohman，E.M.，andHolmes，D.R.，Jr.(2002).Prognosticimplicationsofabnormalitiesinrenalfunctioninpatientswithacutecoronarysyndromes.Circulation106，974-980.Almendro，N.，Bellon，T.，Rius，C.，Lastres，P.，Langa，C.，Corbi，A.，andBernabeu，C.(1996).Cloningofthehumanplateletendothelialcelladhesionmolecule-1promoteranditstissue-specificexpression.Structuralandfunctionalcharacterization.J.Immunol.157，5411-5421.Aratani，Y.，Okazaki，R.，andKoyama，H.(1992).Endextensionrepairofintroducedtargetingvectorsmediatedbyhomologousrecombinationinmammaliancells.NucleicAcidsRes.20，4795-4801.Argente，J.，Pozo，J.，andChowen，J.A.(1996).Thegrowthhormoneaxiscontrolandeffects.HormoneResearch45Suppl1，9-11.Barber，M.D.，Ross，J.A.，andFearon，K.C.(1999).Cancercachexia.Surg.Oncol.8，133-141.Bartlett，D.L.，Charland，S.，andTorosian，M.H.(1994).Growthhormone，insulin，andsomatostatintherapyofcancercachexia.Cancer73，1499-1504.Bercu，B.B.，Walker，R.F.，Diagnostic，t.，hormone，G.G.，Growth，h.，peptide，andGrowth，h.s.(1997).GROWTHHORMONESECRETAGOGUESINCHILDRENWITHALTEREDGROWTH.ActaPaediatrica86，102-106.Bettan，M.，Emmanuel，F(xiàn).，Darteil，R.，Caillaud，J.M.，Soubrier，F(xiàn).，Delaere，P.，Branelec，D.，Mahfoudi，A.，Duverger，N.，andScherman，D.(2000).High-levelproteinsecretionintobloodcirculationafterelectricpulse-medatedgenetransferintoskeletalmuscle.Mol.Ther.2，204-210.Blethen，S.L.(1995).Complicationsofgrowthhormonetherapyinchildrern.Curr.Opin.Pediatr.7，466-471.Blethen，S.L.andMacGillivray，M.H.(1997).Arisk-benefitassessmentofgrowthhormoneuseinchildren.DrugSaf17，303-316.Blethen，S.L.andRundle，A.C.(1996).Slippedcapitalfemoralepiphysisinchildrentreatedwithgrowthhormone.AsummaryoftheNationalCooperativeGrowthStudyexperience.Horm.Res.46，113-116.Bohlen，P.，Esch，F(xiàn).，Brazeau，P.，Ling，N.，andGuillemin，R.(1983).Isolationandcharacterizationoftheporcinehypothalamicgrowthhormonereleasingfactor.Biochem.Biophys.Res.Commun.116，726-734.Boshart，M.，Weber，F(xiàn).，Jahn，G.，Dorsch-Hasler，K.，F(xiàn)leckenstein，B.，andSchaffner，W.(1985).Averystrongenhancerislocatedupstreamofanimmediateearlygeneofhumancytomegalovirus.Cell41，521-530.Bureau，M.F.，Gehl，J.，Deleuze，V.，Mir，L.M.，andScherma.n，D.(2000).ImportanceofassociationbetweenpermeabilizationandelectrophoreticforcesforintramuscularDNAelectrotransfer.Biochim.Biophys.Acta1474，353-359.Carbonelli，D.L.，Corley，E.，Seigelchifer，M.，andZorzopulos，J.(1999).AplasmidvectorforisolationofstrongpromotersinEscherichiacoli.FEMSMicrobiol.Lett.177，75-82.Chandler，S.D.，Mayeda，A.，Yeakley，J.M.，Krainer，A.R.，andFu，X.D.(1997).RNAsplicingspecificitydeterminedbythecoordinatedactionofRNArecognitionmotifsinSRproteins.Poroc.Natl.Acad.Sci.U.S.A94，3596-3601.Chen，C.andOkayama，H.(1987).High-efficiencytransformationofmammaliancellsbyplasmidDNA.Mol.CellBiol.7，2745-2752.Chevalier，R.L.，Goyal，S.，Kim，A.，Chang，A.Y.，Landau，D.，andLeRoith，D.(2000).RenaltubulointerstitialinjuryfromureteralobstructionintheneonatalratisattenuatedbyIGF-1.KidneyInt.57，882-890.Claustres，M.，Chatelain，P.，andSultan，C.(1987).Insulin-likegrowthfactorIstimulateshumanerythroidcolonyformationinvitro.JClin.Endocrinol.Metab65，78-82.Cocea，L.(1997).Duplicationofaregioninthemultiplecloningsiteofaplasmidvectortoenhancecloning-mediatedadditionofrestrictionsitestoaDNAfragment.Biotechniques23，814-816.Corpas，E.，Harman，S.M.，Pineyro，M.A.，Roberson，R.，andBlackman，M.R.(1993).Continuoussubcutaneousinfusionsofgrowthhormone(GH)releasinghormone1-44for14daysincreaseGHandinsulin-likegrowthfactor-Ilevelsinoldmen.JournalofClinicalEndocrinology&Metabolism76，134-138.Correa，P.N.，Eskinazi，D.，andAxelrad，A.A.(1994).Circulatingerythroidprogenitorsinpolycythemiaveraarehypersensitivetoinsulin-likegrowthfactor-1invitrostudiesinanimprovedserum-freemedium.Blood83，99-112.Cremagnani，L.，Cantalamessa，L.，Orsatti，A.，Vigna，L.，Vallino，F(xiàn).，andBuccianti，G.(1993).Recombinanthumanerythropoietin(rhEPO)treatmentpotentiatesgrowthhormone(GH)responsetogrowthhormonereleasinghormone(GHRH)stimulationinhemodialysispatients.Clin.Nephrol.39，282-286.Crook，E.D.，Washington，D.O.，andFlack，J.M.(2002).Screeningandpreventionofchronickidneydisease.J.Natl.Med.Assoc.94，55S-62S.Dai，B.，Wu，H.，Holthuizen，E.，andSingh，P.(2001).Identificationofanovelciselementrequiredforcelldensity-dependentdown-regulationofinsulin-likegrowthfactor-2P3promoteractivityinCaco2cells.J.Biol.Chen.276，6937-6944.Danko，I.andWolff，J.A.(1994).Directgenetranferintomuscle.[Review].Vaccine12，1499-1502.Darquet，A.M.，Cameron，B.，Wils，P.，Scherman，D.，andCrouzet，J.(1997).AnewDNAvehiclefornonviralgenedeliverysupercoiledminicircle.GeneTher.4.1341-1349.Darquet，A.M.，Rangara，R.，Kreiss，P.，Schwartz，B.，Naimi，S.，Delaere，P.，Crouzet，J.，andScherman，D.(1999).MinicircleanimprovedDNAmoleculeforinvitroandinvivogenetransfer.GeneTher.6.209-218.Davis，H.L.，Whalen，R.G.，andDemeneix，B.A.(1993).DirectgenetransferintoskeletalHumanGeneTherapy4，151-159.Davis，M.P.andDickerson，D.(2000).Cachexiaandanorexiacancer′scovertkiller.Support.CareCancer8，180-187.Demetri，G.D.(2001).Anaemiaanditsfunctionalconsequencesincancerpatientscurrentchallengesinmanagementandprospectsforimprovingtherapy.Br.J.Cancer84Suppl131-7.，31-37.Diez，J.，Iglesias，P.，Sastre，J.，Mendez，J.，Selgas，R.，andGomez-Pan，A.(1996).Growthhormoneresponsestogrowthhormone-releasinghormoneandclonidinebeforeandaftererythropoietintherapyinCAPDpatients.Nephron74，548-554.Dolnik，V.，Novotny，M.，andChmelik，J.(1993).Electromigrationbehaviorofpoly-(L-glutamate)conformersinconcentratedpolyacrylamidegels.Biopolymers33，1299-1306.Dorsch-Hasler，K.，Keil，G.M.，Weber，F(xiàn).，Jasin，M.，Schaffner，W.，andKoszinowski，U.H.(1985).AlongandcomplexenhanceractivatestranscriptionofthegenecodingforthehighlyabundantimmediateearlymRNAinmurinecytomegalovirus.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A82，8325-8329.Draghia-Akli，R.，F(xiàn)iorotto，M.L.，Hill，L.A.，Malone，P.B.，Deaver，D.R.，andSchwartz，R.J.(1999).Myogenicexpressionofaninjectableprotease-resistantgrowthhormone-releasinghormoneaugmentslong-termgrowthinpigs.Nat.Biotechnol.17，1179-1183.Draghia-Akli，R.，Khan，A.S.，Cummings，K.K.，Parghi，D.，Carpenter，R.H.，andBrown，P.A.(2002a).ElectricalEnhancementofFormulatedPlasmidDeliveryinAnimals.TechnologyinCancerResearch&Treatment1，365371.Draghia-Akli，R.，Li，X.G.，andSchwartz，R.J.(1997).Enhancedgrowthbyectopicexpressionofgrowthhormonereleasinghormoneusinganinjectablemyogenicvector.naturebiotechnology15，1285-1289.Draghia-Akli，R.，Malone，P.B.，Hill，L.A.，Ellis，K.M.，Schwartz，R.J.，andNordstrom，J.L.(2002b).Enhancedanimalgrowthvialigand-regulatedGHRHmyogenic-injectablevectors.FASEBJ.16，426-428.Dubreuil，P.，Petitclerc，D.，Pelletier，G.，Gaudreau，P.，F(xiàn)armer，C.，Mowles，TF，andBrazeau，P.(1990).Effectofdoseandfrequencyofadministrationofapotentanalogofhumangrowthhormone-releasingfactoronhormonesecretionandgrowthinpigs.JournalofAnimalScience68，12541268.Duck，S.C.，Schwarz，H.P.，Costin，G.，Rapaport，R.，Arslanian，S.，Hayek，A.，Connors，M.，andJaramillo，J.(1992).Subcutaneousgrowthhormone-releasinghormonetherapyingrowthhormone-deficientchildrenfirstyearoftherapy.JournalofClinicalEndocrinology&Metabolism75，1115-1120.Edwards，B.K.，Howe，H.L.，Ries，L.A.，Thun，M.J.，Rosenberg，H.M.，Yancik，R.，Wingo，P.A.，Jemal，A.，andFeigal，E.G.(2002).Annualreporttothenationonthestatusofcancer，1973-1999，featuringimplicationsofageandagingonU.S.cancerburden.Cancer94，2766-2792.Esch，F(xiàn).S.，Bohlen，P.，Ling，N.C.，Brazeau，P.E.，Wehrenberg，W.B.，Thorner，M.O.，Cronin，M.J.，andGuillemin，R.(1982).Characterizationofa40residuepeptidefromahumanpancreatictumorwithgrowthhormonereleasingactivity.Biochemical&BiophysicalResearchCommunications109，152-158.Evans，W.S.，Vance，M.L.，Kaiser，D.L.，Sellers，R.P.，Borges，J.L.，Downs，T.R.，F(xiàn)rohman，L.A.，Rivier，J.，Vale，W.，andThorner，M.O.(1985).Effectsofintravenous，subcutaneous，andintranasaladministrationofgrowthhormone(GH)-releasinghormone-40onserumGHconcentrationsinnormalmen.JournalofClinicalEndocrinology&Metabolism61，846-850.Fechheimer，M.，Boylan，J.F.，Parker，S.，Sisken，J.E.，Patel，G.L.，andZimmer，S.G.(1987).Transfectionofmammaliancell.swithplasmidDNAbyscrapeloadingandsonicationloading.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A84，8463-8467.Fewell，J.G.，MacLaughlin，F(xiàn).，Mehta，V.，Gondo，M.，Nicol，F(xiàn).，Wilson，E.，andSmith，L.C.(2001).GenetherapyforthetreatmentofhemophiliaBusingPINC-formulatedplasmiddeliveredtomusclewithelectroporation.Mol.Ther.3，574-583.Frohman，L.A.，Downs，T.R.，Heimer，E.P.，andFelix，A.M.(1989).DipeptidylpeptidaseIVandtrypsin-likeenzymaticdegradationofhumangrowthhormone-releasinghormoneinplasma.J.Clin.Invest.83，1533-1540.Frohman，L.A.，Thominet，J.L.，Webb，C.B.，Vance，M.L.，Uderman，H.，Rivier，J.，Vale，W.，andThorner，M.O.(1984).Metabolicclearanceandplasmadisappearanceratesofhumanpancreatictumorgrowthhormonereleasingfactorinman.J.Clin.Invest.73，1304-1311.Fryer，A.D.andJacoby，D.B.(1993).EffectofinflammatorycellmediatorsonM2muscarinicreceptorsinthelungs.LifeSci.52，529-536.Gehl，J.，Skovsgaard，T.，andMir，L.M.(1998).Enhancementofcytotoxicitybyelectropermeabilizationanimprovedmethodforscreeningdrugs.AnticancerDrugs9，319-325.Gehl，J.，Sorensen，T.H.，Nielsen，K.，Raskmark，P.，Nielsen，S.L.