本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領域，具體涉及一種多功能微生物魚肥的制備方法。

背景技術：

我國傳統(tǒng)的池塘養(yǎng)魚和種莊稼一樣都要施肥，但對養(yǎng)魚來說，施肥的目的主要是增加水的肥沃度，促進各種魚餌生物的生長和繁殖，為養(yǎng)殖魚類提供更多的食料?，F(xiàn)有的魚肥雖然施用后肥效持久，但分解緩慢，且分解時要消耗大量的氧氣，施用不當易引起水產(chǎn)動物的缺氧死亡。有益微生物制劑對于水面施肥有比較明顯的促進效果，與水產(chǎn)專用魚肥同時使用，可以起到協(xié)同的作用。目前市場上的一些產(chǎn)品也是根據(jù)長效肥和短效肥復配制成的，通過促進水中的浮游生物來生產(chǎn)魚類所需要的生物餌料，而高產(chǎn)魚塘是通過全價魚飼料來喂魚的。池塘中魚的密度非常之大，以至于浮游生物的生長速度比不上魚類吃食生物餌料的速度，所以，最終浮游生物無法正常生長。且現(xiàn)有的魚肥功能較為單一，大量施用會污染水質(zhì)，不能抑制水體中病原菌的繁殖生長，因此，缺乏對魚病的有效防治；同時，施加上述肥料在魚池中，水溫受到外界天氣變化影響大，例如“倒春寒”，水質(zhì)不穩(wěn)定，苗種難以適應，應急反應強烈。

技術實現(xiàn)要素：

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種多功能魚肥的制備方法，通過添加牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉及利用復合微生物發(fā)酵發(fā)酵棉籽粕等營養(yǎng)成分，使得制備的魚肥可以用于池塘、水庫或湖泊中飼養(yǎng)魚苗、魚種、鱔種、蝦苗、蟹苗等的飼養(yǎng)；一方面，牛乳鐵蛋白肽特有的殺菌作用及代謝產(chǎn)生的各種酶類能對魚池中的有害菌進行滅殺，降低疾病幾率；另一方面，提供豐富的營養(yǎng)原料，改善水質(zhì)，增加水中的溶氧含量。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過以下技術方案予以實現(xiàn)：

一種多功能微生物魚肥的制備方法，包括以下步驟：

(1)將含有重組牛乳鐵蛋白肽質(zhì)粒的釀酒酵母菌接種到100～500ml液體培養(yǎng)基中，于28～35℃恒溫培養(yǎng)箱中180～250rpm震蕩培養(yǎng)10～24h；

(2)將上述菌液轉(zhuǎn)接至1l～2.5l新鮮液體培養(yǎng)基中，180～250rpm震蕩培養(yǎng)，待od600在1.5～2.5之間轉(zhuǎn)接至經(jīng)過滅菌的發(fā)酵罐中，于30～35℃發(fā)酵60～72h；

(3)待發(fā)酵結(jié)束后，將罐溫升至90～98℃保持10min，自然冷卻，冷卻后收集發(fā)酵液，并用噴霧干燥機進行噴霧干燥，即得牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉；

(4)將14～24份的發(fā)酵棉籽粕、12～19份的獸骨粉、7～11份的玉米葉粉、5～9份的蹄膠粉、3～7份的貝殼粉、30～43份的水與復合微生物混合并攪拌均勻，放入到發(fā)酵池中自然發(fā)酵5～10天得物料a，期間每隔1天攪拌1次；

(5)將物料a置于烘干室內(nèi)在52～83℃下放置2～5天，粉碎過篩；

(6)將粉碎后的物料a與23～36份的乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉、0.5～1.5份的微量元素、11～20份的檸檬酸在攪拌機上充分攪拌混勻得物料b；

(7)將物料b用壓力為2～4.5公斤蒸汽調(diào)質(zhì)至溫度為60～66℃，用制粒機制粒，冷卻后裝袋保存，即得上述魚肥成品；

優(yōu)選的，所述復合微生物包括以下重量份的菌種：固氮芽孢桿菌5～11份、酒紅土褐鏈霉菌6～10份、植物乳桿菌3～9份、產(chǎn)朊假絲酵母5～10份；

優(yōu)選的，所述復合微生物包括以下重量份的菌種：固氮芽孢桿菌6份、酒紅土褐鏈霉菌8份、植物乳桿菌7份、產(chǎn)朊假絲酵母8份；

優(yōu)選的，所述發(fā)酵棉籽粕優(yōu)選為20份、獸骨粉優(yōu)選為15份、玉米葉粉優(yōu)選為29份、蹄膠粉優(yōu)選為27份、貝殼粉優(yōu)選為25份、水優(yōu)選為36份；

優(yōu)選的，所述牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉優(yōu)選為32份、微量元素優(yōu)選為1份、檸檬酸優(yōu)選為17份；

