專利名稱：α-淀粉酶絮凝—疏水吸附提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于酶制劑分離提取技術(shù)領(lǐng)域。
α-淀粉酶是工業(yè)上使用最廣泛的酶制劑之一，在發(fā)酵、飴糖、紡織和洗滌劑等工業(yè)上都有重要的應(yīng)用。α-淀粉酶主要有發(fā)酵法生產(chǎn)。目前由發(fā)酵液中分離提取α-淀粉酶主要有二種方法。一是直接用硫酸銨沉淀，二是采用絮凝-超濾-乙醇沉淀法。第一種方法要消耗大量的硫酸銨，產(chǎn)品中含有大量菌體和發(fā)酵的殘?jiān)?，產(chǎn)品比活較低。第二種方法要求發(fā)酵液絮凝后要有高的澄清度，否則超濾膜易于阻塞，這是大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)上難以掌握的。目前國內(nèi)工業(yè)用α-淀粉酶仍用第一種方法生產(chǎn)，國內(nèi)和國外食品用α-淀粉酶均用第二種方法生產(chǎn)，只是國外許多廠家把超濾后的酶液加入穩(wěn)定劑直接出售。1985年EizoSada等人在《BiotechnologyandBioengineering》上報(bào)導(dǎo)了用
作吸附劑的分離純化α-淀粉酶的疏水層析法，由于agarose價(jià)格貴，
使用壽命短，無法用于生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是用一種吸附樹脂作為吸附劑，用疏水吸附和解吸代替目前食品酶生產(chǎn)中超濾濃縮工序，同時(shí)提高酶的純度并使之能擴(kuò)大用于工業(yè)生產(chǎn)。
本發(fā)明的α淀粉酶絮凝吸附工藝如附圖
所示，發(fā)酵液〔1〕加入絮凝劑進(jìn)行絮凝〔2〕，接著用板框壓濾或離心〔3〕，濾餅棄去〔4〕，在濾液中加入適量的大孔吸附樹脂吸附〔5〕，攪拌平衡1小時(shí)，上清液棄去〔6〕，將吸附后的樹脂裝柱〔7〕，按照層析法的常規(guī)操作用一定濃度的乙醇，以一定的流速洗脫〔8〕，分段收集洗脫液，收集酶液分段加入1倍量的乙醇進(jìn)行沉淀〔9〕，乙醇回收〔10〕，最后用板框壓濾或離心〔11〕，濾餅干燥粉碎〔12〕，分裝〔13〕。
利用本發(fā)明所述工藝提取α-淀粉酶取代了現(xiàn)有食品級(jí)α-淀粉酶生產(chǎn)中的超濾濃縮，發(fā)酵液中固體殘?jiān)男跄稍跀?shù)分鐘內(nèi)完成，提取率可達(dá)60%左右，酶的活性每克可達(dá)60000單位(現(xiàn)有工藝生產(chǎn)的食品級(jí)α-淀粉酶每克活性為6000-8000單位)。吸附洗脫的濃縮倍數(shù)可達(dá)7倍左右。
下面是本發(fā)明的實(shí)施例。
取500毫升發(fā)酵液于1000毫升燒杯中，稱取0.75g CaCl2用少量蒸餾水溶解，然后加入發(fā)酵液中，攪拌，邊攪拌邊加入60毫升1號(hào)絮凝劑，迅速攪拌，絮凝發(fā)生后，加入2號(hào)絮凝劑25毫升，慢慢攪拌，大塊絮凝物出現(xiàn)后停止攪拌，壓濾，收集濾液，待殘?jiān)敫桑〕鲇蒙倭克?，壓濾，至殘?jiān)敫蔀橹?。合并兩次濾液于1000毫升燒杯中，加入100克處理好的吸附樹脂，置于電磁攪拌器上攪拌吸附1小時(shí)，停止攪拌，靜置數(shù)分鐘，傾泌去大部分上清液，將樹脂慢慢轉(zhuǎn)移至一根直徑3厘米的層析柱中，打開層析柱出口，讓吸附后的廢液流出，待液面和柱床表面相平時(shí)關(guān)閉出口，用滴管加入40%乙醇溶液，柱上端接泵，出口接紫外分析儀，以2毫升/分鐘流速洗脫。把紫外分析儀的指針調(diào)至適當(dāng)?shù)目潭?例如8.0或9.0)，待指針開始向0方向移動(dòng)時(shí)開始換燒杯收集，待指針回到原來位置時(shí)停止收集。用量筒測(cè)量收集液的體積，加入一倍量預(yù)冷過的95%乙醇沉淀，在冰箱中靜置1小時(shí)后離心，然后用丙酮脫水，置干燥器中過夜。
權(quán)利要求
1.一種α-淀粉酶的提取工藝，其特征是絮凝-在吸附樹脂上的疏水吸附提取。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征是發(fā)酵液經(jīng)絮凝，板框壓濾、樹脂吸附、洗脫、乙醇沉淀、干燥等工序提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取工藝，其特征是發(fā)酵液先經(jīng)1號(hào)和2號(hào)絮凝劑相繼絮凝，壓濾的清液用大孔吸附樹脂吸附，裝柱用適當(dāng)濃度的乙醇溶液洗脫。
全文摘要
本發(fā)明屬于酶制劑分離提取技術(shù)領(lǐng)域，其目的是用樹脂吸附和洗脫代替現(xiàn)行食品級(jí)α-淀粉酶生產(chǎn)工藝中超濾濃縮工序，并獲得高純度的α-淀粉酶。本發(fā)明使用1號(hào)和2號(hào)絮凝劑相繼絮凝，絮凝在絮凝劑加入后數(shù)分鐘內(nèi)即可完成，絮凝物結(jié)成大塊很易板框壓濾。本工藝生產(chǎn)所得的α-淀粉酶的活性回收率可達(dá)60％左右，1克酶粉的活性在60000單位左右。
文檔編號(hào)C12N9/28GK1034577SQ87105939
公開日1989年8月9日 申請(qǐng)日期1987年12月15日 優(yōu)先權(quán)日1987年12月15日
發(fā)明者王傳懷, 張國寶, 余宏 申請(qǐng)人:南京大學(xué)