，Skovsgaard，T.，andMir，L.M.(1999).Invivoelectroporationofskeletalmusclethreshold，efficacyandrelationtoelectricfielddistribution.BiochimBiophys.Acta14298，233-240.German，M.，Ashcroft，S.，Docherty，K.，Edlund，H.，Edlund，T.，Goodison，S.，Imura，H.，Kennedy，G.，Madsen，O.，Melloul，D.，and.(1995).Theinsulingenepromoter.Asimplifiednomenclature.Diabetes44，1002-1004.Gilbert，R.A.，Jaroszeski，M.J.，andHeller，R.(1997).Novelelectrodedesignsforelectrochemotherapy.Biochim.Biophys.Acta1334，9-14.Gopal，T.V.(1985).Genetransfermethodfortransientgeneexpression，stabletransformation，andcotransformationofsuspensioncellcultures.Mol.CellBiol.5，1188-1190.Graham，F(xiàn).L.andvanderEb，A.J.(1973).TransformationofratcellsbyDNAofhumanadenovirus5.Virology54，536-539.Guillemin，R.，Brazeau，P.，Bohlen，P.，Esch，F(xiàn).，Ling，N.，andWehrenberg，W.B.(1982).Growthhormone-releasingfactorfromahumanpancreatictumorthatcausedacromegaly.Science218，585-587.Hafez，I.M.，Maurer，N.，andCullis，P.R.(2001).Onthemechanismwherebycationiclipidspromoteintracellulardeliveryofpolynucleicacids.GeneTher.8，1188-1196.Hamm，A.，Krott，N.，Breibach，I.，Blindt，R.，andBosserhoff，A.K.(2002).Efficienttransfectionmethodforprimarycells.TissueEng8，235-245.Harland，R.andWeintraub，H.(1985).TranslationofmRNAinjectedintoXenopusoocytesisspecificallyinhibitedbyantisenseRNA.J.CellBiol.101，1094-1099.Heller，R.，Jaroszeski，M.J.，Glass，L.F.，Messina，J.L.，Rapaport，D.P.，DeConti，R.C.，F(xiàn)enske，N.A.，Gilbert，R.A.，Mir，L.M.，andReintgen，D.S.(1996).PhaseI/IItrialforthetreatmentofcutaneousandsubcutaneoustumorsusingelectrochemotherapy.Cancer77，964-971.Herzog，R.W.，Mount，J.D.，Arruda，V.R.，High，K.A.，andLothrop，C.D.，Jr.(2001).Muscle-directedgenetransferandtransientimmunesuppressionresultinsustainedpartialcorrectionofcaninehemophiliaBcausedbyanullmutation.Mol.Ther.4，192-200.Horlick，R.A.andBenfield，P.A.(1989).Theupstreammuscle-specificenhanceroftheratmusclecreatinekinasegeneiscomposedofmultipleelements.Mol.CellBiol.9，2396-2413.Hostetter，T.H.andLising，M.(2002).NationalKidneyDiseaseEducationProgram.J.Natl.Med.Assoc.94，72S-75S.Inouye，C.，Remondelli，P.，Karin，M.，andElledge，S.(1994).IsolationofacDNAencodingametalresponaeelementbindingproteinusinganovelexpressioncloningproceduretheonehybridsystemDNACellBiol.13，731-742.Inouye，S.，Nakazawa，A.，andNakazawa，T.(1985).DeterminationofthetranscriptioninitiationsiteandidentificationoftheproteinproductoftheregulatorygenexylRforxyloperonsontheTOLplasmid.J.Bacteriol.163，863-869.Jardieu，P.，Clark，R.，Mortensen，D.，andDorshkind，K.(1994).Invivoadministrationofinsulin-likegrowthfactor-IstimulatesprimaryBlymphopoiesisandenhanceslymphocyterecoveryafterbonemarrowtransplantation.JImmunol.152，4320-4327.Jaynes，J.B.，Johnson，J.E.，Buskin，J.N.，Gartside，C.L.，andHauschka，S.D.(1988).Themusclecreatinekinasegeneisregulatedbymultipleupstreamelements，includingamuscle-specificenhancer.Mol.CellBiol.8，62-70.Johnson，N.F.，Hoover，M.D.，Thomassen，D.G.，Cheng，Y.S.，Dalley，A.，andBrooks，A.L.(1992).Invitroactivityofsiliconcarbidewhiskersincomparisontootherindustrialfibersusingfourcellculturesystems.Am.J.Ind.Med.21，807-823.Kawamoto，T.，Makino，K.，Niwa，H.，Sugiyama，H.，Kimura，S.，Amemura，M.，Nakata，A.，andKakunaga，T.(1988).Identificationofthehumanbeta-actinenhanceranditsbindingfactor.Mol.CellBiol.8，267-272.Kawamoto，T.，Makino，K.，Orita，S.，Nakata，A.，andKakunaga，T.(1989).DNAbendingandbindingfactorsofthehumanbeta-actinpromoter.NucleicAcidsRes.17，523-537.Klamut，H.J.，Bosnoyan-Collins，L.O.，Worton，R.G.，Ray，P.N.，andDavis，H.L.(1996).Identificationofatranscriptionalenhancerwithinmuscleintron1ofthehumandystrophingene.Hum.Mol.Genet.5，1599-1606.Klamut，H.J.，Gangopadhyay，S.B.，Worton，R.G.，andRay，P.N.(1990).Molecularandfunctionalanalysisofthemuscle-specificpromoterregionoftheDuchennemusculardystrophygene.Mol.CellBiol.10，193-205.Koo，G.C.，Huang，C.，Camacho，R.，Trainor，C.，Blake，J.T.，Sirotina-Meisher，A.，Schleim，K.D.，Wu，T.J.，Cheng，K.，Nargund，R.，andMcKissick，G.(2001).Immuneenhancingeffectofagrowthhormonesecretagogue.JImmunol.166，4195-4201.Kraus，J.，Woltje，M.，Schonwetter，N.，andHollt，V.(1998).Alternativepromoterusageandtissuespecificexpressionofthemousesomatostatinreceptor2gene.FEBSLett.428，165-170.Kurtz，A.，Jelkmann，W.，andBauer，C.(1982).Anewcandidatefortheregulationoferythropoiesis.Insulin-likegrowthfactorI.FEBSLett.149，105-108.Kurtz，A.，Matter，R.，Eckardt，K.U.，andZapf，J.(1990).Erythropoiesis，serumerythropoietin，andserumIGF-Iinratsduringacceleratedgrowth.ActaEndocrinol.(Copenh)122，323-328.Lareyre，J.J.，Thomas，T.Z.，Zheng，W.L.，Kasper，S.，Ong，D.E.，Orgebin-Crist，M.C.，andMatusik，R.J.(1999).A5-kilobasepairpromoterfragmentofthemurineepididymalretinoicacid-bindingproteingenedrivesthetissue-specific，cell-specific，andandrogen-regulatedexpressionofaforeigngeneintheepididymisoftransgenicmice.J.Biol.Chem.274，8282-8290.Larsen，P.R.，Harney，J.W.，andMoore，D.D.(1986).Sequencesrequiredforcell-typespecificthyroidhormoneregulationofratgrowthhormonepromoteractivity.J.Biol.Chem.261，14373-14376.LeBrun，C.J.，Diehl，L.F.，Abbott，K.C.，Welch，P.G.，andYuan，C.M.(2000).Lifeexpectancybenefitsofcancerscreeningintheend-stagerenaldiseasepopulation.Am.J.KidneyDis.35，237-243.Lee，S.H.，Wang，W.，Yajima，S.，Jose，P.A.，andMouradian，M.M.(1997).Tissue-specificpromoterusageintheD1Adopaminereceptorgeneinbrainandkidney.DNACellBiol.16，1267-1275.Lesbordes，J.C.，Bordet，T.，Haase，G.，Castelnau-Ptakhine，L.，Rouhani，S.，Gilgenkrantz，H.，andKahn，A.(2002).Invivoelectrotransferofthecardiotrophin-1geneintoskeletalmuscleslowsdownprogressionofmotorneurondegenerationinpmnmice.Hum.Mol.Genet.11，1615-1625.Levenson，V.V.，Transue，E.D.，andRoninson，I.B.(1998).Internalribosomalentrysite-containingretroviralvectorswithgreenfluorescentproteinanddrugresistancemarkers.Hum.GeneTher.9，1233-1236.Li，C.，Ke，S.，Wu，Q.P.，Tansey，W.，Hunter，N.，Buchmiller，L.M.，Milas，L.，Charnsangavej，C.，andWallace，S.(2000).Tumorirradiationenhancesthetumor-specificdistributionofpoly(L-glutamicacid)-conjugatedpaclitaxelanditsantitumorefficacy.Clin.CancerRes.6.2829-2834.Li，X.，Eastman，E.M.，Schwartz，R.J.，andDraghia-Akli，R.(1999).Syntheticmusclepromotersactivitiesexceedingnaturallyoccurringregulatorysequences.naturebiotechnology17，241-245.Lin，H.，Yutzey，K.E.，andKonieczny，S.F.(1991).Muscle-specificexpressionofthetroponinIgenerequiresinteractionsbetweenhelix-loop-helixmuscleregulatoryfactorsandubiquitoustranscriptionfactors.Mol.CellBiol.11，267-280.Liu，Y.，Li，H.，Tanaka，K.，Tsumaki，N.，andYamada，Y.(2000).Identificationofanenhancersequencewithinthefirstintronrequiredforcartilage-specifictranscriptionofthealpha2(XI)collagengene.J.Biol.Chem.275，12712-12718.Lucas，M.L.，Heller，L.，Coppola，D.，andHeller，R.(2002).IL-12plasmiddeliverybyinvivoelectroporationforthesuccessfultreatmentofestablishedsubcutaneousB16.F10melanoma.Mol.Ther.5，668-675.Lucas，M.L.，Jaroszeski，M.J.，Gilbert，R.，andHeller，R.(2001).Invivoelectroporationusinganexponentiallyenhancedpulseanewwaveform.DNACellBiol.20，183-188.Macejak，D.G.andSarnow，P.(1991).Internalinitiationoftranslationmediatedbythe5′leaderofacellularmRNA.Nature353，90-94.Madry，H.，Reszka，R.，Bohlender，J.，andWagner，J.(2001).Efficacyofcationicliposome-mediatedgenetransfertomesangialcellsinvitroandinvivo.J.Mol.Med.79，184-189.Makis，A.C.，Chaliasos，N.，Hatzimichael，E.C.，andBourantas，K.L.(2001).Recombinanthumanerythropoietintherapyinatransfusion-dependentbeta-thalassemiamajorpatient.Ann.Hematol.80，492-495.Matsubara，H.，Gunji，Y.，Maeda，T.，Tasaki，K.Koide，Y.，Asano，T.，Ochiai，T.，Sakiyama，S.，andTagawa，M.(2001).Electroporation-mediatedtransferofcytokinegenesintohumanesophagealtumorsproducesanti-tumoreffectsinmice.AnticancerRes.21，2501-2503.Matsuo，A.，Tooyama，I.，Isobe，S.，Oomura，Y.，Akiguchi，I.，Hanai，K.，Kimura，J.，andKimura，H.(1994).Immunohistochemicallocalizationintheratbrainofanepitopecorrespondingtothefibroblastgrowthfactorreceptor-1.Neuroscience60，49-66.McNally，M.A.，Lebkowski，J.S.，Okarma，T.B.，andLerch，L.B.(1988).Optimizingelectroporationparametersforavarietyofhumanhematopoieticcelllines.Biotechniques6，882-886.Miklavcic，D.，Beravs，K.，Semrov，D.，Cemazar，M.，Demsar，F(xiàn).，andSersa，G.(1998).Theimportanceofelectricfielddistributionforeffectiveinvivoelectroporationoftissues.Biphys.J74，2152-2158.Miklavcic，D.，Semrov，D.，Mekid，H.，andMir，L.M.(2000).AvalidatedmodelofinvivoelectricfielddistributionintissuesforelectrochemotherapyandforDNAelectrotransferforgenetherapy.Biochim.Biophys.Acta1523，73-83.Mirza，A.M.，Ezzat，S.，andAxelrad，A.A.(1997).Insulin-likegrowthfactorbindingprotein-1iselevatedinpatientswithpolycythemiaveraandstimulateserythroidburstformationinvitro.Blood89，1862-1869.Morley，J.E.(2001).Anorexia，bodycomposition，andageing.Curr.Opin.Clin.Nutr.MetabCare4，9-13.Mumper，R.J.，Wang，J.，Klakamp，S.L.，Nitta，H.，Anwer，K.，Tagliaferri，F(xiàn).，andRolland，A.P.(1998).Protectiveinteractivenoncondensing(PINC)polymersforenhancedplasmiddistributionandexpressioninratskeletalmuscle.J.ControlRelease52，191-203.Muramatsu，T.，Arakawa，S.，F(xiàn)ukazawa，K.，F(xiàn)ujiwara，Y.，Yoshida，T.，Sasaki，R.，Masuda，S.，andPark，H.M.(2001).Invivogeneelectroporationinskeletalmusclewithspecialreferencetothedurationofgeneexpression.Int.JMol.Med.7，37-42.Murray，R.D.andShalet，S.M.