本發(fā)明公開了一種腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒的制備方法，屬于飼料添加劑制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

仔畜早期斷奶后，由于自身消化道機能發(fā)育不全，特別是胃酸分泌不足，且仔畜飼料的pH值多在5.8～6.5之間，常使仔畜胃內(nèi)的pH值較高。過高的pH值使胃蛋白酶活性降低，飼料利用率低，而且易引起腸道受損，產(chǎn)生腹瀉等癥狀，嚴重影響仔畜的生長和養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟效益。在仔畜早期斷奶后，配合使用酸化劑，可以彌補胃酸分泌的不足，能提高飼料消化率，保證仔畜的健康生長。

酸化劑分為單一酸化劑和復合酸化劑兩大類，單一酸化劑包括無機酸和有機酸。飼料中常用的無機酸有鹽酸、磷酸等，有機酸有乳酸、檸檬酸、丙酸、蘋果酸等，無機酸具有較強的酸性及相對較低的添加成本，但是在使用過程中會破壞胃粘膜功能甚至灼傷胃粘膜，抑制胃酸分泌和仔豬胃功能的正常發(fā)育；有機酸具有良好的風味，并且有些可直接進入三羧酸循環(huán)，在生產(chǎn)實際中使用較多，復合酸化劑是由不同種酸化劑按一定比例復合而成的產(chǎn)品。當前比較一致認為效果較好的排列順序是：復合酸＞有機酸＞無機酸。

然而，現(xiàn)有的這些飼料酸化劑往往存在以下問題：（1）不能達到抑制有害微生物生長、促進有益菌生長的目的，對動物的防病治病、提高免疫力的效果欠佳；（2）目前酸化劑的制備方法主要是簡單物理混合、顆?；@種制備方法易使酸化劑暴露，這種暴露的酸化劑不僅破壞飼料中的其他營養(yǎng)成分，影響飼料的適口性，甚至在加工過程中腐蝕飼料加工機械。隨著人們對動物食品安全的認識水平越來越高，現(xiàn)有的飼料酸化劑已無法滿足使用需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對現(xiàn)有酸化劑不能達到抑制有害微生物生長、促進有益菌生長的目的，無法提高仔畜的抗病能力，且易破壞飼料中營養(yǎng)成分，還會腐蝕飼料加工機械的缺陷，提供一種腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒的制備方法，本發(fā)明首先配置液體培養(yǎng)基，隨后將枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌等接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將所得菌液混合制得復合益生菌液，再以紅薯粉、麥麩、豆粕等為營養(yǎng)底物，經(jīng)復合益生菌液發(fā)酵酸化，再將所得發(fā)酵酸化料與羧甲基纖維素混合造粒并干燥制成芯材，最后將鄰苯二甲酸醋酸纖維素與乙醇丙酮溶液、去離子水等腸溶型材料配置成殼材乳液，并包裹芯材，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒，本發(fā)明制得的酸化劑顆粒實現(xiàn)定位釋放藥液效果，從而提高了調(diào)控動物腸道酸堿平衡和胃腸道生長發(fā)育的效果，同時避免了酸化劑對飼料中其它營養(yǎng)成分的破壞及對加工機械的腐蝕，還可有效提高動物免疫力、改善飼料適口性，具有廣泛的應用前景。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

（1）稱取10～12g葡萄糖，10～12g蛋白胨，10～12g酵母膏，5～6g檸檬酸三銨，5～6g牛肉粉，5～6g乙酸鈉，0.5～0.6g氯化鎂，0.20～0.24g氯化錳，0.5～0.6g磷酸氫二鉀，加入1.0～1.2L去離子水中，以300～400r/min攪拌20～30min，得混合液，用質(zhì)量分數(shù)為10%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)混合液pH為6.2～6.5，隨后裝入高壓滅菌鍋中，在120～121℃下滅菌處理20～30min，得液體培養(yǎng)基；

（2）按接種量均為3～5%，將枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，乳酸菌LB1，雙歧桿菌，分別接種至4份80～100mL上述液體培養(yǎng)基中進行單菌種培養(yǎng)，在35～37℃下厭氧培養(yǎng)15～20h，過濾得菌液，量取10～20mL枯草芽孢桿菌菌液，80～100mL植物乳桿菌菌液，30～50mL乳酸菌LB1菌液，30～50mL雙歧桿菌菌液混合均勻后，得復合益生菌液；

（3）稱取400～500g紅薯粉，200～300g麥麩，200～300g豆粕，加入粉碎機中粉碎，過60目篩，將過篩后的復合粉末裝入高壓蒸汽滅菌鍋中，在120～121℃下滅菌處理15～20min，得滅菌發(fā)酵料，將滅菌發(fā)酵料與上述復合益生菌液混合后加入500～600mL去離子水，并裝入發(fā)酵罐中，在22～30℃下密封發(fā)酵3～5天，得發(fā)酵酸化料；

