專利名稱：：皂苷在病原體控制的方法和組合物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及將作為協(xié)同劑的皂苷用于控制材料上之植物和動(dòng)物病原體集落化和/或生長(zhǎng)的方法和制劑。本發(fā)明通過(guò)用含有皂苷和肉桂醛，α-己基肉桂醛和/或松柏醛的組合物控制真菌和寄生蟲(chóng)的生長(zhǎng)來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明，所述真菌和寄生蟲(chóng)在植物部分和組織表面集落化。
背景技術(shù)：
：通常設(shè)計(jì)殺蟲(chóng)劑和殺真菌劑來(lái)治理或除去宿主植物或材料上侵染的生物體。將通常所用的殺蟲(chóng)劑和殺真菌劑用于生物體集落化的植物或植物部分表面。集落化生物體包括吸汁的昆蟲(chóng)和病原體真菌；這兩種生物均能夠嚴(yán)重地破壞宿主植物，包括抑制宿主植物的生長(zhǎng)和降低植物的生產(chǎn)力，從而殺死宿主植物。侵染植物的病原體昆蟲(chóng)包括與細(xì)菌共生的那些昆蟲(chóng)種，例如蚜蟲(chóng)，葉蟬，粉虱；宿主昆蟲(chóng)沒(méi)有共生體不能存活。例如，蚜蟲(chóng)(homoptera)在血腔內(nèi)稱為菌細(xì)胞(mycetocytes)的細(xì)胞中有Buchnera屬的共生細(xì)菌。細(xì)菌從母體蚜蟲(chóng)直接傳播到其后代，脫共生的蚜蟲(chóng)不能天然產(chǎn)生。細(xì)菌可以提供宿主昆蟲(chóng)胚胎發(fā)生所需的脂類，這些脂類在受昆蟲(chóng)感染的植物韌皮部的汁中沒(méi)有或濃度很低。植物病原體還包括葡萄根瘤蚜(Daktulosphairavitifoliae)，一種蚜蟲(chóng)類昆蟲(chóng)，和線蟲(chóng)。根瘤蚜原產(chǎn)于落基山脈東部的美國(guó)，以已經(jīng)進(jìn)化了對(duì)昆蟲(chóng)攝食的抗性的天然野生型葡萄為生。用于生產(chǎn)葡萄酒的歐洲葡萄(Vitisvinifera)是在西亞進(jìn)化的，但對(duì)根瘤蚜沒(méi)有抗性。已經(jīng)在所有加利弗尼亞的主要農(nóng)業(yè)區(qū)報(bào)道了莖和球線蟲(chóng)(Ditylenchusdipsaci)。這種廣泛的分布可能反映了其在侵染植物材料，如蒜小鱗莖上的傳播。無(wú)論所述侵染材料在何處生長(zhǎng)，均可能導(dǎo)入線蟲(chóng)。Ditylenchusdipsaci可以寄生在各種栽培和野生植物中。線蟲(chóng)在感染的組織中生成蟲(chóng)癭。除由線蟲(chóng)本身的蟲(chóng)癭干擾植物外，由寄生真菌給感染植物帶來(lái)的損傷也會(huì)增加，所述真菌很容易黏附到變?nèi)醯母M織和肥大的，未分化的蟲(chóng)癭細(xì)胞上。此外，有些真菌例如腐霉屬，鐮孢屬和絲核菌屬在蟲(chóng)癭中比在根的其它區(qū)域中生長(zhǎng)并繁殖的更快，由此在根組織中誘發(fā)較早崩潰。大部分真菌均對(duì)植物有致病性。銹菌(銹菌目，多孢銹菌屬)，白粉菌(白粉菌科，單絲殼屬)和霜霉(霜霉科)是于特異性宿主植物相關(guān)的專性寄生物，所述宿主植物產(chǎn)生病原體所需的營(yíng)養(yǎng)。另外，曲霉屬，鏈格孢屬，鐮孢屬和青霉屬的真菌可以污染糧食作物和其它產(chǎn)品，已知所有這些真菌均生產(chǎn)真菌毒素如黃曲霉毒素，fumonisins，萎蔫酸，TA/AAL毒素，zearalenone，和單端孢菌素(trichothecene)，5-丁基吡啶甲酸和相關(guān)植物毒性的吡啶衍生物。這些真菌毒素對(duì)包括植物和人的不同種有很高的毒性，而且可發(fā)現(xiàn)于包括牛奶，牛奶制品，豆，谷類食物，椰子，花生，番薯的商業(yè)制備食品和商業(yè)上制備的動(dòng)物食品。各種殺蟲(chóng)劑和殺真菌劑用于控制植物病原體。例如當(dāng)環(huán)境條件有利于銹病和白粉病的發(fā)展時(shí)，以6-7天的療程噴灑保護(hù)性的殺真菌劑是典型的控制方法。兩種常用的系統(tǒng)殺真菌劑是苯菌靈和嗪氨靈。較早的殺真菌劑還包括無(wú)機(jī)化合物如銅和硫以及有機(jī)保護(hù)劑如福美雙，captom，mameb和chlorotholonil。這些化合物只在植物表面起作用，而且為了防止感染必須是在真菌病原體出現(xiàn)時(shí)或之前存在。這些較早的殺真菌劑是多位點(diǎn)抑制劑，即它們影響真菌的許多代謝活性。較新的殺真菌劑一般是系統(tǒng)性高效有機(jī)物，如苯并咪唑酮，甾醇生物合成抑制劑，carboxanilide，和苯甲酰胺類，它們?cè)谥参飪?nèi)部和表面起作用。與較早的表面保護(hù)劑相比，系統(tǒng)性殺真菌劑通常在低許多的劑量時(shí)就有效，而且可以治愈已確立的真菌感染，是病害治理中的重要因素。系統(tǒng)性殺真菌劑通常在真菌的單個(gè)位點(diǎn)發(fā)揮作用，干擾特定的代謝過(guò)程，這些過(guò)程是生產(chǎn)真菌生物生長(zhǎng)，保持和致病力所需的所有新細(xì)胞物質(zhì)所必需的。這些制劑通常只對(duì)真菌病原體有效。殺蟲(chóng)劑，殺真菌劑和化學(xué)防腐劑的廣泛使用已經(jīng)導(dǎo)致抗性病原體的發(fā)展和進(jìn)化。由于環(huán)境和保健日益為人們所關(guān)心，所以必需鑒定和/或研制新的殺蟲(chóng)劑和殺真菌劑以符合未來(lái)的環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)，特別是由動(dòng)物消費(fèi)的天然產(chǎn)品，從而有較低的動(dòng)物和環(huán)境毒性。因此需要開(kāi)發(fā)新方法和制劑以控制植物和動(dòng)物病原體并降低在可消費(fèi)產(chǎn)品和主要由病原體組成的環(huán)境中有毒代謝產(chǎn)物的水平。皂苷是一種廣泛分布于植物中的甾醇糖苷。皂苷有各種不同的生物活性，可以作為殺真菌劑，殺蟲(chóng)劑，抗癌劑，化妝品，食品防腐劑和具有促進(jìn)生長(zhǎng)和殺蟲(chóng)劑作用的肥料。還用皂苷從日用產(chǎn)品中除去膽甾醇并作物家畜，如雞的飼料添加劑以降低在雞蛋中的膽甾醇水平以及降低糞尿氣味。除皂苷的這些許多不同用途外，皂苷與其它具有殺蟲(chóng)和/或殺真菌活性的物質(zhì)組合的作用還有許多尚未得到開(kāi)發(fā)。相關(guān)文獻(xiàn)在英國(guó)專利申請(qǐng)9203522中描述了在組合物中龍舌蘭的皂苷保護(hù)人和其它動(dòng)物抗害蟲(chóng)如蚊子和蜱的用途。在加拿大專利申請(qǐng)90100605公開(kāi)了有促進(jìn)生長(zhǎng)和殺蟲(chóng)作用的肥料，含有皂苷，木質(zhì)素，磷，氮，鉀和稀土金屬。在日本專利申請(qǐng)61065802中公開(kāi)了含蘆薈皂苷和對(duì)-羥基苯甲酸酯的食品防腐劑。在美國(guó)專利5290557中公開(kāi)了含來(lái)自Yuccaschidigera或Y.Hederahelix的皂苷的組合物抗非水生軟體動(dòng)物如蝸牛和蛞蝓的用途。由Westcott等人1992)美國(guó)昆蟲(chóng)學(xué)會(huì)年報(bào)，85(3)304-309公開(kāi)了皂苷對(duì)蝗蟲(chóng)蛹的作用。在日本專利申請(qǐng)2157205中公開(kāi)了從石刁柏中提取含載體的抗真菌藥物。在日本專利申請(qǐng)91106370中公開(kāi)了含有一種或多種來(lái)自各種植物壓榨汁和/或乙酸組合溶劑提取物或其濃縮物之試劑的抗微生物特性。從水果漿，煙草和種子中分離的皂苷的抗微生物和害蟲(chóng)活性分別由Okunji等人(國(guó)際生藥研究雜志，(1990)28(3)193-199)，Gruenweller等人(光化學(xué)(Oxf)，(1990)29(8)2485-2490)和Lalithat等人(國(guó)際昆蟲(chóng)控制，(1988)30(2)42-45)進(jìn)行了描述。在日本專利申請(qǐng)61007290描述了用山茶葉中的皂苷控制anthrose，稻瘟病和稻長(zhǎng)蠕孢葉斑點(diǎn)的用途。在德國(guó)專利申請(qǐng)3724595中還報(bào)道了皂苷的抗微生物特性。美國(guó)專利2465854描述了含肉桂醛衍生物的殺蟲(chóng)劑組合物。用肉桂醛控制蘑菇生長(zhǎng)底物中的輪枝孢菌屬公開(kāi)在美國(guó)專利5149715中。美國(guó)專利4402950描述了通過(guò)使用從芳香植物中用蒸汽得到的萜烯使活的人和動(dòng)物生物體內(nèi)的病毒失活。引述的萜烯是黑胡椒油，肉桂芳香油，小豆蔻油，乙酸里哪酯，肉桂醛，黃樟腦，香芹酮(carvon)和順/反檸檬醛(citrao)。美國(guó)專利4477361描述了含抗微生物表面活性劑的肉桂化合物，該表面活性劑使得表面得以洗滌。Bowles和Miller(食品保護(hù)雜志，(1993)56788-794)描述了各種芳香和脂族醛的抗肉毒桿菌毒素(antibotulinal特性。已經(jīng)報(bào)道了包含肉桂醛的其它制劑可以保護(hù)作物抵御致病微生物的攻擊。參見(jiàn)美國(guó)專利4978686和5149715以及法國(guó)專利申請(qǐng)2529755。發(fā)明概述本發(fā)明涉及含皂苷的制劑和其在控制材料上的植物動(dòng)物病原體之集落化和/或生長(zhǎng)的方法中的用途。提供了控制植物以及種子和秧苗上致病生物的方法并提供了基本上沒(méi)有植物病原體的植物種子和秧苗。所述方法包括步驟將有病害植物的或?qū)Σ≡w攻擊敏感的植物的一或多部分或組織與足以控制靶致病生物生長(zhǎng)量的含皂苷制劑接觸。還提供了控制在各種可消費(fèi)的產(chǎn)品中毒性代謝產(chǎn)物水平的方法和含皂苷的組合物，所述消費(fèi)產(chǎn)品是由生產(chǎn)毒素的微生物集落化的或可能由所述微生物集落化。這些方法包括步驟將可消費(fèi)產(chǎn)品或其前體與含抗致病皂苷和/或降低毒性的物質(zhì)接觸，所述物質(zhì)限制于可消費(fèi)物質(zhì)或前體并生產(chǎn)毒素的一種或多種微生物的集落化，并殺滅或置換(displace)它們。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了治理農(nóng)業(yè)作物的致病生物和控制由植物材料得到的可消費(fèi)產(chǎn)品的毒性代謝產(chǎn)物水平以及降低真菌毒素和毒性代謝產(chǎn)物對(duì)食物鏈的污染方面的用途。所用的組合物除包含皂苷外，還可包含類黃酮醛如肉桂醛，α-己基肉桂醛和松柏醛。還發(fā)現(xiàn)皂苷制劑有殺滅線蟲(chóng)的用途。優(yōu)選實(shí)施方案的簡(jiǎn)要描述提供基本上控制在材料，如植物，植物部分和農(nóng)業(yè)產(chǎn)品上的植物和動(dòng)物病原體，如真菌，昆蟲(chóng)，蛛形綱和非兩棲類/非水生軟體動(dòng)物集落化和/或生長(zhǎng)的方法和用作為協(xié)同劑的皂苷和天然產(chǎn)物，如一種或多種類黃酮的組合制劑，所述材料能夠支持病原體的生長(zhǎng)或由病原體集落化并受其侵染。優(yōu)選皂苷起天然產(chǎn)物的協(xié)同劑的作用。在植物收獲前將所述組合物用于植物或在收獲和/或加工后用于植物或其它材料。更優(yōu)選在收獲前將所述組合物用于植物，植物部分或組織。優(yōu)選所述組合物是生物可降解的，而且最優(yōu)選以水溶液或生物可降解的水溶性無(wú)水離子表面活性劑，如吐溫80的乳劑形式提供?？梢栽隗w外或體內(nèi)評(píng)價(jià)特定病原體對(duì)所述組合物的敏感性?！皡f(xié)同劑”指提高至少一種存在于制劑中的其它化合物的作用的化合物，所述的組合作用大于其分別的，單獨(dú)作用的總和?！疤烊划a(chǎn)物”指一中生物特有的或少數(shù)相近生物共有的天然來(lái)源的有機(jī)化合物，包括真菌的二級(jí)代謝產(chǎn)物和由植物產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)。例如將在植物部分表面如葉，根或花部分或組織，如木質(zhì)部或韌皮部集落化的真菌和/或昆蟲(chóng)與天然產(chǎn)物接觸以殺滅，置換或延緩或消除病原體的生長(zhǎng)?！凹浠敝肝⑸锘蚶ハx(chóng)與病原體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，通常是必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸，特別是甲硫氨酸所來(lái)自的材料如植物部分或組織相連。“生長(zhǎng)”指由于材料的利用而帶來(lái)的生物體不可逆轉(zhuǎn)的改變，導(dǎo)致體積，干重或蛋白質(zhì)含量增加和/或群落或集落增加?！安≡w”指使生物學(xué)宿主受到損害或產(chǎn)生病害的生物如真菌，細(xì)菌，昆蟲(chóng)，蛛形綱動(dòng)物，蠕蟲(chóng)和非兩棲類/非水生軟體動(dòng)物?！安牧稀敝改軌蛑С职胁≡w集落化和/或生長(zhǎng)的物質(zhì)。生物控制病原體侵染到植物上的方法是使用含一種或多種皂苷和類黃酮醛，特別是使用天然產(chǎn)生的化合物如芳香醛肉桂醛，α-己基肉桂醛和松柏醛的制劑?！吧锟刂啤敝附?jīng)宿主植物對(duì)病原體侵染的直接抗致病活性和/或誘導(dǎo)的抗性來(lái)控制植物病原體。本發(fā)明的組合物和方法與現(xiàn)有的組合物和方法相比具有幾種優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)鑒定和探索皂苷的抗病原特性，可調(diào)整一種或多種其它制劑成分的有效量和濃度，特別是通過(guò)降低已知制劑中的一種或多種其它成分的濃度，同時(shí)降低制劑的植物毒性作用并保留或提高其抗致病效果。例如，雖然據(jù)報(bào)道類黃酮醛和肉桂醛表現(xiàn)出抗真菌特性，但以前卻不曾將其與皂苷聯(lián)合用于植物。僅使用含肉桂醛的皂苷乳劑就足以長(zhǎng)期使植物宿主免受病原體生物，包括銹病和白粉病的侵襲，并且在比先前報(bào)道的濃度更低時(shí)就可產(chǎn)生效果。本發(fā)明的制劑還可有效地對(duì)抗已知對(duì)常規(guī)方法產(chǎn)生抗性的害蟲(chóng)，這類害蟲(chóng)包括薊馬蟲(chóng)和棉鈴蟲(chóng)。制劑的植物毒性還由于所用醛的濃度較低，所需的應(yīng)用量少，而且使用的皂苷的甾體部分的量少而得以降低。因此，具有重要價(jià)值和環(huán)境保護(hù)意義。另外，與未處理的植物相比對(duì)病原體的長(zhǎng)期控制可獲得更有益于健康的植物，并且能提高宿主植物的產(chǎn)量；抗致病物質(zhì)的低濃度和單次劑量可降低對(duì)植物或其收成谷物的危害以及可降低對(duì)殺蟲(chóng)劑使用工人的副作用，或者對(duì)攝入處理植物組織或部分的動(dòng)物、魚(yú)類或家禽的副作用。本發(fā)明的制劑還可有效地控制真菌和昆蟲(chóng)，消除需應(yīng)用多種藥劑的弊端。在特定的情形下，例如當(dāng)昆蟲(chóng)侵害植物部分或組織，又形成繼發(fā)性真菌病時(shí)，本發(fā)明的制劑尤其有益。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可避免對(duì)可消費(fèi)農(nóng)嚴(yán)品的污染并使其明顯降低到消費(fèi)安全水平。再者，通過(guò)用殺滅或替代產(chǎn)生霉菌毒素的真菌的物質(zhì)處理田地植物，可明顯降低收獲作物的毒素污染水平。皂苷是一類由皂苷配基部分和糖部分組成的化合物。S.Budavari編輯，TheMerckIndex，第十一版，Merck&amp;Co.，Inc.，Rahway，N.J.，1990，第1328頁(yè)。本發(fā)明中使用的皂苷是一類廣泛分布在植物中的甾醇糖苷，其中每個(gè)皂苷由皂苷配基和至少一個(gè)糖結(jié)構(gòu)部分組成。皂苷配體包含甾體或三萜，糖部分可包含葡萄糖、半乳糖、戊糖或甲基戊糖。更優(yōu)選用于本發(fā)明的皂苷是絲蘭屬植物衍生的，最優(yōu)選的是Schidigera絲蘭或Valida絲蘭的皂苷提取物。各種結(jié)構(gòu)相關(guān)的皂苷是已知的，結(jié)構(gòu)上差異最大的是糖基化類型。見(jiàn)上。