(2000).Growthhormonecurrentandfuturetherapeuticapplications.Expert.Opin.Pharmacother.1，975-990.Nabel，E.G.，Plautz，G.，Boyce，F(xiàn).M.，Stanley，J.C.，andNabel，G.J.(1989).Recombinantgeneexpressioninvivowithinendothelialcellsofthearterialwall.Science244，1342-1344.Nairn，R.S.，Adair，G.M.，Porter，T.，Pennington，S.L.，Smith，D.G.，Wilson，J.H.，andSeidman，M.M.(1993).TargetingvectorconfigurationandmethodofgenetransferinfluencetargetedcorrectionoftheAPRTgeneinChinesehamsterovarycells.Somat.CellMol.Genet.19，363-375.Nampoory，M.R.，Johny，K.V.，Costandi，J.N.，Gupta，R.K.，Nair，M.P.，Samhan，M.，alMuzairai，I.A.，andalMousawi，M.(2002).Inferiorlong-termoutcomeofrenaltransplantationinpatientswithdiabetesmellitus.Med.Princ.Pract.11，29-34.Narum，D.L.，Kumar，S.，Rogers，W.O.，F(xiàn)uhrmann，S.R.，Liang，H.，Oakley，M.，Taye，A.，Sim，B.K.，andHoffman，S.L.(2001).CodonoptimizationofgenefragmentsencodingPlasmodiumfalciparummerzoiteproteinsenhancesDNAvaccineproteinexpressionandimmunogenicityinmice.Infect.Immun.69，7250-7253.Nelson，K.A.(2000).Thecanceranorexia-cachexiasyndrome.Semin.Oncol.27，64-68.Nelson，K.A.(2001).Modernmanagementofthecanceranorexia-cachexiasyndrome.Curr.PainHeadacheRep.5，250-256.Neumann，E.，Schaefer-Ridder，M.，Wang，Y.，andHofschneider，P.H.(1982).Genetransferintomouselyomacellsbyelectroporationinhigh.electricfields.EMBOJ.1，841-845.Nomoto，S.，Tatematsu，Y.，Takahashi，T.，andOsada，H.(1999).CloningandcharacterizationofthealternativepromoterregionsofthehumanLIMK2generesponsibleforalternativetranscriptswithtissue-specificexpression.Gene236，259-271.Ohlsson，H.，Thor，S.，andEdlund，T.(1991).Novelinsulinpromoter-andenhancer-bindingproteinsthatdiscriminatebetweenpancreaticalpha-andbeta-cells.Mol.Endocrinol.5，897-904.Omirulleh，S.，Abraham，M.，Golovkin，M.，Stefanov，I.，Karabaev，M.K.，Mustardy，L.，Morocz，S.，andDudits，D.(1993).ActivityofachimericpromoterwiththedoubledCaMV35Senhancerelementinprotoplast-derivedcellsandtransgenicplantsinmaize.PlantMol.Biol.21，415-428.Otani，Y.，Tabata，Y.，andIkada，Y.(1996).Rapidlycurablebiologicalgluecomposedofgelatinandpoly(L-glutamicacid).Biomaterials17，1387-1391.Otani，Y.，Tabata，Y.，andIkada，Y.(1998).Hemostaticcapabilityofrapidlycurablegluesfromgelatin，poly(L-glutamicacid)，andcarbodiimide.Biomaterials19，2091-2098.Papassotiriou，I.，Voskaridou，E.，Stamoulakatou，A.，andLoukopoulos，D.(2000).Increasederythropoietinlevelinducedbyhydroxyureatreatmentofsicklecellpatients.Hematol.J.1，295-300.Payen，E.，Bettan，M.，Rouyer-Fessard，P.，Beuzard，Y.，andScherman，D.(2001).Improvementofmousebeta-thalassemiabyelectrotransferoferytbropoietincDNA.Exp.Hematol.29，295-300.Pech，M.，Rao，C.D.，Robbins，K.C.，andAaronson，S.A.(1989).Functionalidentificationofregulatoryelementswithinthepromoterregionofplatelet-derivedgrowthfactor2.Mol.CellBiol.9，396-405.Pelletier，J.andSonenberg，N.(1988).InternalinitiationoftranslationofeukaryoticmRNAdirectedbyasequencederivedfrompoliovirusRNA.Nature334，320-325.Pinkert，C.A.，Ornitz，D.M.，Brinster，R.L.，andPalmiter，R.D.(1987).Analbuminenhancerlocated10kbupstreamfunctionsalongwithitspromotertodirectefficient，liver-specificexpressionintransgenicmice.GenesDev.1，268-276.Potrykus，I.，Paszkowski，J.，Saul，M.W.，Petruska，J.，andShillito，R.D.(1985).Molecularandgeneralgeneticsofahybridforeigngeneintroducedintotobaccobydirectgenetransfer.Mol.Gen.Genet.199，169-177.Porter，H.，Weir，L.，andLeder，P.(1984).Enhancer-dependentexpressionofhumankappaimmunoglobulingenesintroducedintomousepre-Blymphocytesbyelectroporation.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A81，7161-7165.Prahalada，S.，Stabinski，L.G.，Chen，H.Y.，Morrissey，R.E.，DeBurlet，G.，Holder，D.，Patrick，D.H.，Peter，C.P.，andvanZwieten，M.J.(1998).Pharmacologicalandtoxicologicaleffectsofchronicporcinegrowthhormoneadministrationindogs[seecomments].Toxicol.Pathol.26，185-200.Prentice，H.，Kloner，R.A.，Prigozy，T.，Christensen，T.，Newman，L.，Li，Y.，andKedes，L.(1994).TissuerestrictedgeneexpressionassayedbydirectDNAinjectionintocardiacandskeletalmuscle.JournalofMolecular&CellularCardiology26，1393-1401.Raghavachari，N.andFahl，W.E.(2002).Targetedgenedeliverytoskincellsinvivoacomparativestudyofliposomesandpolymersasdeliveryvehicles.J.Pharm.Sci.91，615-622.Rippe，R.A.，Brenner，D.A.，andLeffert，H.L.(1990).DNA-mediatedgenetransferintoadultrathepatocytesinprimaryculture.Mol.CellBiol.10，689-695.Robbins，K.，McCabe，S.，Scheiner，T.，Strasser，J.，Clark，R.，andJardieu，P.(1994).Immunologicaleffectsofinsulin-likegrowthfactor-I--enhancementofimmunoglobulinsynthesis.Clin.Exp.Immunol.95，337-342.Sakhuja，V.，Jha，V.，Varma，S.，Joshi，K.，Gupta，K.L.，Sud，K.，andKohli，H.S.(2000).Renalinvolvementinmultiplemyelomaa10-yearstudy.RenFail.22，465-477.Satozawa，N.，Takezawa，K.，Miwa，T.，Takahashi，S.，Hayakawa，M.，andOoka，H.(2000).Differencesintheeffectsof20K-and22K-hGHonwaterretentioninrats[InProcessCitation].GrowthHorm.IGF.Res.10，187-192.Skroch，P.，Buchman，C.，andKarin，M.(1993).Regulationofhumanandyeastmetallothioneingenetranscriptionbyheavymetalions.Prog.Clin.Biol.Res.380113-28.，113-128.Smith，L.C.andNordstrom，J.L.(2000).Advancesinplasmidgenedeliveryandexpressioninskeletalmuscle.Curr.Opin.Mol.Ther.2，150-154.SohmiyaM.andKato，Y.(2000).Effectoflong-termtreatmentwithrecombinanthumangrowthhormoneonerythropoietinsecretioninananemicpatientwithpanhypopituitarism.JEndocrinol.Invest23，31-36.Somiari，S.，Glasspool-Malone，J.，Drabick，J.J.，Gilbert，R.A.，Heller，R.，Jaroszeski，M.J.，andMalone，R.W.(2000).Theoryandinvivoapplicationofelectroporativegenedelivery.Mol.Ther.2，178-187.Song，S.，Embury，J.，Laipis，P.J.，Berns，K.I.，Crawford，J.M.，andFlotte，T.R.(2001).Stabletherapeuticserumlevelsofhumanalpha-1antitrypsin(AAT)afterportalveininjectionofrecombinantadeno-associatedvirus(rAAV)vectors.GeneTher.8，1299-1306.Soubrier，F(xiàn).，Cameron，B.，Manse，B.，Somarriba，S.，Dubertret，C.，Jaslin，G.，Jung，G.，Caer，C.L.，Dang，D.，Mouvault，J.M.，Scherman，D.，Mayaux，J.F.，andCrouzet，J.(1999).pCORanewdesignofplasmidvectorsfornonviralgenetherapy.GeneTher.6，1482-1488.Sowade，B.，Sowade，O.，Mocks，J.，F(xiàn)ranke，W.，andWarnke，H.(1998).Thesafetyoftreatmentwithrecombinanthumanerythropoietininclinicaluseareviewofcontrolledstudies.Int.J.Mol.Med.1，303-314.Terada，Y.，Tanaka，H.，Okado，T.，Inoshita，S.，Kuwahara，M.，AkibaT.，Sasaki，S.，andMarumo，F(xiàn).(2001).Efficientandligand-dependentregulatederythropoietinproductionbynakeddnainjectionandinvivoelectroporation.Am.JKidneyDis.38，S50-S53.Thorner，M.O.，F(xiàn)rohman，L.A.，Leong，D.A.，Thominet，J.，Downs，T.，Hellmann，P.，Chitwood，J.，Vaughan，J.M.，andVale，W.(1984).Extrahypothalamicgrowth-hormone-releasingfactor(GRF)secretionisararecauseofacromegalyplasmaGRFlevelsin177acromegalicpatients.JournalofClinicalEndocrinology&Metabolism59，846-849.Thorner，M.O.，Hartman，M.L.，Vance，M.L.，Pezzoli，S.S.，andAmpleford，E.J.(1995).Neuroendocrineregulationofgrowthhormonesecretion.[Review].Neuroscience&BiobehavioralReviews19，465-468.Thorner，M.O.，Vance，M.L.，Evans，W.S.，Rogol，A.D.，Rivier，J.，Vale，W.，Blizzard，andRM.(1986).CLINICALSTUDIESWITHGHRHINMAN.HormoneResearch24，91-98.Toneguzzo，F(xiàn).，Keating，A.，Glynn，S.，andMcDonald，K.(1988).Electricfield-mediatedgenetransfercharacterizationofDNAtransferandpatternsofintegrationinlymphoidcells.NucleicAcidsRes.16，5515-5532.Tripathy，S.K.，Svensson，E.C.，Black，H.B.，Goldwasser，E.，Margalith，M.，Hobart，PM，andLeiden，J.M.(1996).Long-termexpressionoferythropoietininthesystemiccirculationofmiceafterintramuscularinjectionofaplasmidDNAvector.Proc.Natl.Acad.Sci.USA93，10876-10880.Tronche，F(xiàn).，Rollier，A.，Bach，I.，Weiss，M.C.，andYaniv，M.(1989).TheratalbuminpromotercooperationwithupstreamelementsisrequiredwhenbindingofAPF/HNF1totheproximalelementispartiallyimpairedbymutationorbacterialmethylationMol.CellBiol.9，4759-4766.Tronche，F(xiàn).，Rollier，A.，Herbomel，P.，Bach，I.，Cereghini，S.，Weiss，M.，andYaniv，M.(1990).Anatomyoftheratalbuminpromoter.Mol.Biol.Med.7，173-185.Trudel，M.andCostantini，F(xiàn).(1987).A3′enhancercontributestothestage-specificexpressionofthehumanbetaglobingene.GenesDev.1，954-961.Tsumaki，N.，Kimura，T.，Tanaka，K.，Kimura，J.H.，Ochi，T.，andYamada，Y.(1998).Modulararrangementofcartilage-andneuraltissue-specificcis-elementsinthemousealpha2(XI)collagenpromoter.J.Biol.Chem.273，22861-22864.Tsunekawa，B.，Wada，M.，Ikeda，M.，Uchida，H.，Naito，N.，andHonjo，M.(1999).The20-kilodalton(kDa)humangrowthhormone(hGH)differsfromthe22-kDahGHintheeffectonthehumanprolactinreceptor.Endocrinology140，3909-3918.Tsurumi，Y.，Takeshita，S.，Chen，D.，Kearney，M.，Rossow，S.T.，Passeri，J.，Horowitz，J.R.，Symes，J.F.，andIsner，J.M.(1996).DirectintramusculargenetransferofnakedDNAencodingvascularendothelialgrowthfactoraugmentscollateraldevelopmentandtissueperfusion[seecomments].Circulation94，3281-3290.Tur-Kaspa，R.，Teicher，L.，Levine，B.J.，Skoultchi，A.I.，andShafritz，D.A.(1986).Useofelectroporationtointroducebiologicallyactiveforeigngenesintoprimaryrathepatocytes.Mol.CellBiol.6，716-718.Urena，P.，Bonnardeaux，A.，Eckardt，K.U.，Kurtz，A.，andDrueke，T.B.(1992).Insulin-likegrowthfactorIamodulatoroferythropoiesisinuraemicpatients？Nephrol.Dial.Transplant.7，40-44.Vance，M.L.(1990).Growth-hormone-releasinghormone.