本發(fā)明涉及保健食品領(lǐng)域，具體是一種增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品及其制備方法。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查表明，約有75%的人處于亞健康狀態(tài)，并且這一數(shù)據(jù)在許多國家和地區(qū)逐年呈上升趨勢。而針對我國16個省市人群進行的健康狀況調(diào)查表明，北京、上海和廣東人處于“亞健康”狀態(tài)的比例分別是75.3%、73.49%和73.4l%。而引起亞健康最主要、最本質(zhì)原因的是人體自身免疫功能降低。
免疫力是人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物（病毒、細菌等）；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內(nèi)突變細胞和病毒感染細胞的能力?，F(xiàn)代免疫學(xué)認為，免疫力是人體識別和排除“異己”的生理反應(yīng)。人體內(nèi)執(zhí)行這一功能的是免疫系統(tǒng)。然而，隨著生活節(jié)奏的加快，人們面臨家庭、事業(yè)、社會等各方面壓力，經(jīng)常出現(xiàn)體質(zhì)虛弱、營養(yǎng)不良、精神萎靡、疲乏無力、食欲降低、睡眠障礙等表現(xiàn)，生病、打針吃藥便成了家常便飯。每次生病都要很長時間才能恢復(fù)，而且常常反復(fù)發(fā)作。如果出現(xiàn)上述癥狀，就是免疫力低下所造成的。
導(dǎo)致免疫力低下的原因除了壓力外還有很多，如：年齡的增長、睡眠不足、缺少鍛煉、飲水少、作息不規(guī)律、周圍環(huán)境嘈雜等都可能造成免疫低下。輕度的免疫低下，通過一段時間的調(diào)理機體能自然的恢復(fù)，而嚴重的免疫低下不僅需要藥物治療的介入，甚至有導(dǎo)致癌變的可能。
隨著人們生活水平的提高，人們更愿意花更多的精力在疾病的預(yù)防，而不是等到疾病發(fā)生后的治療。保健食品應(yīng)運而生，面對一些保健食品質(zhì)量不過關(guān)、效果虛假、價格昂貴等問題，研究和開發(fā)一種能安全、有效、經(jīng)濟實惠的中藥保健類產(chǎn)品具有廣泛而深遠的意義。
現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號為cn101637258b的中國發(fā)明專利，公開了一種用于增強免疫力的保健食品，其主要由以下重量份數(shù)的物質(zhì)制成：人參提取物：2-6份；枸杞子提取物：3-9份；制何首烏提取物：0.5-1.5份；烏雞提取液：90-270份；根據(jù)該配方制成的口服液劑型，食用安全，服用方便，經(jīng)過口味調(diào)配，依從性良好。但該保健食品采用昂貴的中草藥作為原料，成本較高，且分子量較大，人體對其的吸收消化率不高。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種分子量小，易被人體吸收，能增強體質(zhì)，提高免疫力且成份低廉的增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品及其制備方法。
本發(fā)明針對背景技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：一種增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品，成份及其重量份為：鱘魚魚鰾多肽70~85份、十四酸異丙酯0.0002~0.0004份、靈芝多糖10~20份、維生素c0.5~3份、聚磷酸酯0.0001~0.0003份、大豆磷脂1~10份。成分搭配科學(xué)合理，對細胞免疫、體液免疫、巨噬細胞吞噬功能和nk細胞活性均有良好的促進作用，且組合物增強免疫力的效果要遠優(yōu)于單一成份；綠色安全、無毒副作用，并且免疫增強作用顯著，對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用。十四酸異丙酯和聚磷酸酯可增加人體細胞對鱘魚魚鰾多肽保健食品的消化吸收率，提高本發(fā)明產(chǎn)品的利用率，提高產(chǎn)品品質(zhì)。
鱘魚魚鰾的平均分子量為750.0~815.0da，脯氨酸的含量為11.29~13.16%，羥脯氨酸的含量為7.86~8.71%，谷氨酸的含量為7.65~8.73%，天冬氨酸的含量為4.87~5.59%，精氨酸的含量為4.15~5.36%。
一種增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品的制備方法，制備步驟為：
1）將鱘魚魚鰾勻漿后，按照1g：21~25ml的重量體積比加入ph為9.5~10.5的甘氨酸-naoh緩沖液，混合均勻后，調(diào)節(jié)ph至9.0~10，得到混合液；
2）將混合液溫度升至45~50℃攪拌預(yù)熱5~10分鐘，按原料質(zhì)量的2.0~2.5%加入堿性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解溫度為45~50℃，酶解時間6~8h。酶解結(jié)束后將所得的酶解產(chǎn)物升溫至90~95℃，并于此溫度保持10~15min，再冷卻至室溫，然后離心，取上清液；
