專利名稱：Il－8受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組新穎的環(huán)胍化合物、其制備方法、它在治療IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78介導的疾病中的用途以及用于此療法中的藥物組合物。
背景技術(shù)：
白細胞介素-8(IL-8)有許多不同的名稱，諸如中性粒細胞引誘/活化蛋白-1(NAP-1)，源于單核細胞的中性粒細胞趨化因子(MDNCF)，中性粒細胞活化因子(NAF)，和T細胞淋巴細胞趨化因子。白細胞介素-8是對中性粒細胞、嗜堿性細胞和T細胞亞型的化學引誘劑，它是由包括暴露于TNF、IL-1α、IL-1β或LPS的巨嗜細胞、纖維母細胞、內(nèi)皮細胞和上皮細胞在內(nèi)的多數(shù)有核細胞產(chǎn)生，并且由暴露于LPS或諸如FMLP的趨化因子的中性粒細胞本身所產(chǎn)生。M.Baggiolini等，J.Clin.Invest.84，1045(1989)；J.Schroder等，J.Immunol.139，3474(1987)和J.Immunol.144，2223(1990)Strieter等，Science 243，1467(1989)和J.Biol.Chem.264，10621(1989)；Cassatella等，J.Immunol.148，3216(1992)。
Groα、GROβ、GROγ和NAP-2還屬于趨化因子α家族，象IL-8一樣，這些趨化因子還被冠以不同的名稱，例如GROα、β、γ分別被稱為MGSAα、β和γ(黑素瘤生長刺激活性(Melanoma GrowthStimulating Activity))，見Richmond等，J.Cell Physiology129，375(1986)和Chang等，J.Immunol 148，451(1992)。所有擁有直接位于CXC基序之前的ELR基序的α家族的趨化因子均和IL-8B受體結(jié)合。
在體外，IL-8、Groα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78促進了許多功能，它們均顯示出對中性粒細胞的化學引誘特性，同時IL-8和GROα顯示出T-淋巴細胞和嗜堿性細胞趨化活性。另外，IL-8可以誘導正常和特異反應性的個體的嗜堿性細胞釋放組胺。另外，IL-8和GRO-α可以誘導中性粒細胞的溶菌酶釋放和呼吸爆發(fā)。IL-8還顯示出增加了Mac-1(CD11b/CD18)在沒有de novo蛋白合成時在中性粒細胞的表面表達。這可有助于增加中性粒細胞與血管內(nèi)皮細胞的粘附作用。許多已知的疾病是以大量的中性粒細胞浸潤為特征的。正如IL-8、Groα、GROβ、GROγ和NAP-2促進中性粒細胞的積聚和活化，這些趨化因子與包括牛皮癬和風濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的很大范圍的急性和慢性炎癥疾病有關(guān)，Baggiolini等，F(xiàn)EBS Lett.307，97(1992)；Miller等，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等，Annu Rev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等，Lancet 341，643(1993)。另外，ELR趨化因子(那些正好在CXC基序前的含有氨基酸ELR基序)也與拮抗劑有關(guān)，Strieter等，Science 258，1798(1992)。
在體外，通過結(jié)合并活化七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)家族的受體，特別是通過結(jié)合IL-8受體，最顯著的是B受體，IL-8、Groα、GROβ、GROγ和NAP-2誘導中性粒細胞形狀改變、趨化性、顆粒釋放和呼吸爆發(fā)，Thomas等，J.Biol.Chem.266，14839(1991)，和Holmes等，Science 253，1278(1991)。此受體家族成員的非肽小分子拮抗劑的發(fā)展已經(jīng)有了先例，其綜述見R.Freidinger在Progress inDrug Research，Vol.40，pp.33-98，Birkhauser Verlag，Basel1993。因此，IL-8受體代表了新穎的抗炎藥物發(fā)展的充滿希望的靶標。
兩種高親和力的人類IL-8受體(77％同源性)的特征如下只與IL-8高親和力結(jié)合的IL-8Rα，以及對IL-8及GROα、GROβ、GROγ和NAP-2均有高親和力的IL-8RB。見Holmes等，見上文；Murphy等，Science 253，1280(1991)；Lee等，J.Biol.Chem.267，16283(1992)；LaRosa等，J.Biol.Chem.267，25402(1992)；和Gayle等，J.Biol.Chem.268，7283(1993)。
在這一領(lǐng)域，對治療還需要能夠與IL-8α或β受體結(jié)合的化合物。因此，IL-8受體結(jié)合的抑制劑的化合物將對與IL-8生成增加(其負責將中性粒細胞和T細胞亞型趨化到炎癥區(qū)域)相關(guān)的疾病有益。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種治療趨化因子介導疾病的方法，其中，趨化因子和IL-8α或β受體結(jié)合，而且此方法包括施用有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。特別是此趨化因子是IL-8。
本發(fā)明還涉及到需要抑制IL-8和其在哺乳動物中受體結(jié)合的方法，它包括給上述哺乳動物施用有效量的式(I)的化合物。
用于本發(fā)明的式(I)化合物具有如下結(jié)構(gòu) 其中R是OH、SH、NHSO2Rd；Rd是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、雜芳基，雜芳基C1-4烷基，雜芳基C2-4烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可被任選取代。
R6和R7獨立地是氫或C1-4烷基基團，或R6和R7和與之相連的氮一起形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個選自氧、氮或硫的雜原子，并且此環(huán)可被任選取代；R1獨立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、鹵代C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜芳基C1-4烷氧基、芳基C2-10烯基、雜芳基C2-10烯基、雜環(huán)C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R17、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個R1部分共同形成O-(CH2)sO-或不飽和的5到6元環(huán)；
q是0、或1-10的整數(shù)；t是0、或1或2的整數(shù)；s是1-3的整數(shù)；R4和R5獨立是氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或R4和R5和與之相連的氮一起形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個選自氧、氮或硫的雜原子；R2獨立地選自C2-5烷基和C2-5烯基，其所有基團都可以任選獨立地被下列基團一到三取代鹵素、硝基、鹵代C1-4烷基、C1-4烷基、氨基、單-或二-C1-4烷基取代的胺、羥基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、S(O)mRa、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7、NHS(O)2Ra、和除碳之外任選獨立含有1到3個NR9、O、C(O)、S、SO、或SO2部分；Y獨立地選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、鹵代C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、芳基C2-10烯基、雜芳基C2-10烯基、雜環(huán)基C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11；C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Rd、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個Y部分可以一同形成O-(CH2)sO-或一個不飽和的5到6元環(huán)；n是1-3的整數(shù)；m是1-3的整數(shù)；R8是氫或C1-4烷基；R9是氫或C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11是氫、C1-4烷基，任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12是氫、C1-10烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基烷基；R17是C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、或雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可任選被取代；并且Ra是烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、或雜環(huán)基C1-4烷基部分，所有這些部分均可以被任選取代。
