一種茶葉揮發(fā)性精油在制備防癌保健品或抗癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于茶葉精深加工技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種茶葉揮發(fā)性精油在制備防癌保 健品或抗癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國(guó)飲茶歷史悠久，茶樹(shù)資源豐富，運(yùn)為飲茶者提供了得天獨(dú)厚的條件。茶是最受 人們歡迎的健康飲料之一，茶葉中含有茶蛋白、茶多酪、茶多糖、咖啡堿、茶葉皂巧等多種功 效成分，具有抗腫瘤、降血糖、降血脂、降血壓、抗氧化和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理功能，作為 保健食品和藥品具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。
[0003] 茶葉香氣物質(zhì)種類(lèi)豐富，含量卻極微，一般占茶葉干物質(zhì)含量的0.01~0.05%，綠 茶約為0.005~0.02%，紅茶約為0.0 l~0.03%，烏龍茶約為0.05 %。茶葉香氣物質(zhì)按有機(jī) 化學(xué)分類(lèi)法可分為碳氨化合物、醇類(lèi)、醒類(lèi)、酬類(lèi)、酸類(lèi)、醋類(lèi)、內(nèi)醋類(lèi)、酪類(lèi)、氧雜類(lèi)化合物、 含硫類(lèi)化合物、含氮類(lèi)化合物等，其中W醇類(lèi)、酬類(lèi)、醋類(lèi)、醒類(lèi)和碳氨化合物為主。香氣含 量最高的烏龍茶，其香氣因產(chǎn)地環(huán)境、茶樹(shù)品種、鮮葉原料、制作工藝、品質(zhì)等級(jí)、膽存方法 等不同而表現(xiàn)出各自特有的香氣特征，尤W制作工藝影響較大:發(fā)酵程度輕者，其香氣成分 中澄花叔醇、萊莉內(nèi)醋、嗎I噪等含量較高;發(fā)酵程度重者，芳精醇及其氧化產(chǎn)物、香葉醇、苯 甲醇等成分含量較高。茶葉深加工方面，茶葉水提取制備速溶茶、濃縮茶汁用于茶飲料加工 得到廣泛應(yīng)用，茶葉中分離的茶多酪包括其中的兒茶素廣泛用于食品添加劑或生產(chǎn)保健食 品，部分甚至用于醫(yī)藥領(lǐng)域如消炎藥及做抗癌研究，但茶葉的揮發(fā)性精油即香氣物質(zhì)，其保 健功能應(yīng)用很少在加工中得W重視。有專(zhuān)利采用控類(lèi)及其衍生物(源自油脂衍生)對(duì)6大茶 類(lèi)茶葉的揮發(fā)性精油進(jìn)行了選擇性的萃取，有專(zhuān)利利用相關(guān)分解酶處理茶葉后制備高香氣 的茶葉提取物，還有專(zhuān)利利用微波結(jié)合離子液體進(jìn)行茶葉香氣的提取并用于分析。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種茶葉揮發(fā)性精 油在制備防癌保健品或抗癌藥物中的應(yīng)用。該方法簡(jiǎn)單，快速。
[0005] 本發(fā)明的目的通過(guò)W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種茶葉揮發(fā)性精油在制備防癌保健品或抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0007] 所述防癌保健品或抗癌藥物是指防治或者治療具有釀還原酶(QR)誘導(dǎo)效應(yīng)的癌 癥的保健品或藥品。
[000引所述茶葉揮發(fā)性精油是W茶葉為原料，優(yōu)選通過(guò)同時(shí)蒸饋萃取法提取得到的。也 可W采用其他方法制備得到。
[0009]所述同時(shí)蒸饋萃取法具體按照W下步驟:將茶葉原料研磨粉碎，按照每克茶葉原 料添加5~20ml水的比例添加水，得到茶水混合物；W二氯甲燒作為萃取劑，利用同時(shí)蒸饋 萃取裝置等方法進(jìn)行提取，提取時(shí)間為60min~ISOmin;將所制得的溶液轉(zhuǎn)入樣品瓶中氮吹 干燥，得到茶葉精油。
[0010] 所述利用同時(shí)蒸饋萃取裝置進(jìn)行提取具體按照W下步驟:茶水混合物置于圓底燒 瓶中，連接于蒸饋萃取裝置的一端，并用電熱套加熱，保持微沸;蒸饋萃取裝置的另一端連 接裝有二氯甲燒的圓底燒瓶，用水浴鍋加熱，溫度保持在55°c。
[0011] 當(dāng)茶葉用量<50克時(shí)，所述二氯甲燒的用量是50mL當(dāng)茶葉用量>50克時(shí)，所述二 氯甲燒的用量是茶葉克數(shù)對(duì)應(yīng)數(shù)量的毫升數(shù)。
[0012] 所述茶葉為紅茶、綠茶、青茶、黃茶、白茶和黑茶。
[0013] 本發(fā)明W茶葉揮發(fā)性精油對(duì)W小鼠肝癌細(xì)胞化palclc7為代表誘導(dǎo)其釀還原酶 (QR)活性提高為抗癌活性評(píng)價(jià)，茶葉揮發(fā)性精油對(duì)化palck7癌細(xì)胞株具有較好的抑制作 用，是一種潛在的防癌抗癌活性物質(zhì)。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下的優(yōu)點(diǎn)及有益效果：
