飼料預(yù)混劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用和飼料預(yù)混劑調(diào)制加工技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于提 高南美白對(duì)蝦免疫力、改善腸道病害，減少南美白對(duì)蝦早期死亡綜合征的飼料預(yù)混劑及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2005年我國的南美白對(duì)蝦淡水、海水總養(yǎng)殖面積150萬畝，至2010年即超過300 萬畝，年產(chǎn)量90-100萬噸。至2012年開始南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖不再是南方四省的專業(yè)；向北 方延伸到江浙、山東、河北、遼寧等沿海地區(qū)迅速發(fā)展到270多萬畝，年產(chǎn)量達(dá)到150萬噸以 上。2011年以來，南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖的病害死亡率越來越高，大多數(shù)地區(qū)養(yǎng)成率在20%以下； 至2012年上半年在海南、廣東和廣西等地養(yǎng)殖成功率下降到10%左右，給白對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶 來巨大損失。其主要原因是由于人工養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦的腸炎、白便、干胰臟壞死病害越來越 多，特別是近年來不斷蔓延的早期死亡綜合征（EMS)給南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來極大損失。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提出一種飼料預(yù)混劑及其制備方法，以提高對(duì)蝦的 免疫水平、腸道健康、優(yōu)化水體生態(tài)、降低對(duì)蝦的發(fā)病率，從而提高養(yǎng)殖效益。
[0004] 基于上述目的，本發(fā)明提供的飼料預(yù)混劑的制備方法包括：以植物乳桿菌 LactobacillusplantarumBW2013 菌株、解淀粉芽抱桿菌Bacillusamyloliquefaciens A3菌株、枯草芽抱桿菌Bacillussubtilisszxll菌株、類球紅細(xì)菌Rhodobacter sphaeroidesWD-2菌株以及面包酵母菌為發(fā)酵菌種，以馬齒莧提取物、仙鶴草提取物、黃芪 提取物、地錦草提取物、甘草提取物復(fù)合而成的復(fù)合培養(yǎng)液作為培養(yǎng)基，分別進(jìn)行發(fā)酵，制 成有效活菌數(shù)彡5X10sCFU/ml的飼料預(yù)混劑。
[0005] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，包括以下步驟：
[0006] 1)將馬齒莧、仙鶴草、黃芪、地錦草和甘草按照1~2:1~2:1~2:1~2:1~2 的重量比投入到水中，經(jīng)蒸煮得到中藥提取液；
[0007] 2)將碳源、氮源、無機(jī)鹽、微量元素加入到所述中藥提取液中，經(jīng)滅菌、降溫后，分 別接入所述植物乳桿菌、解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和類球紅細(xì)菌，分別進(jìn)行發(fā)酵，分 別制得植物乳桿菌活菌液、解淀粉芽孢桿菌活菌液、枯草芽孢桿菌活菌液和類球紅細(xì)菌活 菌液；
[0008] 3)將所述四種活菌液和面包酵母菌活菌液加入到混合載體中，經(jīng)發(fā)酵后制得所述 飼料預(yù)混劑。
[0009] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述植物乳桿菌活菌液的制備方法包括：
[0010] 將葡萄糖、水溶性淀粉、酵母粉、乳清粉、硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯 化鈣、氫氧化鈉、硫胺素、煙酰胺、?；撬?、中藥提取液與水混合，調(diào)節(jié)pH至6. 5~7. 5， 經(jīng)滅菌、降溫后接種植物乳桿菌，于32~35°C條件下發(fā)酵20~40小時(shí)，得到含活菌量 彡3X10sCFU/ml的植物乳桿菌活菌液。
[0011] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述解淀粉芽孢桿菌活菌液的制備方法包括：
[0012] 將葡萄糖、玉米粉、水溶性淀粉、酵母粉、硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化 鈣、氯化鈉、吡哆素、煙酰胺、硫酸錳、中藥提取液與水混合，調(diào)節(jié)pH至7. 0~9. 0,經(jīng)滅 菌、降溫后接種解淀粉芽孢桿菌，于28~30°C條件下發(fā)酵15~35小時(shí)，得到含活菌量 彡lX109CFU/ml的解淀粉芽孢桿菌活菌液。
[0013] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述枯草芽孢桿菌活菌液的制備方法包括：