[Review][52refs].ClinicalChemistry36，415-420.Vance，M.L.，Kaiser，D.L.，Evans，W.S.，F(xiàn)urlanetto，R.，Vale，W.，Rivier，J.，andThorner，M.O.(1985).Pulsatilegrowthhormonesecretioninnormalmanduringacontinuous24-hourinfusionofhumangrowthhormonereleasingfactor(1-40).Evidenceforintermittentsomatostatinsecretion.J.Clin.Invest.75，1584-1590.Vansteenkiste，J.，Pirker，R.，Massuti，B.，Barata，F(xiàn).，F(xiàn)ont，A.，F(xiàn)iegl，M.，Siena，S.，Gateley，J.，Tomita，D.，Colowick，A.B.，andMusil，J.(2002).Double-blind，placebo-controlled，randomizedphaseIIItrialofdarbepoetinalfainlungcancerpatientsreceivingchemotherapy.J.Natl.CancerInst.94，1211-1220.Vegeto，E.，Allan，G.F.，Schrader，W.T.，Tsai，M.J.，McDonnell，D.P.，andO′Malley，B.W.(1992).ThemechanismofRU486antagonismisdependentontheconformationofthecarboxy-terminaltailofthehumanprogesteronereceptor.Cell69，703-713.Verhelst，J.，Abs，R，Vandeweghe，M.，Mockel，J.，Legros，J.J.，Copinschi，G.，Mahler，C.，Velkeniers，B.，Vanhaelst，L.，VanAelst，A.，DeRijdt，D.，Stevenaert，A.，andBeckers，A.(1997).Twoyearsofreplacementtherapyinadultswithgrowthhormonedeftciency.Clin.Endocrinol.(Oxf)47，485-44.Vilquin，J.T.，Kennel，P.F.，Paturneau-Jouas，M.，Chapdelaine，P.，Boissel，N.，Delaere，P.，Tremblay，J.P.，Scherman，D.，F(xiàn)iszman，M.Y.，andSchwartz，K.(2001).ElectrotransferofnakedDNAintheskeletalmusclesofanimalmodelsofmusculardystrophies.GeneTher.8，1097-1107.Vittone，J.，Blackman，M.R.，Busby-Whitehead，J.，Tsiao，C.，Stewart，K.J.，Tobin，J.，Stevens，T.，Bellantoni，M.F.，Rogers，M.A.，Baumann，G.，Roth，J.，Harman，S.M.，andSpencer，R.G.S.(1997).Effectsofsinglenightlyinjectionsofgrowthhormone-releasinghormone(GHRH1-29)inhealthyelderlymen.MetabolismClinicalandExperimental46，89-96.Wada，M.，Uchida，H.，Ikeda，M.，Tsunekawa，B.，Naito，N.，Banba，S.，Tanaka，E.，Hashimoto，Y.，andHonjo，M.(1998).The20-kilodalton(kDa)humangrowthhormone(hGH)differsfromthe22-kDahGHinthecomplexformationwithcellsurfacehGHreceptorandhGH-bindingproteincirculatinginhumanplasma.Mol.Endocrinol.12，146-156.Weinroth，S.E.，Parenti，D.M.，andSimon，G.L.(1995).WastingsyndromeinAIDSpathophysiologicmechanismsandtherapeuticapproaches.Infect.AgentsDis.4，76-94.Wells，K.E.，Maule，J.，Kingston，R.，F(xiàn)oster，K.，McMahon，J.，Damien，E.，Poole，A.，andWells，D.J.(1997).Immuneresponses，notpromoterinactivation，areresponsiblefordecreasedlong-termexpressionfollowingplasmidgenetransferintoskeletalmuscle.FEBSLett.407，164-168.Wiethoff，C.M.，Smith，J.G.，Koe，G.S.，andMiddaugh，C.R.(2001).Thepotentialroleofproteoglycansincationiclipid-mediatedgenedelivery.Studiesoftheinteractionofcationiclipid-DNAcomplexeswithmodelglycosaminoglycans.J.Biol.Chem.276，32806-32813.Wilson，J.M.，Birinyi，L.K.，Salomon，R.N.，Libby，P.，Callow，A.D.，andMulligan，R.C.(1989).Implantationofvasculargraftslinedwithgeneticallymodifiedendothelialcells.Science244，1344-1346.Wolff，J.A.，Malone，R.W.，Williams，P.，Chong，W.，Acsadi，G.，Jani，A.，F(xiàn)elgner，andPL.(1990).Directgenetransferintomousemuscleinvivo.Science247，1465-1468.Wu，G.Y.andWu，C.H.(1988a).EvidencefortargetedgenedeliverytoHepG2hepatomacellsinvitro.Biochemistry27，887-892.Wu，G.Y.andWu，C.H.(1988b).Receptor-mediatedgenedeliveryandexpressioninvivo.J.Biol.Chem.263，14621-14624.Wu，H.K.，Squire，J.A.，Song，Q.，andWeksberg，R.(1997).Promoter-dependenttissue-specificexpressivenatureofimprintinggene，insulin-likegrowthfactorII，inhumantissues.Biochem.Biophys.Res.Commun.233，221-226.Xie，T.D.andTsong，T.Y.(1993).Studyofmechanismsofelectricfield-inducedDNAtransfection.V.EffectsofDNAtopologyonsurfacebinding，celluptake，expression，andintegrationintohostchromosomesofDNAinthemammaliancell.Biophys.J.65，1684-1689.Xu，J.，Nawaz，Z.，Tsai，S.Y.，Tsai，M.J.，andO′Malley，B.W.(1996).TheextremeCterminusofprogesteronereceptorcontainsatranscriptionalrepressordomainthatfuuctionsthroughaputativecorepressor.Proc.Natl.Acad.Sci.USA93，12195-12199.Yasui，A.，Oda，K.，Usunomiya，H.，Kakudo，K.，Suzuki，T.，Yoshida，T.，Park，H.M.，F(xiàn)ukazawa，K.，andMuramatsu，T.(2001).Elevatedgastrinsecretionbyinvivogeneelectroporationinskeletalmuscle.Int.JMol.Med.8，489-494.Yeh，S.S.andSchuster，M.W.(1999).Geriatriccachexiatheroleofcytokines.Am.JClin.Nutr.70，183-197.Yin，D.andTang，J.G.(2001).Genetherapyforstreptozotocin-induceddiabeticmicebyelectroporationaltransferofnakedhumaninsulinprecursorDNAintoskeletalmuscleinvivo.FEBSLett.495，16-20.Yorifuji，T.andMikawa，H.(1990).Co-transferofrestrictionendonucleasesandplasmidDNAintomammaliancellsbyelectroporationeffectsonstabletransformation.Mutat.Res.243，121-126.Yutzey，K.E.andKonieczny，S.F.(1992).DifferentE-boxregulatorysequencesarefunctionallydistinctwhenplacedwithinthecontextofthetroponinIenhancer.NucleicAcidsRes.20，5105-5113.Zhao-Emonet，J.C.，Boyer，O.，Cohen，J.L.，andKlatzmann，D.(1998).DeletionalandmutationalanalysesofthehumanCD4genepromotercharacterizationofaminimaltissue-specificpromoter.Biochim.Biophys.Acta1442，109-119.序列表<110>Advisys<120>用于治療慢性病個體的質(zhì)粒介導(dǎo)的補(bǔ)充<130>108328.00073-AVSI-0007<160>25<170>PatentInversion3.1<210>1<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是生長激素釋放激素(GHRH)，其以His1和Va12替代了Tyr1和Ala2，以Ala15替代Gly15，以及用Leu27和Asn28替代了Met27和Ser28。<400>1HisValAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysvalLeuAlaGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleLeuAsnArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>2<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是修飾的生長激素釋放激素(GHRH)的氨基酸序列。通過將Gly15替換成Ala15增加了α-螺旋構(gòu)象。這是TI-GHRH序列，所以它以Ile代替Ala2，用Ala15代替Gly15，并且用Leu27和Asn28替代了Met27和Ser28。<400>2TyrIleAspAlaIlePheThrAshSerTyrArgLysValLeuAlaGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleLeuAsnArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>3<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是生長激素釋放激素，其以Val2替代了Ala2，以Ala15替代Gly15，以及用Leu27和Asn28替代了Met27和Ser28。<400>3TyrvalAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysValLeuAlaGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleLeuAsnArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>4<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是豬生長激素釋放激素(GHRH)，其以Ala15替代Gly15，以及用Leu27和Asn28替代了Met27和Ser28。<400>4TyrAlaAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysValLeuAlaGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleLeuAsnArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>5<211>44<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是(1-44)NH2的人工序列<400>5ThrAlaAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysValLeuGlyGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleMetSerArgGlnGlnGly202530GluSerAsnGlnGluArgGlyAlaArgAlaArgLeu3540<210>6<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是GHRH(1-40)OH的人工序列<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>位置1的Xaa可以是Tyr或His。<220><221>MISC_FEATURE<222>(2)..(2)<223>位置2的Xaa可以是Ala，Val或Ile。<220><221>MISC_FEATURE<222>(15)..(15)<223>位置15的Xaa可以是Ala，Val或Ile。<220><221>MISC_FEATURE<222>(27)..(27)<223>位置27的Xaa可以是Met或Leu。<220><221>MISC_FEATURE<222>(28)..(28)<223>位置28的Xaa可以是Ser或Asp。<220><221>MISC_FEATURE<222>(34)..(34)<223>ARG可以是SER<220><221>MISC_FEATURE<222>(38)..(38)<223>Gln也可以是Arg<400>6XaaXaaAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysValLeuXaaGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleXaaXaaArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>7<211>323<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是真核啟動子c5-12的核酸序列<400>7cggccgtccgccctcggcaccatcctcacgacacccaaatatggcgacgggtgaggaatg60gtggggagttatttttagagcggtgaggaaggtgggcaggcagcaggtgttggcgctcta120aaaataactcccgggagttatttttagagcggaggaatggtggacacccaaatatggcga180cggttcctcacccgtcgccatatttgggtgtccgccctcggccggggccgcattcctggg240ggccgggcggtgctcccgcccgcctcgataaaaggctccggggccggcggcggcccacga300gctacccggaggagcgggaggcg323<210>8<211>190<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是人生長激素(hGH)聚腺苷尾的核酸序列<400>8gggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactcca60gtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtcc120ttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagaca180acctgtaggg190<210>9<211>219<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是豬生長激素釋放激素的cDNA<400>9atggtgctctgggtgttcttctttgtgatcctcaccctcagcaacagctcccactgctcc60ccacctccccctttgaccctcaggatgcggcggcacgtagatgccatcttcaccaacagc120taccggaaggtgctggcccagctgtccgcccgcaagctgctccaggacatcctgaacagg180cagcagggagagaggaaccaagagcaaggagcataatga219<210>10<211>40<212>PRT<213>人工序列<220><223>這是豬生長激素釋放激素的氨基酸序列<400>10TyrAlaAspAlaIlePheThrAsnSerTyrArgLysValLeuGlyGln151015LeuSerAlaArgLysLeuLeuGlnAspIleMetSerArgGlnGlnGly202530GluArgAsnGlnGluGlnGlyAla3540<210>11<211>3534<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是操作性連接HV-GHRH質(zhì)粒的成分的核酸序列<400>11gttgtaaaacgacggccagtgaattgtaatacgactcactatagggcgaattggagctcc60accgcggtggcggccgtccgccctcggcaccatcctcacgacacccaaatatggcgacgg120gtgaggaatggtggggagttatttttagagcggtgaggaaggtgggcaggcagcaggtgt180tggcgctctaaaaataactcccgggagttatttttagagcggaggaatggtggacaccca240aatatggcgacggttcctcacccgtcgccatatttgggtgtccgccctcggccggggccg300cattcctgggggccgggcggtgctcccgcccgcctcgataaaaggctccggggccggcgg360cggcccacgagctacccggaggagcgggaggcgccaagctctagaactagtggatcccaa420ggcccaactccccgaaccactcagggtcctgtggacagctcacctagctgccatggtgct480ctgggtgttcttctttgtgatcctcaccctcagcaacagctcccactgctccccacctcc540ccctttgaccctcaggatgcggcggcacgtagatgccatcttcaccaacagctaccggaa600ggtgctggcccagctgtccgcccgcaagctgctccaggacatcctgaacaggcagcaggg660agagaggaaccaagagcaaggagcataatgactgcaggaattcgatatcaagcttatcgg720ggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccag780tgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtcct840tctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaa900cctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggc960tcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgt1020tgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggg1080gtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccacctt1140ggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctga1200ttttaaaataactataccagcaggaggacgtccagacacagcataggctacctggccatg1260cccaaccggtgggacatttgagttgcttgcttggcactgtcctctcatgcgttgggtcca1320ctcagtagatgcctgttgaattcgataccgtcgacctcgagggggggcccggtaccagct1380tttgttccctttagtgagggttaatttcgagcttggcgtaatcatggtcatagctgtttc1440ctgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagcataaagt1500gtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgctcactgc1560ccgctttccagtcgggaaacctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcgg1620ggagaggcggtttgcgtattgggcgctcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgct1680cggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagctcactcaaaggcggtaatacggttatcca1740cagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccagga1800accgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatc1860acaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccagg1920cgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggat1980acctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcatagctcacgctgtaggt2040atctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttc2100agcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacg2160acttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcg2220gtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaagaacagtatttg2280gta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gatcctttgatcttttctacggggctagcgcttagaagaactcatc1740cagcagacggtagaatgcaatacgttgagagtctggagctgcaataccatacagaaccag1800gaaacggtcagcccattcaccacccagttcctctgcaatgtcacgggtagccagtgcaat1860gtcctggtaacggtctgcaacacccagacgaccacagtcaatgaaaccagagaaacgacc1920attctcaaccatgatgttcggcaggcatgcatcaccatgagtaactaccaggtcctcacc1980atccggcatacgagctttcagacgtgcaaacagttcagccggtgccagaccctgatgttc2040ctcatccaggtcatcctggtcaaccagacctgcttccatacgggtacgagcacgttcaat2100acgatgttttgcctggtggtcaaacggacaggtagctgggtccagggtgtgcagacgacg2160cattgcatcagccatgatagaaactttctctgccggagccaggtgagaagacagcaggtc2220ctgacccggaacttcacccagcagcagccagtcacgaccagcttcagtaactacatccag2280aactgcagcacacggaacaccagtggttgccagccaagacagacgagctgcttcatcctg2340cagttcattcagagcaccagacaggtcagttttaacaaacagaactggacgaccctgtgc2400agacagacggaaaacagctgcatcagagcaaccaatggtctgctgtgcccagtcataacc2460aaacagacgttcaacccaggctgccggagaacctgcatgcagaccatcctgttcaatcat2520gcgaaacgatcctcatcctgtctcttgatcagatcttgatcccctgcgccatcagatcct2580tggcggcaagaaagccatccagtttactttgcagggcttcccaaccttaccagagggcgc2640cccagctggcaattccggttcgcttgctgtccataaaaccgcccagtctagcaactgttg2700ggaagggcgatcg2713<210>22<211>55<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是人生長激素5’非翻譯區(qū)的核酸序列<400>22caaggcccaactccccgaaccactcagggtcctgtggacagctcacctagctgcc55<210>23<211>782<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是質(zhì)粒pUC-18復(fù)制起點的核酸序列<400>23tcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgctcggtcgttcggctgcggcgagcggta60tcagctcactcaaaggcggtaatacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaag120aacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcg180tttttccataggctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagagg240tggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtg300cgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcggga360agcgtggcgctttctcatagctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgc420tccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggt480aactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccact540ggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtgg600cctaactacggctacactagaaggacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagtt660accttcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggt720ggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcct780tt782<210>24<211>5<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是NEO核糖體結(jié)合位點<400>24tcctc5<210>25<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>這是原核PNEO啟動子的核酸序列<400>25accttaccagagggcgccccagctggcaa2963272758v權(quán)利要求1.治療個體貧血癥的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。2.權(quán)利要求1的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。3.權(quán)利要求1的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。4.權(quán)利要求1的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。5.權(quán)利要求1的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。6.權(quán)利要求5的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。7.權(quán)利要求5的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。8.權(quán)利要求1的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。9.權(quán)利要求8的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。10.權(quán)利要求9的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。11.權(quán)利要求8的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。12.權(quán)利要求8的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。13.權(quán)利要求1的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。14.權(quán)利要求1的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。15.治療個體貧血癥的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。16.權(quán)利要求15的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。17.權(quán)利要求15的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。18.權(quán)利要求15的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。19.權(quán)利要求15的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。20.權(quán)利要求19的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。21.權(quán)利要求19的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。22.權(quán)利要求15的方法，其中將第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。23.權(quán)利要求22的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。24.權(quán)利要求23的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮(mifepristone)或其功能性等同物。25.權(quán)利要求24的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。26.權(quán)利要求25的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。27.權(quán)利要求25的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。28.權(quán)利要求27的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。29.權(quán)利要求15的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。30.治療個體貧血癥的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到個體體內(nèi)。31.權(quán)利要求30的方法，其中重組的GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。32.權(quán)利要求30的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。33.權(quán)利要求30的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物是含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。34.權(quán)利要求30的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。35.提高個體總紅細(xì)胞量的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。36.權(quán)利要求35的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。37.權(quán)利要求35的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。38.權(quán)利要求35的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。39.權(quán)利要求35的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。40.權(quán)利要求39的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。41.權(quán)利要求39的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。42.權(quán)利要求35的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。43.權(quán)利要求42的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。44.權(quán)利要求43的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。45.權(quán)利要求42的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。46.權(quán)利要求42的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。47.權(quán)利要求35的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。48.權(quán)利要求35的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。49.提高個體體內(nèi)總紅細(xì)胞量的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。50.權(quán)利要求49的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。51.權(quán)利要求49的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。52.權(quán)利要求49的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。53.權(quán)利要求49的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。54.權(quán)利要求53的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。55.權(quán)利要求53的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。56.權(quán)利要求49的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。57.權(quán)利要求56的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。58.權(quán)利要求57的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。59.權(quán)利要求58的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。60.權(quán)利要求49的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽還具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。61.