[0015] (1)本發(fā)明提取得到的茶葉揮發(fā)性精油具有較強(qiáng)的防癌保健和抗癌效果，且本發(fā) 明所設(shè)及的同時(shí)蒸饋萃取法及相關(guān)法操作簡(jiǎn)單易行，成本低，精油的回收率高；因此，具有 較高的實(shí)際應(yīng)用和推廣價(jià)值。
[0016] (2)本發(fā)明得到的茶葉精油能夠應(yīng)用于芳香療法中，不僅能夠舒緩情緒，消除焦 慮，并且還具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的保健功效，具有良好的應(yīng)用前景，可W應(yīng)用于醫(yī)藥、保健 品和日化行業(yè)。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0018] 實(shí)施例1茶葉揮發(fā)性精油的制備方法
[0019] (1)稱(chēng)取25g磨碎茶樣于IL圓底燒瓶中，按照每克茶葉原料添加5~20ml水的比例 添加一級(jí)水，連接于同時(shí)蒸饋萃取裝置的一端，并用電熱套加熱，保持微沸；另一端連接裝 有50mL二氯甲燒的圓底燒瓶，用水浴鍋加熱，溫度保持在55°C ;提取時(shí)間為60~1 SOmin。
[0020] (2)提取結(jié)束后收集饋出液轉(zhuǎn)入樣品瓶中，氮吹揮干二氯甲燒，得到茶葉揮發(fā)性精 油樣品。
[0021] 實(shí)施例2茶葉揮發(fā)性精油抗腫瘤細(xì)胞體外功效研究，包括W下步驟：
[0022] (1)制備化pal Cl八小鼠肝癌細(xì)胞懸液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、狀態(tài)良好的細(xì)胞，用0.25% 膜蛋白酶(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))消化，用培養(yǎng)基配制成5X IO3個(gè)細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸液，接種于96孔培 養(yǎng)板中，每孔20化L，接種兩塊板。37°C ,5% (體積百分?jǐn)?shù))C〇2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞24h。
[0023] (2)按照一定劑量將茶葉揮發(fā)性精油用含10 %胎牛血清的a-MEM培養(yǎng)液(體積百分 數(shù))配置成含樣品的一定濃度溶液，每孔加入15化L溶液，將不加入小鼠肝癌細(xì)胞組作為空 白對(duì)照組，對(duì)照組加等量新鮮培養(yǎng)液。37 °C，5 % C〇2培養(yǎng)箱(體積百分?jǐn)?shù)）中繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。
[0024] (3)培養(yǎng)24h后，兩塊板分為A板和B板。
[002引細(xì)胞存活率的測(cè)定
[0026] A板加入0.2% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù))的結(jié)晶紫，每孔100化，室溫(20-25°C)放置10-15min， 在水中漂洗后用紙吸干水分。加入0.5 % SDS (質(zhì)量百分?jǐn)?shù))溶液，在搖床上10化pm，37 °C振蕩 化后，用酶標(biāo)儀于610nm處測(cè)吸光度值(OD值）。
[0027] 釀還原酶(QR)的測(cè)定
[002引 B板加入50化0.08%的洋地黃皂巧（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)），在10化pm搖床上，37°C振蕩〉 0.5h。然后將反應(yīng)體系：酶液、MTT、甲糞釀混合后倒入加樣槽中，迅速加入20化L/well酶反 應(yīng)液。使用酶標(biāo)儀利用動(dòng)力學(xué)法在490nm，Imin測(cè)定一次。
[0029] (4)計(jì)算方法
[0032] 樣品的相對(duì)QR活性用CD值表示，其定義為相對(duì)QR活性達(dá)到倍增時(shí)對(duì)應(yīng)的樣品濃 度，當(dāng)細(xì)胞活力大于0.5，且相對(duì)QR活性大于2時(shí)，認(rèn)為樣品具有誘導(dǎo)釀還原酶的活性即具有 抗癌活性。
[0033] 實(shí)施例3茶葉精油的抗癌活性評(píng)價(jià)(一）
[0034] 將紅茶、綠茶、黑茶、白茶、青茶、黃茶共6大茶類(lèi)代表采用實(shí)施例1的方法得到茶葉 揮發(fā)性精油，使用實(shí)施例2所述的方法，通過(guò)線(xiàn)性擬合曲線(xiàn)得到誘導(dǎo)釀還原酶產(chǎn)生倍增的具 體濃度。