（4）向700～800g上述發(fā)酵酸化料中添加100～200mL質(zhì)量分數(shù)為2%羧甲基纖維素，并轉(zhuǎn)入造粒機中擠出制成1～3mm粒徑的顆粒，隨后置于干燥箱中，在50～60℃下干燥2～3h，得芯材；

（5）稱取3～4g鄰苯二甲酸醋酸纖維素，加入30～40mL質(zhì)量分數(shù)為10%乙醇丙酮溶液中，以300～400r/min攪拌20～30min，再加入1.0～1.5g檸檬酸三乙酯，55～60mL去離子水，繼續(xù)攪拌30～40min，得殼材乳液，隨后將上述芯材浸泡在殼材乳液中3～5min，過濾得濾餅，將濾餅置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒。

本發(fā)明的應用方法是：首先按質(zhì)量比1:350～1:1000，將本發(fā)明制得的酸化劑顆粒與豬飼料攪拌混合8～12min，隨后將所得混合豬飼料對斷奶15～20天、生長健康的仔豬進行喂養(yǎng)，讓仔豬自由采食，將混合飼料每天分2～4次進行投喂，控制仔豬日采食量在1～3kg，并且要保證每天都有1h的空槽時間即可。經(jīng)檢測，仔豬連續(xù)食用含有本發(fā)明酸化劑的飼料30天后，平均增重15～18kg，平均日增重達500～600g，與使用傳統(tǒng)飼料酸化劑相比，動物日增重提高了8～10%，日采食量提高了3～5%，料肉比降低了4～6%，同時本發(fā)明飼料酸化劑顆粒具有較好的腸溶、緩釋作用，在動物胃中釋放率為8～10%，在小腸中釋放率為50～70%，在大腸中釋放率為25～40%。

本發(fā)明的有益效果是：

（1）本發(fā)明制得的酸化劑顆粒具有較好的腸道保健及改善飼料適口性的效果，同時有效降低飼料酸度，降低飼料的pH和酸結(jié)合力，延長飼料的保存時間；

（2）本發(fā)明制得的酸化劑顆?？梢杂行浹a牲畜胃酸分泌的不足，提高動物的消化吸收能力，顯著增加食欲，從而保證動物的健康生長，食用后動物皮紅毛亮，提高生產(chǎn)性能和抵抗疾病能力；

（3）本發(fā)明飼料酸化劑為腸溶性顆粒制品，在口腔、食道包衣膜完整，有效酸成分未釋放出來，到達后段腸道才會緩慢釋放，發(fā)揮抑菌和改善動物消化道微生態(tài)的作用，還可避免對飼料中其他營養(yǎng)成分造成破壞，亦不會對加工機械造成腐蝕。

具體實施方式

首先稱取10～12g葡萄糖，10～12g蛋白胨，10～12g酵母膏，5～6g檸檬酸三銨，5～6g牛肉粉，5～6g乙酸鈉，0.5～0.6g氯化鎂，0.20～0.24g氯化錳，0.5～0.6g磷酸氫二鉀，加入1.0～1.2L去離子水中，以300～400r/min攪拌20～30min，得混合液，用質(zhì)量分數(shù)為10%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)混合液pH為6.2～6.5，隨后裝入高壓滅菌鍋中，在120～121℃下滅菌處理20～30min，得液體培養(yǎng)基；隨后按接種量均為3～5%將枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，乳酸菌LB1，雙歧桿菌，分別接種至4份80～100mL上述液體培養(yǎng)基中進行單菌種培養(yǎng)，在35～37℃下厭氧培養(yǎng)15～20h，過濾得菌液，量取10～20mL枯草芽孢桿菌菌液，80～100mL植物乳桿菌菌液，30～50mL乳酸菌LB1菌液，30～50mL雙歧桿菌菌液混合均勻后，得復合益生菌液；再稱取400～500g紅薯粉，200～300g麥麩，200～300g豆粕，加入粉碎機中粉碎，過60目篩，將過篩后的復合粉末裝入高壓蒸汽滅菌鍋中，在120～121℃下滅菌處理15～20min，得滅菌發(fā)酵料，將滅菌發(fā)酵料與上述復合益生菌液混合后加入500～600mL去離子水，并裝入發(fā)酵罐中，在22～30℃下密封發(fā)酵3～5天，得發(fā)酵酸化料；再向700～800g上述發(fā)酵酸化料中添加100～200mL質(zhì)量分數(shù)為2%羧甲基纖維素，并轉(zhuǎn)入造粒機中擠出制成1～3mm粒徑的顆粒，隨后置于干燥箱中，在50～60℃下干燥2～3h，得芯材；最后稱取3～4g鄰苯二甲酸醋酸纖維素，加入30～40mL質(zhì)量分數(shù)為10%乙醇丙酮溶液中，以300～400r/min攪拌20～30min，再加入1.0～1.5g檸檬酸三乙酯，55～60mL去離子水，繼續(xù)攪拌30～40min，得殼材乳液，隨后將上述芯材浸泡在殼材乳液中3～5min，過濾得濾餅，將濾餅置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒。

