本發(fā)明屬于禽畜飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種結(jié)球甘藍(lán)提取物的制備方法及其應(yīng)用和促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料。

背景技術(shù)：

畜禽要保證能夠要好的生產(chǎn)能力，保持健康是必須的大前提，而畜禽健康的首要重點(diǎn)是胃腸道健康，畜禽所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的唯一獲得途徑是胃腸道，同時(shí)由于胃腸道與外界直接相通，也是抵御外界病源感染的最前線同時(shí)也是主戰(zhàn)場(chǎng)之一，由此不難看出，胃腸道的健康及其功能正常對(duì)畜禽生產(chǎn)意義重大。

近年來(lái)，很多養(yǎng)殖企業(yè)為了促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和保持畜禽健康，存在著濫用和過度使用抗生素和化學(xué)藥物的現(xiàn)象，結(jié)果造成畜產(chǎn)品藥物殘留過高，給消費(fèi)者的身體健康造成了不良影響。隨著人們對(duì)食品安全的重視，減少或替代抗生素及化學(xué)制劑使用將是未來(lái)畜禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的必然趨勢(shì)。而植物提取物作為飼料添加劑以應(yīng)用效果好、低殘留、不易產(chǎn)生抗藥性以及無(wú)污染而成為一種理想的飼料添加劑，也是當(dāng)前飼料添加劑研究的熱點(diǎn)之一。但目前尚缺乏一種使用廉價(jià)且在促進(jìn)畜禽腸道健康方面能達(dá)到滿意效果的植物類飼料添加劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種結(jié)球甘藍(lán)提取物的制備方法及其應(yīng)用和促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料，將結(jié)球甘藍(lán)的提取物作為添加劑應(yīng)用在飼料中，能夠促進(jìn)畜禽的腸道發(fā)育，保護(hù)腸道健康，有利于提高畜禽的出欄重和降低畜禽的料重比。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

設(shè)計(jì)一種結(jié)球甘藍(lán)提取物的制備方法，取新鮮的結(jié)球甘藍(lán)葉片加去離子水粉碎打漿，并加去離子水調(diào)整漿料的料液體積比至1:12～18，再于45～55℃的條件下超聲波浸提30～60min，過濾后所得濾液即為結(jié)球甘藍(lán)提取物。

具體的，取新鮮的結(jié)球甘藍(lán)葉片加去離子水粉碎打漿，并加去離子水調(diào)整漿料的料液體積比至1:15，再于50℃的條件下70w超聲波浸提50min，以250μm篩網(wǎng)過濾2～6次，最終所得濾液即為結(jié)球甘藍(lán)提取物。

上述方法所得結(jié)球甘藍(lán)提取物在畜禽飼料作為添加劑的應(yīng)用。

經(jīng)長(zhǎng)期的試驗(yàn)研究，本發(fā)明篩選所選結(jié)球甘藍(lán)是十字花科、蕓薹屬的植物，為甘藍(lán)的變種，又名卷心菜、洋白菜、包菜、圓白菜等。甘藍(lán)具有耐寒、抗病、適應(yīng)性強(qiáng)、易貯耐運(yùn)、產(chǎn)量高、品質(zhì)好等特點(diǎn)，在中國(guó)各地普遍栽培。結(jié)球甘藍(lán)的營(yíng)養(yǎng)成分豐富，每百克可食部分含蛋白質(zhì)1.2～2.4克，脂肪約為0.3克，碳水化合物約為3.5克。而且經(jīng)過發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)球甘藍(lán)還含有豐富的維生素u，對(duì)提高畜禽生產(chǎn)性能和促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育具有良好的作用。

具體的，含有所述結(jié)球甘藍(lán)提取物的促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料，由下述重量份原料制成：

玉米50～57份、豆粕19～24份、棉籽粕5～7份、玉米蛋白粉2～4份、植物油2～4份、次粉7～9份、食鹽0.3～0.35份、麥飯石0.8～1.2份、石粉1.2～1.5份、磷酸氫鈣1.5～1.6份、預(yù)混料0.8～1.2份，以及按照50～200ml/kg向上述原料混合物中添加的結(jié)球甘藍(lán)提取物。