發(fā)明詳述式(I)的化合物還可用于與哺乳動物，人類除外，的獸醫(yī)學治療有關(guān)的、需要抑制IL-8或與IL-8RA和RB受體結(jié)合的其它趨化因子中。在動物中治療或預防包括趨化因子介導的疾病如在本文治療方法部分提到的那些疾病。
式(I)的典型化合物包括4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-氧代-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2-羥乙基)胍，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(氯甲烷磺酰基)胍，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2，2-二甲氧基乙基)胍，4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[[4-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1，1-二環(huán)氧-1，2，4-噻二唑-3-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[[1-(2-溴苯基)-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[(S)-1-(2-溴苯基)-4-異丙基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基-芐腈，3-[(S)-1-(2-溴苯基)-2-(4-氰基-2-羥基苯基氨基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-丙酸乙酯，[(R)-1-(2-溴苯基)-2-(4-氰基-2-羥基-苯基氨基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-乙酸乙酯，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-異丙基-5-氧代-4，5-二氫-1-H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-異丁基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，
4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-(2-甲基磺?；?sulfanyl)乙基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，3-[(S)-2-(4-氰基-2-羥基苯基氨基)-1-(2，3-二氯苯基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-丙酸乙酯，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-甲基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，4-[(R)-1-(2，3-二氯苯基)-4-甲基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，和4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-甲氧基-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈；或其合適的可接受的鹽。
合適的可藥用鹽為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的那些，并包括無機或有機酸的堿性鹽(basic salts)，酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、醋酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、水楊酸、苯乙酸和扁桃酸。另外，式(I)化合物的可藥用鹽還可以與可藥用的陽離子形成，例如，如果一個取代基中含有一個羧基。合適的可藥用陽離子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并包括堿的、堿土的、銨和四元銨陽離子。
本文所用的下列術(shù)語是指●“鹵素”-所有鹵素，即氯、氟、溴和碘。
●“C2-5烷基”或“烷基”-都指2-5個碳原子的直鏈或支鏈部分，除非對鏈長另有限定，其包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基等。
●本文所用的術(shù)語“烯基”在所有情況下均指2-10個碳原子的直鏈或支鏈部分，除非對鏈長另有限定，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
●“芳基”-苯基和萘基；●“雜芳基”(其本身或任何聯(lián)合中，諸如“雜芳基氧基”、或“雜芳基烷基”)-5-10元芳環(huán)體系，其中一個或多個環(huán)含有一個或多個選自N、O或S的雜原子，例如，但不限于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、異喹啉、喹唑啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑或苯并咪唑。
●“雜環(huán)”(其本身或任何聯(lián)合中，諸如“雜環(huán)烷基”)-飽和或部分不飽和的4-10元環(huán)體系，其中一個或多個環(huán)含有一個或多個選自N、O或S的雜原子，例如，但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫吡喃和咪唑啉。
本文所用術(shù)語“芳基烷基”或“雜芳基烷基”或“雜環(huán)烷基”若無其它說明指如上定義的C1-10烷基連接到本文所定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基部分上。制備方法可應用合成方法以獲得式(I)的化合物，其中一些方法在下文的路線中說明。在這些路線中提供的合成方法可用于生產(chǎn)式(I)的化合物，其具有發(fā)生反應的各種不同的R、R1，以及芳基，并且用被適當保護的任選取代基以達到與本文中所列的反應一致。在這些情況下，隨后脫保護得到原本公開的化合物。一旦構(gòu)成胍核，這些式的另一些化合物就可以按本領(lǐng)域已知的官能團轉(zhuǎn)化的標準技術(shù)制備。而這些路線顯示的只有式(I)的化合物，這僅是為了說明。
路線1 a)Br2，NaOAc，HOAc；b)CuCN，DMF，回流；c)(BOC)2O，DMAP，TEA；d)K2CO3，MeOH；e)TFA目的苯胺6-路線-1可以用商購苯并噁唑啉酮1-路線-1制備。溴化物2-路線-1可用苯并噁唑啉酮1-路線-1在標準溴化條件，如在乙酸中用溴和乙酸鈉溴化制備。溴化物2-路線-1可用標準方法如氰化亞銅(I)在DMF中回流轉(zhuǎn)化成氰化物3-路線-1。酰胺3-路線-1可以用標準條件，諸如BOC酐和三乙胺與催化量的二甲氨基吡啶在二氯甲烷或另外的合適有機溶劑中，轉(zhuǎn)化成BOC保護的化合物4-路線-1。噁唑啉4-路線-1可以通過用標準條件，如碳酸鉀在甲醇中，首先水解成酚5-路線-1，然后用標準條件，如在二氯甲烷或另外的合適有機溶劑中用三氟乙酸將BOC保護基脫掉得到目的苯胺6-路線-1。
路線2 a)RNCS；b)TBSCI；c)硫代光氣；d)RNH2目的硫脲3-路線-2可以按照路線2所列的方法制備。苯胺1-路線-2可以與商購的異硫氰酸酯或從商購的胺與硫光氣或硫光氣等價物縮合得到的異硫氰酸酯連接得到硫脲2-路線-2。酚2-路線-2可以在THF或其它適當?shù)挠袡C溶劑中被諸如TBSCl和咪唑的標準條件下被保護成TBS醚3-路線-2。另外，胺1-路線-2可首先用合適的保護基如TBS醚4-路線-2，用標準條件例如在THF或其它適當?shù)挠袡C溶劑中的諸如TBSCl和胺堿，如咪唑保護酚1-路線-2，可被轉(zhuǎn)化成異硫氰酸酯5-路線-2。，通過胺4-路線-2和硫光氣在堿如碳酸鉀存在下縮合可以制備硫脲5-路線-2。目的硫脲3-路線-2可以通過異硫氰酸酯5-路線-2在適當?shù)挠袡C溶劑中諸如乙醇或DMF中與目的的胺縮合制備。
路線3 目的內(nèi)酰胺3-路線-3可以按照路線3所列的方法制備。碳化二亞胺2-路線-3可以在標準條件，如在室溫下，在有機溶劑，優(yōu)選二氯甲烷中，用硫脲1-路線-3與過量的甲烷磺酰氯和合適的胺堿，如三乙胺制備。內(nèi)酰胺3-路線-3可以用碳化二亞胺2-路線-3首先通過碳化二亞胺2-路線-3與目的的α-氨基酯在合適的有機溶劑，如THF或乙腈中縮合，然后用標準條件，如TBAF在0℃的THF中脫掉TBS基團制得。