權(quán)利要求49的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。62.權(quán)利要求61的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。63.權(quán)利要求49的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。64.提高個體體內(nèi)總紅細(xì)胞量的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到個體體內(nèi)。65.權(quán)利要求64的方法，其中重組的GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。66.權(quán)利要求64的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。67.權(quán)利要求64的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。68.權(quán)利要求64的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。69.逆轉(zhuǎn)個體消瘦的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。70.權(quán)利要求69的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。71.權(quán)利要求69的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。72.權(quán)利要求69的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。73.權(quán)利要求69的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。74.權(quán)利要求73的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。75.權(quán)利要求73的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。76.權(quán)利要求69的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。77.權(quán)利要求76的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。78.權(quán)利要求77的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。79.權(quán)利要求76的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。80.權(quán)利要求76的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。81.權(quán)利要求69的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。82.權(quán)利要求69的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。83.逆轉(zhuǎn)個體消瘦的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。84.權(quán)利要求83的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。85.權(quán)利要求83的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。86.權(quán)利要求83的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。87.權(quán)利要求83的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。88.權(quán)利要求87的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。89.權(quán)利要求87的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。90.權(quán)利要求83的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。91.權(quán)利要求90的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。92.權(quán)利要求91的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。93.權(quán)利要求92的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。94.權(quán)利要求93的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。95.權(quán)利要求93的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。96.權(quán)利要求95的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。97.權(quán)利要求83的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。98.逆轉(zhuǎn)個體消瘦的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到個體體內(nèi)。99.權(quán)利要求98的方法，其中重組GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。100.權(quán)利要求98的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。101.權(quán)利要求100的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。102.權(quán)利要求98的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。103.逆轉(zhuǎn)個體異常體重降低的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。104.權(quán)利要求103的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。105.權(quán)利要求103的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。106.權(quán)利要求103的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。107.權(quán)利要求103的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。108.權(quán)利要求107的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。109.權(quán)利要求107的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。110.權(quán)利要求103的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。111.權(quán)利要求107的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。112.權(quán)利要求111的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。113.權(quán)利要求107的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。114.權(quán)利要求107的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。115.權(quán)利要求103的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。116.權(quán)利要求103的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。117.逆轉(zhuǎn)個體異常體重降低的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。118.權(quán)利要求117的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。119.權(quán)利要求117的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。120.權(quán)利要求117的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。121.權(quán)利要求117的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。122.權(quán)利要求121的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。123.權(quán)利要求121的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。124.權(quán)利要求117的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。125.權(quán)利要求124的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。126.權(quán)利要求125的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。127.權(quán)利要求126的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。128.權(quán)利要求127的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。129.權(quán)利要求127的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。130.權(quán)利要求117的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。131.權(quán)利要求117的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。132.提高慢性病個體體重增加的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到慢性病個體體內(nèi)。133.權(quán)利要求132的方法，其中重組GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。134.權(quán)利要求132的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。135.權(quán)利要求132的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。136.權(quán)利要求132的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)慢性病個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。137.逆轉(zhuǎn)個體淋巴細(xì)胞生成抑制的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。138.權(quán)利要求137的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。139.權(quán)利要求137的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。140.權(quán)利要求137的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。141.權(quán)利要求137的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。142.權(quán)利要求141的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。143.權(quán)利要求141的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。144.權(quán)利要求137的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。145.權(quán)利要求144的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。146.權(quán)利要求145的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。147.權(quán)利要求144的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。148.權(quán)利要求144的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。149.權(quán)利要求137的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。150.權(quán)利要求137的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。151.逆轉(zhuǎn)個體淋巴細(xì)胞生成抑制的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。152.權(quán)利要求151的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。153.權(quán)利要求151的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。154.權(quán)利要求151的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。155.權(quán)利要求151的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。156.權(quán)利要求155的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。157.權(quán)利要求155的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。158.權(quán)利要求151的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。159.權(quán)利要求158的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。160.權(quán)利要求159的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。161.權(quán)利要求160的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。162.權(quán)利要求161的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。163.權(quán)利要求161的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。164.權(quán)利要求163的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。165.權(quán)利要求151的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。166.逆轉(zhuǎn)個體淋巴細(xì)胞生成抑制的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到個體體內(nèi)。167.權(quán)利要求166的方法，其中重組GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽還具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。168.權(quán)利要求166的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。169.權(quán)利要求166的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。170.權(quán)利要求166的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。171.治療個體免疫功能障礙的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)。172.權(quán)利要求171的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。173.權(quán)利要求171的方法，其中個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。174.權(quán)利要求171的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。175.權(quán)利要求171的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。176.權(quán)利要求175的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。177.權(quán)利要求175的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。178.權(quán)利要求171的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。179.權(quán)利要求178的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。180.權(quán)利要求179的方法，其中個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。181.權(quán)利要求178的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。182.