皂苷還可帶有另外的修飾物，例如洋菝契混皂苷在甾體上連有修飾物，皂苷結(jié)構(gòu)可通過(guò)任意數(shù)種本領(lǐng)域已知的酶、化學(xué)和/或機(jī)械手段進(jìn)行修飾。由Schidigera絲蘭得到的皂苷包含甾體皂苷，其主要的皂苷配基是洋菝契皂苷配基和提果皂苷配基(tigogenin)。洋菝契混皂苷經(jīng)水解得到洋菝契皂苷配基(sarsasapogeinm)(5-β，20-βF，22-δF，25-βF洋菝契皂苷配基；也稱為螺旋甾-3-β01和洋菝契皂角苷配基)，葡萄糖和半乳糖。洋菝契皂苷配基的分子式為C27H44O3。Nobel，ParkS.，龍舌蘭，牛津大學(xué)出版社，紐約，1994。用于本發(fā)明的皂苷可從天然資源分離，可全合成或部分合成，或者可通過(guò)重組技術(shù)生產(chǎn)。例如，它們可采用本領(lǐng)域已知的方法，從各種植物的各部分，包括果實(shí)、葉、種子和/或根生產(chǎn)和/或分離；所述各種已知可生產(chǎn)它們的資源，包括從絲蘭、皂樹(shù)屬、龍舌蘭、煙草、甘草、大豆、人參和蘆筍到蘆薈的植物。用于本發(fā)明的皂苷在使用濃度時(shí)優(yōu)選是對(duì)人類和高級(jí)動(dòng)物無(wú)毒的。最優(yōu)選用于本發(fā)明的皂苷是無(wú)毒的食品級(jí)的，來(lái)源于絲蘭屬植物。更為優(yōu)選的皂苷來(lái)源于Schidigera絲蘭或Valida絲蘭和它們的等同物?？紤]到植物毒性的控制及毒理學(xué)安全性，優(yōu)選的皂苷來(lái)源于絲蘭屬，不與膽固醇結(jié)合的優(yōu)選皂苷包括那些源于蘆筍的皂苷。皂苷一般通過(guò)冷卻加壓提取法制備，所得提取物經(jīng)HPLC分析皂苷濃度。絲蘭纖維也可加以利用；它通常是曬干、粉碎的并過(guò)篩。生嚴(yán)制劑的這些化合物的衍生物應(yīng)具有本發(fā)明所需的抗致病和/或植物毒性。根據(jù)其結(jié)構(gòu)，已知的皂苷具有特定特性，發(fā)現(xiàn)其可應(yīng)用于本發(fā)明。一般說(shuō)來(lái)，皂苷可應(yīng)用于廣泛的制劑中，例如殺蟲(chóng)劑、殺真菌劑、一般的殺生物的有毒化合物、表面活性劑、乳化劑、調(diào)味劑和食物添加制品中。這些不同活性歸因于皂苷的特定化學(xué)結(jié)構(gòu)，通常還取決于獲得皂苷的來(lái)源。例如從日本山茶得到的皂苷控制蚊幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)。從除絲蘭屬植物外的來(lái)源得到的皂苷可作為殺蟲(chóng)組合物的活性物質(zhì)。由絲蘭屬植物得到的皂苷被用于除去食物中的膽固醇并用于殺生(biocidal)處理和作為廢渣和其它生物體系抗粘結(jié)/乳化劑。還發(fā)現(xiàn)從龍舌蘭得到的洋菝契混皂苷，例如可用作潤(rùn)濕劑，并且與其它化合物聯(lián)合可治療人類真菌病害。令人感興趣的是，皂苷可作為協(xié)同劑，用以提高制劑中的至少另一種化合物對(duì)各種病原體、生產(chǎn)毒素的微生物或它們的毒性代謝物的對(duì)抗作用，由此，制劑成分的組合作用要比它們的分別作用之和、單獨(dú)作用強(qiáng)和/或活性范圍大。協(xié)同劑的作用是降低給定制劑中一種或多種其它組分的濃度，而基本上保持制劑的原有功效。這種組分與制劑中其它成分的組合可分一步或多步完成并在任何適宜的階段混合和/或應(yīng)用。優(yōu)選選擇一種可理想提高制劑的抗致病作用并降低毒素作用的皂苷。一般說(shuō)來(lái)，皂苷的有效量是約0.3-3％，更優(yōu)選約0.25％v/v10°白利皂苷提取物的水溶液。10°白利是糖化學(xué)領(lǐng)域的術(shù)語(yǔ)。白利糖度等于溶液中糖的重量百分?jǐn)?shù)。Hawley編輯，簡(jiǎn)明化學(xué)辭典，第10版，VanNostrandRernhold，紐約，1981，第149頁(yè)。可提供所需活性的皂苷最優(yōu)選與至少一種醛，尤其是芳香醛組合，它們可直接殺滅真菌或昆蟲(chóng)病原體和/或誘發(fā)植物對(duì)各種真菌或昆蟲(chóng)病原體的系統(tǒng)性抗性。因此，這些抗致病物質(zhì)優(yōu)選包括至少一種病原體生長(zhǎng)抑制的類黃酮醛，其量是應(yīng)足以控制靶病原體微生物的生長(zhǎng)?！翱刂粕L(zhǎng)”的目的在殺滅病原體和/或降低或遏制其繁殖。病原體包括昆蟲(chóng)、真菌和其它集落的對(duì)植物生長(zhǎng)不利的微生物。本發(fā)明的制劑除皂苷外，還優(yōu)選包括下式(1)所示的病原體生長(zhǎng)抑制化合物。其中R代表-CH2OH或-CHO；n是0到3的整數(shù)；每個(gè)R1分別代表OH或含有1-10個(gè)碳原子和0-5個(gè)雜原子的有機(jī)取代基，所述化合物的R1取代基中碳原子和雜原子數(shù)之和不超過(guò)15，R4代表氫或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)基團(tuán)。這些類黃酮醛化合物包括天然產(chǎn)物，如肉桂醛。還注意到了α取代的醛，如α-己基肉桂醛(HCA)，松柏醛和與其密切相關(guān)的化合物。已知許多芳香醛和脂肪醛可用于本發(fā)明，它們通常被認(rèn)為是安全的人工調(diào)味劑，例如苯甲醛、乙醛、肉桂醛、胡椒醛和香草醛(21CFR§172.515)。早在本世紀(jì)五十年代HCA就為大眾所公用，今天更是被廣泛應(yīng)用于化妝品(皂類、去污劑、霜?jiǎng)?、洗劑、香?(香料原料專論，食物調(diào)料毒理學(xué)，12增補(bǔ)，915，1974)。1965年，HCA被FEMA(香料提取制造協(xié)會(huì)，香料成分使用準(zhǔn)則概況，第2569期，食物技術(shù)學(xué)，Champaign，19(第2部分)155，1965)認(rèn)可具有GRSA(通常被認(rèn)為是安全的)并為美國(guó)FDA批準(zhǔn)可應(yīng)用于食物。歐洲理事會(huì)(歐洲理事會(huì)，天然和人工香料，關(guān)于社會(huì)和公共衛(wèi)生領(lǐng)域的部分協(xié)議，Strasbourg，A列(1)，第1部分129號(hào)，第55頁(yè)，1970)將HCA列入可接受的人工香料(濃度為1ppm)。據(jù)報(bào)道這些化合物對(duì)C.botulinum孢子萌發(fā)具有抑制活性。Bowles和Miller，普通食物保存，(1993)56788-794。本發(fā)明的優(yōu)選化合物如下式(2)所示其中R1代表-CHO，R2代表-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表甲氧基或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表氫或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。其中特別重要的類黃酮醛，尤其是芳香醛?？捎糜诒景l(fā)明的芳香醛的例子是肉桂醛(下式(3))和松柏醛(下式(4))其它重要的化合物包括式(1)化合物的類似物，如α-位被烷基，如己基或者被支鏈烷基，如戊基取代的化合物。通常在α-位的基團(tuán)是從C-5到C-10的。這類化合物包括α-己基肉桂醛和α-戊基肉桂醛。α-己基肉桂醛(HCA)的化學(xué)結(jié)構(gòu)如(5)(下)所示HCA的化學(xué)文摘服務(wù)手冊(cè)(CAS)名稱是2-(苯基亞甲基)辛醛，CAS登記號(hào)為[101-86-0]。該化合物還有化學(xué)名稱2-己基-3-苯基-2-丙烯醛。該化合物的分子式是C15H20O，分子量為216.3。HCA是一種低度至中度的揮發(fā)性化合物，25℃時(shí)，其蒸氣壓為70×10-5mmHg。其母體化合物，肉桂醛的蒸氣壓比它要高約40倍(25℃時(shí)為2970×10-5mmHg)。本發(fā)明的芳香醛和脂肪醛可采用本領(lǐng)域已知的各種方法。例如，參見(jiàn)J.March編輯的高等有機(jī)化學(xué)反應(yīng)，機(jī)理和結(jié)構(gòu)，附錄B，第2版，McGraw-Hill，紐約，1977。肉桂醛可通過(guò)合成方法，如將肉桂醇氧化(Traynelis等，美國(guó)化學(xué)會(huì)志，(1964)86298)或通過(guò)苯乙烯與甲酰基甲基苯胺縮合(英國(guó)專利504，125)制備。還可以通過(guò)從天然來(lái)源分離得到目的醛。例如，肉桂醛可以從腐木真菌，Stereumsubpileatum中分離。Birkinshaw等人，生物化學(xué)雜志，(1957)66188。例如可以按照USPN5055621中的描述合成HCA。以實(shí)驗(yàn)室規(guī)模，通過(guò)在氮?dú)庀?，將苯甲醛與辛醇(octanal)反應(yīng)合成HCA(醇醛縮合)(PersonalCommunication，EricWalborsky，F(xiàn)irmenichChemicalManufacturingCenter，PortNewark，NewJersey)。該反應(yīng)在盛有甲醇，309ppm二苯基胺，氫氧化鉀和苯甲醛的攪拌燒瓶中進(jìn)行。在緩慢加入辛醇后，用乙酸使反應(yīng)混合物的pH達(dá)到7.5-9.5。蒸發(fā)掉甲醇并用水洗滌反應(yīng)混合物后，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)儀中。除去約20-24％的罐配料是苯甲醛和“輕物質(zhì)”，剩下的蒸餾物組成α-己基肉桂醛“中心餾份”。使“中心餾份”再分餾，根據(jù)其中氣味評(píng)價(jià)，除去該物質(zhì)中1-5％(重)的輕餾份物質(zhì)。終產(chǎn)物是淺黃色油，在20℃的比重為0.955-0.965，在20℃的折射率為1.548-1.562，在1個(gè)大氣壓下，沸點(diǎn)為305℃，熔點(diǎn)為26℃。還可以從Firmenich得到HCA；其產(chǎn)物主要含有(E)-順式異構(gòu)體(最大值93.8％)，和(Z)-反式異構(gòu)體(最多6％)。少量組分是辛醇的自身醇醛縮合產(chǎn)物(1-1.5％(PersonalCommunication，JuneBurkhardt，F(xiàn)irmenich，Plainsboro，NewJersey)。加入0.04％2，6-二叔丁基-對(duì)甲酚(丁基化的羥基甲苯或BHT)(作為抗氧化劑(TechnicalDataSheet，己基肉桂醛907600，Revision853，F(xiàn)irmenichInc.，Plainsboro，NewJersey))來(lái)穩(wěn)定市售產(chǎn)物?？梢詮囊呀?jīng)報(bào)道天然產(chǎn)生HCA的稻米中分離HCA。(Givaudan-RoureIndex，Givaudan-RoureCorporation，Clifton，NewJersey，1994，p.89)。可以將皂苷和醛化合物組合物單獨(dú)使用或于其它活性或失活的物質(zhì)一起使用。在一些情況下，通過(guò)將一種或多種組分，即除皂苷或式(1)化合物以外的化合物加入到制劑中可以提高制劑的效力。優(yōu)選的是加入組分將特定的制劑的植物毒性減到最低，同時(shí)又可提高制劑的抗致病作用。特別感興趣的是將佐劑加到制劑中?！白魟敝讣尤氲街苿┲杏兄谥饕煞职l(fā)揮作用的物質(zhì)。在農(nóng)業(yè)化學(xué)物質(zhì)的應(yīng)用中，噴霧佐劑完成所述功能?？梢耘渲朴行У膰婌F佐劑以含有一種或多種表面活性劑，溶劑或共溶劑。含表面活性劑，水和油性組分的系統(tǒng)有許多其它形成有序相的可能性表面活性劑自由可以凝集為不同的相以產(chǎn)生微粒，一種可能性是一級(jí)相(firstorderphase)。表面活性劑還集中在油和水相的互滲透界面，形成微乳。例如通過(guò)包含乳化劑，如吐溫80可以直接提供制劑?？梢允褂玫钠渌ノ蹌┌庪x子去污劑入在美國(guó)專利申請(qǐng)4978686中描述的那些。通常，在制劑中在用的去污劑和其它試劑不會(huì)損害類黃酮醛的殺蟲(chóng)劑特性，反而會(huì)提高制劑的實(shí)質(zhì)特性(參見(jiàn)例如美國(guó)專利申請(qǐng)4477361)并可以改善殺蟲(chóng)劑特性。在制劑中可以任選地包含其它組分，如多元酸的鹽如碳酸氫鈉，硫酸鈉，磷酸鈉或磷酸氫二鈉水溶液以提高制劑的抗真菌或殺蟲(chóng)特性。將所得的乳劑稀釋到適宜的濃度進(jìn)行使用。用例如實(shí)施例中描述的方案和本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的其它方法可以確定含皂苷和式(1)，(2)，(3)，(4)和/或(5)化合物的組合物的最有效配方。通過(guò)包含至少一種除皂苷外的化合物以提高制劑中至少另一種其它化合物的作用就可以達(dá)到各制劑最優(yōu)化的目的。根據(jù)其對(duì)特定害蟲(chóng)和/或植物宿主的作用，評(píng)價(jià)使用皂苷和式(1)的任何化合物以及其它制劑組分如吐溫80和/或碳酸氫鈉的各制劑，同時(shí)評(píng)價(jià)適用于特定應(yīng)用以使植物毒性最小同時(shí)又保持或提高了制劑的抗致病作用的各組分的組合和有效量。特別需要的是優(yōu)化制劑以提高對(duì)廣譜病原體的平均病害抗性。通過(guò)系統(tǒng)改變?cè)囼?yàn)制劑中組分的量，用試驗(yàn)制劑處理所需的植物，然后監(jiān)測(cè)與未處理的對(duì)照植物相比的害蟲(chóng)侵染水平可以確定各組分的有效量。例如，在應(yīng)用中可以用各種濃度的皂苷分別噴霧給植物，其中使用含不同量類黃酮醛和/或其它組分的系列制劑。將試驗(yàn)組分的有效量定義為控制病原體在植物宿主上生長(zhǎng)，由此降低植物發(fā)病率的量。可以計(jì)算各特定應(yīng)用的平均病害抗性(MPDC)。MPDC的定義公式為和MPDC=(MDIC-MDIT)MDIC&times;100]]>MDIC＝在未處理對(duì)照中病害發(fā)生的平均％MDIT＝在處理植物中病害發(fā)生的平均％通常，為了進(jìn)行有效的病原體控制，病害控制的平均百分比(MPDC)要大于60％，優(yōu)選至少約70％。通常測(cè)定的有效量的皂苷活性大致與Y.Schidigera皂苷提取物(對(duì)照)相當(dāng)，所述提取物包含約0.05％-3％，優(yōu)選0.25％v/v10°白利糖度的皂苷提取水溶液。還要評(píng)價(jià)制劑的植物毒性；因此至少評(píng)價(jià)制劑在活植物變化上的一種毒性是重要的。按照毒性增加的嚴(yán)重程度，按如下評(píng)價(jià)植物毒性等級(jí)0-植物沒(méi)有任何癥狀；1-很輕微變褐色的胚軸(沒(méi)有其它癥狀)；2-植物有些枯萎，較下部的葉子發(fā)干，維管系統(tǒng)有些變褐色；3-完整植物枯萎，葉子發(fā)干，有外和內(nèi)癥狀的胚軸；4-莖壞死，植物干枯。優(yōu)選的是所用的制劑有2級(jí)或較低級(jí)的植物毒性，更優(yōu)選的是1級(jí)或更低的。例如，評(píng)價(jià)0.1ppm到25000ppm的肉桂醛對(duì)白粉病的作用。通過(guò)使用更高劑量的肉桂醛和/或加入式(1)的其它化合物或通過(guò)經(jīng)加入去污劑等來(lái)提高制劑的實(shí)質(zhì)作用可以改善平均病害控制?？梢詫⒃囼?yàn)組分的有效生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量確定為通過(guò)殺滅害蟲(chóng)或防止其繁殖而降低害蟲(chóng)在宿主植物上集落化程度的量。式(1)，(2)，(3)，(4)或(5)的一種或多種化合物的有效生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量通常為約0.01g/l-25g/l，更優(yōu)選的是約1g/l-20g/l，最佳為約5g/l-10g/l。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在含吐溫80作為乳化劑和任選的碳酸氫鈉的制劑中，所述制劑包含皂苷和有效生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量的α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛。