本發(fā)明屬于保健食品的
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種增強免疫力的保健食品及其制備方法。
背景技術(shù)：
：免疫是指機體對外來異物的一種反應(yīng)，是機體識別“自己”與“非己”物質(zhì)，并對非己異物加以排斥、清除，以維持機體內(nèi)環(huán)境平衡穩(wěn)定的一種生理性防御反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)中的“正氣存內(nèi)，邪不可干、邪之所湊，其氣必虛”，強調(diào)了健康與疾病取決于正氣的盛衰。《黃帝內(nèi)經(jīng)》曰：“衛(wèi)氣者，所以溫分肉，沖皮膚，肥腠理，司開闔也。衛(wèi)氣和則分肉解利，皮膚調(diào)柔，腠理致密也”，可見衛(wèi)氣為機體的屏障，即為機體的免疫防御機制。中醫(yī)的一個臟腑，可以包括幾個臟器的功能，同時幾個臟器又可以具有同一功能，如腎藏先天元氣，脾運化水谷之氣，肺吸入清氣，構(gòu)成了人體之“正氣”。對于人體正氣，中醫(yī)十分重視“后天調(diào)養(yǎng)”，即在后天注意調(diào)攝補養(yǎng)，從而改善體質(zhì)，提高抗病能力，達到增強免疫力作用。而中醫(yī)對免疫低下辨證施治，不外扶正、祛邪兩大法則，所謂扶正，包括了益衛(wèi)氣、補元氣、養(yǎng)血氣，就是調(diào)動機體的抗病力，提高機體的免疫功能，增強其穩(wěn)定性。所謂祛邪，就包括了祛散風(fēng)邪、清熱解毒、活血化瘀等具體治則，具有抑制免疫反應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫平衡的作用，從而以提高機體的抗病能力。以扶正祛邪為原則擬定的具體方藥，就可能作用于免疫系統(tǒng)、發(fā)揮對免疫性疾病的防治作用。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為黃芪與當(dāng)歸配伍蘊含著氣血的辯證關(guān)系。當(dāng)歸補血湯中黃芪補脾氣、益肺氣，是氣中之要藥，當(dāng)歸善補陰血，為血分之要藥，在“從陽引陰，從陰引陽”的理論基礎(chǔ)，配伍藥量比例得當(dāng)，則可起到氣血雙補的功效。黃芪含有多糖、蛋白質(zhì)、皂苷等多種物質(zhì)，黃芪多糖早已證明其為黃芪增強免疫力的成分之一；當(dāng)歸含有多糖、蛋白質(zhì)以及香豆素類、有機酸類化合物等多種物質(zhì)，且當(dāng)歸多糖早已證明其為當(dāng)歸增強免疫力的成分之一?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究者發(fā)現(xiàn)黃芪當(dāng)歸配伍可通過非特異性免疫、細胞免疫和體液免疫提高機體的免疫功能。而瑪咖，溫、甘、平，歸肺、腎經(jīng)，含蛋白質(zhì)、氨基酸、礦物元素、維生素等多種營養(yǎng)成分，瑪咖中含有的多種功效成分能夠促進機體免疫功能，改善機體免疫力。綜上所述，本發(fā)明選用黃芪、當(dāng)歸、瑪咖粉組方，以其含有的粗多糖、蛋白質(zhì)為主要功效成分，遵循傳統(tǒng)中醫(yī)藥養(yǎng)生理論，并結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究資料，通過調(diào)補機體臟腑功能，補充機體所需的營養(yǎng)物質(zhì)，增加能量物質(zhì)儲備，補元氣、益氣血、扶正固本，從而達到增強機體免疫力的功效。根據(jù)配方情況，黃芪、當(dāng)歸采用水煎煮技術(shù)提取，充分提取后有利于有效成分被更好服用吸收，而瑪咖粉屬于新資源食品原料，可直接使用。因此，瑪咖粉過篩（粉碎）直接以粉入用，最大程度地發(fā)揮原粉的功效利用價值。迄今為止，未見其他文獻及專利公開報道采用該組方及方法來制備增強人體免疫力的保健食品。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種增強免疫力的保健食品及其制備方法。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：本發(fā)明提供的一種增強免疫力的保健食品，包括以下重量份的原料：黃芪45～60份，當(dāng)歸15～30份，瑪咖粉10～25份，微晶纖維素0～5份，羧甲基淀粉鈉0～5份，硬脂酸鎂0～1份，二氧化硅0～1份。制備本發(fā)明保健食品的優(yōu)選重量配比是：黃芪50～55份，當(dāng)歸20～25份，瑪咖粉15～20份，微晶纖維素1～3份，羧甲基淀粉鈉1～3份，硬脂酸鎂0.1～0.5份，二氧化硅0.3～0.5份。制備本發(fā)明保健食品的最佳重量配比是：黃芪53份，當(dāng)歸23份，瑪咖粉19份，微晶纖維素2份，羧甲基淀粉鈉2.4份，硬脂酸鎂0.2份，二氧化硅0.4份。