優(yōu)選的，所述微量元素為為含錳、鋁、銅、硼、鉬和鋅無機鹽中的一種或幾種；

上所述液體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料：工業(yè)葡萄糖10～20份、工業(yè)酵母膏5～12份、工業(yè)蛋白胨10～20份、食鹽5～10份，磷酸氫二鉀2～6份、磷酸二氫鈉3～7份、水60～78份；

優(yōu)選的，所述接種的接種量為1％～10％。

本發(fā)明的有益效果為：

1、利用發(fā)酵工程技術獲得高活性、高營養(yǎng)的的牛乳鐵蛋白肽，其既能抑制水體中病原菌及有害藻類的生長繁殖，又能進入魚的消化道中平衡微生態(tài)環(huán)境，增強細胞免疫反應，提高抵抗力，實現(xiàn)養(yǎng)殖效益的最大化。

2、根據(jù)水體養(yǎng)殖產(chǎn)品的營養(yǎng)需求及水體微生態(tài)環(huán)境的調(diào)控機制，利用多種微生物的發(fā)酵的生物魚肥，為水產(chǎn)動物、浮游植物和浮游動物提供豐富的營養(yǎng)，促進養(yǎng)殖產(chǎn)品的生長和發(fā)育；固氮芽孢桿菌能夠降解水中的氨態(tài)氮、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質(zhì)，同時產(chǎn)生氧氣，促進水體中有益藻類及浮游生物餌料的生長繁殖，為水產(chǎn)養(yǎng)殖動物提供充足的天然生物餌料。植物乳桿菌能通過與病原菌對限制性營養(yǎng)素的能力競爭，來抑制病原菌的生長，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的組成，形成生物學屏障。同時，通過其代謝所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物乳酸、細菌素、以及雙乙酰對其它細菌的作用，調(diào)整菌群之間的關系，維持和保證菌群最佳優(yōu)勢組合以及這種組合的穩(wěn)定，阻止了致病菌的定殖和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生長及其毒素的粘附。

3、通過復合微生物發(fā)酵高分子蛋白原料，采用配方技術制得的魚肥含有含有較多的蛋白質(zhì)、糖類、氨基酸和多種維生素，為魚等水產(chǎn)動物、浮游植物和浮游動物提供豐富的營養(yǎng)，改善水質(zhì)，增加水中的溶氧含量，且制備方法簡單，易于規(guī)?；a(chǎn)。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。應當指出的是，對本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1：

一種多功能微生物魚肥的制備方法，包括以下步驟：

(1)將3％(v/v)含有重組牛乳鐵蛋白肽質(zhì)粒的釀酒酵母菌接種到100ml液體培養(yǎng)基中，于35℃恒溫培養(yǎng)箱中190rpm震蕩培養(yǎng)15h；

(2)將上述菌液轉(zhuǎn)接至1.5l新鮮液體培養(yǎng)基中，190rpm震蕩培養(yǎng)，待od600在1.7之間轉(zhuǎn)接至經(jīng)過滅菌的發(fā)酵罐中，于35℃發(fā)酵62h；

(3)待發(fā)酵結(jié)束后，將罐溫升至98℃保持10min，自然冷卻，冷卻后收集發(fā)酵液，并用噴霧干燥機進行噴霧干燥，即得牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉；

(4)將14份的發(fā)酵棉籽粕、16份的獸骨粉、10份的玉米葉粉、7份的蹄膠粉、4份的貝殼粉、30份的水與5份的固氮芽孢桿菌、6份的酒紅土褐鏈霉菌、3份的植物乳桿菌、10份的產(chǎn)朊假絲酵母混合并攪拌均勻，放入到發(fā)酵池中自然發(fā)酵5天得物料a，期間每隔1天攪拌1次；

(5)將物料a置于烘干室內(nèi)在63℃下放置2天，粉碎過篩；

(6)將粉碎后的物料a與28份的乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉、0.2的mnso4份、0.3份的alcl3、0.1份的cucl2、0.4份的h3bo4、11份的檸檬酸在攪拌機上充分攪拌混勻得物料b；

(7)將物料b用壓力為2公斤蒸汽調(diào)質(zhì)至溫度為63℃，用制粒機制粒，冷卻后裝袋保存，即得上述魚肥成品。

上述液體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料：工業(yè)葡萄糖14份、工業(yè)酵母膏7份、工業(yè)蛋白胨14份、食鹽8份，磷酸氫二鉀4份、磷酸二氫鈉5份、水78份。

實施例2：

一種多功能微生物魚肥的制備方法，包括以下步驟：

(1)將1％(v/v)含有重組牛乳鐵蛋白肽質(zhì)粒的釀酒酵母菌接種到200ml液體培養(yǎng)基中，于28℃恒溫培養(yǎng)箱中180rpm震蕩培養(yǎng)24h；