優(yōu)選的制劑通常是含有皂苷和α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛(按重量計(jì)0.5％-10％)并可以包含質(zhì)子惰性酸(按重量計(jì)8％-12％)和余量的水的乳劑。含6-12％質(zhì)子惰性酸的制劑是優(yōu)選的。通常制劑中醛的總量為5％或更少。處理白粉病菌，銹菌和孢子以及蚜蟲(chóng)的優(yōu)選制劑是含有α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛(按重量計(jì)0.001％-10％)，多元酸的鹽(按重量計(jì)4％-12％)，乳化劑(按重量計(jì)1％-4％)和余量的水的乳劑。不使用除具有內(nèi)在抗氧化劑特性的特定醛，例如松柏醛以外的抗氧化劑的制劑也是有效的?？梢詥为?dú)或與組合物一起使用其它化合物，如H2O2，已知它殺滅特定的真菌如在堿性環(huán)境中的A.flavus。也可以包含抗冷凍組分如甘油，丙二醇，乙二醇和/或異丙醇，膠和膠樣物質(zhì)如黃原增膠，阿拉伯膠，明膠，羥丙基甲基纖維素等(如在美國(guó)專利5290557中描述的那些)只要所用的量不會(huì)損害植物和/或任何收獲物，如水果。另外，為了在收獲前使用，可以使用誘導(dǎo)非系統(tǒng)或系統(tǒng)植物抗性的化合物以控制在大田條件下特定真菌的集落化和/或生長(zhǎng)?？梢杂酶鞣N方法，包括其中將待檢制劑在一定時(shí)間內(nèi)暴露于升高的溫度的加速試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)制劑的穩(wěn)定性。以規(guī)則的間隔取制劑樣品，然后用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的方法化學(xué)分析以確定降解的速率和性質(zhì)。例如，可以通過(guò)氣液層析(CLC)，使用30m的非極性聚二甲基硅氧烷毛細(xì)柱(如Hp-1，Hewlett-Packard，或SPB-1，Supelco)和火焰離子檢測(cè)儀分析HCA。用氦作為載氣(8ml/分)和約240℃的柱，(E)-順式異構(gòu)體(主要組分)保留時(shí)間為約6.0分，(Z)-反式異構(gòu)體(微量組分)的保留時(shí)間為約6.3分。為了應(yīng)用，若用制劑制備用于種植對(duì)特定病原體敏感的宿主植物的基礎(chǔ)或其它生長(zhǎng)底物，應(yīng)用于已經(jīng)受到侵染的生長(zhǎng)底物或收獲的物質(zhì)，可以將本發(fā)明的制劑直接加到根際，底物或收獲的物質(zhì)，或?qū)⑺鼈兣c固體支持物結(jié)合或用使用定時(shí)釋放物質(zhì)包囊。若使用固體載體，應(yīng)避免可能導(dǎo)致活性醛氧化的物質(zhì)。釋放體系的實(shí)例包括淀粉葡聚糖等。參見(jiàn)Yuan等.，基礎(chǔ)與應(yīng)用毒理學(xué)(1993)2083-87，有關(guān)運(yùn)載體系的實(shí)例。還可參見(jiàn)Kawada等.，(1994)10385-389。除皂苷和前述式(1)，(2)，(3)，(4)和(5)的特定化合物外，任何這些化合物的衍生物等同于本發(fā)明的化合物，所述衍生物在生物系統(tǒng)作用下產(chǎn)生上述鑒定的分子式的化合物。因此將前體化合物應(yīng)用于植物部分或組織或收獲的物質(zhì)應(yīng)等同于本發(fā)明的實(shí)施。在美國(guó)專利申請(qǐng)5139715和其中引述的參考文獻(xiàn)中描述了前體化合物向類黃酮醛的生物轉(zhuǎn)變。還可參見(jiàn)CaseyandDobbEnzymeMicrob.Techol.(1992)14739-747。前體化合物的實(shí)例包括在與對(duì)植物病原體(如在氨基酸氨裂解酶途徑中的那些)獲得的和/或系統(tǒng)抗性的植物抗性有關(guān)途徑中的那些，包括苯丙氨酸(生產(chǎn)肉桂酸)。所需的其它前體化合物包括在用于生產(chǎn)木質(zhì)素和香豆素的生物途徑中的那些，例如生產(chǎn)對(duì)香豆酸的酪氨酸。因此認(rèn)為產(chǎn)生具有所需抗致病和毒素降低作用的這些化合物的前體和衍生物是本發(fā)明的等同物。通過(guò)將充足量的抗致病劑引入到靶致病生物體中以破壞靶致病生物體的生長(zhǎng)和/或活力來(lái)完成本發(fā)明的方法。在收獲前或收獲后，將含有抗致病劑的制劑引入到植物組織或部分中。應(yīng)用方法包括噴霧，噴灑，浸漬，注射等，活性成分呈濃縮液，溶液，懸浮液，粉末等形式。例如將制劑作為濕或干制劑噴霧到植物病原體侵染的植物葉子的或?qū)χ参锊≡w侵染敏感的植物的葉子表面和/或下表面或其它植物組織或部分，當(dāng)使用濕制劑時(shí)，優(yōu)選是噴霧到試驗(yàn)點(diǎn)?？梢栽谇秩厩盎蚝髧婌F植物，優(yōu)選是在侵染前。但是，為了使對(duì)宿主植物的損害最小，若可行，優(yōu)選是處理較老的植物，由于新葉一般對(duì)植物毒性更敏感。另外，若可以接觸根和在根部集落化的相關(guān)致病生物體時(shí)，可以將干或濕制劑作為灌溉過(guò)程的部分或單獨(dú)應(yīng)用于根際。在一些情況下，可以使用定時(shí)釋放制劑，特別是用于根際或收獲后的物質(zhì)。可以用于植物本身或根際的量取決于侵染程度和使用制劑和在制劑中所用的特定化合物后所達(dá)到的程度，因此以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)確定最佳結(jié)果。將制劑的活性成分引入到靶生物體中的方法可以通過(guò)使處理植物表面的害蟲(chóng)生物體直接攝食或飼喂提供營(yíng)養(yǎng)的宿主整體表面上的害蟲(chóng)生物，所述靶害蟲(chóng)生物在宿主上集落化，所述宿主含有或在其表面有抗致病劑。在提供營(yíng)養(yǎng)的宿主植物表面上的抗致病劑的存在可以是抗致病劑于植物部分直接接觸的結(jié)果，或可以是由宿主植物加工的，作為在用抗致病劑處理植物前引入作為二級(jí)作用的系統(tǒng)抗性的結(jié)果或作為宿主植物遺傳修飾的結(jié)果。根據(jù)靶生物，可以將所用的皂苷和/或醛微囊包埋或與固體支持物，任選地通過(guò)一連接物如從多糖中衍生的結(jié)合區(qū)相連，其中固體支持物是多糖如纖維素，特別是微晶體纖維素。在美國(guó)專利5340731；5202247和5166317中描述了纖維素結(jié)合區(qū)的制備。也可以使用來(lái)自支架(Scaffold)蛋白質(zhì)的結(jié)合區(qū)。參見(jiàn)Shoseyev等.，(PCT申請(qǐng)PCT/0594/04132)。使用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的方法，用或不用可裂解鍵可以將皂苷和/或醛與結(jié)合區(qū)或其它固體支持物相連?；钚猿煞值墓腆w或微囊形式對(duì)于處理或防止土壤病原體是特別有用的。用分析化學(xué)技術(shù)確定活性成分從固體或微囊形式中的釋放和最佳速率。為了達(dá)到定量的目的，可以用氣相層析技術(shù)確定所釋放的醛量。例如將包囊(顆?；?產(chǎn)物的樣品與所選類型的土壤混合，在不同的時(shí)期取樣以測(cè)量釋放。也可以分析從制劑中釋放的揮發(fā)性氣體。用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的方法，用GC層析也可以評(píng)價(jià)葉狀和滴灌應(yīng)用制劑隨時(shí)間的活性和穩(wěn)定性。還可以制備制劑的甲醇或乙醇提取物進(jìn)行HPLC分析。本發(fā)明制劑的一種或多種組分可以通過(guò)調(diào)節(jié)一種或多種基因的表達(dá)而在植物中進(jìn)行生產(chǎn)，所述基因編碼控制所需化合物在植物，植物部分，植物細(xì)胞，特定植物組織和/或水平所需的和/或與植物生長(zhǎng)的特定階段相關(guān)的一種或多種酶或酶途徑或簇。所述酶可以是分別在生物合成途徑或降解途徑中的，所述調(diào)節(jié)可以分別是上升調(diào)節(jié)或下降調(diào)節(jié)，以調(diào)節(jié)內(nèi)源性植物基因或外源供給植物的轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。天生的植物基因是屬于宿主植物基因組所天生的基因。內(nèi)源性植物基因是存在于所需野生型植物宿主的基因組中的基因。它可以是天生的基因或由于植物感染而存在的或其它自然插入到植物基因組中的基因(如病毒基因)。還可以用重組方法或傳統(tǒng)的植物育種方法修飾宿主植物以便將一種或多種外源基因?qū)氲剿拗髦参镏?，所述外源基因編碼控制所需化合物水平的酶，這樣的酶是在皂苷或一種或多種式(1)，(2)，(3)，(4)或(5)的化合物的合成途徑中。基因表達(dá)的調(diào)節(jié)是為了在轉(zhuǎn)錄，翻譯和/或翻譯后控制所需基因產(chǎn)物的生產(chǎn)。通過(guò)調(diào)節(jié)編碼合成化合物所需的一種或多種酶的一種或多種內(nèi)生基因或轉(zhuǎn)基因來(lái)控制所述化合物的水平。在植物中調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方法是本領(lǐng)域已知的。改變生長(zhǎng)條件或?qū)⒒衔锿庠从糜谥参锟梢杂绊懟虮磉_(dá)。例如，通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)源性基因表達(dá)可以用本發(fā)明的制劑誘導(dǎo)系統(tǒng)植物抗性。在分子水平，基因表達(dá)基本上取決于轉(zhuǎn)錄，翻譯和終止控制區(qū)，它們調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū)的表達(dá)。通過(guò)研究調(diào)節(jié)這些控制區(qū)的植物信號(hào)或直接重組所述控制區(qū)，可以調(diào)節(jié)例如編碼控制皂苷水平所需的酶之基因的表達(dá)。若轉(zhuǎn)基因是對(duì)于植物宿主是外源的，則所述轉(zhuǎn)基因應(yīng)包含所選的和所設(shè)計(jì)的控制區(qū)，以達(dá)到所需的基因表達(dá)水平和使基因表達(dá)的時(shí)間選擇。適宜的控制區(qū)于所述基因同源(天然的)或不同源(非天然的)。“同源”指所述控制區(qū)來(lái)自或基本上相似于與所研究基因正常相關(guān)的控制區(qū)。“不同源”指所述控制區(qū)源自不同的核苷酸源或序列或基本上不同于與所研究基因正常相關(guān)的控制區(qū)。例如若與所述控制區(qū)相比，所述酶的編碼序列在來(lái)源上是不同源的，為了在所要求的植物細(xì)胞中表達(dá)基因，就要將在這些植物細(xì)胞中有功能的轉(zhuǎn)錄和翻譯啟始調(diào)節(jié)區(qū)或啟動(dòng)子于所述編碼序列可操作相連。在這些植物細(xì)胞中有功能的轉(zhuǎn)錄和翻譯啟始信號(hào)包括來(lái)自植物宿主或其它植物天生或內(nèi)源性的并指導(dǎo)在植物宿主中的組成性或選擇性表達(dá)之基因的那些，并包括來(lái)自感染植物之病毒如CaMV的序列。特別需要的是在植物，植物部分，植物細(xì)胞，特定植物組織和/或選擇性調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因表達(dá)和/或與植物生長(zhǎng)的特定階段相關(guān)的基因控制區(qū)。優(yōu)選的是本領(lǐng)域已知的那些控制區(qū)和/或于植物生長(zhǎng)的特定階段相關(guān)的，特別是可用于調(diào)節(jié)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)或啟動(dòng)子，所述基因編碼控制皂苷和/或式(1)，(2)，(3)，(4)或(5)的組分在植物，植物部分，植物細(xì)胞或特定植物組織中的水平所需的酶，或與特定的植物生長(zhǎng)階段相關(guān)。例如在USPN4,943,674和5，175,095描述的用于水果中的不同表達(dá)方式的啟動(dòng)子；在USPN5,315,001中見(jiàn)到的；和在USPN5,177,011中快速發(fā)育組織和嫩秧苗中的啟動(dòng)子。在植物宿主中生產(chǎn)本發(fā)明制劑所需組分的優(yōu)選方法是通過(guò)重組DNA方法，特別是通過(guò)用本領(lǐng)域已知的重組技術(shù)，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因植物，改進(jìn)皂苷和/或至少式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)的一種化合物在特定植物組織中的水平。所述方法包括用在植物有功能的表達(dá)盒轉(zhuǎn)化所述植物細(xì)胞，所述表達(dá)盒含有5’到3’方向的轉(zhuǎn)錄可操作連接的組分，轉(zhuǎn)錄和翻譯啟始調(diào)節(jié)區(qū)，連接在閱讀框架中DNA序列的5’，所述DNA序列編碼能夠調(diào)節(jié)生產(chǎn)的和/或生產(chǎn)所述化合物所需的一種或多種酶，以及翻譯和轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。由于改變了在所述化合物生物合成中酶的濃度，所以表達(dá)生產(chǎn)所述化合物所需的酶可以提高所述化合物的生產(chǎn)。特別是在植物組織如葉，根，水果和種子中皂苷，肉桂醛和/或松柏醛生產(chǎn)的選擇性控制。為了在特定的組織中選擇性控制皂苷的生物合成，用表達(dá)盒轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述表達(dá)盒含有編碼一種或多種酶的結(jié)構(gòu)基因，所述酶是合成皂苷所需的而且能夠提高所述化合物在所述組織中的含量。相似地，為了在特定的組織中生物合成肉桂醛，用表達(dá)盒轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述表達(dá)盒含有編碼一種或多種酶的結(jié)構(gòu)基因，所述酶是合成肉桂醛所需的而且能夠提高肉桂醛在所述組織中的含量。特別需要的是編碼能夠代謝前體化合物的一種或多種酶的那些基因，所述化合物對(duì)于從在植物細(xì)胞中正常發(fā)現(xiàn)的底物合成皂苷，肉桂醛和/或松柏醛化合物是必需的。更需要的是轉(zhuǎn)基因表達(dá)至少一種(1)，(2)，(3)，(4)或(5)的化合物和皂苷。制備用于表達(dá)基因的DNA構(gòu)建體，它可以使表達(dá)盒整合到植物宿主的基因組中。用本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)如農(nóng)桿菌，電穿孔或高速率的微顆粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化可以完成整合。根據(jù)應(yīng)用，可以在特定的組織和/或特定的細(xì)胞器中優(yōu)先表達(dá)皂苷和一種前體化合物。利用具有所需表達(dá)方式的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)達(dá)到組織特異性。用適宜的轉(zhuǎn)移肽轉(zhuǎn)移特定細(xì)胞器的酶。已經(jīng)描述了DNA構(gòu)建體組織和細(xì)胞器特異性表達(dá)的方法，而且是本領(lǐng)域已知的。為了證實(shí)所述基因的調(diào)節(jié)和表達(dá)，現(xiàn)有各種技術(shù)可用于確定存在于植物細(xì)胞中的所需DNA序列是否整合到基因組中并被轉(zhuǎn)錄?？梢杂美鏝orthern印跡技術(shù)檢測(cè)編碼所需酶的信使RNA。還可以通過(guò)檢測(cè)酶活性或蛋白質(zhì)產(chǎn)物的免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè)表達(dá)。最優(yōu)選的是用本領(lǐng)域已知的方法測(cè)量在植物宿主中所述化合物的水平。例如與對(duì)照植物相比一種所需的表型，就是證明了因所述基因的表達(dá)而使植物組織中皂苷和/或類黃酮醛的含量和在植物宿主中皂苷水平增加。為了將一種或多種本發(fā)明制劑的化合物導(dǎo)入到靶生物體中，表達(dá)編碼酶的基因的植物宿主會(huì)使靶生物體暴露于至少一種抗致病制劑組分中，所述酶是控制所述化合物的水平所必需的。