實例1

首先稱取10g葡萄糖，10g蛋白胨，10g酵母膏，5g檸檬酸三銨，5g牛肉粉，5g乙酸鈉，0.5g氯化鎂，0.20g氯化錳，0.5g磷酸氫二鉀，加入1.0L去離子水中，以300r/min攪拌20min，得混合液，用質(zhì)量分數(shù)為10%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)混合液pH為6.2，隨后裝入高壓滅菌鍋中，在120℃下滅菌處理20min，得液體培養(yǎng)基；隨后按接種量均為3%，將枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，乳酸菌LB1，雙歧桿菌，分別接種至4份80mL上述液體培養(yǎng)基中進行單菌種培養(yǎng)，在35℃下厭氧培養(yǎng)15h，過濾得菌液，量取10mL枯草芽孢桿菌菌液，80mL植物乳桿菌菌液，30mL乳酸菌LB1菌液，30mL雙歧桿菌菌液混合均勻后，得復合益生菌液；再稱取400g紅薯粉，200g麥麩，200g豆粕，加入粉碎機中粉碎，過60目篩，將過篩后的復合粉末裝入高壓蒸汽滅菌鍋中，在120℃下滅菌處理15min，得滅菌發(fā)酵料，將滅菌發(fā)酵料與上述復合益生菌液混合后加入500mL去離子水，并裝入發(fā)酵罐中，在22℃下密封發(fā)酵3天，得發(fā)酵酸化料；再向700g上述發(fā)酵酸化料中添加100mL質(zhì)量分數(shù)為2%羧甲基纖維素，并轉(zhuǎn)入造粒機中擠出制成1mm粒徑的顆粒，隨后置于干燥箱中，在50℃下干燥2h，得芯材；最后稱取3g鄰苯二甲酸醋酸纖維素，加入30mL質(zhì)量分數(shù)為10%乙醇丙酮溶液中，以300r/min攪拌20min，再加入1.0g檸檬酸三乙酯，55mL去離子水，繼續(xù)攪拌30min，得殼材乳液，隨后將上述芯材浸泡在殼材乳液中3min，過濾得濾餅，將濾餅置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒。

本實例操作簡便，使用時，首先按質(zhì)量比1:350，將本發(fā)明制得的酸化劑顆粒與豬飼料攪拌混合8min，隨后將所得混合豬飼料對斷奶15天、生長健康的仔豬進行喂養(yǎng)，讓仔豬自由采食，將混合飼料每天分2次進行投喂，控制仔豬日采食量在1kg，并且要保證每天都有1h的空槽時間即可。經(jīng)檢測，仔豬連續(xù)食用含有本發(fā)明酸化劑的飼料30天后，平均增重15kg，平均日增重達500g，與使用傳統(tǒng)飼料酸化劑相比，動物日增重提高了8%，日采食量提高了3%，料肉比降低了4%，同時本發(fā)明飼料酸化劑顆粒具有較好的腸溶、緩釋作用，在動物胃中釋放率為8%，在小腸中釋放率為50%，在大腸中釋放率為25%。

實例2

首先稱取11g葡萄糖，11g蛋白胨，11g酵母膏，5g檸檬酸三銨，5g牛肉粉，5g乙酸鈉，0.5g氯化鎂，0.22g氯化錳，0.5g磷酸氫二鉀，加入1.1L去離子水中，以350r/min攪拌25min，得混合液，用質(zhì)量分數(shù)為10%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)混合液pH為6.3，隨后裝入高壓滅菌鍋中，在120℃下滅菌處理25min，得液體培養(yǎng)基；隨后按接種量均為4%，將枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，乳酸菌LB1，雙歧桿菌，分別接種至4份90mL上述液體培養(yǎng)基中進行單菌種培養(yǎng)，在36℃下厭氧培養(yǎng)18h，過濾得菌液，量取15mL枯草芽孢桿菌菌液，90mL植物乳桿菌菌液，40mL乳酸菌LB1菌液，40mL雙歧桿菌菌液混合均勻后，得復合益生菌液；再稱取450g紅薯粉，250g麥麩，250g豆粕，加入粉碎機中粉碎，過60目篩，將過篩后的復合粉末裝入高壓蒸汽滅菌鍋中，在120℃下滅菌處理18min，得滅菌發(fā)酵料，將滅菌發(fā)酵料與上述復合益生菌液混合后加入550mL去離子水，并裝入發(fā)酵罐中，在26℃下密封發(fā)酵4天，得發(fā)酵酸化料；再向750g上述發(fā)酵酸化料中添加150mL質(zhì)量分數(shù)為2%羧甲基纖維素，并轉(zhuǎn)入造粒機中擠出制成2mm粒徑的顆粒，隨后置于干燥箱中，在55℃下干燥2h，得芯材；最后稱取3g鄰苯二甲酸醋酸纖維素，加入35mL質(zhì)量分數(shù)為10%乙醇丙酮溶液中，以350r/min攪拌25min，再加入1.3g檸檬酸三乙酯，58mL去離子水，繼續(xù)攪拌35min，得殼材乳液，隨后將上述芯材浸泡在殼材乳液中4min，過濾得濾餅，將濾餅置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒。

