專利名稱：遺傳修飾在編碼人類G蛋白β3亞單位的基因中用于診斷疾病的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過遺傳分析診斷疾病的方法，具體地說涉及對編碼人類的鳥嘌呤核苷酸結(jié)合的蛋自質(zhì)(G蛋白)的亞單位的基因進行分析。
異源三體鳥嘌呤核苷酸結(jié)合的蛋白質(zhì)(G蛋白質(zhì))在細(xì)胞內(nèi)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有顯著的重要性。在激素受體和在受體活化之后進行構(gòu)型變化的其它受體刺激之后他們介導(dǎo)細(xì)胞外信號的接替，這導(dǎo)致G蛋白的活化，隨后激活或抑制細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)子(例如離子通道，酶)。異源三體G蛋白質(zhì)由三個亞單位，α,β和γ亞單位組成。至今為止，通過生化和分子生物學(xué)方法已經(jīng)檢測到幾個不同的α亞單位，5個β亞單位，和約12個γ亞單位(Birnbaumer,L.和Birnbaumer,M.由G蛋白進行的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，1994版。受體研究雜志15:213-252,1995；Offermanns,S.和Schultz,G.由G蛋白質(zhì)參與的跨膜信號系統(tǒng)的復(fù)合物信息加工。NaunynSchmiedebergs Arch.Pharmacol.350:329-338,1994；Nürnberg,B.,Gudermann,T.，和Schultz,G.作為跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要成分的受體和G蛋白質(zhì)。第2部分，G蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能。分子醫(yī)學(xué)雜志73:123-132,1995；Neer,E.J.異源三體G蛋白質(zhì)跨膜信號形成體。細(xì)胞80:249-257,1995；Rens-Do-miano,S.和Hamm,H.E.異源三體G蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系。FASEB J.9:1059-1066,1995)。
通過用白日咳毒素(PTX)預(yù)處理可以抑制某些α亞單位的受體介導(dǎo)的激活。特別是這些亞單位包括α同種型αi1,αi2和αi3和各種oα亞單位。這些G蛋白質(zhì)類型也被稱作PTX敏感性G蛋白質(zhì)。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對編碼人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因進行的遺傳修飾適用于疾病的診斷。這種遺傳修飾特別適用于確定發(fā)生與G蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)異常相關(guān)的紊亂的危險性。
此外本發(fā)明涉及用于確定個體發(fā)生與G蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)異常相關(guān)的紊亂的相對危險性的方法，該方法包括將編碼個體的人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因序列與SEQ ID NO:1的基因序列進行比較，并且序列中胸腺嘧啶(T)存在于第825位時，確定該個體發(fā)生疾病的危險性增加。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)遺傳修飾定位于編碼人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因。已經(jīng)由Levine等人描述了該基因(Proc.Natl.Acad.Sci USA,87,(1990)2329-2333)。該編碼區(qū)域在第275位具有絲氨酸密碼予(TCC)，而具有與G蛋白質(zhì)異常調(diào)節(jié)相關(guān)的疾病的危險性增加的個體具有密碼子TCT，它在該位置同樣編碼絲氨酸。遺傳修飾是在第825位具有堿基替代，其中胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)替代。但是，該堿基變化在氨基酸水平是“沉默的”，即這種替代不會導(dǎo)致在該位置摻入不同的氨基酸。在具有發(fā)病危險性增加的個體中發(fā)現(xiàn)的序列描述于序列表的SEQ IDNO:1。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的遺傳修飾通常以雜合的形式出現(xiàn)。
與G蛋白質(zhì)異常調(diào)節(jié)相關(guān)的紊亂定義為其中G蛋白質(zhì)參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并且不以生理學(xué)方式執(zhí)行其功能的疾病。
異常調(diào)節(jié)有許多的原因，例如，在結(jié)構(gòu)基因中的修飾或修飾的基因的表達。
紊亂包括心血管疾病，代謝障礙和免疫疾病。
所提到的心血管疾病是高血壓，妊娠高血壓(妊娠中毒，懷孕高血壓)，冠狀心臟疾病，定位的和/或全身性的動脈粥樣硬化，血管狹窄，換血管程序后的再狹窄(例如，具有和沒有斯藤特印模的移植的PTCA)，中風(fēng)或血栓形成趨向和血小板凝聚增加。
所提到的代謝障礙是代謝綜合癥，胰島素抗性和血胰島素過多，Ⅱ型糖尿病，糖尿病并發(fā)癥(例如，腎病，神經(jīng)病，視網(wǎng)膜病等等)，脂類代謝障礙，中樞化學(xué)感受障礙(對二氧化碳的忍受性，酸中毒的忍受性，突發(fā)的嬰兒死亡(SIDS))。
所提到的免疫疾病是人體的免疫應(yīng)答的損害強度(免疫球蛋白的形成，T細(xì)胞和NK細(xì)胞的攻擊性)，對增殖包括傷口愈合能力的損害的總的趨向，發(fā)生腫瘤和增殖包括惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛力的趨向，在HIV感染之后直到疾病變成臨床癥狀潛伏期的持續(xù)時間，卡波西肉瘤，肝硬化的趨向，移植忍受性和移植排斥。
根據(jù)本發(fā)明的遺傳修飾的應(yīng)用特別適用于確定發(fā)生高血壓的危險性。
此外本發(fā)明涉及攜帶上面描述的遺傳突變的轉(zhuǎn)基因動物的生產(chǎn)。該類型的轉(zhuǎn)基因動物特別是作為用于調(diào)查和治療上面描述的紊亂的動物模型具有巨大的重要性。通常用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物的方法對本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員而言是已知的。
對于確定發(fā)生疾病的相對危險性的本發(fā)明方法，從個體獲取含有個體遺傳信息的人體材料。這通?？梢酝ㄟ^取血樣和從其分離核酸來獲得。