在另一實(shí)施方案中，選擇性地表達(dá)所述基因誘導(dǎo)全株植物宿主對(duì)病原體攻擊或集落化的抗性?？梢杂芍参锼拗鞅磉_(dá)抗致病制劑的至少一種組分，將抗致病制劑的其它組分外源用于所述植物宿主以便當(dāng)所述組合直接用間接導(dǎo)入到靶生物體時(shí)，可以引發(fā)所需的抗致病作用。除抗植物病原體的自體保護(hù)外，積累皂苷能力提高的轉(zhuǎn)基因植物可以用作提取皂苷的來(lái)源，隨后用作活性殺蟲(chóng)劑。通過(guò)下降調(diào)節(jié)編碼酶的特異性植物基因的表達(dá)可以積累類黃酮醛，所述酶要么使所需醛進(jìn)一步代謝要么從使代謝中間產(chǎn)物遠(yuǎn)離所需的醛。例如在肉桂醛的情況下，這包括下降調(diào)節(jié)肉桂酸4-羥化酶(CA4H)和肉桂醇脫氫酶(CAD)的表達(dá)。CA4H通常使一些肉桂酸不形成肉桂醛而產(chǎn)生對(duì)香豆酸，其自身的代謝中間產(chǎn)物。通常僅降低CA4H活性并不能足以積累肉桂醛，因?yàn)镃AD能夠迅速地將肉桂醛轉(zhuǎn)變成肉桂醇，后者然后摻入到木質(zhì)素中或作為糖苷積累。同時(shí)降低CA4H和CAD的活性可以增加從肉桂酸到肉桂醛的代謝流動(dòng)并減少肉桂醛向肉桂醇的轉(zhuǎn)變。一些肉桂醛摻入到木質(zhì)素中，但肉桂醛(游離的或作為糖苷)也積累會(huì)高于正常水平，特別是當(dāng)肉桂酸的生物合成增加時(shí)。當(dāng)苯丙氨酸氨裂解酶(PAL；在正常phenylpropanoid代謝中的第一和速率限制步驟，HahlbrockandScheel，(1989)植物生理學(xué)與分子生物學(xué)年度綜述，40347-369)活性高時(shí)會(huì)發(fā)生，這是在植物這自然產(chǎn)生的一種狀態(tài)以應(yīng)答包括真菌病原體侵入和與受傷和昆蟲(chóng)取食相關(guān)的機(jī)械損傷的廣泛的刺激。已經(jīng)克隆了大量的植物CA4H和CAD基因而且其序列可從GenBank得到?？梢詫ú煌参锓N之間保守核苷酸序列的這些基因的部分直接用在植物表達(dá)載體(反義或有意義方向)中以抑制相應(yīng)的內(nèi)源基因(如Pear等.，(1993)抗過(guò)敏研究與進(jìn)展3181-190，Napoli等.，(1990)植物細(xì)胞2279-289。參見(jiàn)USPN5107065)。更優(yōu)選的是用這些保守基因序列從待修飾的植物種的cDNA文庫(kù)中分離CA4H和CADcDNA克隆。然后將所得的cDNA克隆或其部分導(dǎo)入植物表達(dá)載體(發(fā)義和有意義)并用于轉(zhuǎn)化所需的植物。本發(fā)明的DNA構(gòu)建體優(yōu)選含有至少50個(gè)堿基的序列，所述序列與內(nèi)源CA4H或CAD基因同源。通過(guò)將載體于有用的DNA片段操作相連形成可用于植物轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒來(lái)生產(chǎn)重組DNA分子。本文將能夠指導(dǎo)來(lái)自基因克隆部分的RNA表達(dá)的載體稱為“表達(dá)載體”。所述表達(dá)載體含包括啟動(dòng)子的表達(dá)控制元件。用于在高等植物中表達(dá)基因的典型載體是本領(lǐng)域熟知的，包括由Rogers等人(酶學(xué)方法(1987)153253-277)描述的從根癌農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒衍生的載體。用于使導(dǎo)入基因產(chǎn)生強(qiáng)組成性表達(dá)的常用的啟動(dòng)子是花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動(dòng)子(可從PharmaciaPiscataway，NJ得到)?？梢允褂媒M成性啟動(dòng)子(如CaMV35S啟動(dòng)子)或可誘導(dǎo)或發(fā)育調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子(如來(lái)自PAL或內(nèi)源CA4H或CAD基因的啟動(dòng)子)。用組成性啟動(dòng)子可以影響植物所有部分的功能，而用誘導(dǎo)或發(fā)育調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子的優(yōu)點(diǎn)在于只在所需組織和其所需的條件下產(chǎn)生發(fā)義或有義RNA。使用發(fā)育調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子是優(yōu)選的，因?yàn)橐阎猵henylpropanoid生物合成的下降調(diào)節(jié)能夠?qū)愒碢AL基因的轉(zhuǎn)基因植物的發(fā)育產(chǎn)生不必要的副作用(Elkind等.，(1990)國(guó)立科學(xué)院學(xué)報(bào)，879057-9061)?？梢杂迷S多不同的轉(zhuǎn)化方法常規(guī)轉(zhuǎn)化各種植物。對(duì)于將DNA轉(zhuǎn)移到雙子葉植物中的特別有效的一種方法包括使用農(nóng)桿菌。在該方法中，將所需的基因插入在T-DNA區(qū)的邊界之間，所述T-DNA區(qū)基因被剪接成有選擇性標(biāo)記基因(如編碼新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶Ⅱ或phosphinothricin乙酰轉(zhuǎn)移酶)的小重組質(zhì)粒。然后通過(guò)轉(zhuǎn)化或三親配對(duì)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌。然后用攜帶所需基因的農(nóng)桿菌菌株通過(guò)共培養(yǎng)細(xì)菌和適宜的植物組織(如葉盤(pán))來(lái)轉(zhuǎn)化植物組織。用適宜的選擇試劑在組織培養(yǎng)中篩選轉(zhuǎn)化的相比，然后再生植物(參見(jiàn)Horsch等.，(1985)科學(xué)，2271229-1231)。已經(jīng)在植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化，特別是在更recalcitrant作物植物中使用的其它方法包括biolistics和電穿孔(有關(guān)詳細(xì)方法參見(jiàn)Sanford等.，(193)酶學(xué)方法217483-509和Potter(1993)酶學(xué)方法217461-478)。一旦生產(chǎn)了轉(zhuǎn)基因植物，就可以使用用于CA4H和CAD的常規(guī)酶檢測(cè)方法確定不同轉(zhuǎn)化體中酶活性的抑制水平?？赡苤挥猩倭可a(chǎn)的轉(zhuǎn)化體有足夠低的殘留的酶活性，從而可以積累類黃酮醛，而且對(duì)植物發(fā)育沒(méi)有不利的副作用。出于該原因，生產(chǎn)CA4H和CAD均受到抑制的轉(zhuǎn)化體的優(yōu)選方法是將兩種基因分別導(dǎo)入到不同的轉(zhuǎn)化體中，然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)有性雜交將其組合。這可以同時(shí)得到大量組合的待評(píng)估的基因抑制水平。另一種在轉(zhuǎn)基因植物中過(guò)量生產(chǎn)皂苷或類黃酮醛的方法是將植物基因賦予能夠合成特定類黃酮醛和/或皂苷的微生物宿主。然后在發(fā)酵系統(tǒng)中可以用所得微生物生產(chǎn)所述類黃酮醛，或可以用所得微生物作為活或非活微生物制品中類黃酮醛的天然釋放體系。酵母，特別是啤酒酵母是用于該目的優(yōu)選的生物，因?yàn)橐呀?jīng)對(duì)其進(jìn)行了加工用于高水平表達(dá)PAL(Faulkener等.(1994)基因，14313020)，而且已經(jīng)表明植物肉桂酸4-羥化酶在酵母中有功能(Urban等.(1994)歐洲生物化學(xué)雜志，222843-850)。PAL的表達(dá)誘導(dǎo)了從苯丙氨酸生產(chǎn)肉桂酸的能力。從苯丙氨酸生產(chǎn)肉桂醛還需要另外兩個(gè)酶促步驟。在植物中，這些步驟由酶肉桂酸CoA連接酶(CL)和肉桂基CoA還原酶(CCoAR)催化，但是由于4-香豆酸(coumarate)CoA連接酶(4CL)也可以用肉桂酸作為底物(Knobloch，andhahlbrock(177)Arch.Biochem.Biophys.184237-248)，所以可以用4CL代替CL。在許多地方(Genbank)已經(jīng)描述了20以上的克隆PAL基因和5個(gè)以上4CL基因以有利于其在本發(fā)明中的實(shí)施。用來(lái)自純化蛋白質(zhì)N-末端的氨基酸序列，或肽片段作為探針序列，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)基因克隆技術(shù)分離cDNA克隆，可以得到CCoAR的基因。已經(jīng)從大豆栽培作物(Wengenmayer等.(1976)歐洲生物化學(xué)雜志，65529-536；Luderitz和Grisebach(1981)歐洲生物化學(xué)雜志，119115-124)，云杉形成層(Luderitz和Grisebach，同上文)，楊樹(shù)木質(zhì)部(Sarni等.(1984)歐洲生物化學(xué)雜志，139259-265)和Eucalyptusgunnii正在分化的木質(zhì)部(Goffner等.(1994)植物生理學(xué)，106625-632)中純化并部分表征了CCoAR。純化的優(yōu)選方法是Goffner等人(同上文)的，因?yàn)樵摲椒ㄔ赟DS-聚丙烯酰胺凝膠上得到單個(gè)蛋白質(zhì)帶，從而用于蛋白質(zhì)測(cè)序。為了表達(dá)α-己基肉桂醛，也可將表達(dá)催化α-己基加到肉桂醛上的酶的基因插入到微生物宿主或植物中。例如可以從水稻植物中克隆所述基因。用標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化技術(shù)，如電穿孔(Becker和Guarante(1991)酶學(xué)方法，194182-187)將克隆的基因?qū)氲綐?biāo)準(zhǔn)表達(dá)載體中，然后用于轉(zhuǎn)化微生物宿主，優(yōu)選酵母。用標(biāo)準(zhǔn)酶檢測(cè)方法確定被操作基因的功能性表達(dá)，并使用用于類黃酮醛的檢測(cè)方法篩選有最大生產(chǎn)力的菌株。因?yàn)轭慄S酮醛有抗微生物特性，所以優(yōu)選使用的表達(dá)載體是使導(dǎo)入的基因只在生長(zhǎng)循環(huán)晚期或應(yīng)答合成誘導(dǎo)劑時(shí)才表達(dá)。也可以在固定化的全細(xì)胞反應(yīng)器(如Evans等.(1987)生物技術(shù)與生物基因工程，301067-1072)中生長(zhǎng)工程化的微生物宿主以防止在培養(yǎng)基中積累醛。所述配方和方法用于處理被致病生物體集落化的植物。這些包括正在開(kāi)花的植物，草，包括觀賞草皮，小糠草，蔬菜，谷物和水果，包括西紅柿，馬鈴薯，洋薊，草莓，玉米，谷類，洋蔥，黃瓜，萵苣，煙草，柑橘屬如橘子，檸檬，柚子和葡萄柚，以及風(fēng)鈴屬(bell)胡椒和葡萄，和果樹(shù)如桃，蘋(píng)果和櫻桃，觀賞植物如玫瑰和樹(shù)，特別是松樹(shù)。還包括直接或間接由魚(yú)，禽和動(dòng)物，包括人消費(fèi)的作物。“直接或間接”指作物例如可以被人(直接消費(fèi))攝取，或指非人動(dòng)物或禽類攝食谷物，然后它們又可以被人攝取(間接消費(fèi))。用于消費(fèi)的作物包括煙草，魚(yú)，動(dòng)物和禽飼料，用于加工成酒或食物如玉米漿等的作物。靶致病生物包括在植物或植物部分，特別是植物部分的表面集落化的真菌。施用所述制劑的最佳時(shí)間和方法根據(jù)制劑集落化的植物的特定部分和在植物生活周期中，特定侵染發(fā)生或可能發(fā)生的時(shí)間來(lái)確定。例如為了治理白粉菌，銹菌和在宿主植物葉上集落化的其它病原體，用本發(fā)明的制劑噴灑所述宿主植物來(lái)除去病原體。式(1)化合物的使用量部分隨靶病原體和宿主植物的不同而不同，而且可以通過(guò)評(píng)估靶生物體對(duì)所示制劑的敏感性以及制劑或宿主植物的植物毒性作用，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定?？梢栽谇秩局盎蛑髧姙⒅参?，優(yōu)選是在侵染之前。然而，為了使對(duì)宿主植物的損傷降到最小，若可行，優(yōu)選的是處理較老的植物，因?yàn)槟劬G葉對(duì)植物毒性更敏感。另外，可以使用轉(zhuǎn)基因作物，它們以足以抑制病原體生長(zhǎng)和/或殺滅所述病原體的量表達(dá)了一種或多種制劑組分。優(yōu)選在所述病原體集落化的組織，如葉中表達(dá)所述組分。特別需要的是治理受白粉病影響的植物，這種病是由白粉菌科的真菌靶生物引起的。例如下列種在所說(shuō)明的植物中引起白粉病二孢白粉菌秋海棠屬，菊屬，大波斯菊，南瓜，大麗花，亞麻，萵苣和百日菊；禾白粉菌谷類和草；蓼白粉菌菜豆，大豆，三葉草和其它豆科植物，甜菜，甘藍(lán)和其它十字花科植物，黃瓜和羅馬甜瓜，飛燕草和綠球花；Microshphaeraalni烏飯樹(shù)，梓樹(shù)，榆樹(shù)，丁香，櫟樹(shù)，杜鵑花和香豌豆；Phyllactiniasp梓樹(shù)，榆樹(shù)，槭樹(shù)和櫟樹(shù)；蘋(píng)果白粉病柄球菌蘋(píng)果，梨和榅桲；P.oxyacanthae杏，櫻桃，桃和李；Spaelrothecamacularis草莓；S.mors-uvae醋栗和茶鑣子；S.pannosa桃和玫瑰；和葡萄白粉病鉤絲殼霉葡萄，七葉樹(shù)和椴樹(shù)。還需要治理因擔(dān)子菌綱，特別是夏孢銹菌目引起的銹病而受到影響的植物。約有4000種銹病真菌。最重要的銹病真菌和受影響的植物包括柄銹菌屬許多宿主如小麥和所有其它矮小谷物的銹病(禾柄銹菌)；黃或條銹病小麥，大麥和黑麥(條形柄銹菌)；葉或褐銹病小麥和黑麥(隱匿柄銹菌)；大麥的葉或褐矮銹病(大麥柄銹菌)；燕麥褐銹病(禾冠柄銹菌)；玉米銹病(高粱柄銹菌)南方或熱帶玉米銹病(多堆柄銹菌)；高粱銹病(紫色柄銹菌)；和甘蔗銹病(P.sacchari和屈恩氏柄銹菌)。柄銹菌屬還在田地作物如棉花(P.stakmanii)，蔬菜如刁柏(天冬門柄銹菌)和花如菊花(菊柄銹菌)，蜀葵(P.malvacearum)和snapdragon(P.antirrhini)中引起嚴(yán)重的銹病。膠銹菌屬引起重要的膠銹菌癭(G.juniperivirginianae)和山楂膠銹菌癭(G.globosum)。Hemileia引起致命的咖啡葉銹病。(H.vastatrix)。多胞須菌屬在玫瑰上引起銹病，在覆盆子上引起黃銹病。引起銹病并用本發(fā)明制劑可治理的其它真菌包括單胞銹菌屬豆科植物(菜豆，蠶豆和豌豆)(數(shù)個(gè)單胞銹菌)和石竹屬植物(U.caryophyllinus)；柱銹菌屬松樹(shù)，櫟樹(shù)和其它宿主的嚴(yán)重銹病，如白松樹(shù)銹泡病(C.ribicola)松樹(shù)和櫟樹(shù)的紡錘形銹病(櫟柱銹菌tusiforme特異型)；東方疵斑病或松樹(shù)-櫟樹(shù)銹病(櫟柱銹菌virginianae特異型)；pine-sweetfern銹泡病(茶柱銹菌)；pine-Comandra銹病(C.comandrae)；和南方玉米銹病(C.strobilinum)。其它包括柵銹病屬，它引起亞麻的銹病(亞麻柵銹病)；鞘孢銹菌屬，它引起松針的銹泡病(紫菀孢銹菌)；裸雙胞銹菌屬，它引起黑漿果植物和覆盆子的橙銹病；層銹菌屬，引起強(qiáng)烈的破壞型的大豆銹病(豆薯層銹菌)；和疣雙胞銹菌屬，引起桃的銹病。還可以用本發(fā)明的制劑和方法預(yù)防并治理因在植物其它部分，如根和果實(shí)集落化的生物體引起的侵染。對(duì)于影響植物根的真菌，如鐮孢菌屬，曲霉屬和輪枝孢屬(包括棉黃萎輪枝孢和大麗花輪枝孢)，優(yōu)選通過(guò)葉應(yīng)用本發(fā)明的制劑，通過(guò)轉(zhuǎn)移使活性成分到達(dá)根或通過(guò)誘導(dǎo)系統(tǒng)獲得的抗性(SAR)來(lái)治理侵染。為了治理果實(shí)侵染，如黑斑，在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中或之后應(yīng)用本發(fā)明的制劑，優(yōu)選制劑施用到正在發(fā)育的果實(shí)上。