專利名稱：一種細(xì)菌鞭毛鍍銀法染色試劑及其染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種細(xì)菌染色用試劑，以及使用該試劑染色的方法。
細(xì)菌鞭毛極為纖細(xì)，因此在普通光學(xué)顯微鏡中不能看到，通常采用一些特殊的染色方法將鞭毛顯示出來。鞭毛染色的主要原理都是采用不穩(wěn)定的膠體溶液作媒染劑，在鞭毛上生成沉淀，然后再進(jìn)行染色。鍍銀染色法是一種常用的方法。原有的鍍銀染色法所使用的試劑包括甲液和乙液。甲液由丹寧酸、三氯化鐵，福爾馬林、氫氧化鈉和蒸餾水配制而成，乙液為硝酸銀溶液。上述試劑配備好后應(yīng)在當(dāng)日內(nèi)使用，次日效果就較差，第三日該試劑就不能使用了。由于這種試劑不能長期貯存因此為實際工作造成很多麻煩。原有鍍銀染色法對菌種要求高，一般應(yīng)接種后培養(yǎng)16-24小時后使用，如長期未移種，最好連續(xù)移種2-3次后再使用。另外染色過程中涂片是在室溫下干燥，染色時間需三到五分鐘。因此染色的整個操作時間較長。另外此法染色后鞭毛仍很纖細(xì)不清晰，效果不穩(wěn)定，成功率低。
本發(fā)明目的是為鍍銀法細(xì)菌鞭毛染色提供一種新的試劑及其染色方法。該試劑可長期貯存不失效，染色操作簡便、速度快，并且染色效果好。
本發(fā)明目的是通過如下方案實現(xiàn)的本發(fā)明染色試劑包括有A液、B液、C液、A、B、C三種溶液配為A液1.5-2.5％FeCL3水溶液50ml36％甲醛 0.3-0.5mlB液20％單寧酸10-25ml1.0mol/L NaOH水溶液 0.1-0.4ml蒸餾水24.6-39.9mlC液2％ AgNO3水溶液 50ml濃氨水0.90-0.93ml本發(fā)明試劑的染色方法如下在清潔的載玻片上滴加少許蒸餾水，用滅菌接種針在經(jīng)5-8小時培養(yǎng)的新鮮單個菌落上挑取少量菌苔點(diǎn)滴在載玻片上，玻片傾斜使菌液涂在玻片上，干燥后備用。取潔凈試管滴加等量的A液與B液充分混勻，加熱到出現(xiàn)蒸氣顏色由黑蘭變?yōu)橥该髯厣珵橹埂Ｉ岳鋮s后滴在載玻片上染片40-90秒用流水洗盡。滴加C液后將玻片置于酒精燈上稍加熱至產(chǎn)生微量蒸氣而不干，染色30-60秒后流水洗去染液。
下面詳細(xì)敘述本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容。
一、染色試劑的制備A液1.5-2.5％FeCL3水溶液50ml加入36％甲醛0.3-0.5ml混勻。
B液20％單寧酸10-25ml加1.0mol/LNaOH水溶液0.1-0.4ml混勻后加水補(bǔ)充至50ml。
C液2％AgNO3水溶液50ml緩慢加入濃氨水至出現(xiàn)很濃的沉淀，邊搖動邊繼續(xù)滴入濃氨水到恰好沉淀消失成澄清液為止。
二、染色方法1、玻片的清洗同常規(guī)方法2、制片在清潔的載玻片一端滴少許蒸鎦水，用滅菌接種針沾少量蒸鎦水在培養(yǎng)5-8小時的新鮮單個菌落上挑取少量菌苔輕輕點(diǎn)滴在載玻片上。將載玻片緩緩傾斜菌液涂布在玻片上，可在室溫下自然干燥，也可放入37℃恒溫箱中干燥。
3、染色取一潔凈試管滴加等量A液與B液充分混勻，加熱到出現(xiàn)蒸氣顏色由黑蘭變?yōu)橥该髯厣?。稍冷?不燙手)在玻片上滴加少許上述混合液染片40-90秒，然后用流水緩緩洗盡。再滴加少許C液，將玻片置于酒精燈上稍加熱至微量冒蒸氣而不干，染色30-60秒用流水沖去染液即可。