本發(fā)明保健食品的制備方法為：（1）取配方量的黃芪、當(dāng)歸置提取罐水煎煮提取1～3次，加入14～22倍水量，在第一次提取前浸泡30分鐘，每次提取1～3小時，合并提取液，濾過，濾液于0.06～0.08mpa減壓濃縮至60℃時相對密度1.20～1.30，得稠浸膏，稱重，70℃以下于0.06～0.08mpa真空干燥，得干膏，稱重，粉碎過100目篩成細粉，稱重，備用；（2）取配方量的瑪咖粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉以及上述干膏粉，置混合機混合15～30min，得混合粉；（3）混合粉加入適量的0～95%食用乙醇潤濕制軟材，過20目篩制粒，濕顆粒用60℃～70℃干燥至水分≤5%，干燥后過18目篩整粒，得干顆粒，取配方量的硬脂酸鎂、二氧化硅，加至干顆粒中，混合均勻，混合時間為15～30min，得總混合顆粒；（4）取總混合顆粒，置壓片機，壓片。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：1）本發(fā)明以黃芪、當(dāng)歸、瑪咖粉為主要原料，黃芪與當(dāng)歸配方，二者配伍可達補氣活血的目的，對機體起到補益作用，另外再配伍瑪咖粉，補充機體需要的一些營養(yǎng)物質(zhì)，全方位提高機體免疫力，達到增強免疫力功效，且原料來源安全，質(zhì)量可靠，和其他同類保健食品相比，具有明顯的綜合優(yōu)勢；2）本發(fā)明取配方量的黃芪與當(dāng)歸，采用水煎煮技術(shù)提取后使用，可最大程度上保留其有效成分，而瑪咖粉屬于新資源食品原料，可直接使用。因此，瑪咖粉過篩（粉碎）直接以粉入用，這樣也能最大的發(fā)揮原料功效利用價值；3）本發(fā)明具有外觀美觀、便于服用、吸收快、生物利用度高以及工藝簡單、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點，適用于廣大需要人群；4）經(jīng)功能性試驗證明，本發(fā)明保健食品屬于實際無毒級，且具有增強免疫力的作用。以下結(jié)合功能試驗來進一步說明其有益效果。毒理學(xué)試驗1材料和方法1.1樣品：本發(fā)明保健食品（以下簡稱樣品），食用方法及食用量：每日3次，每次3片（0.7g/片），口服，成人體重按60kg計，樣品的人體推薦用量約為0.1g/kgbw。樣品配制方法：用純化水配制成最高濃度（0.4g/ml）的受試物。1.2實驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境：icr小鼠，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證編號：11400700108541，動物生產(chǎn)許可證號：scxk（京）2012-0001，本實驗室屏障環(huán)境動物使用許可證號：syxk（京）2015-0015，小鼠動物飼養(yǎng)室溫度20℃～24℃，濕度60%～70%。1.3試驗方法：小鼠經(jīng)口急性毒性試驗（mtd）：選用icr小鼠，購入后適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)后，于試驗前禁食14小時，不限制飲水。試驗當(dāng)日，取健康小鼠雌雄各10只進行試驗，禁食后體重18.0g～20.7g。每只動物按20ml/kgbw的容量，一日內(nèi)2次灌胃給予樣品配制物。樣品總給予劑量為16g/kgbw（相當(dāng)于人體推薦用量160倍）。給予樣品后密切觀察動物狀態(tài)并記錄，觀察內(nèi)容包括動物外觀、四肢活動、攝食、飲水、排泄等。連續(xù)觀察動物14天，記錄動物的中毒表現(xiàn)和死亡情況。2試驗結(jié)果小鼠經(jīng)口急性毒性試驗（mtd）：給予樣品當(dāng)日至14天，動物的外觀、四肢活動、攝食、飲水、排泄均未見明顯毒性反應(yīng)。試驗期間全部動物存活，體重增長情況正常。動物體重見表1。表1樣品小鼠經(jīng)口急性毒性試驗結(jié)果3試驗結(jié)論樣品對兩種性別的icr小鼠經(jīng)口急性毒性試驗的最大耐受劑量（mtd）均大于16g/kgbw。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)判定，樣品屬于無毒級。藥效學(xué)試驗1材料和方法1.1受試樣品：本發(fā)明保健食品（以下簡稱受試樣品），用法為每人（成人）每日3次，每次3片（0.7g/片），按60kg體重折算成0.1g/kgbw。1.2實驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境：由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司繁殖的spf級icr種雄性小鼠280只，實驗動物生產(chǎn)許可證號：scxk（京）2012-0001。實驗動物質(zhì)量合格證號：114007000103683等。體重18g～20g。