其中，賴氨酸14～16％，蛋氨酸3～4％，復(fù)合維生素3％，五水硫酸銅0.7％，一水硫酸亞鐵4.8％,一水硫酸鋅3.1％，一水硫酸錳4.2％，純度為1％的亞硒酸鈉1.8％，純度為1％的碘化鉀1.1％，糠殼粉25％，余量為麥飯石粉。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1)本發(fā)明飼料所采用的原料來(lái)源廣泛、成本低廉，而且不含有任何抗生素，通過結(jié)球甘藍(lán)的提取物作為添加劑，使得養(yǎng)殖出欄的畜禽肉質(zhì)健康，滿足消費(fèi)的安全飲食需求，有利于在畜禽養(yǎng)殖中廣泛使用。

2)本發(fā)明制備出結(jié)球甘藍(lán)提取物最大限度的保留了維生素u及其它有益物質(zhì)，維生素u是重要的生物活性物質(zhì)，研究表明維生素u能刺激畜禽腸道內(nèi)免疫功能，維生素u對(duì)部分腸道有害菌有抑制作用，能促進(jìn)動(dòng)物腸道健康發(fā)育，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高畜禽日增重，并降低畜禽的料肉比，提高禽類的產(chǎn)蛋能力。

3)本發(fā)明飼料中還含有多種氨基酸、維生素及一些未知促生物質(zhì)，能減少氨及其它腐敗物質(zhì)的產(chǎn)生，阻礙有害物質(zhì)及廢物的吸收，減少對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境的危害。

附圖說明

圖1為具體實(shí)施方式中肉雞試驗(yàn)的對(duì)照組49日齡肉雞十二指腸絨毛形態(tài)電鏡照片；

圖2為具體實(shí)施方式中肉雞試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)ⅱ組49日齡肉雞十二指腸絨毛形態(tài)電鏡照片；

圖3為具體實(shí)施方式中小白鼠試驗(yàn)的對(duì)照組灌胃14d小鼠十二指腸絨毛形態(tài)電鏡照片；

圖4為具體實(shí)施方式中小白鼠試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)組灌胃14d小鼠十二指腸絨毛形態(tài)電鏡照片。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明，下述實(shí)施例中所涉及的試驗(yàn)方法或分析方法，如無(wú)特別說明，均為常規(guī)方法，所用試劑如無(wú)特別說明，均為市售。

實(shí)施例1：一種促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料，玉米56份、豆粕22份、棉籽粕5份、玉米蛋白粉3份、植物油3份、次粉7份、食鹽0.3份、麥飯石0.8份、石粉1.3份、磷酸氫鈣1.5份、預(yù)混料1份，以及向上述原料混合物添加結(jié)球甘藍(lán)提取物100ml/kg。所述預(yù)混料的組分質(zhì)量配比如下：賴氨酸14～16％，蛋氨酸3～4％，復(fù)合維生素3％，五水硫酸銅0.7％，一水硫酸亞鐵4.8％,一水硫酸鋅3.1％，一水硫酸錳4.2％，純度為1％的亞硒酸鈉1.8％，純度為1％的碘化鉀1.1％，糠殼粉25％，余量為麥飯石粉。

實(shí)施例2：一種促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料，玉米56份、豆粕22份、棉籽粕5份、玉米蛋白粉3份、植物油3份、次粉7份、食鹽0.3份、麥飯石0.8份、石粉1.3份、磷酸氫鈣1.5份、預(yù)混料1份，以及向上述原料混合物添加結(jié)球甘藍(lán)提取物200ml/kg。所述預(yù)混料的組分質(zhì)量配比如下：賴氨酸14～16％，蛋氨酸3～4％，復(fù)合維生素3％，五水硫酸銅0.7％，一水硫酸亞鐵4.8％,一水硫酸鋅3.1％，一水硫酸錳4.2％，純度為1％的亞硒酸鈉1.8％，純度為1％的碘化鉀1.1％，糠殼粉25％，余量為麥飯石粉。