從個體分離的核酸確定編碼G蛋白質(zhì)的β3亞單位的基因的結(jié)構(gòu)，并且與描述于SEQ ID NO:1的序列進行比較。
通過對該核酸進行測序分析可以確定該基因的結(jié)構(gòu)。這可以直接從基因組DNA或在該核酸擴增之后，例如采用PCR技術(shù)進行。
基因的結(jié)構(gòu)可以在基因組水平或在mRNA水平或cDNA水平進行測定。
優(yōu)選的是通過在cDNA進行PCR擴增之后測序確定其結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員易于從描述于SEQ ID NO:1的序列推導(dǎo)適用于PCR的引物。在各種情況下選擇與相關(guān)的第825位堿基位置之前和之后的一條鏈和互補鏈結(jié)合的引物的測序程序是優(yōu)選的。
但是，也可以用其它方法對該基因進行比較，例如選擇性雜交或用限制性酶進行合適的作圖分析。上面描述的第825位C到T的堿基的交換導(dǎo)致限制性酶DsaⅠ的裂解位點的喪失，它同樣可用于檢測該遺傳多態(tài)性。
如果該個體在第825位具有胸腺嘧啶(T)，認(rèn)定它發(fā)病的危險性高于在該位置具有胞嘧啶(C)的個體。
本發(fā)明進一步描述了下面的實施例。實施例1通過測序檢測高血壓患者的遺傳修飾。
在患有原發(fā)的高血壓患者中進行初步的調(diào)查以檢測其對PTX敏感性G蛋白質(zhì)激活化的易感性增加。在來自于具有表現(xiàn)型標(biāo)記的患者的無限增殖的細(xì)胞中進行檢測是可能的，所述細(xì)胞是活性增加的鈉/氫交換器。對PTX敏感的G蛋白質(zhì)激活的易感性增加對細(xì)胞功能具有重要性。這些包括細(xì)胞內(nèi)第二信使分子(例如，肌苷1,4,5-三磷酸)的形成增加，細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放加強，免疫球蛋白的形成增加，細(xì)胞生長的速率增加。因為這些變化可以在無限增殖的細(xì)胞中并且在細(xì)胞培養(yǎng)持續(xù)長時間之后檢測到，所以可以推測這種修飾在遺傳上是固定的(Rosskopf,D.,Frmter,E.，和Siffert,W.，存留于來自于原發(fā)的高血壓患者的無限增殖的淋巴母細(xì)胞的高血壓的鈉-質(zhì)子交換器表現(xiàn)型-人類高血壓的一種細(xì)胞培養(yǎng)物模型。臨床調(diào)查診斷92:2553-2559,1993；Rosskopf,D.,Hartung,K.,Hense,J.，和Siffert,W.來自于高血壓患者的無限增殖的B細(xì)胞的免疫球蛋白的形成加強。高血壓26:432-435,1995；Rosskopf,D.,Schrder,K.-J.，和Siffert,W.在來自于原發(fā)的高血壓患者和正常血壓的個體的無限增殖的淋巴母細(xì)胞的增殖中鈉-氫交換的作用。心血管研究29:254-259,1995；Siffert,W.,Rosskopf,D.,Moritz,A.,Wieland,T.,Kaldenberg-Stasch,S.,Kettler,N.,Hartung,K.,Beckmann,S.，和Jakobs,K.H.來自于原發(fā)性高血壓患者的無限增殖化淋巴母細(xì)胞的G蛋白質(zhì)激活的增強。臨床調(diào)查雜志96:759-766,1995)。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法從高血壓患者的無限增殖的細(xì)胞系制備RNA并且利用逆轉(zhuǎn)錄酶將它轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，對編碼G蛋白質(zhì)β3亞單位的cDNA進行擴增和測序。下面的寡核苷酸引物用于PCR:
5′-TGG GGG AGA TGG AGC AAC TG和5′-CTG CTG AGT GTG TTC ACT GCC。
與由Levine等人(Levine,M.A.,Smallwood,P.M.,Moen,P.T.,Jr.,Helman,L.J.，和Ahn,T.G.β3亞單位的分子克隆，G蛋白質(zhì)β亞單位多肽的第三形式Proc.Natl.Acad.Sci.USA87(6):2329-2333,1990)公開的序列進行比較，發(fā)現(xiàn)在來自于高血壓患者的細(xì)胞的cDNA存在下面的不同在編碼序列區(qū)域的核苷酸825胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)替代(核苷酸1對應(yīng)于ATG起始密碼子的堿基A)。該堿基的變化導(dǎo)致沉默多態(tài)性，即與原始的序列比較發(fā)現(xiàn)由相應(yīng)的堿基三聯(lián)體編碼的氨基酸(絲氨酸)沒有被改變。所發(fā)現(xiàn)的DNA序列描述于SEQ ID NO:1。實施例2采用限制性酶分析檢測高血壓患者的遺傳修飾附圖
描述了限制性酶分析對正常血壓個體的基因和高血壓患者的基因進行比較。在該分析中，利用酶DsaⅠ對編碼來自于正常血壓個體(NT)和高血壓患者(HT)的細(xì)胞的β3的cDNA進行限制性酶分析，所述cDNA已經(jīng)通過PCR進行擴增。將反應(yīng)產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進行分級分離，結(jié)果描述于附圖。
用DsaⅠ消化的來自于正常血壓個體的細(xì)胞β3cDNA的整個限制性圖譜清楚地顯示于附圖中。來自于高血壓患者細(xì)胞的cDNA僅部分被DsaⅠ切割。除了預(yù)期的裂解產(chǎn)物，還存在未切割的PCR產(chǎn)物。將參照片段(標(biāo)記物)加樣到左邊和右邊以便進行比較。本文描述的來自于高血壓患者的五個DNA序列中的4個顯示了上面描述的堿基交換并且對于該修飾是雜合的。
序列表(1)一般資料(ⅰ)申請人(A)名稱巴斯夫公開股份有限公司(B)街道Carl-Bosch-大街38(C)城市路德維希港(E)國家聯(lián)邦德國(F)郵政編碼D-67056(G)電話0621/6048526(H)傳真0621/6043123(I)電傳1762175170(ⅱ)申請名稱通過分析基因診斷失調(diào)的方法(ⅲ)序列數(shù)目2(ⅳ)計算機可讀形式(A)媒介類型軟盤(B)計算機IBM PC兼容(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，版本#1.25(EPA)(2)SEQ ID NO:1的資料(ⅰ)序列特征(A)長度1517個堿基對(B)類型核酸(C)鏈數(shù)雙鏈(D)幾何結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型來自于mRNA的cDNA(ⅲ)假設(shè)不是(ⅳ)反意義不是(ⅵ)原始來源(A)生物體人類(ⅸ)特征(A)名詞/關(guān)鍵CDS(B)位置1..1024(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1:ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48Met Gly Glu Met Glu Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Lys