一種抑菌保護劑以及制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，具體設及一種抑菌保護劑W及制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 目前，天然物質(zhì)用于食品保鮮已達到市場份額的25%，并且W每年6%-10%速度 遞增。世界食品供應量的25%被微生物污染。我國雖然對于食品法規(guī)越來越開放，但對食品 安全要求則是越來越嚴格。隨著人們消費水平及意識的提高，天然的、安全的食品成為消費 者的主要消費趨勢。而天然抑菌成分主要分動物源抑菌成分、植物源抑菌成分W及微生物 源抑菌成分。由于微生物源抑菌劑具有易獲取、來源廣、成本低、便于擴大培養(yǎng)等諸多優(yōu)勢， 成為近年食品保鮮劑開發(fā)的一個重要的方向。
[0003] 乳制品作為易變質(zhì)食品之一，如何保留乳品原有的品質(zhì)及特性，避免受到微生物 等因素的影響，始終是乳品加工、運輸、和膽存過程中的重要問題。乳制品抑菌方式包括乳 制品內(nèi)源的成分作用，如具有廣譜抑菌特性的抗菌膚、乳鐵蛋白及其水解產(chǎn)物乳鐵素、微生 物發(fā)酵產(chǎn)生的有機酸等，均可作為食品的天然防腐劑;另有學者研究發(fā)現(xiàn)，德氏乳桿菌保加 利亞亞種、嗜熱鏈球菌、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等可W取代在腸道中生長的多 數(shù)腐敗細菌，減少由腐敗菌產(chǎn)生的易腐敗代謝物，延長了乳制品的保質(zhì)期。
[0004] 除產(chǎn)品內(nèi)源的抑菌體系外，從其他來源提取天然抑菌成分添加到產(chǎn)品中也成為乳 制品防腐的重要手段。此類外源抑菌成分主要包括抑菌類酶制劑、天然精油、多酪類等。如 目前研究最透徹、應用最廣的是乳酸鏈球菌膚(Nisin) ,Nisin能有效地控制有害細菌，特別 是耐熱的芽抱桿菌及梭菌的生長和繁殖，W達到延長不同乳制品貨架期的目的。然而，與乳 制品內(nèi)源性抑菌體系相比，添加的外源抑菌成分存在作用范圍小、不具廣譜抑菌性的弊端。 并且為保證食品的安全性，按規(guī)定可添加于乳制品中的抑菌物質(zhì)種類有限，Nisin因具有用 量少、抗菌能力強等特點，是唯一可用于乳制品的抑菌添加劑，其他成分添加劑對人體可能 會產(chǎn)生一定的毒性，一定程度上限制了乳制品的抑菌物質(zhì)的開發(fā)，為開發(fā)長貨架期的乳制 品帶來一定困難。故此現(xiàn)階段缺少一種作用范圍廣，具廣譜抗菌性的，高效的，容易獲取，能 夠大規(guī)模生產(chǎn)并應用于乳制品的外源抑菌成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術問題是針對目前用于乳制品中添加的外源抑菌成分存在著 不具廣譜抑菌性、作用范圍小，能確保安全無毒的種類極少等缺陷，本發(fā)明提供了一種抑菌 保護劑及其制備方法和應用，該抑菌保護劑來源于微生物，作用范圍廣且具廣譜抑菌性，天 然，安全，制備方法簡單可靠，適合大規(guī)模生產(chǎn)W及在乳制品市場中應用。
[0006] 為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案之一是，一種抑菌保護劑的制備方 法，所述制備方法包括W下步驟：
[0007] 1)將桑黃子實體粉碎后加入乙醇中，進行乙醇浸提；
[000引2)將步驟1)乙醇浸提后所得混合物過濾，分別得到殘渣和浸提液；
[0009] 3)將步驟2)所得浸提液濃縮至乙醇揮發(fā)完全，得到的濃縮物，即抑菌保護劑。
[0010] 本發(fā)明步驟1)為:將桑黃子實體粉碎后加入乙醇中，進行乙醇浸提。其中，本發(fā)明 步驟1)所述的桑黃子實體為桑黃(Phellinus baumii)菌種栽培得到。所述栽培條件為常 規(guī)，只要能由桑黃菌種得到桑黃子實體即可。桑黃作為一種珍貴的傳統(tǒng)藥用真菌，它最早記 載于《藥性論》，傳統(tǒng)中醫(yī)認為桑黃味甘辛，是國際認同的食品領域中相率最高的一種食藥 用真菌。目前，對于桑黃子實體水提物的生物活性有諸多報道，如抗氧化、抗衰老、提高免疫 力、抗突變、抗纖維化、抗肺炎等諸多生物功效。所述的桑黃子實體較佳地在粉碎前經(jīng)過干 燥，所述的干燥為常規(guī)干燥方法。所述的粉碎為常規(guī)的，較佳地為使用粉碎機粉碎子實體， 更佳地為將桑黃子實體粉碎至約0.5~3cm 3的顆粒，最佳地為將桑黃子實體粉碎成為約Icm3 的顆粒。所述的乙醇為常規(guī)的，較佳地為濃度為70%~100%的乙醇，更佳地為濃度為75% ~95%的乙醇，最佳地為濃度為85%~95%的乙醇，所述百分比為體積百分比;所述乙醇的 用量是常規(guī)的，較佳地為5~30倍體積的乙醇，更佳地為10~20倍體積的乙醇，最佳地為15 ~20倍體積的乙醇，所述體積倍數(shù)相對于桑黃子實體體積。所述的乙醇浸提為常規(guī)的，較佳 地浸提時間為12~48小時化），更佳地浸提時間為12~36小時，最佳地浸提時間為24~36小 時，浸提溫度為常規(guī)溫度，較佳為室溫，更佳為l〇°C~40°C，最佳為25°C~30°C。
