本發(fā)明涉及微生物，特別涉及一種柚香煙草提取物的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、煙氣香味是評(píng)定卷煙產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)，優(yōu)質(zhì)卷煙在燃吸過程中產(chǎn)生的香氣量大質(zhì)純，吃味醇和。隨著吸煙與健康問題日益引起人們關(guān)注，各煙草企業(yè)積極研制開發(fā)低焦油含量的卷煙，制煙工藝上廣泛采用了添加煙草薄片、梗絲膨化、盤紙打孔等技術(shù)，致使卷煙在焦油含量降低的同時(shí)，煙氣中香氣的傳輸量減少，香氣不足。因此，現(xiàn)有技術(shù)中，通過添加香精香料等方式來彌補(bǔ)減害降焦所造成的香氣量損失是一種較為常用的技術(shù)手段。

2、由于煙草產(chǎn)品直接吸食的特殊性，因此現(xiàn)有技術(shù)中補(bǔ)充煙草產(chǎn)品香氣量時(shí)一般主要采用天然來源的香精香料，以保證煙草產(chǎn)品的安全性。其中煙草提取物即是一種較為常見的補(bǔ)充和改善煙草香氣及其可吸食性的物質(zhì)成分。

3、現(xiàn)有技術(shù)中，煙草提取物一般由煙草物料經(jīng)水提或醇提并進(jìn)一步減壓濃縮后即可應(yīng)用，而煙草中的一些重要致香前體物如類胡蘿卜素、葉綠素等一方面不溶于水和醇，另一方面需要經(jīng)過降解轉(zhuǎn)化才能生成香味物質(zhì)，雖然有采用微生物或酶制劑進(jìn)一步發(fā)酵或酶解處理方式來增加煙草提取物的香氣量。但實(shí)際使用效果表明，這種改進(jìn)方式所得煙草提取物香氣類型仍然比較單一，無法充分滿足提高和改善煙草香氣的目的，因此就煙草提取物仍有進(jìn)一步研究的必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種柚香煙草提取物的制備方法及應(yīng)用，用于卷煙產(chǎn)品可提高煙氣香氣質(zhì)、香氣量、減少雜氣、提高透發(fā)性。

2、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

3、一種柚香煙草提取物的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)取新黃質(zhì)與吐溫80，按質(zhì)量比1:10形成懸浮液，將懸浮液溶解于二氯甲烷中，減壓蒸餾將二氯甲烷蒸出，加入無水乙醇使新黃質(zhì)的濃度為50mg/ml；

5、(2)將煙葉打磨至200目的煙粉，與水按質(zhì)量比1:7-1:15混合，121℃滅菌15min，加入新黃質(zhì)溶液，使新黃質(zhì)的濃度為2g/l；

6、(3)挑取變棲克雷伯氏菌hnyj-3和腸桿菌hnyj-4分別接種于lb液體培養(yǎng)基中，35-40℃、120-200rpm，振蕩培養(yǎng)24-48h，形成種子液；

7、(4)將變棲克雷伯氏菌hnyj-3種子液、腸桿菌hnyj-4種子液按質(zhì)量比(5-7):(3-5)混合，總接種量1-6％將種子液接種于煙草和新黃質(zhì)混合液，35-40℃、120-200rpm，振蕩培養(yǎng)48-96h；

8、(5)對(duì)發(fā)酵后的混合液進(jìn)行離心，取上清液，加入2倍體積的乙酸乙酯、正己烷、無水乙醇混合溶液，震蕩萃取1-2h，取上清液，在60℃，旋蒸，按體積比1:1加入無水乙醇，在-22℃放置24h，離心得上清液，再次旋蒸，加入10-30％丙二醇得到柚香煙草提取物。

9、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所述變棲克雷伯氏菌(klebsiella?variicola)hnyj-3，于2024年1月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通生物中心，保藏編號(hào)cgmccno.29654；所述腸桿菌(enterobacter?sp.)hnyj-4，于2024年1月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通生物中心，保藏編號(hào)cgmcc?no.29655。

10、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(3)中，所述lb培養(yǎng)基包括：nacl10g/l，蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l。

11、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(3)中，培養(yǎng)條件為：35℃、150rpm，振蕩培養(yǎng)24h，od600值1.8。

12、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(4)中，變棲克雷伯氏菌hnyj-3種子液、腸桿菌hnyj-4種子液的質(zhì)量比為7:3，總接種量4％將種子液接種于煙草和新黃質(zhì)混合液，35℃、150rpm，振蕩培養(yǎng)72h。