路線4 a)2-氨基乙醇，Hunig’s堿，THF；b)TBAF，THF；c)PPh3，DEAD，THF目的二氫咪唑胍(dihydroimidazoyl guanidine)3-路線-4可以按照路線4所示的方法用醇2-路線-4制備。胍2-路線-4可以用碳化二亞胺1-路線-4在標準條件，如通過在合適的有機溶劑，如乙腈或THF中加入伯胺，然后在標準條件，如TBAF在0℃的THF中脫掉TBS基團制得。環(huán)胍3-路線-4可以用標準的Mitsunobu條件，如三苯膦和DEAD在適當?shù)挠袡C溶劑如THF中，用胍2-路線-4制備。
路線5 a)氯甲烷磺酰胺，Hunig’s堿，THF；b)TBAF，THF；c)NaH，DMF目的環(huán)磺酰胺胍3-路線-5可以按照路線5所示方法用氯化物2-路線-5制備。胍2-路線-5可以通過在路線3和4中描述的條件用碳化二亞胺1-路線-5制備。環(huán)胍3-路線-5可用標準的烷基化條件，如NaH在合適的有機溶劑，如DMF中、在室溫或略微加熱下用氯化物2-路線-5制備。
路線6 a)2，2-二甲氧基乙胺，Hunig’s堿，THF；b)TBAF，THF；c)pTSA，丙酮咪唑胍3-路線-6可以在標準酸性條件下，如pTSA在適當有機溶劑如丙酮中，用二甲基縮醛2-路線-6制備。胍2-路線-6可按照路線3和4描述的方法用碳化二亞胺1-路線-6制備。
合成實施例本發(fā)明將通過下列實施例進行描述，這些實施例只是說明性的，而不能被解釋為對本發(fā)明領(lǐng)域的限制。除非另外說明，所有溫度均以攝氏度給出，所有溶劑均是可獲得的最高純度，并且所有反應均是在氬氣氛、無水條件下進行的。
在這些實施例中，所有溫度是攝氏度(℃)。除非另外說明，質(zhì)譜是用快原子轟擊，在VG Zab質(zhì)譜儀上進行測定。1H-NMR(下文為“NMR”)譜是用Bruker AM 250或Am 400分光計上在250MHz下記錄。所表示的多重峰是s＝單峰、d＝雙峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰和br表示寬的信號。Sat.指飽和溶液，eq指試劑相對于主要反應物的摩爾當量比例。
實施例14-[[1-(2-溴苯基)-4.5-二氫-5-氧代-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈的制備。a)4-溴-1，2-苯并噁唑啉酮的制備。
在0℃向苯并噁唑啉酮(10g，74mmol)的醋酸(50ml)溶液中加入醋酸鈉(7.4g，74mmol)和溴(3.8ml，74mmol)并將反應混合物溫至室溫。21小時后，通過過濾收集沉淀物并用水洗滌。濾液在減壓下進行濃縮，過濾收集得到更多的固體物質(zhì)，然后用水洗滌。合并該物質(zhì)得到14g(88％)的4-溴-1，2-苯并噁唑啉酮黃色固體，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.6(s，1H)，7.3(d，1H)，7.0(d，1H)；MS(EI)m/e 212(M+)。b)4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮的制備。
向4-溴-1，2-苯并噁唑啉酮(5.0g，23mmol)的DMF(11mL)溶液中加入氰化亞銅(I)(3.6g，39mmol)，并在165℃加熱。6.5小時后，將此反應混合物冷卻到室溫，并加入水(20ml)和氰化鈉(3.6g)，并將反應加熱到100℃。12小時后，用乙酸乙酯萃取反應混合物，合并的有機層經(jīng)填有硅膠的洗滌柱過濾，用乙酸乙酯洗脫。濾液減壓濃縮得到1.9g(51％)4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮的棕色固體，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.8(s，1H)，7.6(d，1H)，7.2(d，1H)。c)N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮的制備。
在0℃下，向4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮(1.9g，15mmol)的THF(50mL)溶液中加入三乙胺(2.5mL，18mmol)、DMAP(0.37g，3.0mmol)和BOC酐(4.3g，20mmol)并將該反應混合物溫至室溫。1.5小時后，用水(100mL)停止反應并用乙酸乙酯萃取，合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，并減壓濃縮得到4.3g(100％)N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮黃色固體，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.8(d，1H)，7.55(d，1H)，7.45(s，1H)，1.65(s，9H)。d)N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-2-羥基苯胺的制備。
向N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-1，2-苯并噁唑啉酮(4.3g，16mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入碳酸鉀(2.3g，16mmol)。1.5小時后，用水(100mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，并減壓濃縮得到3.1g(81％)棕色泡沫狀的N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-2-羥基苯胺，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.7(d，1H)，7.15(s，1H)，7.1(d，1H)，1.5(s，9H)。e)4-氰基-2-羥基苯胺的制備。
在0℃向N-叔丁基乙酰氧基-4-氰基-2-羥基苯胺(3.1g，13mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入三氟乙酸并將反應混合物溫至室溫。2.5小時后，用水(100mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取，合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗產(chǎn)物用閃式柱色譜純化(50％乙酸乙酯/己烷)得到1.7g(96％)4-氰基-2-羥基苯胺褐色固體。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.0(d，1H)，6.85(s，1H)，6.65(d，1H)，MS(EI)m/e 134(M+)。f)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲的制備。
向4-氰基-2-羥基苯胺(1.0g，7.5mmol)的乙醇(20mL)溶液中加入異硫氰酸(2-溴苯基)酯(1.0mL，7.5mmol)。24小時后，減壓濃縮反應混合物得到2.0g(77％)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲黃色固體，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，DMSO)δ0.8(s，1H)，10.1(s，1H)，9.6(s，1H)，8.7(d，1H)，7.7(d，1H)，7.6(d，1H)，7.4(t，1H)，7.25(d，1H)，7.2(s，1H and d，2H)；MS(EI)m/e 229(100)，348(75(M+))，462(30)，695(10)。g)N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲的制備。
在0℃向N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲(3.5g，10mmol)的THF(50mL)溶液中加入咪唑(1.0g，15mmol)和TBSC1(1.5g，10mmol)。1小時后，用水(100mL)終止此反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮，粗產(chǎn)物從乙酸乙酯中結(jié)晶得到3.9g(84％)N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲黃色固體。1HNMR(400MHz，DMSO)δ9.9(s，1H)，9.2(s，1H)，8.1(d，1H)，7.7(d，1H)，7.6(d，1H)，7.45(d，1H)，7.4(t，1H)，7.35(s，1H)，7.2(t，1H)；MS(EI)m/e 347(100(M+))，175(40)，461(40)。h)N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺的制備。