其它靶真菌生物包括Phragmidiumspt；玫瑰雙殼柄銹菌屬；Sphaerothecatannosa；Oibiapsissicula；Phytophoyataraesitica；柄銹菌屬；鏈格孢屬；Susaiumspp；灰色葡萄孢；SclerotiniaHomoeocarca；DutchElm病害(Ceratocystisulmi)和櫟樹(shù)枯萎(C.fagacearum)。還包括藍(lán)綠藻(Cyanobacteria)。特別需要治理產(chǎn)生fumonisins，富馬酸和/或其結(jié)構(gòu)類似物的真菌。本發(fā)明的制劑還用于抗昆蟲(chóng)，特別是直翅目；包括薊馬的纓翅目；包括蚜蟲(chóng)，葉蟬，粉虱，蚧，蟬和介殼蟲(chóng)的同翅目的那些。本發(fā)明的理論是對(duì)用本發(fā)明制劑處理敏感的昆蟲(chóng)是在其食管中有共生細(xì)菌的那些。因此，用本發(fā)明制劑也可以控制除上述所列以外的有共生物質(zhì)的昆蟲(chóng)。其它靶生物體包括蜘蛛，特別是葉螨(節(jié)肢動(dòng)物門)。其它昆蟲(chóng)靶包括鞘翅目的那些，如南瓜十二星葉甲和棉花棉鈴蟲(chóng)；和鱗翅目，包括蘋(píng)果蠹蛾。特別需要治理葡萄中的根瘤蚜屬侵染。葡萄根瘤蚜屬的根形式(DaktulosphairavitifoliaeFitch)的一種毀壞性的葡萄昆蟲(chóng)。植物損傷不僅是由于根瘤蚜屬的取食，而且更主要的是由于二級(jí)真菌的攻擊，所述二級(jí)真菌不受殺蟲(chóng)劑的控制。通常在于宿主植物根一樣深的地方發(fā)現(xiàn)根瘤蚜屬，這可能有8英尺或更深。因此為了治理葡萄中的根瘤蚜屬侵染，可以將制劑直接釋放到植物根，例如通過(guò)將液體或固體制劑注射到根周圍的土壤中。另外，可以將所述制劑用于植物的葉或其它易接近的部分，然后通過(guò)植物維管系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到根區(qū)或通過(guò)有SAR的誘導(dǎo)。如治理白粉病和銹病一樣，可以用轉(zhuǎn)基因作物治理根瘤蚜屬；表達(dá)式(1)化合物的優(yōu)選組織是根?？梢栽诓煌纳L(zhǎng)階段，用式(1)的化合物治理根瘤蚜屬?？梢詫⑺龌衔锱渲瞥苫蚍謩e施用于根瘤蚜屬生長(zhǎng)的靶特定階段如，卵，幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)階段。在田地和/或?qū)嶒?yàn)室條件下，用任何方法，如在處理后評(píng)價(jià)根瘤蚜屬的死亡率，取食，和/或弄空取食位點(diǎn)，或通過(guò)侵染藤的改善情況均可以評(píng)價(jià)特定制劑和處理方法的效力。另外，通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法，分析代謝、轉(zhuǎn)移和/或?qū)χ苿┨幚淼姆磻?yīng)中藤生理學(xué)狀況，可以評(píng)價(jià)特定制劑和處理方法的效力。也考慮正常試驗(yàn)的劑量，制劑和處理時(shí)間以外的因素以確定根瘤蚜屬物候?qū)W，植物物候?qū)W，植物健康，嫁接愈合和栽培孿種(插枝和根莖)出現(xiàn)的情況。本發(fā)明的方法和制劑也用于處理草皮的侵染。非感染病害的某些生物通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)損傷草皮。在感染性病害使草皮變薄后，藻類經(jīng)常通過(guò)占據(jù)空地而損傷草皮。藍(lán)-綠草藻(Ajanobacterla種)在過(guò)濕土壤的表面發(fā)展成黑菌膜(scum)。藻類降低了空氣和土壤之間的氣體交換，而且還可能在植物中誘發(fā)萎黃病。黑層是主要與高爾夫比賽綠化有關(guān)的生理病害。草皮的沙含量高的應(yīng)注意。另外，可以用本發(fā)明的制劑處理草皮真菌病害。Sclerotiniadollarspot，腐霉屬枯萎病和絲核菌屬枯萎病是各種草皮的致命病害，特別是小糠草。通過(guò)改變制劑的組分，應(yīng)用方案，應(yīng)用體積和/或應(yīng)用速率可以確定所述制劑對(duì)草皮的處理效力。可以在田地和/或?qū)嶒?yàn)室條件下完成評(píng)估，考慮給定的環(huán)境條件，如濕度，溫度，光的質(zhì)量和數(shù)量和強(qiáng)度，土壤類型和肥力，含水量灌溉等情況。通過(guò)比較向頂轉(zhuǎn)移和每天割草的保持和草葉的去除也可以確定制劑的保持能力或活性?？梢砸圆煌膽?yīng)用速率和濃度以及施用方案施用制劑以得到所需的病害控制和植物毒性水平。含皂苷和式(2)和(5)的化合物的制劑對(duì)于所述應(yīng)用是優(yōu)選的，式(3)，(4)和(5)的化合物更優(yōu)選。特別需要的是施用本發(fā)明制劑控制Sclerotiniadollarspot(Sclerotiniahomeocarpa)。Sclerotiniadollarspot是一種在世界各地的的大多數(shù)草皮種上均會(huì)發(fā)生的廣泛的，持久且花費(fèi)高的病害。有利于dollarspot的環(huán)境條件包括高濕度和過(guò)濾水分的時(shí)間長(zhǎng)。與這些環(huán)境條件相關(guān)的低氮肥也會(huì)增加dollarspot的發(fā)病率。形成致密生長(zhǎng)態(tài)的精致葉的草地的危險(xiǎn)特別大，dollarspot主要威脅深入細(xì)致管理的高爾夫比賽草地。還特別需要用所述制劑控制因腐霉屬引起的病害。由腐霉屬引起的病害通常稱為腐霉屬枯萎病，油斑，班枯萎病，冠枯和根枯。腐霉屬也會(huì)引起種子病害。所有草皮對(duì)腐霉屬的攻擊均很敏感，包括蔓生小糠草，用于高爾夫比賽的大多數(shù)流行草地，和美國(guó)南部生長(zhǎng)的新的小糠草。腐霉屬的抗性生物型通常對(duì)傳統(tǒng)殺真菌劑的施用沒(méi)有反應(yīng)。通常在首次出現(xiàn)促進(jìn)腐霉屬生長(zhǎng)的條件之前或出現(xiàn)后葉面噴灑含皂苷的制劑。對(duì)于腐霉屬枯萎病，當(dāng)氣候很熱而且潮濕，而且夜間也很熱時(shí)，就特別需要。本發(fā)明方法和組合物的另一優(yōu)選用途是控制絲核菌枯萎病，通常稱為褐斑。當(dāng)環(huán)境條件有利于其生長(zhǎng)時(shí)，絲核菌枯萎病是一種特別迅速和破壞性的病害。因此當(dāng)氣候炎熱、潮濕，高氮肥率，致密葉生長(zhǎng)和/或降水頻繁時(shí)，通常應(yīng)施用所用的制劑。在草皮上控制絲核菌枯萎病很難，而且傳統(tǒng)殺真菌劑不能控制這種病。用本發(fā)明的制劑可以控制St.Augustine草的絲核菌枯萎病。特別需要的是治理和預(yù)防觀賞花的薊馬，白粉病菌，黑斑，葉枯病和甜瓜蚜蟲(chóng)侵染以及受這些害蟲(chóng)感染的其它植物。本發(fā)明的制劑特別用于預(yù)防或處理玫瑰，圣誕樹(shù)(如松樹(shù))和果樹(shù)和果實(shí)。例如，所述制劑用于處理桃抗蛀孔和使蘋(píng)果樹(shù)抗蘋(píng)果蠹蛾侵染，使葡萄免于卷葉蟲(chóng)，根瘤蚜，葉蟬，葉枯病，薊馬和白粉病菌的侵染。優(yōu)選的制劑包括皂苷和式(2)和(5)的芳香類黃酮醛，式(3)，(4)和(5)是優(yōu)選的。一個(gè)實(shí)例是治理棉花中的棉芽侵染。最重要的種是棉蚜(AphisgossypiiGlover)。幾乎棉花一生長(zhǎng)出葉子，就有小、軟體的淡綠色植物虱飛到其上，然后開(kāi)始繁殖。因此，應(yīng)在棉花發(fā)育早期將本發(fā)明的制劑施用到棉花上。噴小葉是優(yōu)選的，因?yàn)檠料x(chóng)飼喂在地上。進(jìn)行治理最重要的時(shí)間是在冷，濕季節(jié)之前和/或期間，這時(shí)蚜蟲(chóng)很多足以阻礙植物并使植物變形。本發(fā)明還用于治理和預(yù)防晚期枯萎病。晚期枯萎病影響西紅柿，馬鈴薯，茄子和其它馬鈴薯科植物而且是因Phytophthorainfestans侵染而產(chǎn)生的。本發(fā)明制劑優(yōu)選是在適中溫度的潮濕期間施用，這時(shí)通常由于孢子落在植物表面而開(kāi)始發(fā)病。另外，也需要控制棉鈴象鼻蟲(chóng)(AnthonomusgrandisBoheman)。損傷是由成象鼻蟲(chóng)和其幼或蠐螬引起的。成蟲(chóng)通過(guò)咀嚼來(lái)刺棉蕾和棉鈴。應(yīng)將本發(fā)明制劑直接施用到植物的該部分(棉蕾和棉鈴)。含皂苷的制劑也用于控制開(kāi)花植物的授粉時(shí)間。例如為了防止或延遲授粉，以足以驅(qū)走蜜蜂和其它授粉昆蟲(chóng)的量施用所述制劑。通過(guò)調(diào)整制劑的殘留性，可以控制抑制授粉過(guò)程的時(shí)間長(zhǎng)短。另一方面，在需要交叉授粉以施肥的植物中，如果授粉昆蟲(chóng)被所述制劑驅(qū)走或殺滅，應(yīng)避免在該期間施用所述制劑。特別是授粉種屬的Vespidae包括群居的黃蜂，馬蜂，大黃蜂和胡蜂對(duì)本發(fā)明制劑敏感。還需要用本發(fā)明的化合物處理Dermaptera(歐洲Earwigs(Forticulaaureculatia))。蠼螋有極廣泛的食物，而且以許多不同類型的植物物質(zhì)，包括花，蔬菜和果實(shí)(收獲之前和之后的)為食?；ù?，玉米穗絲珠心和新蔬菜秧苗特別易受傷害。因此，例如通過(guò)葉噴灑到正在生長(zhǎng)的植物和/或被蠼螋感染后收獲的植物部分，施用本發(fā)明的制劑。特別需要用本發(fā)明的制劑控制微生物的生長(zhǎng)，如在花瓶溶液中發(fā)現(xiàn)的那些，收獲后處理切花。含皂苷的制劑還可延長(zhǎng)切花的花期，所述花期部分取決于對(duì)花瓶溶液微生物，如細(xì)菌和真菌的控制，無(wú)論莖是在水中，還是在向花(flours)提供營(yíng)養(yǎng)源的部分上。用適宜于特定目的的任何豐富可以完成切花的處理，如將切下的莖浸在本發(fā)明的所述制劑中和/或?qū)⒅苿┘拥交ㄆ咳芤褐谢驅(qū)⒄麄€(gè)切花浸在所述制劑中?？梢栽谑斋@后控制的生物體的實(shí)例包括因BotrytiscinereaPers引起的Botrytis花枯萎病Fr切花，特別是在溫室生長(zhǎng)的玫瑰和許多其它切花作物以及葡萄，因B.cinerea引起的灰霉，延遲因B.cinerea，Rhizopus和Penicilliumexpansum引起的花以及水果如木莓，草莓，蘋(píng)果，梨枯萎。含皂苷與式(2)和(5)化合物的制劑是優(yōu)選的。具體地說(shuō)，含皂苷，肉桂醛和/或α-己基肉桂醛和吐溫80的制劑是優(yōu)選的。通過(guò)花、葉或柄的枯萎，再水合，細(xì)菌生長(zhǎng)和莖污染，以及收獲后微生物和生理學(xué)堵塞的控制可以評(píng)價(jià)制劑對(duì)于促進(jìn)或防止切花花期的效力?？梢栽谄溥M(jìn)入果實(shí)之前施用本發(fā)明化合物，攻擊靶蘋(píng)果蠹蛾(Cydiapomonella)的三個(gè)階段，成蟲(chóng)，卵和新幼蟲(chóng)。為了這一應(yīng)用，必需研制這些生命階段的敏感性圖，以確定應(yīng)用本發(fā)明制劑的最佳時(shí)間。這要試驗(yàn)卵，新幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)對(duì)制劑的敏感性，在初次施用后，新鮮施用保留的殘余物。本發(fā)明的皂苷和類黃酮醛還用于控制SanJose介殼蟲(chóng)，它是一種奇形的固定昆蟲(chóng)。象蚧一樣，介殼病害生物比動(dòng)物更相近。有兩個(gè)蚧科軟蚧(球蟲(chóng)亞綱)傾向于以花園植物為食，而盾蚧(盾蚧科)更喜歡果園作物。球蟲(chóng)亞綱亞科的成員，它們使自己粘附在許多不同植物的葉，果實(shí)和樹(shù)皮上。因此，本發(fā)明的制劑優(yōu)選施用于敏感植物的葉，果實(shí)和樹(shù)皮上。本發(fā)明的方法和組合物還用于控制粉蚧，它們與蚜蟲(chóng)，木虱和根瘤蚜相似。粉蚧從植物中吸取汁并傳播病害，它們分泌的蜜露引起影響光合作用的煙真菌的生長(zhǎng)。通過(guò)葉施用控制煙真菌，所用的量應(yīng)足以在植物中誘導(dǎo)SAR以便控制在昆蟲(chóng)食用的植物的遠(yuǎn)區(qū)域吸汁昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)。除治理宿主植物外，還可以用本發(fā)明的制劑處理種子。還可以將粉末制劑灑在種子上(參見(jiàn)美國(guó)專利4978686，例如制劑可吸收的無(wú)機(jī)材料)或?qū)⒎N子混在植物底物如蛭石中。種子也可從轉(zhuǎn)基因作物獲得，其中式(1)的成分可在種子中表達(dá)，優(yōu)選優(yōu)先在種子中。從處理過(guò)的種子在無(wú)菌條件下生長(zhǎng)的秧苗不易感染真菌和昆蟲(chóng)。另外秧苗也可用本發(fā)明的制劑處理。在某些情況下，需要調(diào)整處理制劑以降低與處理有關(guān)的植物毒性，由于嫩枝更可能表現(xiàn)產(chǎn)植物毒性癥狀。下列實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不具有限制性。實(shí)施例材料和方法下列實(shí)施例中所用的化學(xué)品來(lái)源于肉桂醛，Spectrum化學(xué)公司，新澤西；松柏醛，ANPI化學(xué)公司，英國(guó)；土溫80和碳酸氫鈉，Spectrum化學(xué)公司，格林納達(dá)，加拿大；α-己基肉桂醛，F(xiàn)irmenich，Plainsboro，新澤西；皂苷，Danco公司，F(xiàn)resno，加拿大。實(shí)施例1栽培玫瑰白粉病的治理A.盆栽玫瑰.對(duì)八株栽培玫瑰進(jìn)行試驗(yàn)，觀察肉桂醛/碳酸氫鈉制劑對(duì)銹病和白粉病的效果。所用栽培作物包括未命名Moss(Moss)，Galica，RosetteDelize(HybridTea)，RosaRugosaRubra(Rugosa)，AbelMorrison(Hybridperpetual)，JohnLaing，BettyPrior和RoswdeRoi。選擇五株(5)盆栽玫瑰(Moss，Galica，HybridTea，Rugosa，和Hybridperpetual)，按照Parlrs和Nelson(上述)估算白粉病、銹病和孢子病(僅對(duì)Moss，Galica和對(duì)照植物評(píng)價(jià)孢子病)的等級(jí)。在0-5等級(jí)(其中0＝?jīng)]有白粉病銹病/孢子病害，1＝1-25，2＝26-50，3＝51-75，4＝76-90，5＝＞90％染有病害的總?cè)~數(shù)/叢)中，Moss和Galica作物是5。HybridTea和Hybridperpetual的等級(jí)估算為3，Rugosa的等級(jí)估算為1。蝸牛和Galica還染有相當(dāng)于5級(jí)的銹病。每株作物接受100毫升肉桂醛制劑的葉面噴施，該1000克制劑含5克肉桂醛，80克碳酸氫鈉，10克土溫80，剩余為水。此外，還從第一次用肉桂醛/碳酸氫鈉治理的當(dāng)天開(kāi)始，將250毫升0.01％(v/v)的10°白利糖度皂苷提取液水溶液施用于每株盆栽植物，施用一周。對(duì)照植物則不接受治理。通過(guò)八周后一整周的觀察，發(fā)現(xiàn)單次治理就根除了白粉病、銹病和孢子病，但相比之下，對(duì)照植物的白粉病、銹病和孢子病的病害等級(jí)仍分別為5、3和4。并且，處理似乎還誘發(fā)了系統(tǒng)性抗性。未觀察到植物毒性。B.田地生長(zhǎng)的玫瑰.設(shè)計(jì)的另一個(gè)試驗(yàn)是在同一時(shí)期(季節(jié))和相同環(huán)境條件下評(píng)價(jià)肉桂醛/碳酸氫鈉對(duì)田地生長(zhǎng)的切花玫瑰的白粉病控制作用。試驗(yàn)田中的白粉病和銹病害率較高，無(wú)需另外接種提供疾病壓力。在該研究中，使用JohnLaing，bettyPrior和RosedeRoi栽培品種。從一行十六株中選擇八株JohnLaing加以治理。其它各種植物從各行的第一株植物開(kāi)始治理。類似地，從六株BettyPrior植物中選擇三株加以治理，同樣從四株RosedeRoi植物中選擇兩株加以治理。對(duì)選定的每株作物進(jìn)行單次葉面噴施(約100毫升)治理，所噴施制劑每1000g含肉桂醛(5g)、土溫80(80g)、碳酸氫鈉(8g)，剩余為水。植物的平均間距是0.86米。病害等級(jí)與評(píng)價(jià)盆栽作物的白粉病相同。對(duì)照植物未進(jìn)行治理。