本發(fā)明試劑由于采用了分別配制的A、B、C三種溶液，因而可以長期貯存而不失效，使用時將A液與B液混合加熱染片，再加C液染色。使用本發(fā)明試劑染色細(xì)菌只需培養(yǎng)5-8小時即可染色，同時染色的時間從3-5分鐘縮短40至90秒。載玻片制作過程中不僅可在室溫中于燥又可放入37℃恒溫箱中干燥，這樣加快了干燥的速度。因此本發(fā)明的染色方法操作簡便工作時間短。另外本發(fā)明染色過程中由于采用了A、B液混勻加熱染片后，滴加C液加熱染色的方法使得膠體溶液的沉淀量增多，并且易沉淀在鞭毛上，因而染色后鞭毛粗大、清晰，立體感強(qiáng)，易于辨認(rèn)。經(jīng)分光光度儀掃描可以看出生成膠體化合物的量增多，因而染色效果明顯優(yōu)于原有鍍銀染色法。
實施例一、試劑的制備A液2％FeCL3水溶液50ml加入36％甲醛0.4ml混勻。
B液20％單寧酸水溶液20ml加入1.0mol/LNaOH水溶液0.3ml混勻，加入20.7ml蒸鎦水混勻。
C液2％AgNO3水溶液50ml緩慢加入濃氨水至出現(xiàn)很濃的白色沉淀，邊搖動邊繼續(xù)滴加濃氨水至恰好沉淀消失成澄清液為止，濃氨水滴加量為0.9ml。
二、染色1、按常規(guī)方法清洗玻片備用。
2、在清潔的載玻片一端滴少許蒸鎦水，使用滅菌接種針沾少量蒸鎦水，在培養(yǎng)5-8小時的新鮮單個菌落上挑取少量菌苔，輕輕點(diǎn)滴在載玻片上的蒸鎦水上。將玻片緩緩傾斜菌液涂布在玻片上，將玻片放入37℃恒溫箱中干燥后備用。
3、取一潔凈試管滴加5滴A液與B液充分混勻后，加熱到出現(xiàn)蒸氣，此時溶液顏色由黑蘭變?yōu)橥该髯厣?。待溶液稍冷不燙手后用該混合液在制好的玻片上染片60秒種，然后用流水緩緩洗盡。在玻片上滴加少許C液，將玻片置于酒精燈上稍加熱至微量冒蒸氣而不干，染色60秒種后，流水沖去染液即可4、經(jīng)上述方法染色后的菌體為棕黑色，鞭毛黑色粗大清晰。
權(quán)利要求
1.一種細(xì)菌鞭毛鍍銀法染色試劑，其特征為該鍍銀法染色試劑包括有A液、B液、C液、A、B、C溶液配方如下A液1.5-2.5％FeCL3水溶液 50ml36％甲醛 0.3-0.5mlB液20％單寧酸10-25ml1.0mol/L NaOH水溶液 0.1-0.4ml蒸餾水24.6-39.9mlC液2％ AgNO3水溶液 50ml濃氨水0.90-0.93ml
2.一種細(xì)菌鞭毛鍍銀染色方法，包括玻片清洗、制片、染色其特征為染色按下述方法進(jìn)行(1)制片在清潔的載玻片一端滴少許蒸鎦水，用滅菌接種針沾少量蒸鎦水在培養(yǎng)5-8小時的新鮮單個菌落上挑取少量菌苔點(diǎn)滴在載玻片上，玻片傾斜使菌液涂布在玻片上，干燥；(2)染色取潔凈試管滴加等量A液與B液充分混勻，加熱到出現(xiàn)蒸氣顏色由黑蘭變?yōu)橥该髯厣梗岳浜笕酒?0-90秒，流水洗盡，滴加C液，將玻片置于酒精燈上稍加熱至微量冒蒸氣而不干，染色30-60秒，流水洗盡染液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細(xì)菌鞭毛鍍銀染色方法，其特征為制完畢的玻片可在室溫下干燥，也可在37℃恒溫箱中干燥。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種細(xì)菌染色用試劑以及使用該試劑染色方法。該試劑分為A、B、C三種溶液，主要由三氯化鐵、甲醛、單寧酸、氫氧化鈉、硝酸銀、氨水等配制而成，該試劑可長期貯存而不失效，用于細(xì)菌鞭毛染色細(xì)菌培養(yǎng)只需5-8小時即可，染色時間縮短為40-90秒，制片可在37℃溫箱中干燥，因而染色速度快，操作簡便。本發(fā)明方法染色后的細(xì)菌鞭毛粗大、清晰、立體感強(qiáng)，易于辨認(rèn)。
文檔編號C12Q1/04GK1137569SQ95105969
公開日1996年12月11日 申請日期1995年6月5日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月5日
發(fā)明者谷海瀛 申請人:沈陽鐵路局吉林中心醫(yī)院, 谷海瀛