在0℃向N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)硫脲(3.4g，7.4mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中加入三乙胺(3.1mL 22mmol)、DMAP(20mg)和甲磺酰氯(1.1mL，15mmol)。25分鐘后，用水(100mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物，合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮，得到3.3g(100％)N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺黃色固體，該產(chǎn)物不需要進一步純化。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.7(d.1H)，7.45(d，1H)，7.4(m，4H)，7.15(t，1H)。i)合成二苯基胍的標準方法。4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-氧代-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈的制備。
向N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺(112mg，0.26mmol)的乙腈(2mL)溶液中加入二異丙基乙胺(0.10mL 0.57mmol)和鹽酸甘氨酸乙酯(40mg，0.29mmol)。30分鐘后，在低溫下濃縮混合物。在0℃用THF(1mL)、甲醇(0.1mL)和TBAF(0.29mL，0.29mmol)稀釋粗殘余物。5分鐘后，用水(2mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗產(chǎn)物從二氯甲烷和己烷中重結(jié)晶純化粗產(chǎn)物，得到70mg(73％)棕褐色粉末狀4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-氧代-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.6(1H，d)，7.55(1H，d)，7.4(1H，s)，7.3(2H，dd)，7.0(2H，m)；MS(EI)m/e 372(100(M+)。k)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2-羥乙基)胍的制備。
按標準方法，用N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺(105mg，0.24mmol)、二異丙基乙胺(45μL，0.26mmol)、乙醇胺(16μL，0.26mmol)和TBAF(0.53ml，0.53mmol)在THF(2mL)和甲醇(0.1mL)中反應，得到52mg(57％)棕褐色粉末狀的N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2-羥乙基)胍。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.55(2H，m)，7.2(1H，t)，7.1(1H，d)，7.05(1H，s)，6.95(1H，d)，6.85(1H，t)；MS(EI)m/e 376(100(M+))，490(20)。l)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(氯甲烷磺?；?胍的制備。
按標準方法，用N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺(220mg，0.51mmol)、二異丙基乙胺(63μL，0.56mmol)、氯甲基磺酰胺(72mg，0.56mmol)和TBAF(0.13mL，0.13mmol)在THF(1mL)和甲醇(0.1mL)中反應，得到16mg(32％)棕褐色粉末狀的N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(氯甲烷磺?；?胍。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.85(1H，d)，7.7(1H，d)，7.5(1H，d)，7.4(1H，t)，7.25(1H，t)，7.15(1H，d)，7.05(1H，s)，4.7(2H，s)；MS(EI)m/e 887(100(Mx2))，490(20)。m)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2，2二甲氧基乙基)胍的制備。
按標準方法，用N-(4-氰基-2-叔丁基二甲基硅氧基苯基)-N’-(2-溴苯基)碳化二亞胺(250mg，0.58mmol)、二異丙基乙胺(72μL，0.64mmol)、2，2-二甲氧基乙胺(70μ，0.64mmol)和TBAF(0.70mL，0.70mmol)在THF(6mL)和甲醇(0.1mL)中反應，得到170mg(70％)棕褐色粉末狀的N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2，2-二甲氧基乙基)胍。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.6(1H，m)，7.5(1H，d)，7.15(1H，t)，7.1(1H，d)，7.0(1H，s)，6.9(1H，d)，6.8(1H，t)，4.45(1H，t)，3.3(6H，s)；MS(EI)m/e 420(100(M+))。n)4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈的制備。
在室溫下向N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2-羥乙基)胍(46.2mg，.12mmol)的THF(2mL)溶液中加入三苯膦(140mg，0.53mmol)和DEAD(41μL，.26mmol)。2.5小時后，用水(1mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗殘余物用柱色譜(10％MeOH的乙酸乙酯溶液)純化，得到28 mg(65％)棕褐色粉末狀的4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.6(1H，d)，7.4(2H，m)，7.2(1H，t)，7.0(3H，d and s)，3.95(2H，t)，3.75(2H，t)；MS(EI)m/e 358(100(M+))。o)4-[[4-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1，1-二環(huán)氧-1，2，4-噻二唑-3-基]氨基]-3-羥基芐腈的制備。
在室溫下向N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(氯甲烷磺?；?胍(220mg，0.39mmol)的DMF(4mL)溶液中加入氫化鈉(20mg，0.78mmol)。24小時后，用水(5mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗殘余物用柱色譜(75％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到100mg(63％)棕褐色粉末狀的4-[[4-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1，1-二環(huán)氧-1，2，4-噻二唑-3-基]氨基]-3-羥基芐腈。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.1(1H，d)，7.85(1H，d)，7.7(1H，d)，7.6(1H，t)，7.5(1H，t)，7.2(1H，d)，7.0(1H，s)，4.75(2H，q)；MS(EI)m/e 406(100(M-))。p)4-[[1-(2-溴苯基)-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈的制備。
在室溫下向N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2，2-二甲氧基乙基)胍(120mg，0.28mmol)的丙酮(1mL)溶液中加入pTSA(1mg)。24小時后，用水(5mL)終止反應，并用乙酸乙酯萃取反應混合物。合并的有機層用鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗殘余物用柱色譜(100％乙酸乙酯)純化，得到12mg(12％)棕褐色粉末狀的4-[(1-(2-溴苯基)-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈和4mg(4％)棕褐色粉末狀的4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-甲氧基-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈。
4-[[1-(2-溴苯基)-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.45(2H，t)，7.35(1H，d)，7.3(1H，s)，7.25(1H，d)，7.15(1H，t)，7.1(1H，s)，7.0(1H，s)，6.75(1H，t)；MS (EI)m/e 356(100(M+)).
4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-甲氧基-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.65(1H，t)，7.55(1H，d)，7.25(1H，t)，7.2(2H，s and d)，7.05(1H，d)，6.95(1H，t)，5.8(1H，d)，3.8(1H，dd)，3.5(1H，dd)，3.25(3H，s)；MS(EI)m/e 388(100(M+)).
