本發(fā)明屬于乳制品領(lǐng)域，具體涉及一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料；同時(shí)，本發(fā)明還涉及一種該發(fā)酵乳飲料的制備方法。

背景技術(shù)：

目前，免疫癥狀諸如過敏、氣喘、慢性鼻炎、異位性皮膚炎或是發(fā)炎癥狀在發(fā)展中國家或發(fā)達(dá)國家有越來越普及的趨勢。最常使用的治療方法是口服或涂抹類固醇，然而其缺點(diǎn)是容易產(chǎn)生副作用例如使病人變胖或增加感染率，甚至有致死的風(fēng)險(xiǎn)。許多研究團(tuán)隊(duì)正在開發(fā)更安全的方法，盡可能在減少副作用的前提下，舒緩或是預(yù)防過敏和免疫疾病。

腸道不僅具有消化吸收功能，還有屏障功能。完整的腸道屏障包括3個(gè)部分：機(jī)械屏障、生物屏障、免疫屏障。機(jī)械屏障是指完整的彼此緊密連接的腸黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)，生物屏障包括生化物質(zhì)屏障和微生物屏障，其中的微生物屏障主要由寄生在人體腸道大約500多種腸道微生物構(gòu)成，這些共生菌群通過與腸黏膜粘附、結(jié)合、嵌合等相互作用形成一個(gè)完整的菌膜，構(gòu)成腸道的生物屏障。

消化道是乳酸桿菌在體內(nèi)含量和種類最豐富的地方。乳酸桿菌的重要性主要是和其生理學(xué)活性密切相關(guān)，如分解糖類底物、產(chǎn)生各種功能性酶類以及其它一些益生菌所具有的性質(zhì)。優(yōu)秀的乳酸桿菌除了要具有安全性以及要最大量地抵達(dá)腸道等特性，還具有多種對健康有利的功效。目前研究表明，乳酸桿菌在許多方面為機(jī)體提供保護(hù)，比如促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收、改善胃腸道微環(huán)境、增強(qiáng)免疫功能、調(diào)節(jié)血壓、控制血清膽固醇水平、減少腸內(nèi)感染、消除消費(fèi)者體內(nèi)的有毒物質(zhì)以及緩解成年人肥胖等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料，該發(fā)酵乳飲料具有調(diào)節(jié)免疫和整腸的功能。

一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料，所述發(fā)酵乳飲料由以下重量份數(shù)的原料制成：

生牛乳60-100份，副干酪乳桿菌N1115 0.2-15份，海洋多糖2-10份，低聚果糖10-50份。

進(jìn)一步的，所述的副干酪乳桿菌N1115為5-10份。

進(jìn)一步的，所述的海洋多糖為殼聚糖、卡拉膠、海藻酸鈉、羊棲菜多糖中的至少一種。

進(jìn)一步的，所述海洋多糖為褐藻糖。

本發(fā)明所述的具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料有以下有益效果：

1、專利CN201110357058.8公開了副干酪乳桿菌N1115，它是分離自內(nèi)蒙古民族傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品，是一種具有耐酸耐膽鹽特性和免疫調(diào)節(jié)作用的益生菌，該菌菌株已于2011年3月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏編號：CGMCC No.4691。

采用副干酪乳桿菌N1115，其具有耐酸耐膽鹽特性和免疫調(diào)節(jié)作用，能夠分泌一種可溶性蛋白質(zhì)P40，P40可以激活腸上皮細(xì)胞的表皮生長因子EGF，增強(qiáng)腸上皮細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)分泌sIgA，sIgA是存在于鼻咽、口腔、呼吸道、腸等表面黏膜上的免疫蛋白，是一種重要的免疫因子，具有阻止病原菌粘附、溶解細(xì)菌、隔離外源致敏物質(zhì)等功能，有助于促進(jìn)腸道發(fā)展和損傷修復(fù)，具有免疫調(diào)節(jié)功能。此外，副干酪乳桿菌N1115，能夠利用牛乳中的苯丙氨酸合成、分泌具有抑菌活性的苯乳酸(PLA)，PLA可以通過破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)抑制多種食源性致病菌，防止致病菌在腸道中定植，具有整腸作用。

