專利名稱：利用菇渣發(fā)酵綠色木霉的生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種生物菌劑的制備方法，屬于農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明專利是為解決目前化學(xué)農(nóng)藥的頻繁應(yīng)用，農(nóng)藥殘留在蔬菜和土壤中不斷積累，而應(yīng)用綠色木霉對(duì)多種真菌土傳病害具有明顯的預(yù)防作用。利用有機(jī)添加物為載體大量繁殖木霉菌株，進(jìn)一步鞏固兩者的協(xié)同作用，不僅補(bǔ)充土壤養(yǎng)分，增強(qiáng)抑菌效果，而且可以提高拮抗菌在土壤中的生存繁殖能力，減少農(nóng)藥在土壤中的殘留。
木霉菌對(duì)土傳病原菌的生物防治國(guó)內(nèi)外已有大量報(bào)道，許多菌株田間生產(chǎn)防效并不理想，原因之一是直接引入客土的拮抗微生物不能很好地在土壤中定殖并成為優(yōu)勢(shì)種群。有機(jī)添加物的施入在某種程度上起到“接種”作用，有機(jī)物本身已帶有大量微生物，其帶入的活性有機(jī)碳源又是微生物增殖的主要原因，因此利用有機(jī)添加物培養(yǎng)拮抗菌，不僅可以鞏固拮抗菌在土壤中的定殖，而且增強(qiáng)了抑菌效果。1991年Ophnob報(bào)道，把木霉制劑與有機(jī)肥同時(shí)施用，能使土壤微生物活性明顯提高。1999年劉瓊光報(bào)道利用拮抗細(xì)菌和土壤添加劑同時(shí)施入土壤對(duì)煙草青枯病的防治效果，顯著好于兩種單獨(dú)施用的效果。1994年上海農(nóng)科院植保所周新根報(bào)道利用由蠶豆粉、無(wú)機(jī)鹽等制成的“MX”有機(jī)添加物，滅菌后分別培養(yǎng)三種拮抗菌株，1％的添加量對(duì)辣椒疫病、番茄立枯病、猝倒病具有很好的防效，顯著高于單用。在滅菌土壤中培養(yǎng)4周后拮抗菌的種群密度比單獨(dú)施用拮抗菌的處理高50-100倍，且拮抗菌存活時(shí)間較長(zhǎng)。本研究擬采用一些土傳病害的拮抗木霉菌為拮抗菌株，利用合成有機(jī)物為載體大量繁殖。進(jìn)一步鞏固兩者的協(xié)同作用，不僅補(bǔ)充土壤養(yǎng)分，增強(qiáng)抑菌效果，而且可以激活土壤原有拮抗菌的作用。
菇渣是生產(chǎn)食用菌后的下腳料，其含有較高的蛋白質(zhì)和其他營(yíng)養(yǎng)成分，可以為微生物生長(zhǎng)提供良好營(yíng)養(yǎng)，木霉菌是食用菌生產(chǎn)過(guò)程中主要的污染菌種，適宜其生長(zhǎng)。同時(shí)發(fā)酵的菇渣可以作為肥料，改良土壤。因此采用菇渣生產(chǎn)木霉菌不僅可以降低生產(chǎn)成本，而且可以有效處理廢棄物，提高木霉菌對(duì)土傳病害的防治效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種利用菇渣生產(chǎn)木霉菌劑的制備方法。包括對(duì)多種土傳病害具有較強(qiáng)的拮抗作用的綠色木霉菌。斜面菌種保存，平皿內(nèi)活化培養(yǎng)，三角瓶液體發(fā)酵，種子罐混合發(fā)酵后，以菇渣、麥麩等吸附進(jìn)行固體發(fā)酵，干燥后而制成本菌劑。
1.菌株 用于防治蔬菜土傳病害，從土壤中分離篩選的綠色木霉菌株(Trichoderma viride，編號(hào)Tr9801)。
2.原料處理選擇無(wú)霉變的菇渣曬干后粉碎成80目粉狀備用。
3.液體發(fā)酵將斜面保存的菌種用PDA培養(yǎng)基活化，接種于500ml三角瓶?jī)?nèi)裝液體培養(yǎng)基100ml，26℃，180r振蕩培養(yǎng)，3～5d，為液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度25～28℃，通風(fēng)攪拌，發(fā)酵72小時(shí)。液體培養(yǎng)基為0.5～1％酵母粉，2～3％淀粉，1％豆?jié){，0.2～0.5％CaCO3，0.03～0.05％KH2PO4，0.01～0.02％MgSO4，PH為5.5～6.5。菌液導(dǎo)出時(shí)孢子含量107～108cfu/ml。
4.固體發(fā)酵高壓滅菌后，向固體培養(yǎng)基內(nèi)加入3～5倍重量的孢子懸浮液，于25～28℃，培養(yǎng)7～10天。固體培養(yǎng)基菇渣90.5％，麩皮5％，2％蔗糖，1％磷酸二氫鉀，1％硫酸鎂，0.4％碳酸鈣，0.1％尿素。
5.培養(yǎng)好的物料在低于50℃的條件下風(fēng)干，粉碎，包裝。
本發(fā)明的木霉菌株對(duì)多種蔬菜的土傳病害如猝倒病、立枯病及枯萎病等具有很好的防治效果，對(duì)植株生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用。利用菇渣為營(yíng)養(yǎng)載體大量繁殖木霉菌株，進(jìn)一步鞏固兩者的協(xié)同作用，不僅補(bǔ)充土壤養(yǎng)分，增強(qiáng)抑菌效果，而且可以提高木霉菌在土壤中的生存繁殖能力，且存活時(shí)間較長(zhǎng)，減少農(nóng)藥在土壤中的殘留。本發(fā)明的發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單，易于控制，成本低廉。
