本發(fā)明涉及到一種生物活性飼料，具體涉及到一種無抗生素高活性預(yù)混料。
背景技術(shù)：
抗生素添加劑的長(zhǎng)期使用和濫用導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，雖然耐藥因子的傳遞頻率只有6～10，但由于細(xì)菌數(shù)量大、繁殖快，耐藥性的擴(kuò)散蔓延仍較普遍，而且一種細(xì)菌可產(chǎn)生多種耐藥性。盡管目前尚無確切證據(jù)證明人類耐藥性(如“超級(jí)細(xì)菌”、“耐藥寶寶”等)的產(chǎn)生與家畜使用抗生素有直接的關(guān)系，但長(zhǎng)期在動(dòng)物飼料中使用亞治療劑量的抗生素添加劑已受到社會(huì)的廣泛擔(dān)優(yōu)。
抗生素在畜產(chǎn)品中的殘留是飼料中抗生素應(yīng)用中存在的另一問題。抗生素被動(dòng)物吸收后，可分布全身，但肝、腎、脾等組織分布較多，也可通過泌乳和產(chǎn)蛋過程而殘留在乳、蛋中，從而廣泛地在畜產(chǎn)品中殘留?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，動(dòng)物食品中抗生素殘留不僅影響畜產(chǎn)品的質(zhì)量和風(fēng)味，還能使人體DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生突變，造成致殘、致畸、致癌等嚴(yán)重后果，對(duì)人類健康構(gòu)成極大危害。
隨著人們對(duì)抗生素殘留量所造成的危害越來越有深刻的認(rèn)識(shí)，開發(fā)一種無污染、無殘留、無副作用的無抗生素飼料預(yù)混料以達(dá)到飼料中不含有抗生素的應(yīng)用成為當(dāng)代飼料行業(yè)研究的熱點(diǎn)問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供一種飼料預(yù)混料及其制備方法。
一種飼料預(yù)混料的制備方法，包括如下步驟：
形成功能性生物活性物質(zhì)步驟，將重量比為50∶(30-70)的玉米蛋白粉和棉籽蛋白粉混合，將重量比為(0.3-0.6)∶(0.2-0.5)∶(0.2-0.5)∶400的釀酒酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和水按混合組成的菌液；將重量比為(6-10)∶2的所述蛋白粉和所述菌液混合，30±1℃下需氧發(fā)酵46-49小時(shí)后，再厭氧發(fā)酵68-78小時(shí)，烘干并冷卻后密封保存?zhèn)溆茫?/p>
形成飼料預(yù)混料步驟，將1500～8000重量份的所述功能性生物活性物質(zhì)、2～12重量份的磷酸氫鈣、800～2500重量份的石粉、16～27重量份的復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素、6～12重量份的復(fù)合維生素、3～10重量份的氨基酸和2～8重量份的桉樹葉粉混合。
根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施方式，所述形成飼料預(yù)混料步驟，是將2725～4247重量份的所述功能性生物活性物質(zhì)、3～8重量份的所述磷酸氫鈣、1134～1767重量份的所述石粉、18～23重量份的所述復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素、8～10重量份的所述復(fù)合維生素、3～7重量份的所述氨基酸和2～5重量份的所述桉樹葉粉混合。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述復(fù)合多礦包括硫酸銅、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、碘化鉀、亞硒酸鈉、氯化鈷中的至少一種。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述有機(jī)微量元素包括賴氨酸銅絡(luò)合物、甘氨酸鐵螯合物、小肽鐵、蛋白鐵和氨基酸微量元素螯合物中的至少一種。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述氨基酸微量元素螯合物包括氨基酸鐵、氨基酸銅、氨基酸錳和氨基酸鋅中的至少一種。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述復(fù)合維生素包含維生素A和維生素E。
根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，所述氨基酸包括賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸中的至少一種。
本發(fā)明還提供一種根據(jù)上述制備方法制備的飼料預(yù)混料。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，通過微生物發(fā)酵將大分子蛋白原料分解為多肽、小肽，提高飼料利用率，改善飼料適口性、促進(jìn)仔豬采食，提高免疫能力以及改善仔豬毛膚色。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。
本發(fā)明的飼料預(yù)混料包括功能性生物活性物質(zhì)、磷酸氫鈣、石粉、復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素、復(fù)合維生素、氨基酸和桉樹葉粉。
