專利名稱：抑制導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的自由基復(fù)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑制自由基復(fù)合物，特別涉及一種抑制導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的自由基的復(fù)合物。
背景技術(shù)：
健康人體內(nèi)的自由基產(chǎn)生和清除是平衡的。臨床上90％疾病的產(chǎn)生如癌癥，心臟病，高血壓，糖尿病等多與人體內(nèi)自由基的代謝失衡即氧應(yīng)激相關(guān)。因此，探求有效的抑制自由基物質(zhì)，在防止疾病的發(fā)生和發(fā)展上具有重大的意義。
癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移，是引起癌癥患者死亡的主要原因，抑制癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移是腫瘤治療學(xué)的一個重要領(lǐng)域。近年來，對癌癥采取化療、放療和手術(shù)治療雖取得一定療效，但因其毒副作用而未能有效地抑制其死亡率。其中，這些治療手段產(chǎn)生的自由基，非但不能抑制癌細(xì)胞的增殖，反而顯示出促進(jìn)殘存癌細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移，已成為腫瘤治療學(xué)上的一個難點。研究表明人體內(nèi)自由基具有促進(jìn)癌細(xì)胞蛋白酶合成作用，這種酶在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中能分解基底膜，形成癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中必不可少的環(huán)節(jié)。自由基能促進(jìn)癌細(xì)胞的DNA合成，靜止期的細(xì)胞經(jīng)自由基類物質(zhì)處理后，在誘導(dǎo)DNA合成的同時，能使c-fos，c-myc，c-jun基因表達(dá)增強。自由基能促進(jìn)癌組織的血管新生。自由基能使Rho因子活化，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞機動蛋白的F-actin聚合增強，細(xì)胞的運動能增強。癌細(xì)胞從自身線粒體中放出的自由基，在癌細(xì)胞的增殖，浸潤和轉(zhuǎn)移過程中具有很重要的作用。因此，自由基在癌細(xì)胞的增殖，浸潤和轉(zhuǎn)移過程中具有很重要的作用。通過抑制自由基，則能有效的抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移。近來，抑制自由基已作為抗癌轉(zhuǎn)移藥物篩選的一個新靶位點。
維生素C(Ascorbic acid，縮寫Asc.)為一種自由基抑制物質(zhì)，但由于其具有對光、熱很不穩(wěn)定且易被氧化的特點，從而難以有效的到達(dá)細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮其生物活性。發(fā)明者通過對Asc的衍生物研究表明其具有良好的穩(wěn)定性，進(jìn)入體內(nèi)后可使細(xì)胞內(nèi)Asc高濃度化，能有效的抑制癌細(xì)胞的氧自由基，因而顯示出抗癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移。然而自由基有多種類型，其中以氧自由基，羥基自由基和NO自由基為最常見的自由基，這些自由基不僅與人類常見的幾種主要疾病相關(guān)，而且與癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此，在抑制癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移中，不僅要有效的抑制氧自由基，同時還要能有效的抑制羥基自由基和NO自由基。針對引發(fā)癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的數(shù)種不同類型的自由基，開發(fā)出自由基抑制劑，可望能進(jìn)一步提高抗癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的目的。
目前開發(fā)的抑制自由基活性物質(zhì)，存在以抑制某種自由基為主的特點，而對其它種類的自由基抑制效果存在差別。同時迄今為止有公開報道的自由基抑制劑，也僅以某種單一的活性成分為主，而能同時能抑制數(shù)種自由基的復(fù)合物未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種能同時抑制導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的氧自由基、羥基自由基和NO自由基的復(fù)合物，且復(fù)合物中活性組分的化學(xué)性質(zhì)較其單獨使用時更趨于穩(wěn)定，從而解決了現(xiàn)有自由基抑制劑存在不能同時抑制數(shù)種自由基及在使用時其活性組分化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的問題。
本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思自由基是以氧自由基為主的多種自由基，因此，根據(jù)維生素C及其衍生物具有抗氧化的特性，在本發(fā)明中使用的活性組分之一為維生素C衍生物-Asc2P6Plm，其為維生素C與脂肪酸的水脂化，具有水脂相溶的特性，能有效的抑制人體內(nèi)的氧自由基。本發(fā)明所述的復(fù)合物的另一活性組分為EGCg，(Epigallocatechin Gallate)其為茶葉的提取物，具有化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定性的特性，其能抑制羥基自由基和NO自由基。本發(fā)明人經(jīng)大量實驗研究發(fā)現(xiàn)將其與維生素C衍生物-Asc2P6Plm復(fù)配后能達(dá)到抑制數(shù)種自由基的目的，同時能提高兩者化學(xué)性質(zhì)的穩(wěn)定性。