[0035] 表1. 6大茶類(lèi)茶葉精油誘導(dǎo)釀還原酶產(chǎn)生倍增的濃度(iig/ml)
[0037] W上結(jié)果是=次平行實(shí)驗(yàn)的平均值
[0038] 根據(jù)表1結(jié)果表明：不同茶類(lèi)的茶揮發(fā)油濃度在3~30yg/mL的范圍內(nèi)能誘導(dǎo)釀還 原酶倍增即起到抗癌作用。說(shuō)明茶葉揮發(fā)性精油是一種潛在的防癌抗癌活性物質(zhì)。
[0039] 實(shí)施例4茶葉精油的抗癌活性評(píng)價(jià)(二）
[0040] 將不同香型不同季節(jié)烏龍茶(青茶)采用實(shí)施例1的方法得到茶葉揮發(fā)性精油，使 用實(shí)施例2所述的方法，通過(guò)線(xiàn)性擬合曲線(xiàn)得到誘導(dǎo)釀還原酶產(chǎn)生倍增的具體濃度。
[0041] 表2.不同香型不同季節(jié)鳳凰單從茶(青茶)等誘導(dǎo)QR產(chǎn)生倍增的濃度(iig/mU
[0044] W上結(jié)果是=次平行實(shí)驗(yàn)的平均值
[0045] 根據(jù)表2結(jié)果表明：不同香型不同季節(jié)的鳳凰單從烏龍茶揮發(fā)油濃度在3~30yg/ mL的范圍內(nèi)同樣能誘導(dǎo)釀還原酶倍增即起到抗癌作用。說(shuō)明茶葉揮發(fā)性精油是一種潛在的 防癌抗癌活性物質(zhì)。
[0046] 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種茶葉揮發(fā)性精油在制備防癌保健品或抗癌藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述防癌保健品或抗癌藥物是指防治或者 治療具有醌還原酶誘導(dǎo)效應(yīng)的癌癥的保健品或藥品。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述茶葉揮發(fā)性精油是以茶葉為原料，通 過(guò)同時(shí)蒸餾萃取法提取得到的。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述同時(shí)蒸餾萃取法具體按照以下步驟： 將茶葉原料研磨粉碎，按照每克茶葉原料添加5~20ml水的比例添加水，得到茶水混合物； 以二氯甲烷作為萃取劑，利用同時(shí)蒸餾萃取裝置等方法進(jìn)行提取，提取時(shí)間為60min~ 180min;將所制得的溶液轉(zhuǎn)入樣品瓶中氮吹干燥，得到茶葉精油。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述利用同時(shí)蒸餾萃取裝置進(jìn)行提取具體 按照以下步驟:茶水混合物置于圓底燒瓶中，連接于蒸餾萃取裝置的一端，并用電熱套加 熱，保持微沸；蒸餾萃取裝置的另一端連接裝有二氯甲烷的圓底燒瓶，用水浴鍋加熱，溫度 保持在55°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：當(dāng)茶葉用量<50克時(shí)，所述二氯甲烷的用 量是50mL;當(dāng)茶葉用量>50克時(shí)，所述二氯甲烷的用量是茶葉克數(shù)對(duì)應(yīng)數(shù)量的毫升數(shù)。7. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述茶葉為紅茶、綠茶、青茶、黃茶、白 茶和黑茶。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于茶葉加工領(lǐng)域，公開(kāi)了一種茶葉揮發(fā)性精油在制備防癌保健品或抗癌藥物中的應(yīng)用。所述防癌保健品或抗癌藥物是指防治或者治療具有醌還原酶誘導(dǎo)效應(yīng)的癌癥的保健品或藥品。茶葉揮發(fā)性精油是以茶葉為原料，通過(guò)同時(shí)蒸餾萃取法提取得到的。獲得的茶葉揮發(fā)性精油不僅具有令人愉悅的氣味，能舒緩焦慮情緒，而且還具有一定的抗癌效果，6大茶類(lèi)包括紅茶、綠茶、青茶、黃茶、白茶和黑茶提取的揮發(fā)性精油濃度在3～30μg/ml的范圍內(nèi)能誘導(dǎo)醌還原酶倍增即起到抗癌作用。研究結(jié)果表明茶葉揮發(fā)性精油通過(guò)誘導(dǎo)醌還原酶起到抗癌作用，是一種潛在的抗癌活性物質(zhì)，可以制備防癌保健品和抗癌藥物。
【IPC分類(lèi)】A61K36/82, A61P35/00, A23L33/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105559074
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610077038
【發(fā)明人】陳忠正, 李斌, 張媛媛, 林曉蓉, 燕妮, 高雄, 李曉飛, 李曉玲
【申請(qǐng)人】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2016年2月3日