(2)將上述菌液轉(zhuǎn)接至1l新鮮液體培養(yǎng)基中，180rpm震蕩培養(yǎng)，待od600在1.5之間轉(zhuǎn)接至經(jīng)過滅菌的發(fā)酵罐中，于30℃發(fā)酵60h；

(3)待發(fā)酵結(jié)束后，將罐溫升至94℃保持10min，自然冷卻，冷卻后收集發(fā)酵液，并用噴霧干燥機進行噴霧干燥，即得牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉；

(4)將19份的發(fā)酵棉籽粕、9份的獸骨粉、7份的玉米葉粉、9份的蹄膠粉、3份的貝殼粉、30份的水與8份的固氮芽孢桿菌、6份的酒紅土褐鏈霉菌、6份的植物乳桿菌、5份的產(chǎn)朊假絲酵母混合并攪拌均勻，放入到發(fā)酵池中自然發(fā)酵7天得物料a，期間每隔1天攪拌1次；

(5)將物料a置于烘干室內(nèi)在83℃下放置4天，粉碎過篩；

(6)將粉碎后的物料a與23份的乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉、0.3份的alcl3、0.4份的cucl2、0.1份的h3bo4、0.1份的namoo4、35份的檸檬酸在攪拌機上充分攪拌混勻得物料b；

(7)將物料b用壓力為4.5公斤蒸汽調(diào)質(zhì)至溫度為60℃，用制粒機制粒，冷卻后裝袋保存，即得上述魚肥成品。

上述液體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料：工業(yè)葡萄糖10份、工業(yè)酵母膏5份、工業(yè)蛋白胨20份、食鹽5份，磷酸氫二鉀3份、磷酸二氫鈉6份、水65份。

實施例3：

一種多功能微生物魚肥的制備方法，包括以下步驟：

(1)將10％(v/v)含有重組牛乳鐵蛋白肽質(zhì)粒的釀酒酵母菌接種到500ml液體培養(yǎng)基中，于32℃恒溫培養(yǎng)箱中250rpm震蕩培養(yǎng)10h；

(2)將上述菌液轉(zhuǎn)接至2l新鮮液體培養(yǎng)基中，250rpm震蕩培養(yǎng)，待od600在2.5之間轉(zhuǎn)接至經(jīng)過滅菌的發(fā)酵罐中，于33℃發(fā)酵60h；

(3)待發(fā)酵結(jié)束后，將罐溫升至90℃保持10min，自然冷卻，冷卻后收集發(fā)酵液，并用噴霧干燥機進行噴霧干燥，即得牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉；

(4)將24份的發(fā)酵棉籽粕、12份的獸骨粉、11份的玉米葉粉、5份的蹄膠粉、7份的貝殼粉、43份的水與11份的固氮芽孢桿菌、10份的酒紅土褐鏈霉菌、9份的植物乳桿菌、6份的產(chǎn)朊假絲酵母混合并攪拌均勻，放入到發(fā)酵池中自然發(fā)酵7天得物料a，期間每隔1天攪拌1次；

(5)將物料a置于烘干室內(nèi)在52℃下放置5天，粉碎過篩；

(6)將粉碎后的物料a與36份的乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉、0.4份的alcl3、0.4份的cucl2、0.5份的h3bo4、0.2份的namoo4、20份的檸檬酸在攪拌機上充分攪拌混勻得物料b；

(7)將物料b用壓力為2.5公斤蒸汽調(diào)質(zhì)至溫度為66℃，用制粒機制粒，冷卻后裝袋保存，即得上述魚肥成品。

上述液體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料：工業(yè)葡萄糖20份、工業(yè)酵母膏12份、工業(yè)蛋白胨10份、食鹽10份，磷酸氫二鉀2份、磷酸二氫鈉3份、水78份。

實施例4：

一種多功能微生物魚肥的制備方法，包括以下步驟：

(1)將5％(v/v)含有重組牛乳鐵蛋白肽質(zhì)粒的釀酒酵母菌接種到300ml液體培養(yǎng)基中，于30℃恒溫培養(yǎng)箱中220rpm震蕩培養(yǎng)18h；

(2)將上述菌液轉(zhuǎn)接至1.5l新鮮液體培養(yǎng)基中，220rpm震蕩培養(yǎng)，待od600在2.0之間轉(zhuǎn)接至經(jīng)過滅菌的發(fā)酵罐中，于32℃發(fā)酵60h；

(3)待發(fā)酵結(jié)束后，將罐溫升至96℃保持10min，自然冷卻，冷卻后收集發(fā)酵液，并用噴霧干燥機進行噴霧干燥，即得牛乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉；