治療方法式(I)的化合物或其可藥用鹽可用于制備用于預防或治療人類或其它哺乳動物中任何疾病狀態(tài)的藥物，這些疾病狀態(tài)是由于哺乳動物細胞產(chǎn)生的IL-8細胞因子過多或不規(guī)律所引起或加重的，諸如但不限于單核細胞和/或巨噬細胞，或其它與IL-8α或β受體，也稱作I型或II型受體相結(jié)合的趨化因子。
因此，本發(fā)明提供了一種趨化因子介導疾病的治療方法，其中，趨化因子與IL-8α或β受體結(jié)合，并且此方法包含服用有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。特別地，趨化因子是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。
對于本文的用途，式(I)和(II)的化合物均有同樣的劑量，并且象式(I)化合物的配方是可互換的。
施用足夠量的式(I)化合物以抑制細胞因子功能，特別是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的功能，使之生物學調(diào)低到生理功能的正常水平，或在某種意義上調(diào)整到低于正常水平，以改善疾病狀態(tài)。例如在本發(fā)明的上下文中，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的異常水平的產(chǎn)生由下列組成(i)游離IL-8水平超過或等于1皮克/mL；(ii)任何細胞有關(guān)的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78超過正常生理水平；或(iii)IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的存在分別高于在細胞或組織中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的基本水平。
有許多疾病狀態(tài)，其中產(chǎn)生IL-8過?；虿灰?guī)律加重和/或引起疾病。趨化因子介導的疾病包括牛皮癬、特應性皮炎、關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、中風、感染性休克、內(nèi)毒素休克、葛蘭氏陰性膿毒血癥、中毒性休克綜合征、心臟和腎臟再灌注損傷、腎小球性腎炎、血栓形成、移植物抗宿主反應、阿爾茨海默氏病、同種異體移植物排斥、瘧疾、restinosis、血管生成、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松癥、齦炎或不良的造血干細胞釋放。
這些疾病主要以大量中性粒細胞浸潤、T細胞浸潤或新血管生長為特征，并且和IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2產(chǎn)生增加有關(guān)，其負責使中性粒細胞向炎癥區(qū)域趨化或內(nèi)皮細胞的方向性生長。和其它炎癥性細胞因子(IL-1，TNF，和IL-6)相比，IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2具有獨特的促使中性粒細胞趨化、酶的釋放特性，其包括但不限于釋放彈性蛋白酶以及超氧化物產(chǎn)生和活化。通過IL-8的I或II型受體起作用的α趨化因子并且特別是GROα、GROβ、GROγ或NAP-2，可以通過促使內(nèi)皮細胞的方向性生長從而促使腫瘤的新血管形成。因此，對IL-8誘導的趨化或活化作用的抑制將導致中性粒細胞浸潤的直接減少。
最近的證據(jù)還表明了在HIV感染治療中趨化因子的作用，Littleman等，Nature 381，pp 661(1996)和Koup等，Nature 381，pp 667(1996)。
本發(fā)明還提供了一種治療方法，用式(I)的趨化因子受體拮抗劑化合物治療急性狀態(tài)(setting)，以及用于對那些被認為是易感個體預防CNS損傷。
在此定義的CNS損傷包括頭顱開放或穿透性創(chuàng)傷，諸如手術(shù)，或閉合性頭顱創(chuàng)傷，如頭顱區(qū)域的損傷。在此定義之內(nèi)還包括缺血性發(fā)作，特別是腦部區(qū)域。
缺血性發(fā)作可以定義為由特定腦部區(qū)域的血液供應不足導致的病灶性神經(jīng)紊亂，通常結(jié)果為血管栓塞、血栓或局部動脈粥樣硬化閉塞。在此區(qū)域顯示出炎癥性細胞因子的作用，本發(fā)明提供了一種可能的治療這些損傷的方法。對諸如這些急性損傷，幾乎沒有相關(guān)的治療是可行的。
TNF-α是一種具有前炎癥性作用的細胞因子，其包括內(nèi)皮性白細胞粘連分子的表達。白細胞浸潤到缺血性腦損傷區(qū)域，并且因此抑制或減少TNF水平的化合物將對缺血性腦損傷的治療有用。見Liu等，Stroke，Vol.25.，No.7，pp 1481-88(1994)，其公開的內(nèi)容在此引入作為參考。
閉合性頭顱損傷的模型和以混合的5-LO/CO劑的治療在Shohami等，J.of Vaisc & Clinical Physiology and Pharmacology，Vol.3，No.2，pp.99-107(1992)中進行了討論，其公開的內(nèi)容在此引入作為參考。在那些被治療的動物中發(fā)現(xiàn)減輕水腫形成的治療可改善功能結(jié)果。
服用足夠量的式(I)化合物以抑制與諸如降低中性粒細胞趨化和活化作用的IL-8α或β受體的結(jié)合。式(I)化合物是IL-8結(jié)合的抑制劑的發(fā)現(xiàn)，是基于本文描述的式(I)化合物的在體外受體結(jié)合試驗中的效應。在一些例子中，顯示出式(I)的化合物是重組I型和II型的IL-8受體的雙重抑制劑。優(yōu)選地，此化合物僅為一種受體的抑制劑，更優(yōu)選的是II型IL-8受體的抑制劑。
本文應用的術(shù)語“IL-8介導的疾病或疾病狀態(tài)”指任何和所有的疾病狀態(tài)，其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78起著作用，或者通過產(chǎn)生IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78本身，或者通過IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78引起另外的單核因子釋放，諸如但不限于IL-1、IL-6或TNF。一種疾病狀態(tài)，其中例如IL-1是主要成分，并且它的產(chǎn)生或作用對應于IL-8的增加或減少，則因此被認為是IL-8介導的疾病狀態(tài)。
本文應用的術(shù)語“趨化因子介導的疾病或疾病狀態(tài)”指任何和所有的疾病狀態(tài)，其中與IL-8α或β受體結(jié)合的趨化因子起作用，例如但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。這包括一種疾病狀態(tài)，其中IL-8起作用，或通過產(chǎn)生IL-8本身，或通過IL-8引起另外的單核因子釋放，諸如但不限于IL-1、IL-6或TNF。一種疾病狀態(tài)，其中，例如IL-1是主要成分，并且它的產(chǎn)生或作用對應于IL-8的增加或減少，則因此被認為是IL-8介導的疾病狀態(tài)。
本文應用的術(shù)語“細胞因子”指可以影響細胞功能的任何分泌的多肽，并且是在免疫、炎癥或造血反應中調(diào)整細胞間相互作用的分子。細胞因子包括但不限于單核因子和淋巴因子，不論它們由哪些細胞產(chǎn)生。例如單核因子通常指由諸如巨噬細胞和/或單核細胞的單核細胞產(chǎn)生和分泌的。但是許多其它細胞也產(chǎn)生單核因子，諸如自然殺傷細胞、成纖維細胞、嗜堿細胞、中性粒細胞、內(nèi)皮細胞、腦星型細胞、骨髓基質(zhì)細胞、表皮角化細胞和B淋巴細胞。淋巴因子通常指由淋巴細胞產(chǎn)生。細胞因子的例子包括，但不限于白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子β(TNF-β)。
本文應用的術(shù)語“趨化因子”指可以影響細胞功能的任何分泌的多肽，并且是在免疫、炎癥或造血反應中調(diào)整細胞間相互作用的分子，和上文的術(shù)語“細胞因子”相似。趨化因子主要通過跨膜細胞(celltrausmembranes)分泌，并引起特定白血細胞和白細胞、中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞、T-細胞、B-細胞、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的趨化作用和活化。趨化因子的例子包括但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2、ENA-78、IP-10、MIP-1α、MIP-β、PF4和MCP1、2和3。