無(wú)風(fēng)和確實(shí)受到保護(hù)的噴霧方法控制了噴霧的飄流。JohnLaing作物是幼嫩的，45天的植物，白粉病等級(jí)為5。BettyPrior作物是較老的(≥240天)，白粉病等級(jí)為3，并預(yù)先噴施了Eagle(120天前)；RosedeRoi是240天的植物，白粉病等級(jí)是2，銹病等級(jí)也為2(常用上述相同標(biāo)準(zhǔn))。通過(guò)與未治理的對(duì)照組相比較，觀察治理后每株植物形成的白粉病和銹病害，測(cè)定誘發(fā)的系統(tǒng)性抗性。對(duì)各株植物進(jìn)行每周評(píng)述。在最后的田地里觀察每株植物，測(cè)定該治理方案對(duì)生長(zhǎng)率的影響。在五周試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，除未治理的對(duì)照組和再感染的三株BettyPrior植物的白粉病等級(jí)為3外，所有植物都沒(méi)有白粉病。也未觀察到植物毒性作用。所有植物的新生長(zhǎng)都超過(guò)了未治理的對(duì)照組。計(jì)算每組植物的疾病控制平均百分?jǐn)?shù)(MPDC)。對(duì)白粉病的結(jié)果如下JohnLaing，98.3％；BettyPrior，64.3％；RosedeRoi，100％。三種玫瑰對(duì)白粉病的平均百分?jǐn)?shù)是90.7％。僅對(duì)RosedeRoi評(píng)價(jià)了銹病，該平均百分?jǐn)?shù)是85.0％。在溫室和田地條件下，對(duì)白粉病的有效殺真菌劑提供的MPDC應(yīng)≥70％，而對(duì)銹病的MPDC應(yīng)≥65％。噴施含肉桂醛和碳酸氫鈉的溶液并同時(shí)噴施皂苷可維持盆栽玫瑰或田地玫瑰不得白粉病和銹病的時(shí)間達(dá)56天，而僅噴施水的則無(wú)此效果。經(jīng)治理的植物還可保持沒(méi)有蚜蟲(chóng)。據(jù)報(bào)道平均噴施Rubigon約20天可誘發(fā)玫瑰對(duì)白粉病的系統(tǒng)性抗性。對(duì)玫瑰噴施肉桂醛和松柏醛的溶液或含碳酸氫鈉和肉桂醛和/或松柏醛的乳液測(cè)得的平均疾病控制率約為70％。在平行實(shí)驗(yàn)中，Benomyl給出的平均疾病控制率約為80％。實(shí)施例2用皂苷和松柏醛治理玫瑰上的真菌和昆蟲(chóng)使用實(shí)驗(yàn)玫瑰園中感染玫瑰的六株。用兩種松柏醛制劑中的一種治理JohnLaing(Hybridperpetual)和兩株Londonderry的Marchionese(HybridPerpetual)。低劑量治理(T1)使用的制劑每1000g含松柏醛(5g)，皂苷(0.86毫升10°白利糖度的皂苷溶液)(10g)和H2O。高劑量治理(T2)使用的制劑每1000g含100g松柏醛，皂苷(0.86毫升10°白利糖度的皂苷溶液)，余量為H2O。見(jiàn)表1(下)。采用Paulus和Nelson(上述)等級(jí)體系評(píng)定植物的白粉病和銹病等級(jí)。每株植物(P1至P6)接受約100毫升下表所示的治理噴施制劑。對(duì)照植物僅噴施水。計(jì)算治理前和治理后等級(jí)的變化，以此作為上述的疾病控制平均百分?jǐn)?shù)(MPDC)。</tables>實(shí)施例3對(duì)玫瑰白粉病的治理用肉桂醛制劑，皂苷及肉桂醛和皂苷組合制劑進(jìn)行三次治理實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)它們對(duì)已知易得白粉病的田地生長(zhǎng)玫瑰的作用。在用殺真菌劑治理前通過(guò)變種隨機(jī)阻斷植物。在下列三次實(shí)驗(yàn)中，每次使用兩種植物。在實(shí)驗(yàn)1中，使用ReichsprasidentvonHindenbburg(Bourbon)和OstarCordel(HybridPerpetual)；在實(shí)驗(yàn)2中，使用RosaGallica(ApothecaryRose)和DeuildePaulFontaine(HybridMoss)。在實(shí)驗(yàn)3中，使用ComtedeChambord(Portland)MadamePierreOger(Bourbon)。實(shí)驗(yàn)1評(píng)價(jià)肉桂醛的作用，實(shí)驗(yàn)2評(píng)價(jià)皂苷的作用，實(shí)驗(yàn)3評(píng)價(jià)肉桂醛與皂苷的組合作用。每株植物接受單次葉面噴施100毫升，然后采用Paulus/Nelson等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(同上文)評(píng)價(jià)白粉病。在臨治理前和治理后4天采用該標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)植物。實(shí)施例4僅用皂苷和/或肉桂醛或α-己基肉桂醛治理葡萄根瘤蚜取食位點(diǎn)定位實(shí)驗(yàn)通過(guò)成蟲(chóng)和蛹死亡實(shí)驗(yàn)和卵孵化實(shí)驗(yàn)測(cè)定生理過(guò)程破壞導(dǎo)致的死亡率。孵化后，新昆蟲(chóng)需保證有安全可靠合適的取食地。如要昆蟲(chóng)的生命循環(huán)繼續(xù)，該活動(dòng)必須成功。研究表明約80％葡萄根瘤蚜的死亡發(fā)生在該活動(dòng)中。低劑量濃度的制劑通過(guò)破壞昆蟲(chóng)的“尋求和識(shí)別取食地”的行為可保護(hù)葡萄根。采用下列方案評(píng)價(jià)全部三種類型的作用。成蟲(chóng)和蛹的死亡實(shí)驗(yàn)使約24枚葡萄根瘤蚜卵在普通切除的葡萄根上生長(zhǎng)30天。在約30天時(shí)，一些昆蟲(chóng)仍是蛹，而另一些已是成蟲(chóng)。在該過(guò)程中，取走新的卵。將感染昆蟲(chóng)的根在實(shí)驗(yàn)制劑中浸泡6秒鐘，然后在空氣中晾干。5天后測(cè)定活昆蟲(chóng)(通過(guò)生長(zhǎng)、產(chǎn)卵或肢體運(yùn)動(dòng))的百分?jǐn)?shù)。如果昆蟲(chóng)棄離其取食地，則認(rèn)為死亡。在起始實(shí)驗(yàn)中，在肉桂醛或α-己基肉桂醛水溶液(即2％肉桂醛)中，皂苷劑量為20,000ppm。使用不含其它添加劑的水為陰性對(duì)照，使用250ppm馬拉硫磷(malation)水溶液為陽(yáng)性對(duì)照。卵孵化實(shí)驗(yàn)在用100μl溶液處理過(guò)的50×9mm密封塑料培養(yǎng)皿中的濾紙(Whatman#1，直徑5.5cm)上分設(shè)60枚混合年齡組的葡萄根瘤蚜。將400μl選定濃度的實(shí)驗(yàn)制劑加到濾紙皿中，蓋上培養(yǎng)皿的蓋并放在塑料盒中。6小時(shí)后，將盒子放在24℃的隔離室中。每組10枚卵。一周后，測(cè)定孵化百分?jǐn)?shù)。在起始實(shí)驗(yàn)中，在各種劑量下，用一組卵評(píng)價(jià)在6％NaCHO3和2％土溫80中含肉桂醛的皂苷(0.86ml10°白利糖度的皂苷溶液)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。7天后評(píng)價(jià)制劑的作用，計(jì)數(shù)死在殼中的蛹(DIS)或未孵化完全的卵(IH)數(shù)(即總死亡數(shù))。100ppm肉桂醛時(shí)，有88％的卵死在殼中，剩余12％未孵化完全。往100ppm的制劑加入皂苷可將死在殼中蛹數(shù)提高到93％。僅用水處理的葡萄根瘤蚜卵全部孵化；那些用Carbofuran(10ppm)或馬拉硫磷(250ppm)處理的組，100％的蛹都死在殼中。在實(shí)驗(yàn)室生物鑒定中還使用含或不含肉桂醛(CNMA)的皂苷(0.86ml10°白利糖度溶液)處理葡萄根瘤蚜卵。以不能使卵殼開(kāi)始破裂表示死亡。評(píng)價(jià)帶蛹和成蟲(chóng)的根浸泡處理7天后的EC50和LC50。實(shí)施例5蚜蟲(chóng)，葉螨和粉虱的治理方案如下測(cè)定皂苷與肉桂醛和/或松柏醛對(duì)抗黑豆蚜蟲(chóng)，fabae蚜蟲(chóng)，兩點(diǎn)葉螨，紅葉螨和銀葉粉虱，Bemisiaargentifolii的活性。培養(yǎng)皿的生物測(cè)定每個(gè)培養(yǎng)皿(60mm直徑)用溶于水的特級(jí)類黃酮醛(如10-100ppm)水溶液和/或從Y.schidigera提取的10°白利糖度皂苷系列稀釋液(0.001％-1％(v/v)水溶液)處理，然后使其干燥。在每個(gè)培養(yǎng)皿中放入每只節(jié)肢動(dòng)物的20份樣品(重復(fù)10次)。將和處理過(guò)的盤(pán)接觸3小時(shí)后的死亡率與僅用稀釋液處理的培養(yǎng)皿中的節(jié)肢動(dòng)物相比較。植物葉面的生物測(cè)定植物生長(zhǎng)于溫室中的7.5mm盆中的盆栽土壤中。棉花作物用于鑒定螨和白蝶，甜菜用于鑒定蚜蟲(chóng)。當(dāng)植物達(dá)到3葉階段時(shí)，用60只確定的節(jié)肢動(dòng)物侵染(重復(fù)6次)。使昆蟲(chóng)/螨安居并喂養(yǎng)。向植物噴施100-2000ppm的肉桂醛或α-己基肉桂醛或者0.1-2g/l的Y.schidigera的10°白利糖度的皂苷提取物0.05％-1％(v/v)水溶液，所述水溶液含或不含100-2000ppm的肉桂醛或α-己基肉桂醛，或者0.1-2g/l。植物用高塑料籠(5mm高×10mm直徑)覆蓋。3天后，測(cè)定噴施了試驗(yàn)制劑的植物上昆蟲(chóng)/螨的死亡率，并將其與僅噴施水的植物上昆蟲(chóng)/螨的死亡率進(jìn)行比較。實(shí)施例6線蟲(chóng)侵染的治理各種線蟲(chóng)都會(huì)侵染植物組織，包括莖和球莖線蟲(chóng)(Ditylenchusdipsaci)和根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogynespp.)。用各種含皂苷和/或肉桂醛的制劑治理莖線蟲(chóng)(Ditylenchusdipsaci)的試驗(yàn)如下。1.莖線蟲(chóng)通過(guò)將組織切下放到網(wǎng)底燒杯中并將網(wǎng)底燒杯懸浮于盛水的燒杯中從小球莖大蒜獲取莖線蟲(chóng)。線蟲(chóng)從組織中移出并通過(guò)網(wǎng)沉到燒杯底部。除去上層的水，將剩在杯中的線蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到可透明玻杯中，實(shí)施如下治理方案。測(cè)量出20mm×20mm×20mm的空間，將透明塑料盒劃分為開(kāi)放的頂室。在室溫(19℃)，將0.5ml的自來(lái)水吸移到各室中。使用粘在解剖針上的睫毛處置每只動(dòng)物，在每個(gè)室中放入十條線蟲(chóng)。然后往各室中加入一半體積的測(cè)試溶液(含或不含肉桂醛或α-己基肉桂醛(100-2000ppm)的0.05％-1％(v/v)的10°白利糖度的皂苷提取水溶液)。將水加到對(duì)照池中。使用雙目顯微鏡觀察，監(jiān)視各室中的線蟲(chóng)存活。加入溶液后1，5，10，20，30和60分鐘記錄存活的動(dòng)物數(shù)。若線蟲(chóng)不動(dòng)并對(duì)觸動(dòng)沒(méi)有反應(yīng)，則認(rèn)為是死亡。該試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。2.根線蟲(chóng)a.培養(yǎng)皿的測(cè)定在雙盲研究中，測(cè)試含或不含肉桂醛的皂苷對(duì)抗根結(jié)線蟲(chóng)，Meloidogynejavanica的活性。使線蟲(chóng)直接與制劑接觸，并在24小時(shí)的時(shí)間內(nèi)用肉眼和探針估計(jì)死亡率。采用溶液栽培學(xué)生產(chǎn)Meloidogynejavanica。收獲線蟲(chóng)并在24小時(shí)內(nèi)使用。將0.07ml水中的約100條線蟲(chóng)吸移到syracuse培養(yǎng)皿(Fisher)并立即將1ml測(cè)試制劑吸移到各培養(yǎng)皿中。然后將培養(yǎng)皿放在塑料袋內(nèi)以保持潤(rùn)濕，防止蒸發(fā)。對(duì)每種測(cè)試制劑溶液使用4個(gè)syracuse培養(yǎng)基。7天內(nèi)，每隔24小時(shí)，測(cè)定溶液，根據(jù)線蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)完整性和觸動(dòng)情況，評(píng)價(jià)最早計(jì)數(shù)的10條線蟲(chóng)的存活或死亡。運(yùn)動(dòng)的線蟲(chóng)計(jì)為存活。載體(2％土溫80，6％NaCHO3)中肉桂醛濃度超過(guò)100ppm時(shí)，在24小時(shí)，100％的線蟲(chóng)死亡。該濃度為10ppm時(shí)，在24，48，72，96，108，132和156小時(shí)，分別有0％，15％，17.5％，22.5％，27.5％，52.5％和52.5％的線蟲(chóng)死亡。載體中肉桂醛濃度在1ppm和0.1ppm時(shí)對(duì)死亡率沒(méi)有影響。在所測(cè)試的載體中濃度最低(0.1ppm)的肉桂醛中，加入Yuccashidigera皂苷的10白利糖度濃縮液的1∶60的稀釋度的溶液，則在24小時(shí)，線蟲(chóng)的死亡率為100％。但僅使用皂苷時(shí)，沒(méi)有相同的作用。EtOH(95％)在24小時(shí)全部殺滅線蟲(chóng)。觀察到載體對(duì)死亡率的最小影響為在72小時(shí)，2.5％；在108小時(shí)，5％。b.植物葉面的生物測(cè)定試驗(yàn)本發(fā)明的制劑降低葡萄藤經(jīng)根結(jié)、環(huán)、殘根和包纏損害線蟲(chóng)侵染的能力。將葡萄園中的葡萄藤(Harmony根莖)用1000ppm或3000ppm肉桂醛的皂苷(0.86ml100白利糖度溶液)溶液，市售的抗線蟲(chóng)劑Nemacur或空白配方處理。在處理時(shí)和處理后30和60天時(shí)測(cè)定線蟲(chóng)的侵染程度。實(shí)施例7對(duì)草莓紅核病(PhytophthoraFragariae)的治理草莓紅核病是由草莓紅根腐病真菌引起的，該種真菌通過(guò)感染的種植材料或感染碎片的長(zhǎng)期生存的卵孢子侵染的土壤傳播。如下試驗(yàn)各種含皂苷和肉桂醛或α-己基肉桂醛的制劑。將PhytophthoraFragariae感染的浸漬草莓根與侵染堆肥充分混合并使其腐敗4-6周，產(chǎn)生十分腐敗的接種物以供治理。將接種物分為1kg每份并與不同濃度的1500ml試驗(yàn)制劑混合。治理10分鐘后，將堆肥放在25mm目的篩中在流動(dòng)自來(lái)水下漂洗，以除凈試驗(yàn)制劑。然后將堆肥放入9-cm塑料盆中，在每盆中種植4株草莓。每次治理使用5盆。使植物生長(zhǎng)于控制在15℃和日長(zhǎng)為18小時(shí)的環(huán)境中；使堆肥保持潮濕，促進(jìn)其感染。將盆放在格子中以避免在治理中交叉感染。9周后，洗去草莓根的堆肥，通過(guò)縱向切開(kāi)根部尋找紅色中柱和發(fā)腐或變棕色的根來(lái)檢查感染跡象。經(jīng)顯微鏡檢查根部切片確認(rèn)PhytophthoraFragariae卵孢子存在。實(shí)施例8玉米上真菌病原體的治理評(píng)價(jià)用含或不含肉桂醛或α-己基肉桂醛的皂苷進(jìn)行的三次治理試驗(yàn)。所用皂苷是0.05％-1％v/v的10°白利糖度的Y.schidigera皂苷提取液水溶液。對(duì)已知易被病原性真菌侵染的田地生長(zhǎng)玉米進(jìn)行試驗(yàn)。在殺真菌劑處理前，用變種隨機(jī)阻斷植物。每株植物接受單次葉面噴施至流溢，然后評(píng)價(jià)真菌感染(在Paulus和Nelson下)。根據(jù)Paulus/Nelson(上述)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記錄每株植物的變化，評(píng)定真菌感染。在臨治理前和治理后4天依該標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定植物。實(shí)施例9PitchCanker病PitchCanker病，由真菌Fusariumsubglurinans引起，特征為被侵染樹(shù)的嫩枝、樹(shù)枝、外露根和樹(shù)干有樹(shù)脂樣滲出。