本發(fā)明屬于小麥蛋白加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種食品級(jí)谷氨酰胺酶脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法。

背景技術(shù)：

小麥面筋蛋白俗稱谷朊粉，是生產(chǎn)小麥淀粉時(shí)的副產(chǎn)品。小麥面筋蛋白來源豐富，營養(yǎng)價(jià)值高，應(yīng)用范圍廣，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于小麥面筋蛋白其本身有一個(gè)缺點(diǎn)，即低溶解性。而控制溶解度的最主要因素是電荷率（chargefrequeney）和疏水性（hydrophobicity）。脫酰胺改性可以改變蛋白質(zhì)電荷分布狀態(tài)，使蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)得到伸展，改善其疏水性，最終增大蛋白質(zhì)的溶解性，使蛋白質(zhì)獲得良好的功能特性，從而拓寬它的應(yīng)用范圍。

matsudomi指出脫酰胺改性是改變小麥面筋蛋白溶解性和表面特性的最有前景的方法。目前，蛋白質(zhì)脫酰胺改性的方法主要有非酶法、酶法、混合脫酰胺法。蛋白質(zhì)的非酶法脫酰胺改性包括物理法和化學(xué)法，其中，物理法可分為濕熱法和雙螺桿擠壓法，化學(xué)法有溫和酸、堿、鹽改性。目前報(bào)道中用于酶法脫酰胺的酶主要有轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（tg酶）、蛋白酶、肽谷氨酰胺酶和谷氨酰胺酶（pg酶）。最初利用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（tg酶）、蛋白酶以及肽谷氨酰胺酶來進(jìn)行脫酰胺，在使蛋白質(zhì)發(fā)生脫酰胺反應(yīng)的同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生一些副作用，而pg酶脫酰胺改性較其他酶脫酰胺改性方法在專一性、溫和性以及安全性等方面更具有優(yōu)勢。

近幾年，國內(nèi)外學(xué)者采用蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行脫酰胺改性處理，其中研究最多的蛋白質(zhì)是大豆蛋白、燕麥蛋白、米谷蛋白、小麥面筋蛋白、玉米蛋白等植物蛋白。inthawootsuppavorasatit等人采用蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶（amano500）對(duì)大豆蛋白進(jìn)行脫酰胺處理，并研究了對(duì)其功能性質(zhì)的影響；zhong-qingjiang等人研究了食品級(jí)蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶（amano50）對(duì)燕麥蛋白溶解性及乳化性的影響；yiehuiyong等人研究了蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶（從chryseobacteriumproteolyticum中提純）對(duì)α-玉米蛋白結(jié)構(gòu)及功能性質(zhì)的影響；n.miwa等人采用從chryseobacteriumproteolyticum中提純的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶研究其對(duì)脫脂牛奶蛋白理化性質(zhì)及功能性質(zhì)的影響。在對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行谷氨酰胺酶脫酰胺處理的研究中，蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶的來源大致有三種：一種是利用產(chǎn)谷氨酰胺酶的微生物（如chryseobacteriumproteolyticum）提取、純化得到自制谷氨酰胺酶，該法得到的谷氨酰胺酶成分及酶活性具有一定的不穩(wěn)定性，對(duì)提取工藝要求較高；第二種是購買分析純級(jí)別的商品酶（如sigma公司的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶），該酶價(jià)格昂貴，不適用于大規(guī)模工廠化應(yīng)用；第三種是購買食品級(jí)蛋白酶谷氨酰胺酶，相比于分析純蛋白質(zhì)谷氨酰胺商品酶，食品級(jí)蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶成本大幅降低，對(duì)于工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用具有重要的意義。而目前采用食品級(jí)蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶對(duì)小麥面筋蛋白進(jìn)行脫酰胺改性處理的相關(guān)研究鮮有人報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，包括下列步驟：

第一步：制備蛋白質(zhì)分散液

將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液中得到質(zhì)量體積比為3~12%的小麥面筋蛋白懸浮液；

第二步：脫酰胺反應(yīng)

