專利名稱：條紋擬海牛中新的抗腫瘤化合物Philinopside B的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從海洋動物條紋擬海牛中分離到的新的抗腫瘤化合物Philinopside B。
本發(fā)明化合物Philinopside B為白色無定形粉末，熔點218～220C，[α]20D-13.4°(c＝0.6，吡啶)；Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性；由電噴霧離子質(zhì)譜信號m/z1325/[M+Na]+和m/z 1279[M-Na]-，高分辨質(zhì)譜得該化合物精密質(zhì)量數(shù)為1325.4284[M+Na]+，推算其分子式為C55H84O28S2Na2；紅外光譜(KBr)cmmax-13456cm-1，強寬峰(-OH)，1742cm-1(C＝O)，1237，1069cm-1(υs，SO3Na)。1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表1。
表1 Philinopside B的1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)甙元部分 糖部分碳原子序號 碳化學(xué)位移 氫化學(xué)位移(J) 碳原子序號 碳化學(xué)位移136.11.41(m) Xyl(1→C-3)227.02.04(m)，1.87(m) 1 104.7389.53.20 2 83.1439.6 3 75.8548.00.99(t，9.6) 4 75.3623.32.05(m) 5 64.17120.4 5.6(bs) Qui(1→2xyl)8145.5 1 102.5947.13.44(bd，12) 2 81.110 35.6 3 74.511 23.22.02(m) 4 87.712 31.52.11(m)，1.94(m) 5 71.613 59.3 6 18.414 47.5Xyl(1→4Qui)15 43.72.58(m)，1.72(m) 1 104.916 75.15.91(m) 2 73.917 54.82.64(d，9)3 87.718 179.5 4 68.919 24.01.19(s) 5 66.820 85.01.47(s)MeGlc(1→3xyl)21 28.22.36，1.881 105.522 38.51.77(m) 2 75.123 22.71.98(t，7.8) 3 87.924 38.4 4 70.925 145.7 5 77.926 110.0 6 62.027 22.21.68(s) Me 60.830 17.31.10(s)31 28.71.21(s)32 32.21.12(s)Ac(C＝O) 169.8Ac(CH3) 21.21.99(s)13Cδppm recorded at 150MHz，1Hδppm recorded at 600MHz，Xyl木糖，Qui奎諾糖，Glc葡萄糖，J偶合常數(shù)本發(fā)明還提供了從條紋擬海牛中提取分離Philinopside B的方法，其步驟如下(1)提取將原料條紋擬海牛(干品)浸泡于5.5～4倍量(重量)的60～90％乙醇中，提取30小時以上，重復(fù)提取2～4次，合并提取液，減壓回收乙醇，浸膏混懸于30％乙醇中，以乙醚萃取3～5次，棄乙醚萃取液；下層乙醇液減壓回收，得浸膏；浸膏溶于蒸餾水中，通過大孔樹脂柱，用水、50％乙醇和95％乙醇依次洗脫，收集95％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂甙提取物。
(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Philinopside B的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)進行梯度洗脫，薄層層析檢測，得Philinopside B純品。
本發(fā)明對Philinopside B進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗方法為國際通用的SRB法根據(jù)細胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10μl/孔。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調(diào)零孔。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細胞，4C放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結(jié)果見表2表2.Philinopside B對腫瘤細胞的抑制作用腫瘤細胞株 A-549 MCF-7 IA-9 CAKI-1 U-87-MG PC-3 KBKB-VIN SK-MEL-2 HCT-8IC50(μg/ml) 0.75 2.1 0.90 2.0 2.4 1.1 3.0 3.0 2.6 0.93IC50表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實驗結(jié)果表明，Philinopside B對10種不同的腫瘤細胞株均顯示明顯的抑制作用。
本發(fā)明為研制新的的抗癌藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，對開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。
權(quán)利要求
1.一種抑制腫瘤的化合物Philinopside B，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Philinopside B的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將條紋擬海牛浸泡于5.5～4倍量(重量)的60～90％乙醇中，提取30小時以上，重復(fù)提取2～4次，合并提取液，減壓回收乙醇，浸膏混懸于30％乙醇中，以乙醚萃取3～5次，棄乙醚萃取液；下層乙醇液減壓回收，得浸膏；浸膏溶于蒸餾水中，通過大孔樹脂柱，用水、50％乙醇和95％乙醇依次洗脫，收集95％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂甙提取物；(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Philinopside B的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)進行梯度洗脫，薄層層析檢測，得Philinopside B純品。
3.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Philinopside B用于制備抗腫瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從條紋擬海牛中分離的抗腫瘤化合物Philinopside B，分子式C
文檔編號A61K31/585GK1405179SQ0214502
公開日2003年3月26日 申請日期2002年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月4日
發(fā)明者易楊華, 許強芝, 李玲, 吳久鴻 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)