自1986年在加利福尼亞發(fā)現(xiàn)PitchCanker病原體開(kāi)始，該病原體的宿主和地域范圍擴(kuò)大了許多。最近在墨西哥和日本又發(fā)現(xiàn)了該病原體。使用不同濃度和配制的含或不含肉桂醛的皂苷進(jìn)行雙盲生物測(cè)定。測(cè)定是基于對(duì)Fusariumsubglurinansf.sp.pini放射性生長(zhǎng)的抑制。將8ml制劑(濃度未知的)吸移到200ml融化的2％土豆葡萄糖瓊脂(PDA)中，并將該混合物分配到五只塑料培養(yǎng)皿中(25ml皿)。在四只培養(yǎng)皿的中央分別用瓊脂塞轉(zhuǎn)移接種生長(zhǎng)Fusariumsubglurinansf.sp.pini的PDA培養(yǎng)基，作為對(duì)照的第五只培養(yǎng)皿未進(jìn)行接種。對(duì)每種肉桂醛制劑重復(fù)該些步驟。如上述接種的四只PDA培養(yǎng)皿補(bǔ)加5ppm苯菌靈作為陽(yáng)性對(duì)照；陰性對(duì)照是四只接種F.subglurinans但未進(jìn)行處理的PDA培養(yǎng)皿。將所有接種和未接種的培養(yǎng)皿在18℃培養(yǎng)五天，之后測(cè)量菌落直徑。表10顯示了生物測(cè)定的菌落直徑的原始數(shù)據(jù)平均值，表11比較了含或不含皂苷(0.86ml10°白利糖度的Yuccaschidigera提取物)的各種濃度的CNMA對(duì)菌落直徑的影響。表10Fusariumsubglurinansf.sp.pini的放射性生長(zhǎng)(平均值)*治理劑菌落直徑(cm)PDA(未補(bǔ)加)4.03810ppmCNMA4.363100ppmCNMA4.238100ppmCNMA+皂苷4.300戊二醛2％3.6635,000ppmCNMA+皂苷2.91310ppmCNMA+皂苷3.600H2O3.7382,500ppmCNMA3.5132,500ppmCNMA+皂苷3.600皂苷4.1385,000ppmCNMA2.908空白配方4.38012,500CNMA+皂苷0.00025,000CNMA0.0005ppm苯菌靈(陽(yáng)性對(duì)照)0.00012,500ppmCNMA0.00025,000ppmCNMA+皂苷0.000表11F.f.sp.pini的放射性生長(zhǎng)治理劑CNMACNMA+皂苷(.86ml)ppm菌落直徑(cm)菌落直徑(cm)104.363.601004.244.302,5003.513.605,0002.912.9112,5000025,00000對(duì)照菌落直徑(cm)2％戊二醛3.66H2O3.745ppm苯菌靈0PDA(未補(bǔ)加)4.04實(shí)施例10協(xié)同劑的生物測(cè)定按照本文所述方案測(cè)定化合物的協(xié)同作用。將有效量的協(xié)同劑試驗(yàn)化合物單獨(dú)應(yīng)用或加入與系列稀釋度和濃度配制的已知制劑混合，所述濃度范圍是從不含協(xié)同劑試驗(yàn)化合物的對(duì)照水平到超過(guò)最佳濃度許多的濃度?；景凑丈鲜鰧?shí)施例的方案，對(duì)給定的病原體和/或植物宿主，測(cè)定含或不含協(xié)同劑化合物系列稀釋液的每種制劑和組成的抗致病和/或植物毒性作用。由對(duì)照劑量水平和飽和劑量水平計(jì)算體外和體內(nèi)最佳劑量范圍，該范圍在可調(diào)節(jié)變化過(guò)程中會(huì)有所增加，但所得作用不會(huì)增強(qiáng)。通過(guò)與不含協(xié)同劑試驗(yàn)化合物的對(duì)照進(jìn)行比較，測(cè)定每種試驗(yàn)制劑的有效性并計(jì)算MDIC和MDIT。對(duì)協(xié)同劑化合物的測(cè)定得出特定制劑的評(píng)價(jià)疾病抗性至少為約60％或更高，最佳為約70％或更高；和/或植物毒性等級(jí)為2或更低，最佳為1或更低。皂苷的生物測(cè)定將皂苷或皂苷提取物單獨(dú)應(yīng)用或與已知制劑稀釋液混合，所述稀釋液濃度范圍是從0％皂苷和100％其它組分的對(duì)照水平到各組分的飽和水平。按照上述實(shí)施例的方案，測(cè)給定的病原體和/或植物宿主對(duì)含或不含協(xié)同劑化合物系列稀釋液的每種制劑和組成的抗致病和/或植物毒性作用來(lái)檢測(cè)制劑的協(xié)同作用。通過(guò)與含0.05％-1％v/v10°白利糖度皂苷提取物的皂苷提取液對(duì)照的相當(dāng)活性比較，測(cè)定皂苷的有效量。計(jì)算體外和體內(nèi)最佳劑量范圍。通過(guò)與不含皂苷的對(duì)照進(jìn)行比較，測(cè)定每種試驗(yàn)制劑的有效性并計(jì)算MDIC和MDIT。對(duì)具協(xié)同作用的皂苷的測(cè)定得出特定制劑的評(píng)價(jià)疾病抗性至少為約60％或更高，最佳為約70％或更高；和/或植物毒性等級(jí)為2或更低，最佳為1或更低。實(shí)施例11皂苷和/或肉桂醛對(duì)蝸牛的作用材料和方法實(shí)驗(yàn)1采用底物接觸法進(jìn)行接觸滅螺生物測(cè)定研究。對(duì)于液體制劑，將濾紙片(直徑15cm)在試驗(yàn)溶液中浸泡2秒鐘，然后在空氣中干燥。對(duì)于干性制劑，將底物放在濾紙片上至厚度為0.5cm。干性底物(如普通皂苷纖維)用10ml制劑潤(rùn)濕。將濾紙片放在紙板底部(直徑25cm)，紙板邊緣用凡士林和NaCl封住，防止動(dòng)物從板跑失。在每次重復(fù)試驗(yàn)中，將從ConnecticutValleyBiolgical購(gòu)得的四只蝸牛(Sephiahortensis)和從CarolinaScience購(gòu)得的兩只蛞蝓(Derocerasreticulatum)蝓放在處理過(guò)的或堆放有底物的濾紙片上(重復(fù)五次)。所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)制劑為制劑和組合物編號(hào)#1F1＝2％肉桂醛，2％T80，6％NaCHO3#2F2＝皂苷(10°白利糖度)和F1(1∶9)#3F3＝皂苷纖維+F1(潤(rùn)濕用-10ml)#4F4＝皂苷纖維+普通小麥(50/50w)#5F5＝皂苷(10°白利糖度)(潤(rùn)濕周-10ml)+小麥粉(WhealMillRun)#6F6＝皂苷纖維#7F7＝空白配方(CNMA)(潤(rùn)濕用-10ml)和小麥粉(WhealMillRun)#8F8＝H2O#9F9＝LillyMiller“SSIKB”(陽(yáng)性對(duì)照-四聚乙醛產(chǎn)品)#10F10＝CNMA(包囊的)的油性(Calgenecc-22F)乳液，包囊的CNMA@31.4+1.2％w/w淀粉蔗糖殼(85/15)實(shí)驗(yàn)2如下評(píng)價(jià)肉桂醛制劑成分的活性。用產(chǎn)品或成分將直徑7.5cm的濾紙片完全潤(rùn)濕，并使其在空氣中干燥。將濾紙片放在“Mason1/2品脫”玻璃廣口瓶的底部。在每個(gè)瓶中放2只蝸牛和1只蛞蝓蝓，共放5瓶。瓶口用干酪布封住，但要留一小口以供呼吸。在48小時(shí)時(shí)進(jìn)行觀察。結(jié)果和討論一般來(lái)說(shuō)，正如表12所示，含肉桂醛的制劑是有效的滅螺劑，48小時(shí)時(shí)，顯示的死亡率為100％。使用F1制劑及基于皂苷的配方獲得的死亡率都比陽(yáng)性對(duì)照(F9-“SSIKB”)要高。粗皂苷纖維(F3-含F(xiàn)1)與CNMA結(jié)合在實(shí)驗(yàn)初期就可獲得很高的百分死亡率，據(jù)第2位的是包囊CNMA，它在30分鐘內(nèi)就可獲得100％的死亡率，也是非常致命的。表13顯示實(shí)驗(yàn)2的制劑組成、陰性對(duì)照和相對(duì)百分活性數(shù)據(jù)。表12數(shù)據(jù)分析-蝸牛和蛞蝓*動(dòng)物接觸培養(yǎng)皿邊緣(NACL)實(shí)驗(yàn)3評(píng)價(jià)含或不含肉桂醛(10-25,000ppm)的皂苷(0.86ml10°白利糖度溶液)使苔蘚干燥(dessication)的作用。將Whatman濾紙片(7.5cm)放在每個(gè)培養(yǎng)皿的底部。把3ml水吸移到濾紙片上。從盆栽物核心取出苔蘚段(3.5cm×3.5cm)并將其放在每個(gè)培養(yǎng)皿的濾紙片上。在每張濾紙片上噴施2ml試驗(yàn)溶液。將培養(yǎng)皿放在室溫下，在施用后24，48和60小時(shí)時(shí)觀察干燥面積。表13顯示了該結(jié)果。一般來(lái)說(shuō)，用肉桂醛制劑處理的苔蘚顯示的干燥百分?jǐn)?shù)隨時(shí)間而增大。無(wú)論僅是皂苷或皂苷與肉桂醛結(jié)合都是有效的，但在僅施用肉桂醛時(shí)也確實(shí)觀察到干燥面積的增加。表14的數(shù)據(jù)顯示了制劑成分的百分活性。實(shí)施例12含肉桂醛和皂苷制劑的植物毒性和生物測(cè)定A.植物毒性試驗(yàn)對(duì)三種溫室作物進(jìn)行植物毒性試驗(yàn)，測(cè)定用皂苷(作表面活性輔助劑)和CNMA替代聚山梨醇酯(如土溫)的相容性。下面的概述分析結(jié)果表13苔蘚屬植物(苔蘚)干燥百分?jǐn)?shù)(隨時(shí)間的)024小時(shí).48小時(shí).60小時(shí).苔蘚DICRANUMF10154090F20104080F30155085F4051525F5061826SPAGNUM(BOG苔蘚)F10206090F20155575F30206085F4081220F5091222WOODLANDF10206085F20104070F30205080F40101520F50121828F1CNMA2％F2SAP(10°白利糖度)F3CNMA2％+SAPF4-對(duì)照H2OF5空白配方表141.小玫瑰(Sunburst)分別采用三種治理方法對(duì)四株盆栽小玫瑰(Sunburst)進(jìn)行處理；0.5％CNMA加0.05％皂苷，0.25％CNMA加0.025％皂苷和僅用水作為對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)室使用噴霧塔對(duì)植物進(jìn)行噴施，將所有植物都噴至流溢。噴施后，觀察植物五天。在老葉、新生葉或花瓣上均未觀察到植物毒性，表明該施用比例對(duì)小玫瑰是安全的。2.菊花分別對(duì)三株盆栽菊花用0.5％CNMA加0.05％皂苷，0.25％CNMA加0.025％皂苷和僅用水作為對(duì)照進(jìn)行處理。按上述對(duì)植物進(jìn)行噴施。在之后的五天觀察中，未觀察到對(duì)葉和花瓣的植物毒性，表明該施用比例是安全的。3.一品紅分別對(duì)兩株盆栽一品紅用0.5％CNMA加0.05％皂苷，0.25％CNMA加0.025％皂苷和僅用水作為對(duì)照進(jìn)行處理。在其后的五天觀察中，觀察到高施用比例(0.5％CNMA，0.05％皂苷)對(duì)新生葉具有植物毒性。未觀察到低比例(0.25％CNMA，0.025％皂苷)對(duì)新生葉的毒性癥狀，表明低比例是施用安全的。B.有害昆蟲(chóng)的生物測(cè)定1.兩點(diǎn)葉螨通過(guò)將大約相同數(shù)量的受葉螨侵染的玫瑰葉放在底部墊有Whatman濾紙的培養(yǎng)皿中測(cè)定螨。分別對(duì)放有螨的四個(gè)培養(yǎng)皿中的玫瑰葉兩面噴施三種處理液0.5％CNMA加0.05％皂苷，0.25％CNMA加0.025％皂苷和僅用水作為對(duì)照。將處理過(guò)的螨放置24小時(shí)，然后計(jì)數(shù)并記錄存活的螨數(shù)。結(jié)果如下對(duì)照培養(yǎng)皿(僅噴施水)，53.25±15.57(均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)；0.25％CNMA，6.75±1.18；0.5％CNMA，0.75±0.48。該結(jié)果表明直接噴施含有CNMA和皂苷的制劑可高度有效地對(duì)抗螨。2.西部花薊馬蟲(chóng)通過(guò)將大約相同數(shù)量的受薊馬蟲(chóng)侵染的玫瑰葉放在底部墊有Whatman濾紙的培養(yǎng)皿中鑒定薊馬蟲(chóng)。分別對(duì)放有螨的四個(gè)培養(yǎng)皿中的玫瑰葉兩面噴施三種處理液0.5％CNMA加0.05％皂苷，0.25％CNMA加0.025％皂苷和僅用水作為對(duì)照。將處理過(guò)的薊馬蟲(chóng)放置6小時(shí)，然后計(jì)數(shù)并記錄死亡的薊馬蟲(chóng)數(shù)。結(jié)果如下對(duì)照培養(yǎng)皿(僅噴施水)，1.4％±0.85％(均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)；0.25％CNMA，53.2％±11.8；0.5％CNMA，87.2％±2.79。該結(jié)果表明直接噴施含有CNMA和皂苷的制劑可高度有效地對(duì)抗薊馬蟲(chóng)。3.棉芽使用整株未開(kāi)花的菊花植物鑒定棉芽。用每種處理劑處理兩株植物，將兩片葉子作為樣品測(cè)定存活和死亡的棉芽數(shù)，所述兩片葉子一片摘自植物頂端，另一片摘自植物底部。施用的三種處理劑是1.0％CNMA和0.5％皂苷，0.5％VNMA和0.25％皂苷及僅是0.5％皂苷。對(duì)整株植物進(jìn)行噴施，直至頂端和底部的葉面流溢。結(jié)果以發(fā)現(xiàn)的死亡棉芽比率表示。結(jié)果如下對(duì)照植物(僅施用0.5％皂苷)14.8％±4.5；0.5％CNMA48.3±16.1；1.0％CNMA72.0％±11.2。該結(jié)果表明直接噴施CNMA可高度殺滅蚜蟲(chóng)。實(shí)施例13皂苷，肉桂醛和α-己基肉桂醛的殘留活性兩次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)表明肉桂醛(CNMA)和α-己基肉桂醛(HCA)都具有殘留活性。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，將2毫升兩種濃度的CNMA(0.3％和1％)噴施在濾紙上。將2毫升水也噴施在濾紙上，作為陰性對(duì)照。24小時(shí)后，將2毫升水噴施到處理和對(duì)照濾紙上，然后干燥30分鐘。放上30條薊馬(Frankliniellaoccidentalis)并在1小時(shí)后觀察F.occidentalis的數(shù)目。計(jì)算每種處理劑的死亡率。72小時(shí)后，將處理過(guò)的濾紙翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，僅對(duì)照濾紙1％CNMA處理的濾紙噴施2ml水，并使其干燥30分鐘。將30條蚜蟲(chóng)放在兩片處理過(guò)的濾紙上，1小時(shí)后觀察死亡的F.occidentalis數(shù)并計(jì)算每種處理的平均死亡率。使用α-己基肉桂醛進(jìn)行類似的鑒定。再潤(rùn)濕的濾紙隨時(shí)間的平均死亡率比未再潤(rùn)濕濾紙的要高。這些實(shí)驗(yàn)表明處理過(guò)的濾紙的再潤(rùn)濕在與薊馬接觸的持續(xù)致命性作用中起一定作用。持續(xù)接觸試驗(yàn)為進(jìn)一步確定皂苷、CNMA和HCA的殘留活性，將昆蟲(chóng)限制在兩種代表性的表面上。用玻璃代表無(wú)孔表面，濾紙代表有孔表面。將2ml配方中含或不含類黃酮醛的五種不同濃度的皂苷噴施到濾紙片(直徑9cm)或玻璃培養(yǎng)皿的底部(直徑9cm)。作為對(duì)照，施用2ml不含皂苷的配方液。試驗(yàn)前放置24小時(shí)使干燥。在試驗(yàn)的第7，14，28和56天，將一組培養(yǎng)皿和濾紙用2ml水再潤(rùn)濕，平行的另一組則不再潤(rùn)濕。將昆蟲(chóng)持續(xù)限制在存放表面，按計(jì)劃計(jì)數(shù)被存放表面殺滅的昆蟲(chóng)數(shù)。如果存放表面在48小時(shí)內(nèi)未殺滅昆蟲(chóng)，則不再繼續(xù)其后的研究。實(shí)施例14在轉(zhuǎn)基因植物中過(guò)度產(chǎn)生類黃酮醛由生產(chǎn)肉桂醛的植物組織制備20μgpolyARNA并合成cDNA。將它們部分克隆到λ噬菌體-ZAPII載體(一種市售克隆載體)中。使用寡核苷酸探針篩選至少500,000個(gè)重組體，所述探針是從得自GenBank克隆的CA4H和CAD基因保守序列設(shè)計(jì)的，或從目標(biāo)宿主植物純化的蛋白肽序列而設(shè)計(jì)的。選擇高度雜交的克隆，用于再篩選cDNA文庫(kù)。分析所得克隆的序列以便能將適宜的基因序列引入以反義或有義方向植物表達(dá)盒中。