向所述小麥面筋蛋白分散液中加入食品級(jí)谷氨酰胺酶進(jìn)行脫酰胺處理，然后冷卻得到小麥面筋蛋白脫酰胺處理液；

第三步：透析

所述小麥面筋蛋白脫酰胺處理液在醋酸溶液中透析以去除鹽離子得到小麥面筋蛋白脫酰胺純化液；

第四步：凍干

對(duì)所述小麥面筋蛋白脫酰胺純化液進(jìn)行真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：在第二步中，所述脫酰胺處理在ph值為中性條件下進(jìn)行，所述冷卻是在冰浴中進(jìn)行10-15min。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：在第二步中，所述酶食品級(jí)谷氨酰胺酶與小麥面筋蛋白比為10u/g-40u/g。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：所述透析在0.1m的醋酸溶液中進(jìn)行，4℃下透析12h，每2h更換一次所述醋酸溶液。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：在第二步中，所述脫酰胺處理的溫度條件為30-60℃，所述脫酰胺處理在搖床上進(jìn)行，所述搖床的轉(zhuǎn)速為80rpm-110rpm，所述脫酰胺處理的反應(yīng)時(shí)間為6-30h。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：在第一步中，于攪拌條件下將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液，該磷酸鹽緩沖液的濃度為200mmol/l，所述攪拌的時(shí)間為20-30min。

優(yōu)選的技術(shù)方案為：在第四步中，所述真空冷凍干燥的條件為：溫度為-55℃，真空度為42pa，干燥時(shí)間為30h。

由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是：

1、本發(fā)明工藝采用的原料系小麥面筋蛋白，其是生產(chǎn)小麥淀粉時(shí)的副產(chǎn)物，來源廣泛，價(jià)格低廉，是一種營養(yǎng)豐富、食用安全的植物蛋白源。

2、本發(fā)明采用食品級(jí)的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶對(duì)小麥面筋蛋白進(jìn)行脫酰胺處理，相比較其他酶，在保證谷氨酰胺酶脫酰胺效果的前提下，降低了成本，加速了小麥面筋蛋白在食品領(lǐng)域的工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。

3、現(xiàn)有技術(shù)對(duì)小麥面筋蛋白脫酰胺改性多采用物化方法，存在物理改性方法改性效果不顯著；化學(xué)改性方法反應(yīng)條件劇烈，較難控制，且產(chǎn)物不安全等問題，谷氨酰胺酶較其他酶脫酰胺改性方法在專一性、溫和性以及安全性等方面更具有優(yōu)勢。

4、本發(fā)明的方法采用冰浴冷卻10-15min以抑制pg酶活性，與傳統(tǒng)方法相比使蛋白變性程度最低化。

5、蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶脫酰胺使小麥面筋蛋白結(jié)構(gòu)變松散，隱藏在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的疏水區(qū)域暴露，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變得更加靈活，表面疏水性顯著增加。

6、本方法得到的小麥面筋蛋白產(chǎn)品，溶解度顯著提高，在中性條件下脫酰胺處理18h小麥面筋蛋白樣品溶解度達(dá)到27.27%，是原始未處理小麥面筋蛋白樣品溶解度的3倍（原始未處理小麥面筋蛋白樣品溶解度為9%）。

7、本方法得到的小麥面筋蛋白產(chǎn)品，表面疏水性得到顯著改善，脫酰胺處理24h時(shí)表面疏水性是未處理樣品的3倍，是空白組的2.3倍（其中脫酰胺處理24h樣品表面疏水性為362.9，未處理空白組樣品表面疏水性為121.8，對(duì)照組樣品表面疏水性為158）。

8、整個(gè)工藝操作簡單，易于掌握，對(duì)設(shè)備要求較低，易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

以下由特定的具體實(shí)施例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，熟悉此技術(shù)的人士可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)及功效。

本發(fā)明的檢測方法包括：

1、脫酰胺度的測定：微量彌散皿法

樣品完全脫酰胺產(chǎn)生的氨的含量：準(zhǔn)確稱取0.5g小麥面筋蛋白置于水解管中，再向其加入5ml的2mol/l的hcl，抽真空密封，在115℃-121℃條件下水解4h，水解完后取出冷卻，打開玻璃管，用20g/l的硼酸吸收氮并測定酰胺氮含量。

樣品脫酰胺過程中產(chǎn)生的氨的含量：在康威氏擴(kuò)散皿的中央加入3ml的20g/l的硼酸并滴加10滴左右溴甲酚藍(lán)-甲基紅綜合指示劑，皿外圍加入1ml蛋白樣品，皿邊緣均勻涂抹凡士林，蓋上玻璃蓋，并留有一定空隙，通過留出的空隙向已加入樣品的皿外圍加入飽和naoh溶液3ml，隨后立即封上玻璃蓋避免漏氣，在室溫下放置12h后，用0.02m的hcl滴定至混合指示劑終點(diǎn)。