本實例操作簡便，使用時，首先按質(zhì)量比1:650，將本發(fā)明制得的酸化劑顆粒與豬飼料攪拌混合10min，隨后將所得混合豬飼料對斷奶18天、生長健康的仔豬進行喂養(yǎng)，讓仔豬自由采食，將混合飼料每天分3次進行投喂，控制仔豬日采食量在2kg，并且要保證每天都有1h的空槽時間即可。經(jīng)檢測，仔豬連續(xù)食用含有本發(fā)明酸化劑的飼料30天后，平均增重16kg，平均日增重達550g，與使用傳統(tǒng)飼料酸化劑相比，動物日增重提高了9%，日采食量提高了4%，料肉比降低了5%，同時本發(fā)明飼料酸化劑顆粒具有較好的腸溶、緩釋作用，在動物胃中釋放率為9%，在小腸中釋放率為60%，在大腸中釋放率為33%。

實例3

首先稱取12g葡萄糖，12g蛋白胨，12g酵母膏，6g檸檬酸三銨，6g牛肉粉，6g乙酸鈉，0.6g氯化鎂，0.24g氯化錳，0.6g磷酸氫二鉀，加入1.2L去離子水中，以400r/min攪拌30min，得混合液，用質(zhì)量分數(shù)為10%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)混合液pH為6.5，隨后裝入高壓滅菌鍋中，在121℃下滅菌處理30min，得液體培養(yǎng)基；隨后按接種量均為5%，將枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，乳酸菌LB1，雙歧桿菌，分別接種至4份100mL上述液體培養(yǎng)基中進行單菌種培養(yǎng)，在37℃下厭氧培養(yǎng)20h，過濾得菌液，量取20mL枯草芽孢桿菌菌液，100mL植物乳桿菌菌液，50mL乳酸菌LB1菌液，50mL雙歧桿菌菌液混合均勻后，得復合益生菌液；再稱取500g紅薯粉，300g麥麩，300g豆粕，加入粉碎機中粉碎，過60目篩，將過篩后的復合粉末裝入高壓蒸汽滅菌鍋中，在121℃下滅菌處理20min，得滅菌發(fā)酵料，將滅菌發(fā)酵料與上述復合益生菌液混合后加入600mL去離子水，并裝入發(fā)酵罐中，在30℃下密封發(fā)酵5天，得發(fā)酵酸化料；再向800g上述發(fā)酵酸化料中添加200mL質(zhì)量分數(shù)為2%羧甲基纖維素，并轉(zhuǎn)入造粒機中擠出制成3mm粒徑的顆粒，隨后置于干燥箱中，在60℃下干燥3h，得芯材；最后稱取4g鄰苯二甲酸醋酸纖維素，加入40mL質(zhì)量分數(shù)為10%乙醇丙酮溶液中，以400r/min攪拌30min，再加入1.5g檸檬酸三乙酯，60mL去離子水，繼續(xù)攪拌40min，得殼材乳液，隨后將上述芯材浸泡在殼材乳液中5min，過濾得濾餅，將濾餅置于干燥箱中，在45~55℃下干燥5~6h，得腸溶型益生菌發(fā)酵酸化劑顆粒。

本實例操作簡便，使用時，首先按質(zhì)量比1:1000，將本發(fā)明制得的酸化劑顆粒與豬飼料攪拌混合12min，隨后將所得混合豬飼料對斷奶20天、生長健康的仔豬進行喂養(yǎng)，讓仔豬自由采食，將混合飼料每天分4次進行投喂，控制仔豬日采食量在3kg，并且要保證每天都有1h的空槽時間即可。經(jīng)檢測，仔豬連續(xù)食用含有本發(fā)明酸化劑的飼料30天后，平均增重18kg，平均日增重達600g，與使用傳統(tǒng)飼料酸化劑相比，動物日增重提高了10%，日采食量提高了5%，料肉比降低了6%，同時本發(fā)明飼料酸化劑顆粒具有較好的腸溶、緩釋作用，在動物胃中釋放率為10%，在小腸中釋放率為70%，在大腸中釋放率為40%。