采用下面公開(kāi)的直接轉(zhuǎn)化方法將反義和有義構(gòu)建體導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中。采用熟知的方法(Horsch等(1985)科學(xué)，2771229-1231)轉(zhuǎn)化煙草(N.tabacum種Samsun)葉盤(pán)。采用PCR或雜交方法鑒定包含CA4H或CAD構(gòu)建體的植物，然后篩選用于下步分析。采用公知的分析方法測(cè)定轉(zhuǎn)化植物和未轉(zhuǎn)化對(duì)照植物物質(zhì)中的CA4H和CAD酶活性。選擇與對(duì)照植物的CA4H和CAD活性相比降低不足20％的植物用于下步分析。將低CA4H活性植物與低CAD活性植物進(jìn)行雜交。并采用PCR選擇遺傳了兩種基因構(gòu)建體的子代。采用公知的普通方法分析CA4H和CAD活性被抑制的植物的類黃酮醛產(chǎn)生。實(shí)施例16在微生物體系中類黃酮醛的產(chǎn)生使用從六周齡煙草莖中提取的RNA產(chǎn)生cDNA文庫(kù)。制備20μgpolyARNA并合成cDNA。將它們部分克隆到λ噬菌體-ZAPII載體(一種市售克隆載體)中。采用Goffner等在植物生理學(xué)(1994)106625中所述的方案，使用寡核苷探針篩選至少500,000個(gè)重組體，所述探針從六周齡煙草莖組織純化得到的CCoAr蛋白的肽序列而設(shè)計(jì)的。選擇高度雜交的克隆，用于再篩選cDNA文庫(kù)。分析所得克隆的序列以確定全長(zhǎng)度cDNA插入序列并將適宜CCoAR基因序列引入酵母表達(dá)載體pMTL8110(Faulkner等(1994)基因，14313-20)。類似地，將Rhodosporidiumtoruloides苯丙氨酸氨裂解酶編碼序列(PAL；基因庫(kù)位點(diǎn)RHDPAL)和4-香豆酸歐芹酯CoA1連接酶(4CL；基因庫(kù)位點(diǎn)PC4C1AA)引入相同的酵母表達(dá)載體。采用公知的電穿孔方法(Becker和Guarente，酶學(xué)方法，194182-187；Simon(1993)酶學(xué)方法，217478-483)，用PAL，4CL和CCoAR構(gòu)建體轉(zhuǎn)化啤酒酵母。在缺乏亮氨酸的基本培養(yǎng)基中選擇轉(zhuǎn)化體。采用PCR鑒定攜帶全部三種基因構(gòu)建體的轉(zhuǎn)化體，并篩選用于下步分析。采用熟知的方法測(cè)定轉(zhuǎn)化體和未轉(zhuǎn)化體的提取物的PAL，4CL和CCoAR酶活性。選擇其中PAL，4CL和CCoAR活性大于對(duì)照的菌株用于下步分析。采用公知的普通方法，分析所選擇菌株的類黃酮醛產(chǎn)生，并選擇產(chǎn)生顯著量肉桂醛的菌株確定最佳發(fā)酵條件。實(shí)施例17構(gòu)建產(chǎn)生HCA的酵母菌株如下建立包含肉桂醛(CNMA)生物合成所必需的酶的酵母菌，如啤酒酵母。首先，按照Faulkener等在(1994)基因14313020中構(gòu)建高水平表達(dá)PAL的菌株。也可將植物肉桂酸4-羥化酶基因與適宜的控制信號(hào)可操作連接，再插入菌株(參見(jiàn)Urban等(1994)歐洲生物化學(xué)雜志，222843-850)。應(yīng)用普通基因克隆技術(shù)，使用由純化蛋白的部分氨基酸序列得到的核苷探針?lè)蛛xcDNA克隆，獲得肉桂酰CoA還原酶(CCoAR)基因，所述純化蛋白是從數(shù)種植物中純化得到的并被部分表征。該CCoAR基因還與可控制信號(hào)可操作連接并插入酵母菌。然后按如下克隆催化CNMA轉(zhuǎn)化為HCA的酶編碼基因。使用由稻子植株獲得的mRNA在酵母表達(dá)載體中建立cDNA文庫(kù)。然后將cDNA庫(kù)轉(zhuǎn)化到先構(gòu)建的酵母菌株中并使用表達(dá)載體中存在的可選擇標(biāo)記選擇轉(zhuǎn)化體。為鑒定產(chǎn)生HCA的酵母菌株，將轉(zhuǎn)化體轉(zhuǎn)移到含酵母生長(zhǎng)瓊脂培養(yǎng)基的微量滴定板中。然后將微量滴定板放置在有蚤的室中，蚤對(duì)HCA敏感，但對(duì)CNMA不敏感。將微量滴定孔中含死亡蚤數(shù)與含未轉(zhuǎn)化的對(duì)照酵母菌的微量滴定孔相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的酵母稀釋，再將其重新平鋪在微量滴定板中，之后重復(fù)該篩選方法，得到由單個(gè)轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞衍生的克隆。采用氣液色譜(GLC)，使用30米非極性聚二甲硅氧烷柱(如HP-1，Hewlett-Packard或SPB-1，Supelco)和火焰離子檢測(cè)器分析表現(xiàn)出增加的蚤死亡率的由單細(xì)胞衍生的產(chǎn)生HCA的菌落。使用氦為載氣(8ml/分)，柱溫約是240℃，(E)-順式異構(gòu)體(主成分)的保留時(shí)間約是6.0分鐘，(Z)-反式異構(gòu)體(次要成分)的保留時(shí)間約是6.3分鐘。從生產(chǎn)HCA和已測(cè)定的插入片段的菌落中分離表達(dá)載體DNA以得到催化CNMA轉(zhuǎn)化成HCA之酶的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列。實(shí)施例18構(gòu)建產(chǎn)生HCA的轉(zhuǎn)基因植物采用轉(zhuǎn)座子誘變由水稻植物克隆編碼催化肉桂醛(CNMA)轉(zhuǎn)化為α-己基肉桂醛(HCA)的酶的基因。使用玉米Ac可轉(zhuǎn)座單元克隆載體轉(zhuǎn)化大米原生質(zhì)體，所述可轉(zhuǎn)座單元插入到含插入潮霉素B(hygB)磷酸轉(zhuǎn)移酶基因中以破壞hygB基因的編碼序列(參見(jiàn)，如Izawa等(1991)Mol.Gen.Genet.227391-396；Murao等(1991)核酸化學(xué)研究，19617-622)。將轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體平鋪在含足量潮霉素B(防止非潮霉素抗性的原生質(zhì)體再生長(zhǎng))的生長(zhǎng)培養(yǎng)基上。其中Ac轉(zhuǎn)座單元由hygB基因跳到水稻基因組中的原生質(zhì)體對(duì)潮霉素B有抗性，因此可再生長(zhǎng)形成愈傷組織。植物可由抗潮霉素B的愈傷組織再生(參見(jiàn)Izawa等，同上)。如上實(shí)施例所述，分析再生水稻植物中是否存在CNMA和HCA。產(chǎn)生CNMA但不產(chǎn)生HCA的植物可能攜帶有插入HCA生物合成基因中的AC轉(zhuǎn)座子。從CNMA+/HCA-突變體分離DNA基因組并將其與標(biāo)記轉(zhuǎn)座子DNA雜交。將與轉(zhuǎn)座子DNA探針雜交的片斷亞克隆到適當(dāng)?shù)目寺≥d體中，以進(jìn)行作圖和序列分析。鑒定發(fā)現(xiàn)HCA生物合成基因是開(kāi)放閱讀框架，是因已知的Ac轉(zhuǎn)座子序列的插入而被破壞的。該基因片段可用于探測(cè)cDNA文庫(kù)以分離相應(yīng)的cDNA。將HCA生物合成酶的cDNA插入表達(dá)載體，該載體可與植物產(chǎn)生害蟲(chóng)抗性所需的強(qiáng)表達(dá)啟動(dòng)子連接。采用本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的轉(zhuǎn)化方法將表達(dá)載體插入植物。如上實(shí)施例17所述，分析轉(zhuǎn)基因植物的HCA產(chǎn)生和/或?qū)οx(chóng)的驅(qū)避或殺蟲(chóng)活性。上述結(jié)果表明，與僅噴施水的作物相比，噴施含肉桂醛和碳酸氫鈉并同時(shí)噴施皂苷乳液至流溢的盆栽玫瑰或田地生長(zhǎng)玫瑰可持續(xù)達(dá)56天不染白粉病和銹病。該植物也不長(zhǎng)蚜蟲(chóng)。該結(jié)果還表明皂苷可增強(qiáng)肉桂醛抗葡萄根瘤蚜、線蟲(chóng)、蛞蝓、蝸牛和真菌，如Fusariumsubhlutinans。皂苷和CNMA制劑還可有效地對(duì)抗螨、薊馬蟲(chóng)和棉蚜。本發(fā)明適于使種子、秧苗、植物和植物部分，如果實(shí)，基本上不攜帶病原體，如真菌和吸汁昆蟲(chóng)。本發(fā)明還適于在植物和/或植物部分收獲期間和之后和/或消費(fèi)過(guò)程中，降低植物部分，如莖、葉、根、果實(shí)、種子和/或花上的霉菌毒素和其它有毒的次級(jí)代謝產(chǎn)物。本說(shuō)明書(shū)所述的全部公開(kāi)和專利申請(qǐng)內(nèi)容對(duì)本發(fā)明相關(guān)領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員是指導(dǎo)性的。如果說(shuō)本文所引用參考文獻(xiàn)的全部公開(kāi)和專利申請(qǐng)內(nèi)容是指導(dǎo)性的，則本文也以相當(dāng)深度和廣度加以引用?，F(xiàn)已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行充分描述，在不背離附錄權(quán)利要求的精神和范圍的情況下，本領(lǐng)域普通專業(yè)技術(shù)人員可對(duì)此進(jìn)行許多改變和修正是顯而易見(jiàn)的。權(quán)利要求1.一種控制病原體在植物體上生長(zhǎng)的方法，該方法向植物表面提供有效病原體生長(zhǎng)控制量的一種或多種皂苷化合物和至少一種式(I)化合物的組合，其中所述量對(duì)所述植物不具有植物毒性，并且除式(I)外不含其它抗氧化劑，式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。2.權(quán)利要求1的方法，該方法是將所述植物與含0.01-50g/l的一種或多種式(I)化合物的含水制劑接觸。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。4.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2和R3代表H并且R4代表-(CH2)5-CH3。5.前述任一種權(quán)利要求的方法，其中所述植物是玫瑰、葡萄、蘋(píng)果、桃、草皮草、西紅柿、風(fēng)鈴草屬胡椒(bellpepper)、松或棉花。6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的方法，其中病原體包括至少一種真菌、細(xì)菌、線蟲(chóng)、藻類、昆蟲(chóng)、蜘蛛和陸生軟體動(dòng)物。7.權(quán)利要求5或6的方法，其中的病理學(xué)生物是引起白粉病、銹病、葉枯病、硬葉松干枯病(pitchcanker)，Sclerotoniadollarspot，腐霉屬(Phythium)枯萎病和絲核菌屬(Rhizoctonia)枯萎病的真菌。8.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，其中病原體是至少一種蚜蟲(chóng)、葉蟬、卷葉蟲(chóng)、莖和鱗莖(blub)線蟲(chóng)、藍(lán)綠草藻、蘋(píng)果蠹蛾(condlingmoth)和薊馬蟲(chóng)。9.權(quán)利要求1-3和5-8任一項(xiàng)的方法，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。10.一種用于前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法的含水組合物，它包含一種或多種皂苷化合物和0.01-50g/l的一種或多種式(I)化合物，該組合物不含上式外的其它抗氧劑，其中式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。11.權(quán)利要求10的組合物，其中其中R1代表-CHO，R2和R3代表H并且R4代表-(CH2)5-CH3。12.權(quán)利要求10的組合物，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表-H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。13.權(quán)利要求10的組合物，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。14.權(quán)利要求10-13任一項(xiàng)的組合物在控制病理學(xué)生物在植物體上生長(zhǎng)中的用途。15.一種誘導(dǎo)植物對(duì)致病生物體產(chǎn)生抗性的方法，該方法是使植物與一定量的至少一種皂苷化合物和至少一種式(I)化合物接觸，所述量足以誘導(dǎo)植物對(duì)致病生物體產(chǎn)生系統(tǒng)性抗性，其中式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。16.一種用于權(quán)利要求15方法的組合物，包括含至少一種皂苷化合物和至少一種式(I)化合物的含水制劑的組合，兩種化合物的量足以誘導(dǎo)產(chǎn)生系統(tǒng)性抗性，并且所述制劑除上式外不含其它抗氧劑，其中式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。17.權(quán)利要求10-13或16的組合物在誘導(dǎo)植物對(duì)致病生物體產(chǎn)生系統(tǒng)性抗性中的用途。18.一種組合物，它包含病原體生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量的至少一種皂苷化合物和至少一種式(I)化合物的組合，還包含可農(nóng)用載體，所述組合物對(duì)至少一種病原生物在一個(gè)或多個(gè)植物表面集落化的平均病害抗性約高于70％，其中，式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。19.權(quán)利要求10-13，16或18的組合物的用途，該組合物向至少一種病原生物在一個(gè)或多個(gè)植物表面的集落化提供的平均病害抗性為約70％或更高。20.采用權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法獲得的基本上不帶真菌的種子和植物。21.通過(guò)將所述種子和植物與權(quán)利要求18的組合物接觸獲得的基本上不帶真菌的種子和植物。22.一種篩選植物病原體對(duì)真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑敏感性的方法，所述調(diào)節(jié)劑不含至少一種皂苷化合物和至少一種式(I)化合物，其中，式(I)中R1代表-CHO，R2代表H、-OH或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H、-O-CH3或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基且R4代表H或包含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，所述方法包括將所述植物與一種真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑接觸；和測(cè)定所述制劑對(duì)真菌病原體的有效性。全文摘要本發(fā)明提供了組合應(yīng)用皂苷和天然產(chǎn)物，如類黃酮醛的方法和組合物，該方法和組合物用于控制植物和動(dòng)物病原體，如真菌、昆蟲(chóng)、蜘蛛和非陸生軟體動(dòng)物在收獲前、收獲時(shí)和之后及加工中在材料，如植物、植物部分和農(nóng)產(chǎn)品上的集落化和/或生長(zhǎng)。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)了它們治理農(nóng)作物的在植物部分和組織表面的集落病原體中的用途，在控制由植物獲得的消費(fèi)品的有毒代謝產(chǎn)物水平方面的用途，以及降低與其消費(fèi)有關(guān)的不利于健康的危險(xiǎn)性的用途。還提供了一種使用皂苷殺滅線蟲(chóng)的方法。文檔編號(hào)C12P7/24GK1159739SQ95195514公開(kāi)日1997年9月17日申請(qǐng)日期1995年12月29日優(yōu)先權(quán)日1995年6月7日發(fā)明者R·W·愛(ài)默生,小B·G·克蘭德?tīng)柹暾?qǐng)人:普羅嘉德公司