2、溶解度的測定：福林酚試劑法

準(zhǔn)確稱取凍干的小麥面筋蛋白樣品1mg置于微型離心管中，分散于1ml不同ph值的緩沖液中（10mmol/l，ph=3的醋酸鹽緩沖液；10mmol/l，ph=5的醋酸鹽緩沖液；10mmol/l，ph=7的磷酸鹽緩沖液），每組樣品溶液均置于20℃條件下過夜，之后于10℃，3000rpm條件下離心10min，收集可溶部分，對(duì)上清液中的蛋白含量采用福林酚法進(jìn)行測定。

福林酚試劑法樣品測定：取1ml樣品溶液加入5ml試劑甲混勻，于20-25℃放置10min，再加0.5ml試劑乙，立即搖勻，在20-25℃保溫30min，然后于500nm波長處比色，以1ml蒸餾水代替樣品做空白對(duì)照。

3、水解度的測定：甲醛滴定法

分別取2ml經(jīng)改性后的小麥面筋蛋白水解液于3個(gè)標(biāo)有號(hào)碼的100ml三角瓶中，分別加入5ml蒸餾水及1%酚酞溶液3滴，搖勻。用0.1mol/lnaoh溶液滴定第三號(hào)瓶內(nèi)溶液至呈微紅色，作為終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)并記下讀數(shù)v2，向第一和第二號(hào)瓶內(nèi)分別加入2ml中性甲醛溶液混勻，再用標(biāo)準(zhǔn)naoh溶液滴定至和三號(hào)瓶內(nèi)溶液顏色相同為止，記下讀數(shù)，求出平均值v1，按下式計(jì)算水解度。

游離氨基氮（mg/ml）=nnaoh×(v1-v2)×14/2

水解程度dh（%）=游離氨基氮×上清液體積×10^-3/（樣品量×總含氮量）×100%

表面疏水性的測定：準(zhǔn)確稱取400mg的pg酶處理小麥面筋蛋白樣品分散于15ml的10mmol/lph=7的磷酸鹽緩沖液中，于8000rpm，15℃條件下離心10min，上清液蛋白濃度由考馬斯亮藍(lán)法測得。將上清液稀釋到幾個(gè)不同的濃度梯度（1倍、0.75倍、0.5倍、0.25倍、0.125倍），再取40μlans試劑（8mmol/l）加到4ml的蛋白質(zhì)溶液中，選擇激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長484nm，以熒光強(qiáng)度對(duì)蛋白質(zhì)濃度做曲線，將曲線的最開始斜率定義為被檢測樣品的表面疏水度。

4、上清液蛋白濃度的測定：考馬斯亮藍(lán)法

吸取樣品溶液1ml放入試管中，加入5ml考馬斯亮藍(lán)溶液，搖勻，放置3min左右，等反應(yīng)完成后，在595nm處測定吸光度值，通過牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品溶液蛋白質(zhì)含量。

實(shí)施例一：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為7%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌30min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=10u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速80rpm，于40℃脫酰胺改性反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后立即冰浴冷卻10min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白樣品。

真空冷凍干燥條件為：-55℃，真空度42pa，干燥時(shí)間為30h。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為52.48%，水解度為3.64%。

實(shí)施例二：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為5%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌20min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=40u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速80rpm，于40℃脫酰胺改性反應(yīng)30h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻10min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為53.40%，水解度為8.34%。

實(shí)施例三：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為5%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌20min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=20u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速110rpm，于40℃條件脫酰胺改性反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻15min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為29.59%，水解度為3.20%。

實(shí)施例四：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為12%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌30min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=10u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速110rpm，于40℃條件脫酰胺改性反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻10min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為15.97%，水解度為1.79%。

實(shí)施例五：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為7%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌20min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=10u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速80rpm，于60℃條件脫酰胺改性反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻15min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為78.40%，水解度為7.28%。

實(shí)施例六：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為7%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌20min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=10u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速80rpm，于30℃條件脫酰胺改性反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻10min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為38.71%，水解度為1.49%。

實(shí)施例七：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為5%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌30min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=20u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速110rpm，于40℃條件脫酰胺改性反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻15min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為41.84%，水解度為7.23%，表面疏水性為362.9（其中原始未處理小麥面筋蛋白表面疏水性為121.8，對(duì)照組小麥面筋蛋白樣品表面疏水性為158）。