實(shí)施例3：一種促進(jìn)畜禽腸道健康發(fā)育的飼料，玉米55份、豆粕22份、棉籽粕6份、玉米蛋白粉3份、植物油3份、次粉7份、食鹽0.32份、麥飯石0.8份、石粉1.3份、磷酸氫鈣1.55份、預(yù)混料1份，以及向上述原料混合物添加結(jié)球甘藍(lán)提取物50ml/kg。所述預(yù)混料的組分質(zhì)量配比如下：賴氨酸14～16％，蛋氨酸3～4％，復(fù)合維生素3％，五水硫酸銅0.7％，一水硫酸亞鐵4.8％,一水硫酸鋅3.1％，一水硫酸錳4.2％，純度為1％的亞硒酸鈉1.8％，純度為1％的碘化鉀1.1％，糠殼粉25％，余量為麥飯石粉。

實(shí)施例1-3所述的結(jié)球甘藍(lán)提取物的制備方法如下：取新鮮的結(jié)球甘藍(lán)葉片加去離子水粉碎打漿，并加去離子水調(diào)整漿料的料液體積比至1:15，再于50℃的條件下70w超聲波浸提50min，以250μm篩網(wǎng)過濾四次，最終所得濾液即為結(jié)球甘藍(lán)提取物。

效果對(duì)比例：

一、肉雞實(shí)驗(yàn)

1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理：

試驗(yàn)釆用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選用150只健康、活潑、體重相近的3日齡健康肉雞隨機(jī)分為3個(gè)處理組，分別為對(duì)照組和試驗(yàn)1、2組，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只肉雞。設(shè)預(yù)飼期7天，預(yù)飼期內(nèi)對(duì)肉雞進(jìn)行防疫、喂料和飲水，而后進(jìn)入正式實(shí)驗(yàn)期。對(duì)照組飼喂常規(guī)基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)1組飼喂實(shí)施例3所得的飼料，試驗(yàn)2組飼喂實(shí)施例5所得的飼料。

1.2日常管理

實(shí)驗(yàn)采用舍內(nèi)籠養(yǎng)方式飼養(yǎng)，自然光照，所有肉雞飼喂配合飼料，自由飲水和采食，消毒和免疫按常規(guī)方法進(jìn)行。每日晚上20:00稱量并記錄每組采食量。兩天清糞一次。實(shí)驗(yàn)期間每日觀察肉雞的精神狀態(tài)、行為，記錄每組日耗料量，試驗(yàn)期為49天。

二、小白鼠實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)所用健康雌性昆明小白鼠和小鼠飼料均購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(來(lái)源證號(hào)no.4100310000)。

2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

選取健康的昆明小雌鼠24只，隨機(jī)分成2組，每組12只。其中1組為對(duì)照組，2組為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組每天每只灌服生理鹽水0.4ml，實(shí)驗(yàn)組小白鼠每天每只灌服結(jié)球甘藍(lán)提取物0.6ml。各組灌胃30天后，每組隨機(jī)挑選8只禁食16h屠宰，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。

2.2日常管理

實(shí)驗(yàn)小白鼠飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致，以籠為單位飼養(yǎng)，飼喂普通小鼠日糧；小白鼠每天在自由采食和自由飲水6小時(shí)后，于上午10:00點(diǎn)禁水、禁食，下午15:00灌胃1次；每日以籠為單位記錄采食量，每周記錄一次小鼠體重；觀察昆明小白鼠健康狀況和清掃衛(wèi)生，籠內(nèi)墊料每周更換2～3次。