13、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(5)中，所述乙酸乙酯、正己烷、無水乙醇體積比為5:4:2，震蕩萃取2h，取上清液，在60℃，60mbar旋蒸至密度1.09，按照1:1體積加入無水乙醇，在-22℃放置24h，離心得上清液，再次旋蒸至密度1.2，加入10％丙二醇得到柚香煙草提取物。

14、一種柚香煙草提取物在卷煙中的應(yīng)用，所述柚香煙草提取物是根據(jù)上述制備方法制備得到的。

15、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所述應(yīng)用為將柚香煙草提取物與水按質(zhì)量比1:(20-200)稀釋，而后添加0.5-1ul/支到常規(guī)卷煙或加熱卷煙中；或者，將柚香煙草提取物與水按質(zhì)量比1:(2000-20000)稀釋，按照10-15％噴灑于煙絲上，放置2-6h，卷制成卷煙。

16、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所得柚香煙草提取物與水按照質(zhì)量比1:100稀釋，而后添加0.7ul/支到常規(guī)卷煙或加熱卷煙。

17、本發(fā)明上述技術(shù)方案，具有如下有益效果：

18、本申請(qǐng)的煙草提取物應(yīng)用于卷煙產(chǎn)品可提高煙氣香氣質(zhì)、香氣量、減少雜氣、提高透發(fā)性。本申請(qǐng)利用變棲克雷伯氏菌hnyj-3和腸桿菌hnyj-4發(fā)酵新黃質(zhì)和煙草混合物可產(chǎn)生圓柚酮、α-松露醇、紫蘇酮、香芹酮、二氫香芹酮等致香成分，圓柚酮有甜柚、木香香韻；α-松露醇具有甜香、花香；紫蘇酮具有清香；香芹酮具有藥香、薄荷涼味；可豐富煙氣提高煙草提取物品質(zhì)。

技術(shù)特征：

1.一種柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，所述變棲克雷伯氏菌(klebsiella?variicola)hnyj-3，于2024年1月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通生物中心，保藏編號(hào)cgmccno.29654；所述腸桿菌(enterobacter?sp.)hnyj-4，于2024年1月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通生物中心，保藏編號(hào)cgmccno.29655。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述lb培養(yǎng)基包括：nacl?10g/l，蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，培養(yǎng)條件為：35℃、150rpm，振蕩培養(yǎng)24h，od600值1.8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，變棲克雷伯氏菌hnyj-3種子液、腸桿菌hnyj-4種子液的質(zhì)量比為7:3，總接種量4％將種子液接種于煙草和新黃質(zhì)混合液，35℃、150rpm，振蕩培養(yǎng)72h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柚香煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述乙酸乙酯、正己烷、無水乙醇體積比為5:4:2，震蕩萃取2h，取上清液，在60℃，60mbar旋蒸至密度1.09，按體積比1:1加入無水乙醇，在-22℃放置24h，離心得上清液，再次旋蒸至密度1.2，加入10％丙二醇得到柚香煙草提取物。

7.一種柚香煙草提取物在卷煙中的應(yīng)用，其特征在于，所述柚香煙草提取物是根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述制備方法制備得到的。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為將柚香煙草提取物與水按質(zhì)量比1:(20-200)稀釋，而后添加0.5-1ul/支到常規(guī)卷煙或加熱卷煙中；或者，將柚香煙草提取物與水按質(zhì)量比1:(2000-20000)稀釋，按照10-15％噴灑于煙絲上，放置2-6h，卷制成卷煙。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所得柚香煙草提取物與水按質(zhì)量比1:100稀釋，而后添加0.7ul/支到常規(guī)卷煙或加熱卷煙。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種柚香煙草提取物的制備方法及應(yīng)用，該柚香煙草提取物制備方法包括：將新黃質(zhì)與吐溫80混合溶解于二氯甲烷中，減壓蒸餾后加入無水乙醇；將煙葉打磨成煙粉，與水混合滅菌，加入新黃質(zhì)溶液；將變棲克雷伯氏菌HNYJ?3和腸桿菌HNYJ?4接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)種子液，將兩種種子液混合接種于煙草和新黃質(zhì)混合液，振蕩培養(yǎng)發(fā)酵；發(fā)酵后離心萃取，旋蒸，加入無水乙醇和丙二醇，得柚香煙草提取物。本申請(qǐng)利用兩菌株發(fā)酵新黃質(zhì)和煙草混合物產(chǎn)生圓柚酮、α?松露醇、紫蘇酮、香芹酮、二氫香芹酮等致香成分，應(yīng)用于卷煙產(chǎn)品可提高煙氣香氣質(zhì)、香氣量、減少雜氣、提高透發(fā)性。

技術(shù)研發(fā)人員：張婷婷,楊金初,馮穎杰,鄭峰洋,楊宗燦,劉文召,郝輝,賈國濤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26