[0011] 本發(fā)明步驟2)為:將步驟1)乙醇浸提后所得混合物過濾，分別得到殘渣和浸提液。 其中，所述的過濾是常規(guī)的，較佳的是使用4層紗布進行過濾。
[0012] 本發(fā)明所述制備方法在步驟3)之前較佳地還包括步驟2'）即將步驟2)所述的殘渣 再次進行乙醇浸提，將所得浸提液與步驟2)所得浸提液合并。
[0013] 本發(fā)明步驟3)為:將步驟2)所得浸提液濃縮至乙醇揮發(fā)完全，得到的濃縮物，即抑 菌保護劑。其中，所述的濃縮為常規(guī)的，較佳地為在減壓狀態(tài)下，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對提取液 進行減壓濃縮，更佳地為減壓濃縮的過程中控制溫度不高于50°C。
[0014] 本發(fā)明所述制備方法較佳地在步驟3)之后還包括步驟4)為將步驟3)所得的濃縮 物經(jīng)過冷凍干燥得到抑菌保護劑。
[0015] 本發(fā)明所述制備方法較佳地在步驟4)之后還包括步驟5):將步驟4)所述的抑菌保 護劑加乙醇進行溶解，得到不同濃度的抑菌保護劑溶液，所述的乙醇為常規(guī)的，較佳地為 70 %~100 %的乙醇，所述百分比為體積百分比，所述抑菌保護劑溶液濃度較佳的為 0.0Img/mL~1Omg/mL。
[0016] 為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案之二是，一種抑菌保護劑，所述抑菌 保護劑由前述制備方法制備而得。
[0017] 本發(fā)明中，當前述制備方法優(yōu)選地包括步驟4)時，即相應制備得到不同濃度的抑 菌保護劑溶液。所述抑菌保護劑溶液濃度較佳的為O.Olmg/mL~lOmg/mL。所述抑菌保護劑 或所述的抑菌保護劑溶液的作用溫度為常規(guī)的，較佳地為4~37°C。
[0018] 為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的技術方案之=是，抑菌保護劑在乳制品的應 用。
[0019] 在符合本領域常識的基礎上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實 例。
[0020] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0021] 本發(fā)明的積極進步效果在于:本發(fā)明開發(fā)了一種抑菌保護劑的制備方法，該制備 方法操作簡便，能較好的滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。利用該制備方法制備的抑菌保護劑來源 于可食用真菌，安全可靠，具有廣譜抑菌性，可不同程度抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙 口氏菌、枯草芽抱桿菌、單增李斯特菌等有害細菌的生長，另對啤酒酵母、白霉、青霉等真菌 類微生物也有一定的抑制作用，但對保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、雙歧桿菌的有益菌生長 的無抑制作用，所W，本發(fā)明的抑菌保護劑在抑制有害微生物的同時保護了有益微生物的 存活率，運在乳制品中尤為重要，故此，本發(fā)明提供的抑菌保護劑存在廣闊的市場應用價 值。
【附圖說明】
[0022] 圖1為不同濃度的抑菌保護劑對啤酒酵母生長抑制作用。
[0023] 圖2為不同濃度的抑菌保護劑對己氏殺菌乳菌群總數(shù)的作用。
【具體實施方式】
[0024] 下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[00巧]本發(fā)明所設及的室溫均為0~40。〇。
[0026] 桑黃菌種栽培得到子實體后，將子實體粉碎，在干燥的子實體粉碎物中加入5倍體 積無水乙醇浸提;室溫靜置浸提4她后，將乙醇浸泡桑黃子實體得到的混合物過濾，重復上 述步驟對過濾所得殘渣進行第二次浸提;合并量兩次乙醇浸提液，進行減壓濃縮，待乙醇完 全揮發(fā)后，進行冷凍干燥，得到桑黃子實體乙醇提取物即抑菌保護劑;該桑黃乙醇提取物用 乙醇進行溶解，制備所得0.0 Img/mL、0.1 mg/血、Img/血、5mg/血、1 Omg/mL不同濃度的桑黃醇 提物溶液即為抑菌保護劑溶(簡稱抑菌保護液)。
[0027] 固體肉湯培養(yǎng)基（即肉湯瓊脂培養(yǎng)基）制備：取營養(yǎng)肉湯1.8g，瓊脂1.2g，加入 IOOmL去離子水溶解，121°C滅菌20min后，待用。
[00%]液體肉湯培養(yǎng)基制備：取營養(yǎng)肉湯1. Sg，加入IOOmL去離子水溶解，121°C滅菌 20min后，待用。
[0029] 取革蘭氏陰性菌大腸桿菌化scherichia coli)、宋內(nèi)氏志賀氏菌（Shigella 化StelIani)、沙口氏菌（salmonella)分別進行菌種