動物購入后在本動物室屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)后開始試驗。本實驗動物房使用許可證號：syxk（京）2010-0023/syxk（京）2015-0033。動物室溫度：22℃～25℃，相對濕度：55%～70%。1.3劑量選擇與受試物給予方式：根據(jù)受試樣品的人體日推薦劑量，設(shè)3.0g/kgbw、1.0g/kgbw、0.5g/kgbw（分別相當(dāng)于人體推薦用量的30、10、5倍）3個劑量組，將受試樣品用純化水溶解稀釋配制成高、中、低劑量濃度，另設(shè)一個陰性對照組。以灌胃方式每日給予受試物一次，連續(xù)給予受試物30天后處死動物并采集各項指標(biāo)。1.4主要儀器與試劑：天平、分析天平、超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機、恒溫水浴、酶標(biāo)儀、顯微鏡等。無菌手術(shù)器械、微量注射器（250μl）、細胞計數(shù)器、24孔和96孔平底細胞培養(yǎng)板、96孔u型細胞培養(yǎng)板、200目細胞篩等。綿羊紅細胞（srbc）、雞紅細胞、生理鹽水、hank′s液（ph7.2）、rpmi1640培養(yǎng)液、胎牛血清、青鏈霉素、刀豆蛋白（cona）、1%冰醋酸、1mol/lhcl溶液、酸性異丙醇（96ml異丙醇加4ml1mol/lhcl溶液）、mtt、pbs緩沖液（ph7.2-7.4）、補體（豚鼠血清）、瓊脂糖、yac-1細胞、乳酸鋰、硝基氯化四氫唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶ⅰ、0.2mol/ltris-hcl緩沖液（ph8.2）、1%np40、印度墨汁、0.1%na2co3、giemsa染液、都氏試劑等。1.5試驗方法1.5.1對體重的影響小鼠每周稱重一次，受試樣品各劑量組與陰性對照組進行比較（統(tǒng)計遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、nk細胞活性測定、血清溶血素測定和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗體重）。1.5.2對免疫器官重量的影響于末次給予受試物后動物稱重（遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)），處死，摘取脾臟及胸腺，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污，稱量臟器重量以后根據(jù)體重計算每只動物的臟器體重比值，以mg/10gbw表示，受試樣品各劑量組與陰性對照組進行比較。1.5.3cona誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（mtt法）取上述健康小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物，末次給予受試物后，各組動物無菌取脾，加入適量滅菌hank′s，無菌條件下制備脾細胞懸液，調(diào)整細胞濃度至3×106/ml，分2孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml。在其中一孔加入75μlcona液（a，相當(dāng)于7.5μg/ml），另一孔作為對照（b），置37℃培養(yǎng)72小時，培養(yǎng)結(jié)束前4小時每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入不含血清的rpmi1640培養(yǎng)液，同時加入mtt（5mg/ml）50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，充分吹打混勻后分裝到96孔板中，每孔做3個平行孔，用酶標(biāo)儀在570nm處測定各溶液的吸光度值（abs）。計算增殖力（增殖力=absa-absb）。受試樣品各劑量組與陰性對照組進行比較。1.5.4遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（綿羊紅細胞（srbc）誘導(dǎo)小鼠dth（足跖增厚法））取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。末次給予受試物前5天每只小鼠腹腔注射2ml2%（v/v）綿羊紅細胞懸液進行免疫。免疫4天后，每只小鼠測量左后足跖厚度，然后在測量部位皮下注射20μl20%綿羊紅細胞懸液。注射24h后用游標(biāo)卡尺測量左后足跖厚度，同一部位測量三次，取平均值。計算dth的程度（dth程度=激發(fā)后足跖厚度-激發(fā)前足跖厚度）。受試樣品各劑量組與陰性對照組進行比較。1.5.5抗體生成細胞檢測（jeme改良玻片法）取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。