權(quán)利要求178的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物是通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。183.權(quán)利要求171的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。184.權(quán)利要求171的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。185.治療個體免疫功能障礙的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。186.權(quán)利要求185的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。187.權(quán)利要求185的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體細(xì)胞的遞送過程包括電穿孔。188.權(quán)利要求185的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。189.權(quán)利要求185的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。190.權(quán)利要求189的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。191.權(quán)利要求189的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。192.權(quán)利要求185的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。193.權(quán)利要求192的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白在個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。194.權(quán)利要求193的方法，其中遞送分子開關(guān)到個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。195.權(quán)利要求194的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。196.權(quán)利要求195的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。197.權(quán)利要求195的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。198.權(quán)利要求197的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。199.權(quán)利要求185的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。200.治療個體免疫功能障礙的方法，包括將重組的生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到個體體內(nèi)。201.權(quán)利要求200的方法，其中重組的GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。202.權(quán)利要求200的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。203.權(quán)利要求200的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。204.權(quán)利要求200的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。205.延長慢性病個體預(yù)期壽命的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到慢性病個體細(xì)胞內(nèi)。206.權(quán)利要求205的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體到慢性病個體細(xì)胞的遞送包括電穿孔。207.權(quán)利要求205的方法，其中慢性病個體細(xì)胞是體細(xì)胞，或干細(xì)胞。208.權(quán)利要求205的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包含SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。209.權(quán)利要求205的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步包含一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。210.權(quán)利要求209的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。211.權(quán)利要求209的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。212.權(quán)利要求205的方法，其中遞送核酸表達(dá)構(gòu)建體到慢性病個體細(xì)胞起始編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。213.權(quán)利要求212的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物在慢性病個體的組織特異性細(xì)胞中表達(dá)。214.權(quán)利要求213的方法，其中慢性病個體的組織特異性細(xì)胞包括肌細(xì)胞。215.權(quán)利要求212的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。216.權(quán)利要求212的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征；X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。217.權(quán)利要求205的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。218.權(quán)利要求205的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)慢性病個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。219.延長慢性病緩者預(yù)期壽命的方法，包括(a)將有效量的第一核酸表達(dá)構(gòu)建體和有效量的第二核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體細(xì)胞內(nèi)；其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物；且其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體具有調(diào)節(jié)蛋白的編碼區(qū)域；以及(b)將分子開關(guān)分子遞送到個體體內(nèi)，其中該分子開關(guān)分子控制調(diào)節(jié)蛋白的活化。220.權(quán)利要求219的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體到慢性病個體細(xì)胞的遞送包括電穿孔。221.權(quán)利要求219的方法，其中第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到慢性病個體細(xì)胞的遞送包括電穿孔。222.權(quán)利要求219的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體編碼含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的多肽序列。223.權(quán)利要求219的方法，其中第一核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。224.權(quán)利要求223的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。225.權(quán)利要求223的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。226.權(quán)利要求219的方法，其中遞送第二核酸表達(dá)構(gòu)建體到慢性病個體細(xì)胞起始編碼的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。227.權(quán)利要求226的方法，其中編碼的調(diào)節(jié)蛋白是在慢性病個體細(xì)胞中表達(dá)，但無活性。228.權(quán)利要求227的方法，其中遞送分子開關(guān)到慢性病個體細(xì)胞活化調(diào)節(jié)蛋白，并且該分子開關(guān)包含米非司酮或其功能性等同物。229.權(quán)利要求228的方法，其中活性調(diào)節(jié)蛋白起始第一核酸序列所編碼的GHRH或其功能性生物等同物表達(dá)。230.權(quán)利要求229的方法，其中編碼的GHRH是生物活性多肽，而編碼的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。231.權(quán)利要求229的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。232.權(quán)利要求231的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)慢性病個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。233.權(quán)利要求219的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)慢性病個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。234.延長慢性病個體壽命的方法，包括將重組生長激素釋放激素(“GHRH”)或其生物功能性等同物遞送到慢性病個體體內(nèi)。235.權(quán)利要求234的方法，其中重組的GHRH是生物活性多肽，而重組的GHRH功能性生物等同物是被遺傳改造而含有不同的氨基酸序列同時相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。236.權(quán)利要求234的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物具有通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。237.權(quán)利要求234的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物是含有SeqID#1，SeqID#2，SeqID#3，或SeqID#4的通式。238.權(quán)利要求234的方法，其中重組的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)慢性病個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。239.治療有腫瘤的個體的方法，所述腫瘤選自腺瘤；肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；或?qū)嶓w腫瘤；該方法包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織內(nèi)。其中隨后的GHRH或其生物等同物表達(dá)足以延緩腫瘤的生長。240.權(quán)利要求239的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖施加給含有遞送的核酸表達(dá)構(gòu)建體的組織區(qū)域。241.權(quán)利要求240的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖前，將多個電極安置在組織內(nèi)；其中將核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了一對電極的區(qū)域。242.權(quán)利要求240的方法，其中細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖電脈沖或血管壓力脈沖。243.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體組織的遞送過程包括電穿孔。244.權(quán)利要求239的方法，其中通過注射，基因槍，或金顆粒轟擊遞送。245.權(quán)利要求239的方法，其中個體是家畜；食用動物；或力畜。246.權(quán)利要求239的方法，其中個體是人。247.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體基本上不含病毒骨架(viralbackbone)。248.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體的啟動子包括組織特異性啟動子。249.權(quán)利要求248的方法，其中組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子。250.權(quán)利要求248的構(gòu)建體，其中啟動子包括SPc5-12。251.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體3’非翻譯區(qū)是人生長激素3’UTR，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV40多聚腺苷化信號。252.權(quán)利要求239的方法，其中組織包括肌肉。253.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。254.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包括SeqID#1。255.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。256.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。257.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。258.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。259.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。260.權(quán)利要求239的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。261.權(quán)利要求259的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。262.權(quán)利要求259的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。263.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH功能性生物等同物是相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。264.權(quán)利要求239的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。265.權(quán)利要求239的方法，其中腫瘤包括良性或惡性腫瘤。266.權(quán)利要求239的方法，其中預(yù)防了個體腎衰竭。267.治療有惡瘤的個體的方法，該方法包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織中；其中隨后GHRH或功能性生物等同物的表達(dá)足以延緩惡瘤的生長。268.權(quán)利要求267的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖施加給含有遞送的核酸表達(dá)構(gòu)建體的組織區(qū)域。269.權(quán)利要求268的方法，進(jìn)一步包括在對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖之前將多個電極安置在組織內(nèi)；其中將核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了多個電極的區(qū)域。270.權(quán)利要求268的方法，其中細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖是電脈沖或血管壓力脈沖。271.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體組織的遞送過程包括電穿孔。272.權(quán)利要求267的方法，其中通過注射，基因槍，或金顆粒轟擊遞送。273.權(quán)利要求267的方法，其中個體是家畜；食用動物；或力畜。274.權(quán)利要求267的方法，其中個體是人。275.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體基本上不含病毒骨架。276.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體的啟動子包括組織特異性啟動子。277.權(quán)利要求276的方法，其中組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子。278.權(quán)利要求276的構(gòu)建體，其中啟動子包括SPc5-12。279.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體3’非翻譯區(qū)是人生長激素3’UTR，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV40多聚腺苷化信號。280.權(quán)利要求267的方法，其中組織包括肌肉。281.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。282.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#1。283.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。284.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。285.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。286.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。287.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。288.權(quán)利要求267的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。