專利名稱：一種新的膽固醇組織細胞化學染色法－鄰苯二甲醛染色法的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物組織的染色法，特別是一種新的膽固醇組織細胞化學染色法-鄰苯二甲醛染色法。
通常的脂肪染色法，如蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹黑、鋨酸、油紅、硫酸尼羅藍染色等，雖然能顯示脂肪組織，但不能特異性地顯示膽固醇。顯示膽固醇的染色方法有Schultz法和Adams法。這兩種方法前者需要3天，后者需要7天，耗時較多，操作步驟也較多且染色效果并不理想，也不易將細胞中的膽固醇確切地顯示出來。
本發(fā)明的目的是建立一種簡單實用效果好的膽固醇組織細胞化學染色技術，用于快速定位檢查組織中有無沉積的膽固醇。能達到以下目的(1)特異性地顯示組織和細胞中的膽固醇物質(zhì)；(2)縮短染色時間；(3)減少操作步驟；(4)染色效果好，不但能將組織中的膽固醇顯示出來，而且可將細胞內(nèi)的膽固醇顯示出來，具有較好的染色精度和定位能力。
本發(fā)明的染色原理和方法設計是將生物化學中膽固醇與鄰苯二甲醛在濃硫酸作用下能產(chǎn)生紫紅色顯色反應這一原理移植到組織細胞化學中，先將組織塊或組織切片與鄰苯二甲醛作用，然后加濃硫酸。如果組織或細胞中含有一定的膽固醇，則呈紫紅色反應。這一反應具有特異性，中性脂肪，甘油三酯及脂肪酸無這一反應。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種新的膽固醇組織細胞化學染色法-鄰苯二甲醛染色法，包括塊染色和切片染色，其特征在于用冰乙酸為溶劑將鄰苯二甲醛(又稱苯二醛或鄰苯二醛，即O-PHTHALALDEHYDE或O-PHTHALDIALDEHYDE)配制成0.01％-1％的染色液，當做塊染色時，將待染組織塊置于染色液中1-72小時后，按常規(guī)冰凍切片，于室溫下，加數(shù)滴濃硫酸顯色5秒到10分鐘，加蓋玻片，用顯微鏡觀察呈紫紅色或橙紅色；當做切片染色時，按常規(guī)冰凍切片，于切片上滴加數(shù)滴染色液，作用30秒-60分鐘，于室溫下加數(shù)滴濃硫酸顯色5秒到10分鐘，加蓋玻片，用顯微鏡觀察呈紫紅色或橙紅色。
本發(fā)明的最佳實施方式(1)鄰苯二甲醛的冰乙酸溶液濃度0.5％(2)塊染法如需固定時，將用10％甲醛溶液固定后的大小適宜的組織塊浸入冰乙酸配制的濃度為0.5％的鄰苯二甲醛溶液12-24h，冰凍切片，加濃硫酸顯色10秒鐘即加蓋玻片在顯微鏡下觀察結(jié)果。
(3)切片染色法如需固定時，將用10％甲醛溶液固定后的組織冰凍切片，滴加冰乙酸配制的濃度為0.5％的鄰苯二甲醛溶液數(shù)滴，作用1分鐘后加濃硫酸顯色，過30秒到1分鐘即加蓋玻片在顯微鏡下觀察結(jié)果。
(4)加蓋玻片觀察可延長顯色保持時間，可保持數(shù)小時。
實施例實例1(塊染色)試劑用冰乙酸配制濃度為0.5％的鄰苯二甲醛溶液，保存于棕色瓶內(nèi)。濃硫酸(分析純)。
組織及染色取含有膽固醇的實驗性動脈粥樣硬化家兔中的肝組織行膽固醇染色。如有需要時將該肝組織用10％甲醛溶液固定后，切成大小適宜，厚度約2-3mm的組織塊，置于盛有0.5％的鄰苯二甲醛染色液的青霉素小瓶中，分別作用12h和24h后行冰凍切片，然后在載玻片上向切片組織滴加濃硫酸，在室溫下約過10秒鐘即可見組織呈顯色反應，加蓋玻片后在顯微鏡下觀察。