末次給予受試物前5天時，每只小鼠腹腔注射0.2ml2%綿羊紅細胞懸液進行免疫。末次給予后1h，各組動物取脾，制備脾細胞懸液，將脾細胞清洗后，準(zhǔn)確加入8mlhank′s液，混懸后取25μl，加入10%（v/v）綿羊紅細胞50μl后鋪片，37℃保溫1h，加入sa稀釋（1:8）的補體，繼續(xù)保溫1h，計數(shù)玻片上的溶血空斑數(shù)，溶血空斑數(shù)以空斑數(shù)/全脾來表示。空斑數(shù)/全脾=玻片上的空斑數(shù)×稀釋倍數(shù)受試樣品各劑量組的空斑數(shù)量與陰性對照組進行比較。1.5.6血清溶血素的測定（半數(shù)溶血值的測定）取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。末次給予受試物前5天時，每只小鼠腹腔注射0.2ml的2%綿羊紅細胞懸液進行免疫。末次給予受試物后，摘除眼球取血，放置1小時后，2000r/min離心10min，收集血清。取血清用sa緩沖液400倍稀釋。將稀釋后的血清1ml置于試管內(nèi)，依次加入5%（v/v）srbc0.2ml，補體1ml。另設(shè)不加血清的對照管（以sa緩沖液代替）。置37℃恒溫水浴中保溫20min后，冰浴終止反應(yīng)。2000r/min離心10min。取上清1ml，加都氏試劑3ml，同時取10%srbc0.25ml，加都氏試劑至4ml，充分混勻，放置10min后，于540nm處對照管作空白，分別測定各管吸光度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值（hc50）表示。hc50=（樣品光吸光度值/srbc半數(shù)溶血時的吸光度值）×稀釋倍數(shù)。受試樣品各劑量組的hc50與陰性對照組進行比較。1.5.7小鼠碳廓清試驗取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。末次給予受試物后，自小鼠尾靜脈注入以0.9%氯化鈉注射液稀釋4倍的印度墨汁，0.1ml/10gbw。注入后立刻計時，分別自注入后的2min和10min從內(nèi)眥靜脈叢取血20μl，加到2ml0.1%na2co3溶液中，混勻，以0.1%na2co3調(diào)零，在600nm處測定吸光度（abs）值。將小鼠處死后，取肝臟和脾臟分別稱重。以吞噬指數(shù)（α）表示小鼠碳廓清的能力。k=（lgabs1-lgabs2）/(t2-t1)α=體重/（肝重＋脾重）×受試樣品各劑量組的α值與陰性對照組比較。1.5.8小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗（半體內(nèi)法）取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。試驗前24h，小鼠腹腔注射0.5%水解乳蛋白1.5ml/只，注射后輕柔腹部數(shù)次。試驗當(dāng)日小鼠腹腔注射1%雞紅細胞懸液0.1ml/只，30min后小鼠脫臼處死，立即腹腔注射2ml0.9%氯化鈉注射液，繼續(xù)輕柔腹部約1min。然后剪開腹壁皮膚，用吸管輕輕吸出腹腔液制片。玻片干后甲醇固定5min，giemsa染液染色，用純化水漂洗，晾干。油鏡下計數(shù)巨噬細胞，每張片子計數(shù)100個。以吞噬百分率和吞噬指數(shù)表示吞噬能力。吞噬百分率（%）=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)×100%吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細胞總數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)吞噬百分率需進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，x=sin-1，式中p為吞噬百分率，用小數(shù)表示。受試樣品各劑量組的吞噬百分率或吞噬指數(shù)與陰性對照組進行比較。1.5.9nk細胞活性測定（乳酸脫氫酶ldh測定法）取上述健康雄性小鼠40只，按體重隨機分組，每組10只，按上述劑量給予受試物。末次給予受試物后，各組動物取脾，制備脾細胞懸液。用滅菌注射用水裂解紅細胞后，加入1%冰醋酸稀釋細胞懸液。調(diào)整細胞懸液的濃度為2×107后，加入96孔板中培養(yǎng)。每個動物分成：反應(yīng)孔（脾細胞懸液和yac-1細胞懸液各100μl，效靶比為50:1）；自然釋放孔（yac-1細胞懸液和培養(yǎng)液各100μl）；最大釋放孔（yac-1細胞懸液和1%np40各100μl）。以上各項均做3個平型管。96孔板在37℃、5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時，加入ldh基質(zhì)液和1mol/lhcl后，合并各平行孔的溶液，在490nm處測定吸光度（abs）。