具體實(shí)施例方式
原料處理選擇無(wú)霉變的菇渣曬干后粉碎成80目粉狀備用。
液體培養(yǎng)500ml三角瓶?jī)?nèi)裝液體培養(yǎng)基100ml，121℃，20分鐘。晾涼后，接種木霉孢子懸浮液10ml，26℃，180r振蕩培養(yǎng)，3～5d，得到液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度25～28℃，通風(fēng)攪拌，發(fā)酵72小時(shí)，菌液導(dǎo)出時(shí)孢子含量107～108cfu/ml。液體培養(yǎng)基1L5～10克酵母粉，20～30克淀粉，10克豆?jié){，2～5克CaCO3，0.3～0.5克KH2PO4，0.1～0.2克MgSO4，PH為5.5～6.5。
固體發(fā)酵按一定比例配制培養(yǎng)基，滅菌121℃，30分鐘，冷卻后固體培養(yǎng)基放入發(fā)酵槽內(nèi)加入3～5倍重量的液體孢子發(fā)酵液，攪拌均勻，于25～28℃，培養(yǎng)7～10天。固體培養(yǎng)基1kg菇渣905克，麩皮50克，20克蔗糖，10克磷酸二氫鉀，10克硫酸鎂，4克碳酸鈣，1克尿素，含水量60％。
培養(yǎng)好的物料在低于50℃的條件下風(fēng)干，粉碎，包裝。其孢子量為107～108cfu/g。
權(quán)利要求
1.一種木霉菌劑的制備方法，利用菇渣生產(chǎn)木霉菌劑的液固兩相法發(fā)酵工藝。其特征在于，該生產(chǎn)方法是以液固兩相法結(jié)合，利用菇渣為生產(chǎn)原料進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌。
2.權(quán)利要求1所述的木霉菌生產(chǎn)方法，其特征在于，木霉菌種為綠色木霉(Trichoderma viride，編號(hào)為Tr9801)。
3.權(quán)利要求1所述的木霉菌生產(chǎn)方法，其特征在于，原料處理，選擇無(wú)霉變的菇渣曬干后粉碎成80目粉狀備用。
4.權(quán)利要求1所述的木霉菌生產(chǎn)方法，其特征在于，液體發(fā)酵，液體培養(yǎng)基為0.5～1％酵母粉，2～3％淀粉，1％豆?jié){，0.2～0.5％CaCO3，0.03～0.05％KH2PO4，0.01～0.02％MgSO4，PH為5.5～6.5。先在500ml三角瓶?jī)?nèi)裝液體培養(yǎng)基100ml，26℃，180r振蕩培養(yǎng)，3～5d，為液體菌種。以10％(V/V)接種量加入種子發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度25～28℃，通風(fēng)攪拌，發(fā)酵72小時(shí)。
5.權(quán)利要求1所述的木霉菌生產(chǎn)方法，其特征在于，固體發(fā)酵，固體培養(yǎng)基菇渣90.5％，麩皮5％，2％蔗糖，1％磷酸二氫鉀，1％硫酸鎂，0.4％碳酸鈣，0.1％尿素。高壓滅菌30～40分鐘，物料冷卻后接入加入3～5倍重量的權(quán)利要求4的發(fā)酵液，攪拌均勻，于25～28℃，培養(yǎng)7～10天。
6.培養(yǎng)好的物料在低于50℃的條件下風(fēng)干，粉碎，包裝。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域。為解決目前化學(xué)農(nóng)藥的頻繁應(yīng)用，農(nóng)藥殘留在蔬菜和土壤中不斷積累，而應(yīng)用生物制劑綠色木霉對(duì)多種真菌土傳病害具有明顯的預(yù)防作用，從而制定的一種產(chǎn)孢量大、發(fā)酵時(shí)間短的生產(chǎn)工藝。技術(shù)要點(diǎn)是利用菇渣為原料，液固兩相法發(fā)酵生產(chǎn)菌劑。原料易得，成本低廉，工藝簡(jiǎn)單。生產(chǎn)的菌劑不僅預(yù)防土傳病害，而且可以促進(jìn)植物生長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于連作重茬嚴(yán)重的保護(hù)地蔬菜生產(chǎn)引起的土傳病害預(yù)防和防治，還可以作為蔬菜育苗的基質(zhì)，培育壯苗。
文檔編號(hào)C12R1/885GK101063088SQ20071005718
公開(kāi)日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2007年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月24日
發(fā)明者郝永娟, 王正祥, 王萬(wàn)立, 劉春艷, 王勇, 楊秀榮 申請(qǐng)人:天津市植物保護(hù)研究所