289.權(quán)利要求287的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。290.權(quán)利要求287的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。291.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH功能性生物等同物是相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。292.權(quán)利要求267的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。293.權(quán)利要求267的方法，其中腫瘤包括良性或惡性腫瘤。294.治療有白血病或淋巴瘤的個體的方法，該方法包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織中；其中隨后GHRH或功能性生物等同物的表達(dá)足以延緩白血病或淋巴瘤的生長率。295.權(quán)利要求294的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖施加給含有遞送的核酸表達(dá)構(gòu)建體的組織區(qū)域。296.權(quán)利要求295的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖前，將多個電極安置在組織內(nèi)；其中核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了多個電極的區(qū)域。297.權(quán)利要求295的方法，其中細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖是電脈沖或血管壓力脈沖。298.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體組織的遞送過程包括電穿孔。299.權(quán)利要求294的方法，其中通過注射，基因槍，或金顆粒轟擊遞送。300.權(quán)利要求294的方法，其中個體是家畜；食用動物；或力畜。301.權(quán)利要求294的方法，其中個體是人。302.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體基本上不含病毒骨架。303.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體的啟動子包括組織特異性啟動子。304.權(quán)利要求303的方法，其中組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子。305.權(quán)利要求303的構(gòu)建體，其中啟動子包括SPc5-12。306.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體3’非翻譯區(qū)是人生長激素3’UTR，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV40多聚腺苷化信號。307.權(quán)利要求294的方法，其中組織包括肌肉。308.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。309.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#1。310.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。311.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。312.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。313.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。314.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。315.權(quán)利要求294的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。316.權(quán)利要求315的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。317.權(quán)利要求315的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。318.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH功能性生物等同物是相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。319.權(quán)利要求294的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。320.預(yù)防個體產(chǎn)生轉(zhuǎn)移性腫瘤的方法，包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織中；其中隨后GHRH或功能性生物等同物的表達(dá)足以延緩轉(zhuǎn)移性腫瘤的發(fā)生。321.權(quán)利要求320的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖施加給含有遞送的核酸表達(dá)構(gòu)建體的組織區(qū)域。322.權(quán)利要求321的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖之前將多個電極安置在組織內(nèi)；其中核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了多個電極的區(qū)域。323.權(quán)利要求321的方法，其中細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖是電脈沖或血管壓力脈沖。324.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)入個體組織的遞送過程包括電穿孔。325.權(quán)利要求320的方法，其中通過注射，基因槍，或金顆粒轟擊遞送。326.權(quán)利要求320的方法，其中個體是家畜；食用動物；或畜力。327.權(quán)利要求320的方法，其中個體是人。328.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體基本上不含病毒骨架。329.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體的啟動子包括組織特異性啟動子。330.權(quán)利要求329的方法，其中組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子。331.權(quán)利要求329的構(gòu)建體，其中啟動子包括SPc5-12。332.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體3’非翻譯區(qū)是人生長激素3’UTR，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV40多聚腺苷化信號。333.權(quán)利要求320的方法，其中組織包括肌肉。334.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。335.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#1。336.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。337.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。338.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。339.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。340.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。341.權(quán)利要求320的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。342.權(quán)利要求341的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。343.權(quán)利要求341的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。344.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH功能性生物等同物是相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。345.權(quán)利要求320的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。346.權(quán)利要求320的方法，其中腫瘤包括良性或惡性腫瘤。347.治療具有轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞生長的個體的方法，腫瘤細(xì)胞選自腺瘤；惡瘤，白血病，淋巴瘤，肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；和實體腫瘤；該方法包括(a)將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體的肌肉組織中；(b)對該組織施加電穿孔細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中核酸表達(dá)構(gòu)建體包括肌特異性啟動子；編碼的GHRH或其功能性生物等同物；和人生長激素3’非翻譯區(qū)(“3’UTR”)；啟動子，編碼的GHRH或其功能性生物等同物，和3’非翻譯區(qū)均操作性連接，GHRH或生物等同物的體內(nèi)表達(dá)由啟動子調(diào)控，并且該構(gòu)建體基本上不含有病毒骨架；隨后GHRH或功能性生物等同物的表達(dá)促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌，并足以延緩細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性生長的生長。348.權(quán)利要求347的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖前，將多個電極安置在組織內(nèi)；其中核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了多個電極的區(qū)域。349.權(quán)利要求347的方法，其中個體是家畜；食用動物；或力畜。350.權(quán)利要求347的方法，其中個體是人。351.權(quán)利要求347的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。352.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#1。353.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。354.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。355.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。356.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。357.權(quán)利要求347的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。358.權(quán)利要求347的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種帶電荷的轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽，該帶電荷的轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。359.治療個體腎衰竭的方法，該方法包括將有效量的編碼生長激素釋放激素(“GHRH”)或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到個體組織中；其中隨后GHRH或功能性生物等同物的表達(dá)足以延緩癌的生長。360.權(quán)利要求359的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖；其中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖施加給含有遞送的核酸表達(dá)構(gòu)建體的組織區(qū)域。361.權(quán)利要求360的方法，進(jìn)一步包括對組織施加細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖前，將多個電極安置在組織內(nèi)；其中核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到組織中插入了多個電極的區(qū)域。362.權(quán)利要求360的方法，其中細(xì)胞轉(zhuǎn)染脈沖是電脈沖或血管壓力脈沖。363.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體到個體組織的遞送包括電穿孔。364.權(quán)利要求359的方法，其中通過注射，基因槍，或金顆粒轟擊遞送。365.權(quán)利要求359的方法，其中個體是家畜；食用動物；或力畜。366.權(quán)利要求359的方法，其中個體是人。367.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體基本上不含病毒骨架。368.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體的啟動子包括組織特異性啟動子。369.權(quán)利要求368的方法，其中組織特異性啟動子包括肌特異性啟動子。370.權(quán)利要求368的構(gòu)建體，其中啟動子包括SPc5-12。371.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體3’非翻譯區(qū)是人生長激素3’UTR，牛生長激素3’UTR，骨骼α肌動蛋白3’UTR，或SV40多聚腺苷化信號。372.權(quán)利要求359的方法，其中組織包括肌肉。373.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體是SeqID#11，SeqID#12，SeqID#13，SeqID#14，SeqID#17，SeqID#18，SeqID#19，SeqID#20，或SeqID#21。374.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#1。375.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#2。376.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#3。377.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#4。378.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含SeqID#10。379.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物包含氨基酸通式(SEQID#6)-X1-X2-DAIFTNSYRKVL-X3-QLSARKLLQDI-X4-X5-RQQGERNQEQGA-OH其中通式具有下述特征X1是酪氨酸(“Y”)，或組氨酸(“H”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X2是丙氨酸(“A”)，纈氨酸(“V”)，或異亮氨酸(“I”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X3是丙氨酸(“A”)或甘氨酸(“G”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X4是蛋氨酸(“M”)或亮氨酸(“L”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；X5是絲氨酸(“S”)或天冬酰胺(“N”)的D-或L-異構(gòu)體氨基酸；或其組合。380.權(quán)利要求359的方法，其中核酸表達(dá)構(gòu)建體進(jìn)一步含有一種轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽。381.權(quán)利要求380的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含帶電荷的多肽。382.權(quán)利要求380的方法，其中轉(zhuǎn)染-促進(jìn)多肽包含聚-L-谷氨酸鹽。383.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH功能性生物等同物是相較于GHRH多肽具有類似或改進(jìn)的生物活性的多肽。384.權(quán)利要求359的方法，其中編碼的GHRH或其功能性生物等同物促進(jìn)個體體內(nèi)生長激素(“GH”)的分泌。385.權(quán)利要求359的方法，其中腎衰竭緣于患有癌癥的個體，所述癌癥選自腺瘤；惡瘤，白血病，淋巴瘤，肥大細(xì)胞瘤；黑素瘤；肉瘤；和實體腫瘤。386.權(quán)利要求385的方法，其中癌癥包括良性或惡性腫瘤。全文摘要本發(fā)明涉及質(zhì)粒介導(dǎo)補(bǔ)充的組合物和方法。該組合物和方法可用于延緩腫瘤生長；延緩惡病質(zhì)，消瘦，貧血及其它通常與患癌癥的動物相關(guān)的病癥?？偟恼f來，本發(fā)明具體可如下實施將有效量的編碼GHRH或其功能性生物等同物的核酸表達(dá)構(gòu)建體遞送到動物組織中，并使該編碼基因在該動物體內(nèi)表達(dá)。例如，當(dāng)這種核酸序列被遞送到個體組織特異性細(xì)胞中時，能夠獲得特定的組成型表達(dá)。而且，GHRH或其功能性生物等同物基因的外部調(diào)節(jié)可通過誘導(dǎo)型啟動子而實現(xiàn)，其中所述啟動子由施用給該動物的分子開關(guān)分子調(diào)控。編碼GHRH或其功能性生物等同物的組成型或誘導(dǎo)型核酸表達(dá)構(gòu)建體的優(yōu)選遞送方法是通過體內(nèi)電穿孔方法直接注入動物細(xì)胞內(nèi)。另外，可通過將重組GHRH或其生物等同物直接遞送到動物體內(nèi)而達(dá)到延緩腫瘤生長，延緩惡病質(zhì)或通常與腫瘤相關(guān)的消瘦的治療目的。文檔編號A61K48/00GK1615151SQ02827105公開日2005年5月11日申請日期2002年12月10日優(yōu)先權(quán)日2001年12月11日發(fā)明者R·德拉吉亞-阿克利,R·H·卡彭特,D·R·克恩,R·J·施瓦茨,G·金,K·哈恩,M·K·布倫納申請人:阿德維希斯公司,貝勒醫(yī)學(xué)院