發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明所述的抑制導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的自由基的復(fù)合物主要由活性組分維生素C衍生物-Asc2P6Plm和EGCg(Epigallocatechin Gallate)組成，其中Asc2P6Plm和EGCg的重量比以0.1-2∶0.1-1為佳。所述的Asc2P6Plm的制備參見EP 0875514A1，EGCg為市售商品。
本發(fā)明所述的復(fù)合物制備方法在水溶劑(如蒸留水)，水溶性制劑(如生理鹽水)或脂溶劑(如胡麻油)中按Asc2P6Plm∶EGCg，0.1-2∶0.1-1g/L(重量單位/體積單位)溶合而形成復(fù)合物。
本發(fā)明所述的復(fù)合物的使用方法本發(fā)明所述的復(fù)合物在使用上無特定的劑型限制，其能與藥理學(xué)上允許的添加成分(稀釋劑，著色劑，安定劑，界面活性劑，助溶劑，緩沖劑，矯味劑，香料，保存劑，糖衣劑)相組合，制成經(jīng)口給藥的固型制劑，如散劑、丸劑、片劑及膠囊劑和非經(jīng)口給藥的外用劑型，如軟膏、貼敷劑及注射劑。
本發(fā)明所述的復(fù)合物對包括惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、消化器官的腫瘤(胃癌，腸癌，肝癌，膽囊癌，膽道癌，胰腺癌)、肺癌、乳癌、生殖器官腫瘤(睪丸癌，卵巢癌，子宮癌，前列腺癌)、口腔類腫瘤(口腔癌、咽喉癌、上顎癌、舌癌、)，甲狀腺癌、腦部腫瘤、各類肉瘤、骨肉瘤、白血病、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、膀胱腫瘤、皮膚癌及皮膚附屬器官癌的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移具有抑制作用。
本發(fā)明所述的復(fù)合物具有抑制癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移活性高，副作用低及使用方便等優(yōu)點。
具體實施方法下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但其并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍實施例對肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制的試驗用8-9周齡的C57/BL6小鼠進(jìn)行以下的試驗。
把以下的試劑用0.2ml的PBS中溶解，通過腹腔進(jìn)行注射。
1組，空白對照組(5只)PBS 0.2ml2組，Asc2P6Plm組，用Asc2P6Plm 0.2mg/0.2ml3組，Asc2P6Plm 0.13mg，EGCg0.07mg溶解于PBS中腹腔注射后，立即通過尾靜脈注射入PBS懸混的B 16 Melanoma細(xì)胞5×104，從第二天起連續(xù)7天腹腔進(jìn)行注射，結(jié)束后再連續(xù)飼養(yǎng)14天，然后進(jìn)行解剖，統(tǒng)計小鼠肺臟的轉(zhuǎn)移灶。結(jié)果顯示，2組的肺臟轉(zhuǎn)移灶抑制率是33.7％，3組的肺臟轉(zhuǎn)移灶抑制率是56.7％。
對人皮膚纖維肉瘤細(xì)胞浸潤抑制試驗用Matrigel(Colaborative制)31μg涂于浸潤用的多孔膜的小腔(孔徑8μm；Becton Dickinson制)內(nèi)，等干燥后將癌細(xì)胞(人皮膚纖維肉瘤細(xì)胞或B 16 Melanoma細(xì)胞)播種到腔內(nèi)，經(jīng)105分鐘和4小時后，用棉棒擦去多孔膜小腔表面的細(xì)胞，經(jīng)臺盼藍(lán)染色后，從小腔上取下膜，貼附到載玻片上，在顯微鏡下對浸潤細(xì)胞數(shù)進(jìn)行測定。所用的癌細(xì)胞是經(jīng)過250μM和Asc2P6Plm 20μg與EGCg10μg的混合溶解物培養(yǎng)。這個培養(yǎng)的條件，經(jīng)驗證不顯出細(xì)胞的毒性。結(jié)果顯示，Asc2P6Plm組細(xì)胞浸潤抑制率是59-68％，本發(fā)明組細(xì)胞浸潤抑制率是77-82％。
權(quán)利要求
1.一種抑制導(dǎo)致惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、消化器官的腫瘤、肺癌、乳癌、生殖器官腫瘤、口腔類腫瘤、甲狀腺癌、腦部腫瘤、各類肉瘤、骨肉瘤、白血病、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、膀胱腫瘤、皮膚癌及皮膚附屬器官癌的癌細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的自由基的復(fù)合物，其特征為所述的復(fù)合物主要由維生素C衍生物-Asc2P6Plm和EGCg組成。
2.如權(quán)利要求1所述復(fù)合物，其特征為其中Asc2P6Plm和EGCg的重量比為0.1-2∶0.1-1。
全文摘要
本發(fā)明公開的是以提高化學(xué)穩(wěn)定性為目的,由茶提取物EGCg與微生素C衍生物配合組成的一類復(fù)合物。這類復(fù)合物,不僅能消除引發(fā)癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的多種自由基,而且,當(dāng)這兩種物質(zhì)有效組合后,其各自的穩(wěn)定性得到提高,從而克服了這兩種物質(zhì)單獨使用時的缺陷。
文檔編號A61P35/04GK1366879SQ02110788
公開日2002年9月4日 申請日期2002年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月6日
發(fā)明者劉建文, 魏東芝 申請人:華東理工大學(xué)