三、測(cè)定指標(biāo)及方法

3.1肉雞生長(zhǎng)性能

根據(jù)稱重和采食量記錄，統(tǒng)計(jì)全期耗料量，計(jì)算全期平均日采食量、平均日增重和料肉比。

表1肉雞生產(chǎn)性能實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

3.2肉雞腸道發(fā)育指標(biāo)測(cè)定

在肉雞49日齡時(shí)，每組隨機(jī)選10只雞屠宰，實(shí)驗(yàn)中剪取十二指腸(胃和膽管在小腸的開口處之間，距幽門175cm處)、空腸(空腸中段)和回腸(回盲瓣膜和結(jié)腸間的部分)等部位腸管各3cm,用生理鹽水沖洗除去內(nèi)容物，放入10％福爾馬林中固定保存，用于腸壁組織結(jié)構(gòu)指標(biāo)的測(cè)定。

取保存好的腸斷，用乙醇逐級(jí)脫水，二甲苯透明，包埋機(jī)包埋，切片機(jī)進(jìn)行切片((4um)，用蘇木精和伊紅染色，樹膠封片，顯微照像設(shè)備進(jìn)行圖像采集(見附圖1-2)，載玻片在40x和100x放大倍數(shù)下用光學(xué)顯微鏡檢查然后用moticimages2000軟件進(jìn)行組織切片絨毛高度和隱窩深度的測(cè)量。絨腺比例＝絨毛高度(um)/隱窩深度(um)。指標(biāo)測(cè)定在河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院生理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

表2結(jié)球甘藍(lán)提取物對(duì)肉雞49d小腸絨毛形態(tài)的影響(um)

3.3小白鼠腸道發(fā)育指標(biāo)測(cè)定

小白鼠30日齡時(shí)，每組隨機(jī)選8只，剪取其十二指腸(胃和膽管在小腸的開口處之間)腸管各1cm,用生理鹽水沖洗除去內(nèi)容物，放入10％福爾馬林中固定保存，用于腸壁組織結(jié)構(gòu)指標(biāo)的測(cè)定。

取保存好的腸斷，用乙醇逐級(jí)脫水，二甲苯透明，包埋機(jī)包埋，切片機(jī)進(jìn)行切片((4um)，用蘇木精和伊紅染色，樹膠封片，顯微照像設(shè)備進(jìn)行圖像采集(見附圖3-4)，絨腺比例＝絨毛高度(um)/隱窩深度(um)。指標(biāo)測(cè)定在河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院生理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

表3結(jié)球甘藍(lán)提取物對(duì)小鼠21d小腸絨毛形態(tài)的影響(um)

3.4數(shù)據(jù)處理

采用spss統(tǒng)計(jì)軟件18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較(lsd法)。

四、結(jié)果分析

腸道組織形態(tài)的變化與畜禽的生產(chǎn)性能有很大關(guān)系，腸道黏膜的結(jié)構(gòu)可以展現(xiàn)出腸道功能的相關(guān)信息，例如絨毛高度、隱窩深度和腸道表皮面積。增加絨毛長(zhǎng)度可以增加消化吸收面積、加強(qiáng)消化酶的作用和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸，進(jìn)而增強(qiáng)腸道的消化吸收功能。本發(fā)明研究表明，在肉雞配合飼料中添加結(jié)球甘藍(lán)提取物，可明顯促進(jìn)十二指腸絨毛和小腸平滑肌發(fā)育，其中，當(dāng)結(jié)球甘藍(lán)提取物添加量為200ml/kg時(shí)，49天十二指腸絨毛高度和小腸平滑肌厚度與對(duì)照組差異顯著(p<0.05)。結(jié)球甘藍(lán)提取物能提高肉雞生產(chǎn)性能，降低料肉比，當(dāng)結(jié)球甘藍(lán)提取物添加量為200ml/kg時(shí)，49天出欄重與對(duì)照組差異顯著(p<0.05)；昆明小白鼠實(shí)驗(yàn)表明，在小白鼠日糧中添加結(jié)球甘藍(lán)提取物，可明顯提高十二指腸絨毛長(zhǎng)度和絨腺比，能夠增加結(jié)腸平滑肌厚度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，結(jié)球甘藍(lán)提取物能夠促進(jìn)畜禽腸道發(fā)育和維護(hù)腸道健康。