2、當(dāng)采用低聚果糖作為副干酪乳桿菌N1115的復(fù)配成分可以明顯促進(jìn)副干酪乳桿菌N1115的增殖效果。

3、本發(fā)明具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料能明顯提高血清溶血素半數(shù)溶血值(HC50)、NK細(xì)胞活性和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞率(P＜0.05)，具有增強(qiáng)免疫力的功能。

4、進(jìn)一步的，當(dāng)海洋多糖采用褐藻糖時(shí)，褐藻糖具有免疫調(diào)節(jié)活性，能夠與副干酪乳桿菌N1115、低聚果糖協(xié)同作用，增強(qiáng)腸上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的免疫活性。

上述具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料的制備方法，包括以下步驟：

a、將生牛乳、海洋多糖和低聚果糖混合均勻，經(jīng)過均質(zhì)、殺菌工藝后添加副干酪乳桿菌N1115，發(fā)酵至凝乳；

b、搖勻破乳，在4℃溫度下放置24h，殺菌，冷藏保存。

進(jìn)一步的，步驟a中的均質(zhì)、殺菌工藝參數(shù)如下：

均質(zhì)：均質(zhì)溫度為60-65℃，均質(zhì)壓力為17.5-20MPa；

殺菌：殺菌溫度為70℃，殺菌時(shí)間30min。

進(jìn)一步的，步驟a中的發(fā)酵工藝參數(shù)如下：

在42℃培養(yǎng)箱中發(fā)酵6h。

進(jìn)一步的，步驟b中的殺菌工藝參數(shù)如下：

殺菌：95℃下滅菌300s。

進(jìn)一步的，步驟b中的冷藏溫度為2-6℃。

步驟a中的殺菌工藝70℃殺菌30min既可以殺死原料中對健康有害的病菌又能保持乳品中營養(yǎng)物質(zhì)風(fēng)味不變，保證各配料成分結(jié)構(gòu)不變。步驟b的殺菌工藝95℃下滅菌300s可以使乳清蛋白充分變性，構(gòu)成酸奶的最基本的骨架單元，提供酸奶合適的質(zhì)構(gòu)和粘稠度。

附圖說明

圖1為滅活副干酪乳桿菌N1115免疫性能測試。

圖2為滅活型發(fā)酵乳飲料整腸功能測試。

具體實(shí)施方式

基于本發(fā)明的設(shè)計(jì)思想，下面，結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明的具有免疫調(diào)節(jié)功能的滅活型發(fā)酵乳飲料做進(jìn)一步的詳細(xì)描述：

實(shí)施例1-9

表1原料含量表

表2原料含量表

實(shí)施例6-9中用海洋多糖代替實(shí)施例4中的褐藻糖且含量不變，其他原料及含量與實(shí)施例4相同。

對比例1-6

表3原料含量表

對比例1-4用其他益生菌代替實(shí)施例4中的副干酪乳桿菌N1115，其他原料及含量與實(shí)施例4相同。

表4原料含量表

對比例5-6改變實(shí)施例4中的低聚果糖含量，其他原料及含量與實(shí)施例4相同。

上述滅活型發(fā)酵乳飲料的制備方法包括以下步驟：

a、將生牛乳、海洋多糖和低聚果糖混合均勻，經(jīng)過60-65℃均質(zhì)、均質(zhì)壓力為17.5-20MPa，70℃殺菌30min，后添加副干酪乳桿菌N1115，在42℃培養(yǎng)箱中發(fā)酵6h至凝乳；