3）將上清液進過截留分子量為1~2kda的超濾膜，取濾過液，并將其制成濃度5~10mg/ml的溶液，進行大孔樹脂脫鹽；脫鹽后的酶解液在≤40℃的溫度下進行真空濃縮，最后經(jīng)噴霧干燥得鱘魚魚鰾多肽；
4）取配方量維生素c溶解于90~95%乙醇水溶液中備用，取配方量鱘魚魚鰾多肽、十四酸異丙酯、靈芝多糖、大豆磷脂和聚磷酸酯于雙蒸水中混合均勻，加入維生素c的乙醇溶液，混合均勻，噴霧干燥，即得增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品。鱘魚魚鰾多肽保健食品為片劑、分散片、速溶片、散劑、顆粒劑或膠囊。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：1）本發(fā)明工藝科學(xué)合理，操作簡單，通過堿性蛋白酶酶解并融合大孔樹脂脫鹽和噴霧干燥等手段進行制備，酶解過程易監(jiān)控，使增強免疫力的鱘魚魚鰾多肽有效釋放；2）成分搭配科學(xué)合理，對細胞免疫、體液免疫、巨噬細胞吞噬功能和nk細胞活性均有良好的促進作用，且組合物增強免疫力的效果要遠優(yōu)于單一成份；3）綠色安全、無毒副作用，并且免疫增強作用顯著，對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用。
具體實施例
下面通過實施例對本發(fā)明方案作進一步說明：
實施例1：
一種增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品，成份及其重量份為：鱘魚魚鰾多肽70~85份、十四酸異丙酯0.0002~0.0004份、靈芝多糖10~20份、維生素c0.5~3份、聚磷酸酯0.0001~0.0003份、大豆磷脂1~10份。成分搭配科學(xué)合理，對細胞免疫、體液免疫、巨噬細胞吞噬功能和nk細胞活性均有良好的促進作用，且組合物增強免疫力的效果要遠優(yōu)于單一成份；綠色安全、無毒副作用，并且免疫增強作用顯著，對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用。十四酸異丙酯和聚磷酸酯可增加人體細胞對鱘魚魚鰾多肽保健食品的消化吸收率，提高本發(fā)明產(chǎn)品的利用率，提高產(chǎn)品品質(zhì)。
鱘魚魚鰾的平均分子量為750.0~815.0da，脯氨酸的含量為11.29~13.16%，羥脯氨酸的含量為7.86~8.71%，谷氨酸的含量為7.65~8.73%，天冬氨酸的含量為4.87~5.59%，精氨酸的含量為4.15~5.36%。
一種增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品的制備方法，制備步驟為：
1）將鱘魚魚鰾勻漿后，按照1g：21~25ml的重量體積比加入ph為9.5~10.5的甘氨酸-naoh緩沖液，混合均勻后，調(diào)節(jié)ph至9.0~10，得到混合液；
2）將混合液溫度升至45~50℃攪拌預(yù)熱5~10分鐘，按原料質(zhì)量的2.0~2.5%加入堿性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解溫度為45~50℃，酶解時間6~8h。酶解結(jié)束后將所得的酶解產(chǎn)物升溫至90~95℃，并于此溫度保持10~15min，再冷卻至室溫，然后離心，取上清液；
3）將上清液進過截留分子量為1~2kda的超濾膜，取濾過液，并將其制成濃度5~10mg/ml的溶液，進行大孔樹脂脫鹽；脫鹽后的酶解液在≤40℃的溫度下進行真空濃縮，最后經(jīng)噴霧干燥得鱘魚魚鰾多肽；
4）取配方量維生素c溶解于90~95%乙醇水溶液中備用，取配方量鱘魚魚鰾多肽、十四酸異丙酯、靈芝多糖、大豆磷脂和聚磷酸酯于雙蒸水中混合均勻，加入維生素c的乙醇溶液，混合均勻，噴霧干燥，即得增強免疫能力的鱘魚魚鰾多肽保健食品。鱘魚魚鰾多肽保健食品為片劑、分散片、速溶片、散劑、顆粒劑或膠囊。
實施例2：
1）以史氏鱘（acipenserschrenckii）魚鰾作為原料，勻漿后與ph為10的甘氨酸-naoh緩沖液按照1g：25ml的重量體積比混合、勻漿，然后調(diào)節(jié)ph值至10，得混合液；
2）將混合液溫度升至50℃攪拌預(yù)熱10分鐘，按原料質(zhì)量的2.2%加入堿性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解溫度為50℃，酶解時間7h。將所得的酶解產(chǎn)物升溫至90℃，并于此溫度保持15min，再冷卻至室溫，然后離心取上清液；
3）上清液過截留分子量為1kda的超濾膜，收集小于1kda組分制成濃度5mg/ml的溶液，按照大孔樹脂柱體積的1:15將超濾酶解液加入到大孔樹脂柱，用雙蒸水洗脫2個體積后，然后用75%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，在35℃進行真空濃縮，最后濃縮液經(jīng)噴霧干燥得魚鰾多肽；
4）所得的魚鰾多肽經(jīng)sec-hplc試驗表明：酶解產(chǎn)物平均分子量為775.3da，脯氨酸(pro)的含量為10.83%，羥脯氨酸(hyp)的含量為8.35%，谷氨酸(glu)的含量為8.19%，天冬氨酸(asp)的含兩位5.38%，精氨酸(arg)的含量為4.69%；