計算nk細胞活性。nk細胞活性（%）=（abs反應(yīng)孔-abs自然釋放孔）/(abs最大釋放孔-abs自然釋放孔)nk細胞活性需轉(zhuǎn)換（x=sin-1），p為nk細胞活性，用小數(shù)表示。受試樣品各劑量組的nk紅細胞活性與陰性組進行比較。1.6數(shù)據(jù)處理：采用spss軟件對數(shù)據(jù)進行處理。數(shù)據(jù)采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算f值，f值＜f0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性：f值≥f0.05，p≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計：對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。1.7試驗結(jié)果判斷增強免疫力功能判定：在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-吞噬細胞功能、nk細胞活性四個方面任兩個方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。其中細胞免疫功能測定項目中的兩個試驗結(jié)果均為陽性，或任一個試驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定細胞免疫功能測定結(jié)果陽性。體液免疫功能測定項目中的兩個試驗結(jié)果均為陽性，或任一個試驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定體液免疫功能測定結(jié)果陽性。單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個試驗結(jié)果均為陽性，或任一個試驗的兩個劑量組結(jié)果陽性，可判定單核-巨噬細胞功能結(jié)果陽性。nk細胞活性測定試驗的一個以上劑量組測定，可判定nk細胞活性結(jié)果陽性。2試驗結(jié)果2.1對小鼠體重的影響由表1～表4中可以看出，受試樣品各劑量組小鼠體重均與陰性對照組相比較，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異不具有顯著性意義（p＞0.05），表明該樣品對小鼠體重?zé)o影響。表1對小鼠體重的影響（遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)）（±sd）表2對小鼠體重的影響（nk細胞活性測定）（±sd）表3對小鼠體重的影響（血清溶血素測定）（±sd）表4對小鼠體重的影響（小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗）（±sd）2.2對免疫器官重量的影響由表5中可以看出，受試樣品各劑量組小鼠脾臟、胸腺的臟器體重比與陰性對照組相比較，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異不具有顯著性意義（p＞0.05），表明該樣品對小鼠脾臟、胸腺的臟器體重比值無影響。表5對小鼠免疫器官重量的影響（±sd）2.3cona誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗由表6中可以看出，受試樣品高劑量組（3.00g/kgbw，相當(dāng)于人體推薦量的30倍）的脾細胞增殖能力均明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異均具有顯著性意義（p＜0.001）。表明該樣品具有促進脾細胞增殖的作用。表6對小鼠脾細胞增殖力的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）增殖力（×10-2）p值陰性對照組—102.53±0.43—高劑量組3.0104.96±1.610.001中劑量組1.0103.19±1.110.161低劑量組0.5103.39±2.060.7052.4遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)由表7中可以看出，受試樣品高、中劑量組（3.00g/kgbw、1.0g/kgbw，分別相當(dāng)于人體推薦量的30倍、10倍）小鼠足跖的腫脹度值明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差距具有顯著性意義（p＜0.05、p＜0.01）。表明該樣品具有加強遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)程度的作用。