Lys1 5 10 15CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT GCT GAC GTT ACT CTG GCA GAG 96Gln Ile Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu20 25 30CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG 144Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gln Met Arg Thr Arg35 40 45CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC 192Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala50 55 60ACT GAT TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC 240Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile65 70 75 80GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC 288Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg85 90 95TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val100 105 110GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 384Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser115 120 125CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 432Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly130 135 140TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 480Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser145 150 155 160TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC TTG TGG GAC ATT GAG ACT GGG CAG CAG 528Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp Ile Glu Thr Gly Gln Gln165 170 175AAG ACT GTA TTT GTG GGA CAC ACG GGT GAC TGC ATG AGC CTG GCT GTG 576Lys Thr Val Phe Val Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Ala Val180 185 190TCT CCT GAC TTC AAT CTC TTC ATT TCG GGG GCC TGT GAT GCC AGT GCC 624Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe Ile Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala195 200 205AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC 672Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gln Thr Phe Thr Gly210 215 220CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC 720His Glu Ser Asp Ile Asn Ala Ile Cys Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala225 230 235 240ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG 768Ile Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg245 250 255GCA GAC CAG GAG CTG ATC TGC TTC TCC CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC 816Ala Asp Gln Glu Leu Ile Cys Phe Ser His Glu Ser Ile Ile Cys Gly
260 265 270ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT GGC CGC CTA CTA TTC GCT GGC 864Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly275 280 285TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT 912Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg290 295 300GTG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC 960Val Gly Ile Leu Ser Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val305 310 315 320ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC 1008Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu325 330 335AAA ATC TGG AAC TGA G GAGGCTGGAG AAAGGGAAGT GGAAGGCAGT GAACACACTC 1064Lys Ile Trp Asn *340AGCAGCCCCC TGCCCGACCC CATCTCATTC AGGTGTTCTC TTCTATATTC CGGGTGCCAT 1124TCCCACTAAG CTTTCTCCTT TGAGGGCAGT GGGGAGCATG GGACTGTGCC TTTGGGAGGC 1184AGCATCAGGG ACACAGGGGC AAAGAACTGC CCCATCTCCT CCCATGGCCT TCCCTCCCCA 1244CAGTCCTCAC AGCCTCTCCC TTAATGAGCA AGGACAACCT GCCCCTCCCC AGCCCTTTGC 1304AGGCCCAGCA GACTTGAGTC