其中，功能性生物活性物質(zhì)是由蛋白粉發(fā)酵而成。蛋白粉是50∶(30-70)的玉米蛋白粉和棉籽蛋白粉混合蛋白粉。玉米蛋白粉可以取自玉米，棉籽蛋白粉取自棉粕、菜粕和/或花生粕。發(fā)酵菌種包括飼料活性釀酒酵母菌、枯草芽孢桿菌和乳酸桿菌，將上述菌種和水按重量份數(shù)比配成菌液，菌液包括重量比為(0.3-0.6)∶(0.2-0.5)∶(0.2-0.5)∶400的釀酒酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和水混合而成。將上述混合蛋白粉和菌液按重量比(6-10)∶2的比例混合后，放入底部和周圍加有加熱管道的特制發(fā)酵罐中，頂部蓋上吸水棉布，保持加熱管道溫度在30±1℃左右，需氧發(fā)酵46-49小時(shí)左右后，關(guān)閉加熱管道，蓋上發(fā)酵罐上蓋并密閉在常溫下進(jìn)入?yún)捬醢l(fā)酵68-78小時(shí)左右，發(fā)酵完成。將發(fā)酵好的物料在物料溫度不高于80℃下，采用管束或盤式干燥機(jī)烘干并冷卻，再用3.0mm篩粉碎制成功能性生物活性物質(zhì)，用塑料袋密封保存?zhèn)溆?。功能性生物活性物質(zhì)能有效的補(bǔ)充和維持畜禽消化道中的菌群平衡，提高動(dòng)物免疫力、抗病力，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，增加畜禽生產(chǎn)性能，提高飼料報(bào)酬5％～8％，并有效消除糞便臭味，改善畜禽生長(zhǎng)環(huán)境，替代等量?jī)?yōu)質(zhì)豆粕。
將上述功能性生物活性物質(zhì)、磷酸氫鈣、石粉、復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素、復(fù)合維生素、氨基酸和桉樹葉粉混合形成飼料預(yù)混料。飼料預(yù)混料按重量份包含述功能性生物活性物質(zhì)1500～8000份、磷酸氫鈣2～12份、石粉800～2500份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素16～27份、復(fù)合維生素6～12份、3～10氨基酸份和桉樹葉粉2～8份。
優(yōu)選地，飼料預(yù)混料包括功能性生物活性物質(zhì)2725～4247份、磷酸氫鈣3～8份、石粉1134～1767份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素18～23份、復(fù)合維生素8～10份、氨基酸3～7份、桉樹葉粉2～5份。
磷酸氫鈣可同時(shí)提供鈣和磷，可溶性較其他同類產(chǎn)品好，動(dòng)物的吸收利用率高。
石粉在飼料預(yù)混料中的主要作用是作為載體，礦物微量元素容重大，因此應(yīng)選擇容重較大的石粉作為載體。
復(fù)合多礦和有機(jī)微量元素兩者復(fù)配，使其在腸道內(nèi)更易消化吸收，從而提高動(dòng)物生產(chǎn)性能；防治了微量元素缺乏癥，提高免疫力，并且有益于飼料中營(yíng)養(yǎng)素的利用，還兼有氨基酸強(qiáng)化劑作用。復(fù)合多礦可以包括硫酸銅、硫酸鐵、硫酸錳、硫酸鋅、碘化鉀、亞硒酸鈉、氯化鈷等。有機(jī)微量元素主要包括氨基酸微量元素螯合物、賴氨酸銅絡(luò)合物、甘氨酸鐵螯合物、小肽鐵和蛋白鐵等。氨基酸微量元素螯合物可以是氨基酸鐵、氨基酸銅、氨基酸錳、氨基酸鋅等。
復(fù)合維生素主要包含維生素A和維生素E。維生素A可促進(jìn)蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪的代謝，具有明顯的促生長(zhǎng)作用。維生素E具有吸氧的能力，有重要的抗氧化作用，可防止脂肪和維生素A等被氧化分解。
氨基酸指的是組成蛋白質(zhì)的基本單位，構(gòu)成動(dòng)物體蛋白質(zhì)的氨基酸有20種，能改善飼糧氨基酸平衡，促進(jìn)消化吸收，提高免疫力還具有誘食作用。氨基酸可以是賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸，其中賴氨酸可改善動(dòng)物胴體品質(zhì)，提高瘦肉率；蛋氨酸可提高動(dòng)物的采食量；蘇氨酸可促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)。
桉樹葉粉含有豐富的植物蛋白和豬生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，添加可顯著提高豬的生長(zhǎng)性能。
實(shí)施例1
將重量配比為50∶30的玉米蛋白粉和棉籽蛋白粉混合。
將重量配比為0.5∶0.4∶0.4∶400的釀酒酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和水按混合，組成菌液混合物。
將混合蛋白粉和配制好的菌液按8∶2重量分?jǐn)?shù)比例混合后，放入底部和周圍加有加熱管道的特制發(fā)酵罐中，頂部蓋上吸水棉布，保持加熱管道溫度在30℃左右，需氧發(fā)酵48小時(shí)左右后，關(guān)閉加熱管道，蓋上發(fā)酵罐上蓋并密閉在常溫下進(jìn)入?yún)捬醢l(fā)酵72小時(shí)左右，發(fā)酵完成。
將發(fā)酵好的物料在物料溫度不高于80℃下，采用管束或盤式干燥機(jī)烘干并冷卻，再用3.0mm篩粉碎制成功能性生物活性物質(zhì)，用塑料袋密封保存?zhèn)溆谩?/p>
將制得的功能性生物活性物質(zhì)2725重量份、石粉1134重量份、磷酸氫鈣3重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量18重量份、復(fù)合維生素8重量份、氨基酸重量3份、桉樹葉粉2重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例2
