本發(fā)明涉及煙草香料技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種檸檬發(fā)酵型煙用香料及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

檸檬是一種具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的水果，其含有豐富的維生素c，研究表明吸煙的人需要的維生素c是不吸煙者的二倍，另外抽煙者容易生痰，而檸檬可袪痰，且袪痰功效比橙和柑還要強(qiáng)，因此選擇檸檬作為原料，開發(fā)一種新型的煙用發(fā)酵香料。

當(dāng)前，中式卷煙調(diào)香香料主要采用傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取技術(shù)獲得，此方法獲得的香料存在很多不足，已經(jīng)不能完全滿足當(dāng)前卷煙調(diào)香高品質(zhì)的需求，而利用生物技術(shù)處理后得到的香料除自然香韻外，還能增加濃厚的釀香香韻，給予抽吸卷煙特殊的口感。本發(fā)明從廣西梧州產(chǎn)的六堡茶中篩選出一株優(yōu)勢(shì)菌株，經(jīng)鑒定為塔賓曲霉。該塔賓曲霉菌株能分泌多種生物酶，在發(fā)酵過程中可以增加檸檬發(fā)酵的香氣，賦予其特別的抽吸口感。

現(xiàn)有技術(shù)中，有以檸檬為原料，制備果汁、發(fā)酵酒的方法，但是還沒有塔賓曲霉發(fā)酵檸檬煙用香料出現(xiàn)，更沒有將其添加到卷煙濾棒中進(jìn)行卷煙調(diào)香的應(yīng)用報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種檸檬發(fā)酵型煙用香料及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明利用微生物發(fā)酵技術(shù)處理檸檬，通過一系列的分解、合成、轉(zhuǎn)化等生化反應(yīng)，增加更豐富的釀香香味成分，從而豐富煙香，改善卷煙抽吸口感，開發(fā)出一種新型煙用發(fā)酵香料；本發(fā)明同時(shí)提供了所述煙用發(fā)酵香料的制備方法及所述煙用發(fā)酵香料在卷煙調(diào)香中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的一種檸檬發(fā)酵型煙用香料的制備方法，包括以下步驟：

以檸檬為原料，用菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501發(fā)酵，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的1％，在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵8d，發(fā)酵結(jié)束后對(duì)其進(jìn)行真空抽濾、離心分離以及用0.2微米的雙層濾膜過濾提純，即得到所需的發(fā)酵香料；對(duì)其發(fā)酵后的香料進(jìn)行真空抽濾、離心分離以及雙層濾膜過濾三個(gè)步驟進(jìn)行。

所述菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501已于2014年9月17日保藏在位于中國(guó)武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：m2014425。

本發(fā)明提供的一種檸檬發(fā)酵型煙用香料的制備方法，優(yōu)選技術(shù)方案為：

1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機(jī)將檸檬打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；

2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；

3.接種：在無(wú)菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的0.5％～2.0％；

4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵4～12d；

5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向?yàn)V渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；

6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個(gè)大氣壓；

7.回溶：將其浸膏用無(wú)水乙醇充分回溶；

8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料。

本發(fā)明同時(shí)提供了所述煙用發(fā)酵香料應(yīng)用方法：上述檸檬發(fā)酵香料，用于煙用香精的調(diào)配，或者直接進(jìn)行煙草加香。具體是將所述的檸檬發(fā)酵香料用丙二醇稀釋到(2-6)wt％，然后添加(0.2-1)μl到香煙中，采用的是微型注射器對(duì)香煙進(jìn)行濾棒注射進(jìn)樣。

本發(fā)明中使用微生物菌株為塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501，其通過如下途徑獲得：將茶葉(約0.5g)剪碎放入裝有200ml2％蔗糖察氏液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在培養(yǎng)溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床中，培養(yǎng)42h后可得到中央為棕色的白色菌絲球。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明利用塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501生產(chǎn)發(fā)酵型煙用香料，所制備的發(fā)酵型煙用香料其不僅具有檸檬特有的天然香韻，而且還有濃厚的釀香香韻；將該香料進(jìn)行卷煙嘴棒加香試驗(yàn)，結(jié)果表明，該香原料能夠豐富煙香，抽吸時(shí)口感舒適、余味好，而且煙氣變得柔和細(xì)膩。本發(fā)明應(yīng)用微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)發(fā)酵型煙用香料，為新型香原料的開發(fā)提供了一條新途徑。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的有關(guān)技術(shù)問題作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1

1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機(jī)將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；

2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；

3.接種：在無(wú)菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的0.5％；

4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵4d；

5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向?yàn)V渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；

6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個(gè)大氣壓。

7.回溶：將其浸膏用無(wú)水乙醇充分回溶

8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)檸檬天然果香味香氣突出，而釀香風(fēng)味不足。

實(shí)施例2

1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機(jī)將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；

2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；

3.接種：在無(wú)菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的1％；

4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵8d，；

5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向?yàn)V渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；

6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個(gè)大氣壓；

7.回溶：將其浸膏用無(wú)水乙醇充分回溶；

8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)不僅檸檬天然果香味突出，而且釀香風(fēng)味也明顯爆發(fā)，兩種香味相得益彰。

實(shí)施例3

1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機(jī)將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；

2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；

3.接種：在無(wú)菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的2％；

4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵12d；

5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向?yàn)V渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；

6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個(gè)大氣壓；

7.回溶：將其浸膏用無(wú)水乙醇充分回溶；

8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)釀香風(fēng)味顯著，但是少了天然的香氣。

實(shí)施例4

塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501獲得：將茶葉(約0.5g)剪碎放入裝有200ml2％蔗糖察氏液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在培養(yǎng)溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床中，培養(yǎng)42h后可得到中央為棕色的白色菌絲球。

實(shí)施例5

以實(shí)施例2中所制備的發(fā)酵型煙用香料為例，進(jìn)行在卷煙中應(yīng)用研究的說明。將檸檬發(fā)酵型煙用香料用95％乙醇稀釋到3％，靜置兩天；然后用微型注射器對(duì)空白香煙嘴棒進(jìn)行注射進(jìn)樣0.5μl95％乙醇，標(biāo)注為a0組；對(duì)空白香煙嘴棒進(jìn)行注射進(jìn)樣0.5μl發(fā)酵香料，標(biāo)注為a1組。進(jìn)樣后的香煙放在密封袋，室溫保存一周，待感官評(píng)吸。

6人組成評(píng)吸小組，評(píng)吸結(jié)果表明，發(fā)酵型煙用香料其不僅具有檸檬特有的天然香韻，而且還有濃厚的釀香香韻；將該香料進(jìn)行卷煙加香試驗(yàn)，結(jié)果表明，該香原料能夠豐富煙香，煙氣變得柔和細(xì)膩，抽吸時(shí)口感舒適，降低了口腔刺辣感，改善了卷煙吸味。