實(shí)施例八：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

稱取一定量的小麥面筋蛋白，邊攪拌邊加入盛有磷酸鹽緩沖液（200mmol/l，ph=7）的反應(yīng)器中，配制成濃度為5%（w/v）的小麥面筋蛋白液，攪拌30min后形成蛋白懸浮液，加入食品級(jí)pg酶攪拌形成酶與底物比e/s=20u/g的體系，置于搖床中，轉(zhuǎn)速110rpm，于40℃條件脫酰胺改性反應(yīng)18h，反應(yīng)結(jié)束后冰浴冷卻15min，pg酶處理液經(jīng)0.1m醋酸溶液透析12h，每2h更換一次透析液，真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

真空冷凍干燥條件同實(shí)施例1。

檢測脫酰胺改性小麥面筋蛋白的脫酰胺度為38.20%，水解度為6.67%，溶解度為27.30%，表面疏水性為374.9（其中原始未處理小麥面筋蛋白溶解度為11.43%，表面疏水性為121.8；對(duì)照組小麥面筋蛋白樣品溶解度為9%，表面疏水性為158）。

實(shí)施例九：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：包括下列步驟：

第一步：制備蛋白質(zhì)分散液

將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液中得到質(zhì)量體積比為8%的小麥面筋蛋白懸浮液；

第二步：脫酰胺反應(yīng)

向所述小麥面筋蛋白分散液中加入食品級(jí)谷氨酰胺酶進(jìn)行脫酰胺處理，然后冷卻得到小麥面筋蛋白脫酰胺處理液；

第三步：透析

所述小麥面筋蛋白脫酰胺處理液在醋酸溶液中透析以去除鹽離子得到小麥面筋蛋白脫酰胺純化液；

第四步：凍干

對(duì)所述小麥面筋蛋白脫酰胺純化液進(jìn)行真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

在第二步中，所述脫酰胺處理在ph值為中性條件下進(jìn)行，所述冷卻是在冰浴中進(jìn)行10min。

在第二步中，所述酶食品級(jí)谷氨酰胺酶與小麥面筋蛋白比為40u/g。

4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：所述透析在0.1m的醋酸溶液中進(jìn)行，4℃下透析12h，每2h更換一次所述醋酸溶液。

5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：在第二步中，所述脫酰胺處理的溫度條件為60℃，所述脫酰胺處理在搖床上進(jìn)行，所述搖床的轉(zhuǎn)速為100rpm，所述脫酰胺處理的反應(yīng)時(shí)間為20h。

6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：在第一步中，于攪拌條件下將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液，該磷酸鹽緩沖液的濃度為200mmol/l，所述攪拌的時(shí)間為25min。

7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：在第四步中，所述真空冷凍干燥的條件為：溫度為-55℃，真空度為42pa，干燥時(shí)間為30h。

實(shí)施例十：一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法

一種脫酰胺改性小麥面筋蛋白的方法，其特征在于：包括下列步驟：

第一步：制備蛋白質(zhì)分散液

將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液中得到質(zhì)量體積比為12%的小麥面筋蛋白懸浮液；

第二步：脫酰胺反應(yīng)

向所述小麥面筋蛋白分散液中加入食品級(jí)谷氨酰胺酶進(jìn)行脫酰胺處理，然后冷卻得到小麥面筋蛋白脫酰胺處理液；

第三步：透析

所述小麥面筋蛋白脫酰胺處理液在醋酸溶液中透析以去除鹽離子得到小麥面筋蛋白脫酰胺純化液；

第四步：凍干

對(duì)所述小麥面筋蛋白脫酰胺純化液進(jìn)行真空冷凍干燥得到脫酰胺改性小麥面筋蛋白。

在第二步中，所述脫酰胺處理在ph值為中性條件下進(jìn)行，所述冷卻是在冰浴中進(jìn)行12min。

在第二步中，所述酶食品級(jí)谷氨酰胺酶與小麥面筋蛋白比為25u/g。

所述透析在0.1m的醋酸溶液中進(jìn)行，4℃下透析12h，每2h更換一次所述醋酸溶液。

在第二步中，所述脫酰胺處理的溫度條件為45℃，所述脫酰胺處理在搖床上進(jìn)行，所述搖床的轉(zhuǎn)速為80，所述脫酰胺處理的反應(yīng)時(shí)間為30h。

在第一步中，于攪拌條件下將小麥面筋蛋白分散于磷酸鹽緩沖液，該磷酸鹽緩沖液的濃度為200mmol/l，所述攪拌的時(shí)間為25min。

在第四步中，所述真空冷凍干燥的條件為：溫度為-55℃，真空度為42pa，干燥時(shí)間為30h。

上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。