TGAGGCCCCA GGCCCTAGGA TTCCTCCCCC AGAGCCACTA 1364CCTTTGTCCA GGCCTGGGTG GTATAGGGCG TTTGGCCCTG TGACTATGGC TCTGGCACCA 1424CTAGGGTCCT GGCCCTCTTC TTATTCATGC TTTCTCCTTT TTCTACCTTT TTTTCTCTCC 1484TAAGACACCT GCAATAAAGT GTAGCACCCT GGT 1517(2)SEQ ID NO:2的資料(ⅰ)序列特征(A)長度341個氨基酸(B)類型氨基酸(D)幾何結(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2:Met Gly Glu Met Glu Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Lys Lys1 5 10 15Gln Ile Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu20 25 30Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gln Met Arg Thr Arg35 40 45Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala50 55 60Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile65 70 75 80Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg85 90 95Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val100 105 110Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser115 120 125Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly130 135 140Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser145 150 155 160Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp Ile Glu Thr Gly Gln Gln165 170 175Lys Thr Val Phe Val Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Ala Val180 185 190Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe Ile Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala195 200 205Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gln Thr Phe Thr Gly210 215 220His Glu Ser Asp Ile Asn Ala Ile Cys Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala225 230 235 240Ile Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg245 250 255Ala Asp Gln Glu Leu Ile Cys Phe Ser His Glu Ser Ile Ile Cys Gly260 265 270Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly275 280 285Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg290 295 300Val Gly Ile Leu Ser Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val305 310 315 320Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu325 330 335Lys Ile Trp Asn *340
權(quán)利要求
1．遺傳修飾在編碼人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因中的應(yīng)用，用于診斷疾病。
2．遺傳修飾在編碼人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因中的應(yīng)用，用于確定發(fā)生與G蛋白質(zhì)異常調(diào)節(jié)相關(guān)的紊亂的危險性。
3．根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中遺傳修飾是在編碼SEQ IDNO:1的第275位氨基酸的密碼子。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中在SEQ ID NO:1的第825位由胸腺嘧啶替代胞嘧啶。
5．根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述的紊亂是心血管疾病，代謝障礙或免疫疾病。
6．根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中紊亂是高血壓。
7．用于確定個體發(fā)生與G蛋白質(zhì)異常調(diào)節(jié)相關(guān)的紊亂的相對危險性的方法，該方法包括將編碼個體的人類G蛋白質(zhì)β3亞單位的基因序列與SEQ ID NO:1的基因序列進行比較，并且如果其中胸腺嘧啶(T)存在于第825位，確定該個體發(fā)生疾病的危險性增加。
8．根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中通過測序進行基因的比較。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在測序之前將包括第825位的基因片段進行擴增。
10．根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中通過雜交進行基因的比較。
11．根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中基因的比較是利用限制性酶切割來完成的。
12．根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中使用限制性酶DsaⅠ。
全文摘要
本發(fā)明涉及在編碼人類G蛋白β3亞單位的基因中使用遺傳修飾以便用于診斷疾病。
文檔編號C12Q1/68GK1218515SQ97194612
公開日1999年6月2日 申請日期1997年5月2日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月14日
發(fā)明者溫弗里德·西佛特 申請人:溫弗里德·西佛特