在治療中為了應用式(I)的化合物或其可藥用鹽，通常按照標準的藥學實踐將其配制成藥物組合物。因此本發(fā)明還涉及包含有效的、無毒量的式(I)化合物和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
式(I)的化合物，其可藥用鹽及如上混合的藥物組合物可以通過任何方便的給藥途徑施用，例如口服、局部用藥、非腸道給藥或吸入。式(I)的化合物可以通過常規(guī)方法將式(I)的化合物和標準的藥學載體結(jié)合制成方便的劑型施用。式(I)的化合物還可以和一種已知的第二種治療活性化合物以方便的劑型聯(lián)合服用。這些方法可涉及將適當?shù)某煞只旌稀⒅屏：蛪褐苹蛉芙獾侥康闹苿┲?。應意識到藥學可接受特性或稀釋劑的形式和特性受聯(lián)合使用的活性成分的量、給藥途徑和其他眾所周知的變量支配。在與制劑的其它成分相容的意義上說，載體必須是“可接受的”并且不會對其受者有毒害。
例如，藥用載體可以是固體或液體，典型的固體載體是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、凝膠、瓊脂、膠質(zhì)、阿拉伯樹膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。典型的液體載體是糖漿、花生油、橄欖油、水等。同樣，載體或稀釋劑可以包括本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的時間延遲物質(zhì)，諸如單獨或含石蠟的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
可以使用的藥物形式很廣泛，因此，如果使用的是一種固體載體，制劑可以制備成片劑、以粉末或成小球形式或以錠劑或糖錠形式放入硬膠囊中。固體載體的量可有很大變化，但是優(yōu)選的是從大約25mg到大約1g。當應用液體載體時，制劑可以是糖漿劑、乳劑、軟膠囊、無菌可注射液，如安瓿或非水混懸液。
式(I)的化合物可以局部施用，即通過非全身用藥。這包括式(I)的化合物外用到表皮或頰腔和將此混合物滴入耳、眼和鼻，這樣此化合物將不會明顯的進入血液。與此相反，全身用藥指口腔、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和肌肉內(nèi)給藥。
適用于局部用藥的制劑包括適于穿透皮膚達到炎癥部位的液體或半液體制劑，諸如擦劑、洗劑、霜劑、軟膏或糊劑和適用于眼、耳或鼻部用藥的滴劑。對于局部用藥，在制劑重量中活性成分可包含0.001％到10％w/w，例如從1％到2％。但是它可含有高達制劑的10％w/w，但優(yōu)選少于5％w/w，更優(yōu)選的是0.1％到1％w/w。
本發(fā)明的洗劑包括適于皮膚或眼部應用的那些。眼用洗劑可以包含任選含有殺菌劑的無菌水溶液并且可以用類似于滴劑的制備方法制備。用于皮膚的洗劑或擦劑還可以包括一種加速干燥和使皮膚冷卻的試劑，諸如乙醇或丙酮，和/或一種保濕劑，如甘油或一種油，如蓖麻油或花生油。
本發(fā)明的霜劑、軟膏或糊劑是外用活性成分的半固體制劑。這些制劑可以通過細分散或粉末形式的活性成分，單獨或在水或非水液體的溶液或混懸液中，用適當?shù)臋C械相助與油脂或非油脂基質(zhì)混合而制得?；|(zhì)可以包含烴諸如硬、軟或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；粘質(zhì)；天然來源的油諸如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸諸如硬脂酸或油酸和醇諸如丙二醇或大粒凝膠。制劑可以包含任何適當?shù)谋砻婊钚詣┲T如陰離子、陽離子或非離子表面活性劑如脫水山梨醇酯或其聚氧乙烯衍生物。制劑可以包括懸浮劑諸如天然樹膠、纖維素衍生物或無機物諸如silicaceous硅，和其他成分諸如羊毛脂。
本發(fā)明的滴劑包含無菌水或油溶液或混懸液，并可以通過將活性成分溶解到適當?shù)臍⒕鷦┖?或殺真菌劑和/或其它任何適當?shù)姆栏瘎┑乃芤褐兄苽?，并且?yōu)選包括表面活性劑。然后將所得到的溶液通過過濾使之澄清，轉(zhuǎn)移到適當?shù)娜萜魅缓竺芊?，通過高壓滅菌或維持在98-100℃半小時滅菌。另外，此溶液還可以通過過濾滅菌并用無菌技術(shù)轉(zhuǎn)移到容器中。適于包含在滴劑中的殺菌劑和殺真菌劑的例子是硝酸苯汞或醋酸苯汞(0.002％)、氯化苯甲烴銨(0.01％)和醋酸洗必泰(0.01％)。合適的用于制備油性溶液的溶劑包括甘油、稀的酒精和丙二醇。
式(I)的化合物可以胃腸外用藥，即通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹膜內(nèi)用藥。通常優(yōu)選的胃腸外用藥是皮下和肌內(nèi)形式。適用于此用藥方式的適宜劑型可以通過常規(guī)技術(shù)制備。式(I)的化合物還可以通過吸入用藥，即通過鼻內(nèi)和口腔吸入。適用于此用藥方式的適宜劑型諸如氣霧劑或計量吸入器可以通過常規(guī)技術(shù)制備。
對于本文公開的式(I)化合物的所有應用方法，每日口服劑量方案優(yōu)選從大約0.01到大約80mg/kg體重。每日胃腸外劑量方案優(yōu)選從大約0.001到大約80mg/kg體重。每日局部用藥劑量方案優(yōu)選從0.1mg到150mg，每日用藥1到4次，優(yōu)選2或3次。每日吸入用藥劑量優(yōu)選從大約0.01mg/kg到大約1mg/kg。本領(lǐng)域的技術(shù)人員也意識到式(I)化合物或可藥用鹽的個體劑量的最佳量和間隔將取決于待治療疾病的性質(zhì)和程度、劑型、用藥途徑和部位和待治療的特定患者，并且此最佳治療方案可由方便的技術(shù)決定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員還意識到最佳的治療過程，即對于一個確定天數(shù)的治療，每天服用式(I)化合物或其可藥用鹽的劑量，可以由本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員應用常規(guī)的治療測定試驗過程確定。
現(xiàn)在本發(fā)明將通過下列生物學實施例進行描述。這些實施例只是用于說明而不是作為本發(fā)明范圍的限制。
生物學實施例本發(fā)明化合物的IL-8和GRO-α趨化因子抑制效應是用下列體外分析方法測定的受體結(jié)合分析從Amersham Corp.，Arlington Heights，IL獲得[125I]IL-8(人類重組體)，比活性為2000 Ci/mmol。從NEN-New EnglandNuclear獲得GRO-α。所有其它化學試劑為分析級。高水平的重組人類IL-8α型和β型受體是在中國倉鼠卵巢細胞上分別表達，如前所述(Holmes等，Science，1991，253，1278)。按照前述方法(Haour等，J Biol Chem.，249 pp 2195-2205(1974))將中國倉鼠卵巢膜均質(zhì)化。此外，均質(zhì)化緩沖液改為10mM Tris-HCL、1mM MgSO4、0.5mM EDTA(乙二胺四乙酸)、1mM PMSF(α-甲苯磺酰氟)、0.5mg/L亮肽素，pH 7.5。用Pierce Co.微分析試劑盒(Pierce Co.micro-assay kit)用牛血清白蛋白作為標準，測定膜蛋白的濃度。所有的分析均在96孔微孔平板中進行。每個反應混合物在20mM Bis-Trispropane和0.4mM Tris HCl緩沖液(pH 8.0)中含有125I IL-8(0.25nM)或125IGro-α和0.5μg/mL的IL-8Rα或1.0μg/mL的IL-8Rβ膜，緩沖液中含有1.2mM MgSO4、0.1mM EDTA、25mM NaCl和0.03％CHAPS。另外，加入預先溶解在DMSO中的待測藥物或化合物以達到的最終濃度在0.01nM和100uM之間。通過加入125I-IL-8開始測試，在室溫下1小時后，在用含有1％聚乙烯亞胺/0.5％BSA阻擋的玻璃纖維filtermat上用Tomtec 96孔收集器對此平板進行收集，并用25mMNaCl、10mMTrisHCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA、0.03％CHAPS，pH 7.4洗滌三次。然后將過濾器干燥并在Betaplate液體閃爍計數(shù)器上計數(shù)。重組體IL-8Rα，或I型受體在本文還指非許可受體，并且重組體IL-8Rβ，或II型受體指許可受體。