5）取20g維生素c溶解于95%乙醇水溶液中備用，取800g鱘魚魚鰾多肽、0.006g十四酸異丙酯、130g靈芝多糖、50g大豆磷脂和0.004g聚磷酸酯于雙蒸水中混合均勻，加入維生素c的乙醇溶液，混合均勻，噴霧干燥，粉末上膠囊填充機進行充填，制成0.5g/粒的膠囊。經(jīng)包裝、成品檢驗，得到產(chǎn)品。產(chǎn)品成分搭配科學(xué)合理，對細胞免疫、體液免疫、巨噬細胞吞噬功能和nk細胞活性均有良好的促進作用，且組合物增強免疫力的效果要遠優(yōu)于單一成份；綠色安全、無毒副作用，并且免疫增強作用顯著，對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用。十四酸異丙酯和聚磷酸酯可增加人體細胞對鱘魚魚鰾多肽保健食品的消化吸收率，提高本發(fā)明產(chǎn)品的利用率，提高產(chǎn)品品質(zhì)。
急性毒理試驗：實驗動物：spf級icr小鼠和sd大鼠；實驗環(huán)境條件：spf屏障級；試驗方法：通過小鼠急性毒性試驗、ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗以及30天喂養(yǎng)試驗來進行毒理學(xué)評定。
試驗結(jié)果：
1、急毒經(jīng)口毒性試驗結(jié)果：實施例2所制鱘魚魚鰾多肽保健食品對雌性、雄性icr小鼠的最大耐受劑量（mtd）均大于20.0g/kg·bw，屬無毒級。
2、遺傳毒性試驗結(jié)果：ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結(jié)果，實施例所制魚鰾多肽保健食品為陰性。
3、30天喂養(yǎng)試驗結(jié)果：實施例所制鱘魚魚鰾多肽保健食品試驗期間，動物生長發(fā)育良好，各劑量組體重、增重、食物利用率、血常規(guī)指標、血生化指標、臟器濕重及臟器/體重比值與對照組比較，無明顯差異（p>0.05）。大體解剖和組織病理檢查未見與樣品有關(guān)的異常改變。
功能試驗：
試驗?zāi)康模簷z驗鱘魚魚鰾多肽保健食品是否具有增強免疫力的功能；
試驗材料：
樣品：實施例2制得的鱘魚魚鰾多肽保健食品膠囊，人體口服推薦量為0.5g/粒，每日2次，每次4粒。成人體重按60kg計算，折合劑量0.0667g/kg·bw。取膠囊內(nèi)容物進行試驗。
試驗動物：spf級雌性icr小鼠，體重為19-21g。
試驗環(huán)境條件：spf屏障系統(tǒng)。
劑量選擇及樣品處理：設(shè)低、中、高劑量分別為0.33g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.0g/kg·bw（分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍）。低、中、高劑量受試液配置時，分別取軟膠囊內(nèi)容物1.65g、3.35g、10.0g加生理鹽水定容至50ml，對照組予以等體積的生理鹽水，每天灌胃一次，灌胃體積為0.1ml/10g·bw，連續(xù)30天。
試驗方法：通過遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗、抗體生成細胞檢測、半數(shù)溶血值的測定、小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、nk細胞活性的測定實驗進行功能評定。
試驗結(jié)果：
經(jīng)口給與小鼠0.33g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.0g/kg·bw劑量的鱘魚魚鰾多肽保健食品膠囊內(nèi)容物30天。實驗結(jié)果（表1-7）表明，低、中、高劑量組均能提高小鼠的脾淋巴細胞增殖能力、血清溶血素水平、小鼠的抗體生成細胞數(shù)和小鼠的nk細胞活性。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》判定鱘魚魚鰾多肽保健食品具有增強免疫力的功能。
具體試驗結(jié)果數(shù)據(jù)如下表所示：
表1鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（dth）的影響
表2鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力實驗的影響
表3鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠抗體生成細胞數(shù)的影響
表4鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠血清溶血素的影響
表5鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)的影響
表6鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力的影響
表7鱘魚魚鰾多肽保健食品對小鼠nk細胞活性的影響
本發(fā)明的鱘魚魚鰾多肽保健食品工藝科學(xué)合理，操作簡單，具有較強的工業(yè)實施性。本發(fā)明的魚鰾多肽類保健食品可作為老年人和體弱多病者的日常保健產(chǎn)品，亦可作為術(shù)后病人的醫(yī)用食品。
本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進行贅述。
以上所述的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細說明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。