(4)將20份的發(fā)酵棉籽粕、15份的獸骨粉、9份的玉米葉粉、7份的蹄膠粉、5份的貝殼粉、36份的水與6份的固氮芽孢桿菌、8份的酒紅土褐鏈霉菌、7份的植物乳桿菌、8份的產(chǎn)朊假絲酵母混合并攪拌均勻，放入到發(fā)酵池中自然發(fā)酵7天得物料a，期間每隔1天攪拌1次；

(5)將物料a置于烘干室內(nèi)在65℃下放置3天，粉碎過篩；

(6)將粉碎后的物料a與36份的乳鐵蛋白肽發(fā)酵粉、0.4份的alcl3、0.4份的cucl2、0.5份的h3bo4、0.2份的namoo4、17份的檸檬酸在攪拌機上充分攪拌混勻得物料b；

(7)將物料b用壓力為3公斤蒸汽調(diào)質(zhì)至溫度為63℃，用制粒機制粒，冷卻后裝袋保存，即得上述魚肥成品。

上述液體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料：工業(yè)葡萄糖13份、工業(yè)酵母膏6份、工業(yè)蛋白胨13份、食鹽7份，磷酸氫二鉀3份、磷酸二氫鈉5份、水66份。

應用例1：

養(yǎng)殖實驗在安徽省合肥市巢湖市江卡種苗繁育有限公司進行，自然水域溫度為25～30℃，ph值8～8.5。標苗設施有6.4×12.5×2.1水泥池數(shù)口，1kw增氧泵數(shù)臺。將池底和池壁刷凈，漂白粉消毒，沖洗3遍測試余氯，合格即可。

實驗設置1個空白組，1個陽性對照組(市售有機魚肥)，4個試驗組(分別投放本發(fā)明實施例1～4組制得的魚肥)，每組設置平行池。放苗前7天，陽性對照組和試驗組每池按照每畝3kg施相應的魚肥，優(yōu)選在晴天8～12時施肥。3天后取養(yǎng)殖水進行觀察，結(jié)果見表1。

表1微生物魚肥的施肥效果

施肥第5天開始放苗，每池品均放10000尾鱖魚苗，放苗后每隔10～15天施肥一次，施肥量為每畝3kg，每組按常規(guī)養(yǎng)殖方式進行日常管理。

飼喂第15天，空白組發(fā)病，其他魚池正常。養(yǎng)殖第30天，收魚分池，計算成活率和增長率，見表2。

表2鱖魚成活生長情況

本次實驗表明，添加本發(fā)明的微生物魚肥不僅可以促進魚的快速生長，還可以提高魚的品質(zhì)和質(zhì)量，而且還使水體中的有益微生物增加，可以有效防治魚病的發(fā)生，是一種經(jīng)濟有效的養(yǎng)殖方法。牛如鐵蛋白肽本身具有很好的生物相容性、胃腸道粘膜親和性，水體中病原菌及有害藻類的生長繁殖，又能進入魚的消化道中平衡微生態(tài)環(huán)境，增強細胞免疫反應，提高抵抗力，肥效時間延長3個月以上，有效抑制動物病原菌的增值，提高生產(chǎn)者的效益。

應用例2

實驗地點選在亳州市譙城豐水源養(yǎng)殖廠，養(yǎng)殖池塘隨機選取5個規(guī)格相同的池塘，實驗前，池塘均經(jīng)過清塘、曬塘處理，養(yǎng)殖用水采用沙濾井過濾后的清潔海水，無敵害生物。

實驗設置1個空白組，1個陽性對照組(市售有機魚肥)，4個試驗組(分別投放本發(fā)明實施例1～4組制得的微生物魚肥)，每組設置平行池。放苗前5天，陽性對照組和試驗組每池按照每畝2kg施相應的魚肥，優(yōu)選在晴天12～16時施肥。3天后取養(yǎng)殖水進行觀察，對照組以綠藻為主呈綠色水，試驗組以硅藻、金藻為主呈褐色水。施肥第6天出現(xiàn)帶卵輪蟲開始放苗，每池放鰱魚10000尾。按常規(guī)養(yǎng)殖方式進行日常管理，放苗后每隔7～10天施肥一次。

飼養(yǎng)第20和26天，對照組發(fā)病排塘，其他魚池正常。養(yǎng)殖110天，收魚，計算成活率，見表3。

表3鰱魚成活生長情況

本次實驗表明，利用本發(fā)明的微生物魚肥可以提高水體中黃綠色和褐色藻類的生物量，水體中帶卵輪蟲的生物量有所提高，為養(yǎng)殖動物提供了豐富的自然餌料，有效節(jié)約了養(yǎng)殖成本。而且養(yǎng)殖水中的溶解氧升高，養(yǎng)殖動物不易發(fā)病，有效提高養(yǎng)殖效率。

參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術方案的精神和范圍。