表7對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）腫脹度（mm）p值陰性對照組—100.19±0.09—高劑量組3.0100.27±0.040.041中劑量組1.0100.35±0.070.000低劑量組0.5100.26±0.090.1052.5抗體生成細胞檢測（jeme改良玻片法）由表8可以看出，受試樣品高劑量組（3.0g/kgbw，相當(dāng)于人體推薦量的30倍）的空斑數(shù)明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有顯著性意義（p＜0.05）。表明該樣品具有增加抗體生成細胞數(shù)的作用。表8對小鼠抗體生成細胞的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）空腹數(shù)（×10-3）p值陰性對照組—1042.67±6.22—高劑量組3.01051.04±7.200.015中劑量組1.01045.50±5.690.632低劑量組0.51048.30±6.250.1362.6血清溶血素的測定（半數(shù)溶血值的測定）由表9中可以看出，受試樣品高、中劑量組（3.0g/kgbw、1.0g/kgbw，分別相當(dāng)于人體推薦量的30倍、10倍）的半數(shù)溶血值明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有顯著性意義（p＜0.001、p＜0.05）。表明該樣品能提高動物血清中溶血素的含量。表9對小鼠血清溶血素的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）半數(shù)溶血值p值陰性對照組—1020.51±6.05—高劑量組3.01048.30±19.700.000中劑量組1.01038.95±20.300.028低劑量組0.51038.34±23.900.0702.7小鼠碳廓清試驗由表10中可以看出，受試樣品中劑量組（1.0g/kgbw，相當(dāng)于人體推薦量的10倍）的吞噬指數(shù)明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有顯著性意義（p＜0.01）。表明該樣品具有增強小鼠碳廓清能力的作用。表10對小鼠碳廓清能力的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）吞噬指數(shù)（a）p值陰性對照組—105.98±0.35—高劑量組3.0106.23±0.760.650中劑量組1.0106.54±0.590.006低劑量組0.5106.03±0.670.4962.8小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗由表11中可以看出，受試樣品中、低劑量組（1.0g/kgbw、0.5g/kgbw，分別相當(dāng)于人體推薦量的10倍、5倍）的吞噬指數(shù)均明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有顯著性意義（p＜0.01、p＜0.05）；受試樣品中、低劑量組的吞噬百分率均明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有顯著性意義（p＜0.05）。表明該樣品具有加強小鼠巨噬細胞吞噬能力作用。表11對小鼠吞噬能力的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）吞噬指數(shù)（k值）p值轉(zhuǎn)化后吞噬百分率（%）p值陰性對照組—100.36±0.20—27.56±7.51—高劑量組3.0100.46±0.130.38632.24±4.350.204中劑量組1.0100.59±0.170.00934.88±5.190.025低劑量組0.5100.54±0.170.04734.83±6.220.0262.9nk細胞活性測定由表12中可以看出，受試樣品高、中、低劑量組（3.0g/kgbw、1.0g/kgbw、0.5g/kgbw，分別相當(dāng)于人體推薦量的30倍、10倍、5倍）的nk細胞活性均明顯高于陰性對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異均具有顯著性意義（p＜0.01、p＜0.01、p＜0.05）。表明該樣品具有增強nk細胞活性的作用。