在本文合成化學部分實施例1到15顯示的所有的式(I)的舉例化合物證明在IL-8受體抑制許可模型中IC50為大約45到大約＜1μg/mL。在受試化合物中，還發(fā)現(xiàn)實施例1到12是大約相同水平的GRO-α結(jié)合抑制劑。趨化分析
這些化合物的體外抑制特性用中性粒細胞趨化作用分析方法測定，如在Current Protocols in Immunology，Vol I，Suppl 1，Unit6.12.3所述，其公開內(nèi)容在此全部引入作為參考。如在CurrentProtocols in Immunology，Vol I，Suppl 1，Unit 7.23.1所述，從人血中分離中性粒細胞，其公開內(nèi)容在此全部引入作為參考。將化學引誘劑IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ和NAP-2置入48多孔室(NeuroProbe，Cabin John，MD)的底室，濃度為0.1～100nM。兩室之間以5um的聚碳酸酯過濾器分隔。當測試本發(fā)明的化合物時，就在上室加入細胞前和細胞混合(0.001-1000nM)。在潮濕的含有5％CO2的孵化器中在大約37℃持續(xù)孵化約45-90分鐘。在孵化期最后，將聚碳酸酯膜移開并且洗滌頂側(cè)，然后用Diff Quick染色方法(BaxterProducts，McGaw Park，IL，USA)將膜染色。趨化到趨化因子的細胞用顯微鏡目測計數(shù)。通常，每個樣品計數(shù)4個區(qū)域，這些數(shù)值平均作為遷移細胞的平均數(shù)量。每個樣品檢驗三次而每個化合物重復測試至少4次。對于特定細胞(陽性對照細胞)沒有加入化合物，這些細胞具有細胞的最大趨化反應。在需陰性對照(未受刺激)的情況下，底室沒有加入趨化因子。陽性對照和陰性對照之間的差別代表了細胞的趨化活性。彈性蛋白酶釋放分析測試本發(fā)明化合物對阻止彈性蛋白酶從人中性粒細胞釋放的能力。按照Current Protocols in Immunology Vol I，Suppl 1 Unit7.23.1中所述從人血液中分離出中性粒細胞。將懸浮在Ringer’sSolution(NaCl 118，KCl 4.56，NaHCO325，KH2PO41.03，葡萄糖11.1，HEPES 5 mM，pH 7.4)中的PMNs 0.88×106細胞放入96孔平板中，每孔體積50ul。向此平板加入50ul待測化合物(0.001-1000nM)、細胞松弛素B 50ul(20ug/ml)和Ringers緩沖液50ul。在加入終濃度為0.01-1000nM IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2之前，將這些細胞溫育(37℃，5％CO2，95％RH)5分鐘。反應持續(xù)45分鐘，然后將96孔平板離心(800×g 5分鐘)并將100ul上清液移走。將該上清加入到另一個96孔平板中，隨后加入終濃度為6ug/ml的人造彈性蛋白酶底物(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC，Nova Biochem，La Jolla，CA)的磷酸鹽緩沖液。立即將平板置入96孔平板熒光讀數(shù)器(Cytofluor 2350，Millipore，Bedford，MA)中，按Nakajima等J.Biol Chem 254 4027(1979)的方法以3分鐘間隔記錄數(shù)據(jù)。從PMNs釋放的彈性蛋白酶的量可以通過測量MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC的降解速度計算出來。在創(chuàng)傷性腦損傷中的TNF-α分析這一分析方法提供了腫瘤壞死因子mRNA在大鼠特定腦區(qū)域表達的檢驗，該腦區(qū)域被實驗性引起的側(cè)面液性打擊創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)。成年Sprague-Dawley大鼠(n＝42)以戊巴比妥鈉麻醉(60mg/kg，腹腔注射)并遭受到中度側(cè)面液體打擊腦損傷(2.4atm.)，其中心位于左側(cè)顳項部皮質(zhì)(n＝18)，或“模擬”處理(無損傷麻醉并手術(shù)，n＝18)。在損傷1、6和24小時后將動物斷頭處死，取出腦，制備左側(cè)(傷側(cè))頂部皮質(zhì)(LC)、對面右側(cè)皮質(zhì)相應的區(qū)域(RC)、損傷的頂部皮質(zhì)附近的皮質(zhì)(LA)、右側(cè)皮質(zhì)的相應臨近區(qū)域(RA)、左側(cè)海馬(LH)和右側(cè)海馬(RH)的組織樣本。分離總RNA并實施Northern印記雜交且相對于TNF-α陽性對照RNA(巨噬細胞＝100％)進行定量。在受傷后1小時時的受傷側(cè)半球觀察到在LH中(陽性對照的104±17％，和模擬組相比p＜0.05)，在LC中(105±21％，p＜0.05)和在LA中(69±8％，p＜0.01)TNFα mRNA表達的顯著增加。在傷后6小時也觀察到在LH中(46±8％，p＜0.05)、在LC中(30±3％，p＜0.01)和在LA中(32±3％，p＜0.01)TNF-αmRNA表達的增加，在傷后24小時就消退了。在對側(cè)半球，在傷后1小時，在RH中(46±2％，p＜0.01)、RC中(4±3％)和RA中(22±8％)，在傷后6小時RH中(28±11％)、RC中(7±5％)和RA中(26±6％，p＜0.05)TNF-αmRNA的表達增加，但是在傷后24小時則沒有。在模擬組(無損傷手術(shù))或空白動物，在任何時間，不論哪側(cè)半球，6個腦區(qū)域均沒有觀察到TNF-αmRNA表達的一致改變。這些結(jié)果顯示在旁矢狀面液體打擊腦損傷后，在特定腦區(qū)有暫時的TNF-αmRNA表達改變，包括非創(chuàng)傷半球的變化。因為TNF-α能誘導神經(jīng)生長因子(NGF)并刺激其他細胞因子從活化的腦星型細胞的釋放，創(chuàng)傷后TNF-α基因表達的改變在對CNS創(chuàng)傷的急性和再生性回應中均起著重要的作用。IL-βmRNA的CNS損傷模型此分析方法以在大鼠實驗性側(cè)面液體打擊腦損傷(TBI)后特定腦區(qū)的白細胞介素-1β(IL-1β)mRNA的區(qū)域性表達為特征。成年Sprague-Dawley大鼠(n＝42)用戊巴比妥鈉麻醉(60mg/kg，腹腔注射)并遭受中度側(cè)面液體打擊腦損傷(2.4atm.)，其中心位于左側(cè)顳頂部皮質(zhì)(n＝18)，或“模擬”處理(無損傷麻醉并手術(shù))。在損傷1、6和24小時后將動物斷頭處死，取出腦，制備左側(cè)(傷側(cè))頂部皮質(zhì)(LC)、對面右側(cè)皮質(zhì)相應的區(qū)域(RC)、損傷的頂部皮質(zhì)附近的皮質(zhì)(LA)、右側(cè)皮質(zhì)的向應臨近區(qū)域(RA)、左側(cè)海馬(LH)和右側(cè)海馬(RH)的組織樣本。分離總RNA并實施Northern印記雜交，得到腦組織IL-1βmRNA的量用負荷在同樣的凝膠上的IL-1β陽性巨噬細胞RNA相對放射活性的百分比表示。在腦損傷1小時后，在受傷側(cè)半球，觀察到LC中(陽性對照的20.0±0.7％，n＝6，和模擬動物相比p＜0.05)、LH中(24.5±0.9％，p＜0.05)和LA中(21.5±3.1％，p＜0.05) IL-1βmRNA的表達有明顯的和顯著的增加，傷后到6小時，在LC中(4.0±0.4％，n＝6，p＜0.05)和LH中(5.0±1.3％，p＜0.05)上述觀察現(xiàn)象仍然存在。在模擬或空白動物中，沒有在任何相關(guān)腦區(qū)域觀察到IL-1βmRNA的表達。這些結(jié)果顯示在TBI后，在特定腦區(qū)IL-1βmRNA的暫時表達局部受到刺激。這些區(qū)域的細胞因子，諸如IL-1β的變化在創(chuàng)傷后起作用。
在本說明書中引用的所有出版物，包括但不限于專利和專利申請在此引入作為參考，就象每一單獨的出版物被詳細地并單獨地指出被全文引入作為參考一樣。