b、搖勻破乳，在4℃溫度下放置24h，95℃下滅菌300s，2℃-6℃冷藏保存。

副干酪乳桿菌N1115免疫性能測試

將副干酪乳桿菌N1115活化、傳代培養(yǎng)，離心分離，收集培養(yǎng)液上清，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)液中含有蛋白P40，表明副干酪乳桿菌N1115在生長增殖過程中能夠向外分泌可溶性蛋白P40。P40是新發(fā)現(xiàn)的一種來源于益生菌的可溶性蛋白，其可以明顯的激活腸上皮細(xì)胞的表皮生長因子，增強(qiáng)腸上皮細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)分泌型免疫球蛋白A(sIgA)，因此，本發(fā)明制備的發(fā)酵乳可通過副干酪乳桿菌N1115發(fā)酵產(chǎn)生的功能蛋白P40，增強(qiáng)機(jī)體腸道系統(tǒng)的免疫能力。

將副干酪乳桿菌N1115活化、傳代培養(yǎng)，離心收集菌體，將菌體熱滅活處理后分成2組，分別以10⁶CFU/mL轉(zhuǎn)接至腸上皮細(xì)胞Caco-2、巨噬細(xì)胞J774A.1共同孵育3h。分別提取Caco-2和J774A.1的總RNA進(jìn)行熒光定量PCR檢測。結(jié)果如圖1所示，熱滅活副干酪乳桿菌N1115菌體可促進(jìn)Caco-2表達(dá)IL-8和TNF-αmRNA；促進(jìn)J774A.1表達(dá)IL-6和IL-10mRNA并抑制其表達(dá)IL-12αmRNA，證明副干酪乳桿菌N1115菌體自身成分具有調(diào)節(jié)免疫力的功能。

滅活型發(fā)酵乳飲料免疫性能測試

將實(shí)施例1-9和對比例1-6制備的乳酸菌飲料經(jīng)口灌胃實(shí)驗(yàn)小鼠30d，灌胃劑量均為8g/kgBW，進(jìn)行免疫力各項(xiàng)指標(biāo)檢測，每項(xiàng)指標(biāo)均檢測8只，結(jié)果如下表4所示。

表4滅活型發(fā)酵乳飲料對小鼠血清溶血素半數(shù)溶血值(HC50)、NK細(xì)胞活性、巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞率的影響

由表4可知，副干酪乳桿菌N1115制備的發(fā)酵乳飲料可以顯著提高血清溶血素半數(shù)溶血值(HC50)、NK細(xì)胞活性和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞率(P＜0.05)，具有增強(qiáng)免疫力的功能，副干酪乳桿菌N1115與低聚果糖、褐藻糖協(xié)同配合可以進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

副干酪乳桿菌N1115整腸功能測試

將N1115活化、傳代培養(yǎng)于添加有0.2％苯丙氨酸的MRS液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)48h后離心收集培養(yǎng)液上清。上清液用0.2μm的膜過濾后，采用高效液相色譜法檢測其中的PLA含量。檢測結(jié)果顯示，N1115能夠以生牛乳中含有的苯丙氨酸為關(guān)鍵底物合成PLA，產(chǎn)量約為0.1232mg/mL。

滅活型發(fā)酵乳飲料整腸功能測試

招募受試人員20人，分為兩組，每組10人，實(shí)驗(yàn)時(shí)間共計(jì)5周(其中，3周飲用發(fā)酵乳，前后各1周僅為觀察期)。受試人員一組飲用實(shí)施例4滅活型副干酪乳桿菌N1115發(fā)酵乳，一組飲用對比例1發(fā)酵乳對照，其他飲食均相同，兩組人員均每天根據(jù)實(shí)際情況記錄其排便次數(shù)、糞便顏色和糞便硬度。

隨著滅活型N1115發(fā)酵乳的飲用，受試人員的排便次數(shù)較飲用前有所增加，且增加幅度高于對照組；排便顏色較飲用前更趨于健康的黃色/黃褐色；排便硬度也較飲用前有所降低，但效果不明顯。由圖2可以看出飲用滅活型N1115發(fā)酵乳可以改善受試人員的排便次數(shù)和排便顏色，具有一定整腸作用。