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料4247重量份、石粉1767重量份、磷酸氫鈣8重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量23重量份、復(fù)合維生素重量10重量份、氨基酸7重量份、桉樹葉粉5重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例3
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料3526重量份、石粉1467重量份、磷酸氫鈣6重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量20重量份、復(fù)合維生素9重量份、氨基酸6重量份、桉樹葉粉3重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例4
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料3285重量份、石粉1367重量份、磷酸氫鈣3重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量18重量份、復(fù)合維生素9重量份、氨基酸6重量份、桉樹葉粉5重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例5
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料3845重量份、石粉1600重量份、磷酸氫鈣8重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量18重量份、復(fù)合維生素10重量份、氨基酸7重量份、桉樹葉粉5重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例6
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料1500重量份、石粉2800重量份、磷酸氫鈣2重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量16重量份、復(fù)合維生素6重量份、氨基酸5重量份、桉樹葉粉2重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例7
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料2000重量份、石粉1000重量份、磷酸氫鈣4重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量17重量份、復(fù)合維生素7重量份、氨基酸4重量份、桉樹葉粉3重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例8
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料8000重量份、石粉2000重量份、磷酸氫鈣12重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量25重量份、復(fù)合維生素12重量份、氨基酸9重量份、桉樹葉粉8重量份混合形成飼料預(yù)混料。
實(shí)施例9
將實(shí)施例1相同的方法制得的功能性生物活性物質(zhì)飼料6000重量份、石粉2500重量份、磷酸氫鈣10重量份、復(fù)合多礦和有機(jī)微量27重量份、復(fù)合維生素11重量份、氨基酸10重量份、桉樹葉粉6重量份混合形成飼料預(yù)混料。
動(dòng)物試驗(yàn)
試驗(yàn)日糧
對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧由深圳市金新農(nóng)飼料股份有限公司提供，生產(chǎn)日期為2016年2月19日。試驗(yàn)料的日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成本見表1所示。
試驗(yàn)組：實(shí)施例1-10的飼料預(yù)混料+基礎(chǔ)日糧，預(yù)混料占預(yù)混料和基礎(chǔ)日糧的總重量百分比3％。
表1基礎(chǔ)日糧和營(yíng)養(yǎng)成分
試驗(yàn)分組
試驗(yàn)動(dòng)物與時(shí)間地點(diǎn)
試驗(yàn)選擇同批轉(zhuǎn)群，體重在12.5kg左右的健康美系(長(zhǎng)×大×杜)三元雜交斷奶仔豬134頭，按體重分為2個(gè)處理，分別為對(duì)照組和試驗(yàn)組，每處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)有22～23頭仔豬，進(jìn)行為期15天的飼養(yǎng)試驗(yàn)。本試驗(yàn)于2016年3月4日到2016年3月19日在惠州桑梓湖養(yǎng)殖有限公司豬場(chǎng)進(jìn)行。
飼養(yǎng)管理
試驗(yàn)豬的管理以惠州桑梓湖養(yǎng)殖有限公司豬場(chǎng)實(shí)際飼養(yǎng)管理為基礎(chǔ)，專人管理，各組在相同的飼養(yǎng)管理和環(huán)境條件下進(jìn)行，保持飼料新鮮，保持豬舍環(huán)境舒適，每天觀察試驗(yàn)豬采食、健康及活動(dòng)情況，發(fā)現(xiàn)病豬后為該豬作標(biāo)記號(hào)，跟蹤記錄發(fā)病日期、持續(xù)時(shí)間、治療方案、康復(fù)情況，嚴(yán)重發(fā)病要剔除試驗(yàn)欄，并稱取病豬的體重，做好日期和體重的記錄。
試驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定
生產(chǎn)性能：日采食量、日增重、料肉比。
腹瀉指數(shù)：發(fā)現(xiàn)腹瀉病豬后為該豬作標(biāo)記號(hào)，跟蹤記錄發(fā)病日期、持續(xù)時(shí)間、治療方案、康復(fù)情況；嚴(yán)重發(fā)病要剔除試驗(yàn)欄，并稱取病豬的體重，做好日期和體重的記錄。根據(jù)評(píng)分結(jié)果計(jì)算每窩腹瀉指數(shù)，其計(jì)算公式為：每窩腹瀉指數(shù)＝觀察記錄分?jǐn)?shù)總和/(觀察總天數(shù)*每窩仔豬數(shù))。
外貌性狀：
毛光澤度：采用主觀評(píng)分方法，即采用1～5分制，1＝毛非常粗糙；2＝毛粗糙；3＝毛較光滑；4＝毛光滑；5＝毛非常光滑，有光澤，2人盲評(píng)(非研發(fā)部人員)。
皮膚紅潤(rùn)度測(cè)定：用成農(nóng)膚色卡逐頭評(píng)定。
試驗(yàn)結(jié)果與分析
試驗(yàn)豬只的生產(chǎn)性能及體表評(píng)分見表3所示。
表3試驗(yàn)組和對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如表3所示，在平均日采食量方面試驗(yàn)組比對(duì)照組增加；在平均日增重方面試驗(yàn)組比對(duì)照組略有提高；在料肉比方面試驗(yàn)組比對(duì)照組低；在毛色、膚色方面試驗(yàn)組的毛膚色比對(duì)照組要好。
試驗(yàn)組和對(duì)照組兩組全期都沒有小豬腹瀉。試驗(yàn)期間連續(xù)潮濕天氣，對(duì)兩組試驗(yàn)豬健康有一定影響，豬群出現(xiàn)少量咳嗽情況，沒有出現(xiàn)重大疾病。
評(píng)價(jià)飼料預(yù)混料的活性度
以活性飼料理論方法評(píng)價(jià)高活性飼料預(yù)混料與普通飼料預(yù)混料
豬源菌群小鼠模型分別飼喂高活性飼料預(yù)混料(添加量3kg/T)、普通預(yù)混料(3kg/T)、基礎(chǔ)飼料。
主要試劑與儀器:
DNA提取試劑盒、培養(yǎng)基、離體恒化器、PCR擴(kuò)增儀、超低溫冰箱(-80℃)、超凈工作臺(tái)、顯微鏡等
1.體內(nèi)活性因子評(píng)價(jià)
以豬源菌群小鼠模型為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通過16S rRNA檢測(cè)方法，檢測(cè)高活性飼料預(yù)混料與普通飼料預(yù)混料對(duì)腸道菌群的正向調(diào)控作用。
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與處理
將30只小鼠(6周齡，雌雄各半)分為3組，每組10只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料，A組飼喂基礎(chǔ)飼料+普通飼料預(yù)混料，B組飼喂基礎(chǔ)飼料+高活性飼料預(yù)混料。
1.2樣本采集
灌喂不同的飼料后第4周定期取其新鮮糞便樣品并拍照，裝于2mL無菌EP管中，凍藏于-80℃待用。
1.3DNA提取
取小鼠糞便20mg，于2mL螺口管中，加入700μL裂解液；具體參照天根的糞便基因組DNA提取試劑盒的說明進(jìn)行。
1.4 16S rRNA測(cè)序
每組3個(gè)重復(fù)，共9個(gè)樣品測(cè)序。
2.體外活性因子評(píng)價(jià)
2.1離體恒化器分組和處理
使用3套離體恒化器模型，分為空白對(duì)照組、高活性飼料預(yù)混料組、普通飼料預(yù)混料組，離體模型接種豬腸道菌群14d后，高活性飼料預(yù)混料組添加高活性飼料預(yù)混料3g、普通飼料預(yù)混料組添加普通飼料預(yù)混料3g，連續(xù)作用8天。
2.2樣本采集
糞便接種發(fā)酵罐后，在加高活性飼料預(yù)混料8天后采集培養(yǎng)液，裝于2mL無菌EP管中，凍藏于-80℃待用，用于細(xì)菌數(shù)量檢測(cè)和菌群結(jié)構(gòu)分析。
2.3DNA提取和16S rDNA測(cè)序
方法同1.3與1.4。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
通過16S rDNA測(cè)序，高活性飼料預(yù)混料對(duì)腸道菌群有正向激活作用：
(1)擬桿菌、梭菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益共生菌群的豐度上調(diào)，使共生菌占?jí)旱剐詢?yōu)勢(shì)；
(2)腸球菌、腸桿菌等條件性致病菌的豐度下調(diào)；
(3)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、致病大腸桿菌等外源致病菌群消失。
當(dāng)然，本發(fā)明還可有其它多種實(shí)施例，在不背離本發(fā)明精神及其實(shí)質(zhì)的情況下，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員當(dāng)可根據(jù)本發(fā)明作出各種相應(yīng)的改變和變形，但這些相應(yīng)的改變和變形都應(yīng)屬于本發(fā)明所附的權(quán)利要求的保護(hù)范圍。