上述描述完全公開了本發(fā)明，包括其優(yōu)選實施方案。在此特別公開的實施方案的改善和改進屬于下列權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。如果不進一步詳細闡述，據(jù)信本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以應用前面描述，最大程度地利用本發(fā)明。因此，此處實施例將僅作為說明解釋，在任何意義上都不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明要求保護的專有權(quán)或特許權(quán)的具體內(nèi)容如下文所限定。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其中R是OH、SH、NHSO2Rd；Rd是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、雜芳基，雜芳基C1-4烷基，雜芳基C2-4烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可被任選取代；R6和R7獨立地是氫或C1-4烷基基團，或R6和R7和與之相連的氮一起形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個選自氧、氮或硫的雜原子，并且此環(huán)可被任選取代；R1獨立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、鹵代C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜芳基C1-4烷氧基、芳基C2-10烯基、雜芳基C2-10烯基、雜環(huán)C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R17、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個R1部分共同形成O-(CH2)sO-或不飽和的5到6元環(huán)；q是0、或1-10的整數(shù)；t是0、或1或2的整數(shù)；s是1-3的整數(shù)；R4和R5獨立是氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或R4和R5和與之相連的氮一起形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個選自氧、氮或硫的雜原子；R6獨立地選自C2-5烷基和C2-5烯基，其所有基團都可以任選獨立地被下列基團一到三取代鹵素、硝基、鹵代C1-4烷基、C1-4烷基、氨基、單-或二-C1-4烷基取代的胺、羥基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、S(O)mRa、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7、NHS(O)2Ra、和除碳之外任選獨立含有1到3個NR9、O、C(O)、S、SO、或SO2部分；Y獨立地選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、鹵代C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、芳基C2-10烯基、雜芳基C2-10烯基、雜環(huán)基C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Rd、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個Y部分可以一同形成O-(CH2)sO-或一個不飽和的5到6元環(huán)；n是1-3的整數(shù)；m是1-3的整數(shù)；R8是氫或C1-4烷基；R9是氫或C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11是氫、C1-4烷基，任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12是氫、C1-10烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基烷基；R17是C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、或雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可任選被取代；Ra是烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、或雜環(huán)基C1-4烷基部分，所有這些部分均可以被任選取代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，該化合物是，4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-氧代-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2-羥乙基)胍，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(氯甲烷磺?；?胍，N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-(2，2-二甲氧基乙基)胍，4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[[4-(2-溴苯基)-4，5-二氫-1，1-二環(huán)氧-1，2，4-噻二唑-3-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[[1-(2-溴苯基)-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈，4-[(S)-1-(2-溴苯基)-4-異丙基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基-芐腈，3-[(S)-1-(2-溴苯基)-2-(4-氰基-2-羥基苯基氨基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-丙酸乙酯，[(R)-1-(2-溴苯基)-2-(4-氰基-2-羥基-苯基氨基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-乙酸乙酯，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-異丙基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-異丁基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-(2-甲基磺?；一?-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，3-[(S)-2-(4-氰基-2-羥基苯基氨基)-1-(2，3-二氯苯基)-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-4-基]-丙酸乙酯，4-[(S)-1-(2，3-二氯苯基)-4-甲基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，4-[(R)-1-(2，3-二氯苯基)-4-甲基-5-氧代-4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基]-3-羥基芐腈，和4-[[1-(2-溴苯基)-4，5-二氫-5-甲氧基-1H-咪唑-2-基]氨基]-3-羥基芐腈；或其合適的可接受的鹽。
3.一種藥物組合物，它含有治療有效量的權(quán)利要求1的化合物，和可藥用載體或稀釋劑。
4.一個治療趨化因子介導的疾病狀態(tài)的方法，其中趨化因子結(jié)合到哺乳動物中的IL-8α或β受體上，該方法包含給上述哺乳動物施用有效劑量的權(quán)利要求1的通式化合物。
5.權(quán)利要求4的方法，其中哺乳動物患有趨化因子介導的疾病，此疾病選自下列趨化因子介導的疾病牛皮癬、特應性皮炎、關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、中風、感染性休克、內(nèi)毒素休克、葛蘭氏陰性膿毒血癥、中毒性休克綜合征、心臟和腎臟再灌注損傷、腎小球性腎炎、血栓形成、移植物抗宿主反應、阿爾茨海默氏病、同種異體移植物排斥、瘧疾、restinosis、血管生成、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松癥、齦炎或不良的造血干細胞釋放。
全文摘要
本發(fā)明涉及苯基脲在趨化因子白細胞介素－8(IL－8)介導的疾病狀態(tài)的治療中的新用途。
文檔編號A61P7/02GK1352554SQ00808133
公開日2002年6月5日 申請日期2000年5月26日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月28日
發(fā)明者M·R·帕洛維奇, K·L·威多森 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司