表12對小鼠nk細胞活性的影響（±sd）組別劑量（g/kgbw）動物數(shù)（只）nk細胞活性p值陰性對照組—1039.96±7.35—高劑量組3.01056.04±7.560.001中劑量組1.01053.39±10.080.003低劑量組0.51047.78±2.350.0103結(jié)果判定分別以3.0g/kgbw、1.0g/kgbw、0.5g/kgbw（相當(dāng)于人體推薦量的30倍、10倍、5倍）劑量的受試樣品小鼠連續(xù)灌胃30天，綜合以上的試驗結(jié)果，根據(jù)“增強免疫力功能判定”陽性結(jié)果如下：受試樣品各劑量組對小鼠體重和脾臟、胸腺的臟器體重比無影響；受試物：一個劑量組在cona誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗中為陽性結(jié)果，兩個劑量組在遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗中為陽性結(jié)果，細胞免疫功能測定結(jié)果陽性；一個劑量組在抗體生成試驗中為陽性結(jié)果，兩個劑量組在血清溶血素的測定試驗中為陽性結(jié)果，體液免疫功能測定結(jié)果為陽性；一個劑量組在小鼠碳廓清試驗中為陽性結(jié)果，兩個劑量組在小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗中為陽性結(jié)果，單核-巨噬細胞功能結(jié)果陽性；三個劑量組在nk試驗中為陽性結(jié)果，nk細胞活性結(jié)果陽性。綜上，本實驗條件下該受試樣品具有增強免疫力功能的作用。具體實施方式：為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。實施例1：黃芪、當(dāng)歸功效的成分主要有多糖等成分，易溶于水，因此適宜水煎煮提取。取配方量的黃芪、當(dāng)歸飲片置提取罐水煎煮提取1～3次，加入14～22倍水量，在第一次提取前浸泡30分鐘，每次提取1～3小時，合并提取液，濾過，濾液減壓（0.06～0.08mpa）濃縮至相對密度1.20～1.30（60℃），得稠浸膏，稱重，70℃以下真空干燥（0.06～0.08mpa），得干膏，稱重，粉碎過100目篩成細粉，稱重，備用；根據(jù)原料的功效成分，制定以提取浸膏中粗多糖的含量為指標(biāo)，采用正交試驗法優(yōu)選提取工藝。影響水提取工藝的主要影響因素有溶媒用量（a）、提取次數(shù)（b）、提取時間（c），所以擬以l9(34)正交試驗表進行試驗考查，優(yōu)選相應(yīng)因素水平，從而確定最佳的提取工藝，粗多糖的測定方法按照本品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的檢測方法進行。取1/3配方量的原料進行試驗，測定提取物干浸膏中粗多糖的總得量，測定方法按本品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)附錄a規(guī)定方法執(zhí)行，正交試驗篩選試驗見下表13、14、15。各因素的水平依據(jù)植物原料一般的提取工藝及大生產(chǎn)經(jīng)驗制定。表13正交試驗因素水平表表14正交試驗安排及實驗結(jié)果表15粗多糖總得量方差分析方差來源離差平方和自由度f均方差p值顯著性a1.526720.7633＞0.05b49.1400224.5700＜0.05*c5.446722.7233＞0.05d1.406720.7033方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)（b）對粗多糖總得量具有顯著性影響。溶媒用量（a）和提取時間（c）對粗多糖總得量沒有顯著性影響，各因素的影響強度次序為b＞a＞c。直觀分析結(jié)果表明，因素a中k3＞k2＞k1，因素b中k2＞k3＞k1，因素c中k2＞k3＞k1，結(jié)果分析，最佳提取工藝為a3b2c2；即原料分別加8倍，6倍量的水煎煮提取2次，每次1.5小時。實施例2：取53份的黃芪與23份的當(dāng)歸，分別按照實施例1最佳的提取工藝，制備黃芪與當(dāng)歸的提取物浸膏；取19份的瑪咖粉、2份微晶纖維素、2.4份羧甲基淀粉鈉以及上述干膏粉，置混合機混合15～30min（粗多糖含量見表16），得混合粉；混合粉加入適量的0～95%食用乙醇潤濕制軟材，過20目篩制粒，濕顆粒用60℃～70℃干燥（水分≤5%），干燥后過18目篩整粒，得干顆粒，取0.2份硬脂酸鎂、0.4份二氧化硅，加至干顆粒中，混合均勻，混合時間為20min，得總混合顆粒；取總混合顆粒，置壓片機，壓片（試驗數(shù)據(jù)見表17）。表16混合粉混合均勻度驗證試驗結(jié)果表17輔料及其用量的考察結(jié)果項目試驗1試驗2試驗3浸膏粉量（g）172172172瑪咖粉（g）140140166.25微晶纖維素（g）36.2527.517.5羧甲基淀粉鈉（g）—717.5二氧化硅（g）—1.753.5硬脂酸鎂（g）1.751.751.75潤濕劑純化水50%食用酒精95%食用酒精顆粒目篩（目）181818片重（g）0.70.70.7混合顆粒休止角（度）33.534.832.9片重差異（%）-4.05～3.88-3.75～3.93-2.73～2.51崩解時限（分鐘）614323硬度硬度適中硬度適中硬度適中碎脆度（%）0.430.520.48結(jié)論不易制粒，軟材偏粘，不合理，崩解不合理制粒效果一般，有粘網(wǎng)現(xiàn)象，壓片成型較好，外觀美觀，崩解時限較長顆粒較均勻，片劑外觀美觀，硬度適中、崩解時限較好當(dāng)前第1頁12