[0014] 將葡萄糖、玉米粉、水溶性淀粉、酵母粉、硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯 化鈣、氯化鈉、吡哆素、煙酰胺、硫酸錳、中藥提取液與水混合，調(diào)節(jié)pH至7. 5~8.5,經(jīng) 滅菌、降溫后接種枯草芽孢桿菌，于28~35°C條件下發(fā)酵15~35小時(shí)，得到含活菌量 彡lX109CFU/ml的枯草芽孢桿菌活菌液。
[0015] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述類球紅細(xì)菌活菌液的制備方法包括：
[0016] 硫酸銨、食用乳酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸錳、硫酸鋅、 硫酸亞鐵、硫酸銅、對(duì)氨基苯甲酸、煙酰胺、吡哆素、中藥提取液與水混合，調(diào)節(jié)pH至6. 0~ 7. 5,經(jīng)滅菌、降溫后接種類球紅細(xì)菌，于28~35°C條件下發(fā)酵15~35小時(shí)，得到含活菌量 彡5X10sCFU/ml的類球紅細(xì)菌活菌液。
[0017] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述混合載體包括：800~1200份β-葡聚糖、70~ 120份蠶蛹粉、80~130份魚粉、5~20份酵母粉、50~150份氨基酸、50~150份玉米粉、 20~80份豆柏粉、250~550份米糠、50~120份磷酸二氫鈣、20~80份硫酸鎂、5~40 份氯化鈉、2000~4000甜菜堿、700~1400份低聚木糖、500~1200份?；撬帷?0~80份 硫胺素、30~80份吡哆素和100~300份煙酰胺。
[0018] 本發(fā)明還提供一種飼料預(yù)混劑，所述飼料預(yù)混劑根據(jù)上述飼料預(yù)混劑的制備方法 制備得到。
[0019]由此可見，本發(fā)明提供的飼料預(yù)混劑含有豐富的活性多糖、黃酮等中藥組合成分 與活菌體及其代謝產(chǎn)物，將其作為對(duì)蝦養(yǎng)殖的微生態(tài)飼料預(yù)混劑，活菌體及其代謝乳酸可 抑制腸道病原菌生長，活性中藥成分、菌群代謝產(chǎn)物（氨基酸、維生素、微量元素等）更容易 被蝦吸收，可以發(fā)揮減少病害、降低死亡率，促進(jìn)生長、增加產(chǎn)量的多重效應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā) 明進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0021] 發(fā)酵菌種：
[0022] 植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum)BW2013 菌株，于 2014 年 9 月 5 日保藏在 中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCCNo. 9642,保藏單位 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。
[0023]解淀粉芽抱桿菌（Bacillusamyloliquefaciens)A3 菌株，于 2012 年 10 月 15 日 保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：保藏入冊登記編號(hào) CGMCCN0. 6676,保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究 所，郵編：100101。
[0024] 枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis)szxll菌株，于2013年9月16日保藏在中國 微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCCN0. 8188,保藏單位地址： 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。
[0025] 類球紅細(xì)菌（Rhodobactersphaeroides)WD_2菌株，于2010年4月20日保藏在 中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCCN0. 3757,保藏單位地 址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。
[0026] 面包酵母菌，市場購買。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述飼料預(yù)混劑的制備方法包括以下步驟：
[0029] 1)制備中藥提取液：
[0030] 將馬齒莧10kg、仙鶴草10kg、黃芪10kg、地錦草10kg、甘草10kg投入到1000L中 藥提取罐中，向其中加水500L，浸泡lh后升溫至100°C，然后蒸煮lh后過濾，得到濾液；再 向?yàn)V渣中加水300L，KKTC蒸煮40分鐘后過濾，合并兩次濾液，得到中藥提取液。將中藥提 取液存入儲(chǔ)存罐中，備用。
[0031] 2)分別制備四種活菌液：
[0032]植物乳桿菌活菌液的制備方法如下（以1000L為例）：將葡萄糖6kg、水溶性淀 粉10kg、酵母粉4kg、乳清粉4kg、硫酸銨3kg、磷酸二氫鉀350g、磷酸氫二鉀250g、氯化鈣 150g、氫氧化鈉500g、硫胺素6g、煙酰胺20g、牛磺酸10g、中藥提取液500L和水5