結(jié)果膽固醇往往呈紫紅或橙紅色圓形液滴狀，其形狀也可呈結(jié)晶狀，組織中可見呈紫紅色或橙色的膽固醇和膽固醇結(jié)晶，細胞內(nèi)可見呈紫紅色或橙紅色膽固醇和膽固醇結(jié)晶。塊染標本顯色保持時間可達4h。塊染12h與塊染24h在顯色強度及顯色保持時間方面無明顯差別。切片組織與鄰苯二甲醛試劑作用后在硫酸作用下紫紅色顯色可保持約4小時。
實例2(切片染色)
試劑用冰乙酸配制濃度為0.5％的鄰苯二甲醛溶液，保存于棕色瓶內(nèi)。濃硫酸(分析純)。
組織切片及染色取含有膽固醇的實驗性動脈粥樣硬化家兔中的肝組織行膽固醇染色。如有需要時，將該肝組織用10％甲醛溶液固定后，在未經(jīng)塊染的前提下直接行冰凍切片。然后在載玻片上向切片組織中滴加數(shù)滴0.5％鄰苯二甲醛染色液，分別作用1分鐘、2分鐘、5分鐘、10分鐘和30分鐘后，再向相應切片組織上滴加數(shù)滴濃硫酸，室溫下約1min即見組織呈顯色反應，加蓋玻片后在顯微鏡下觀察。
本發(fā)明達到的技術效果(1)特異性地顯示組織和細胞中的膽固醇物質(zhì)。用顯微鏡觀察，在含膽固醇的組織及細胞中可見紫紅色和橙紅色顯色反應。膽固醇往往呈紫紅或橙紅色圓形液滴狀，也可呈紫紅或橙紅色結(jié)晶狀，組織中可見呈紫紅色或橙紅色的膽固醇結(jié)晶，細胞內(nèi)可見呈紫紅色或橙紅色膽固醇結(jié)晶和顆粒。
(2)明顯縮短染色時間，只要將切片切好，只需1分鐘即可出結(jié)果。
(3)減少操作步驟，只需1-2步即可完成染色，方法簡便、快速。
(4)染色效果好，不但能將組織中的膽固醇顯示出來，而且可將細胞內(nèi)的膽固醇顯示出來，具有較好的染色精度和定位能力。
權(quán)利要求
1.一種新的膽固醇組織細胞化學染色法-鄰苯二甲醛染色法，包括塊染色和切片染色，其特征在于用冰乙酸為溶劑將鄰苯二甲醛(又稱苯二醛或鄰苯二醛，即O-PHTHALALDEHYDE或O-PHTHALDIALDEHYDE)配制成0.01％-1％的染色液，當做塊染色時，將待染組織塊置于染色液中1-72小時后，按常規(guī)冰凍切片，于室溫下，加數(shù)滴濃硫酸顯色5秒到10分鐘，加蓋玻片，用顯微鏡觀察呈紫紅色或橙紅色；當做切片染色時，按常規(guī)冰凍切片，于切片上滴加數(shù)滴染色液，作用30秒-60分鐘，于室溫下加數(shù)滴濃硫酸顯色5秒到10分鐘，加蓋玻片，用顯微鏡觀察呈紫紅色或橙紅色。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的膽固醇組織細胞化學染色法—鄰苯二甲醛染色法,其特征是用冰乙酸配制的鄰苯二甲醛染色液進行染色,冰凍切片后用數(shù)滴濃硫酸顯色。本發(fā)明方法簡便、快速,染色效果好,具有較好的染色精度和定位能力。
文檔編號C12Q1/60GK1235197SQ9911600
公開日1999年11月17日 申請日期1999年1月6日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月6日
發(fā)明者申洪 申請人:申洪