一種多功能試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種多功能試劑盒。該試劑盒包括盒蓋、盒體、襯墊、裝有QPCR用的試劑的容器、裝有siRNA轉(zhuǎn)染用的試劑的容器、裝有細(xì)胞裂解用的試劑的容器或試劑瓶。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，使用方便、不易受污染。
【專利說明】一種多功能試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種多功能試劑盒，該試劑盒中含有細(xì)胞轉(zhuǎn) 染、細(xì)胞裂解、QPCR實(shí)驗(yàn)用的試劑。

【背景技術(shù)】
[0002] hnRNPs是一種主要存在于細(xì)胞核內(nèi)的具有調(diào)節(jié)前體RNA剪切、拼接、轉(zhuǎn)錄的過 程的核糖核蛋白，廣泛存在于各種組織細(xì)胞內(nèi)。hnRNPA2/Bl是hnRNPs家族的主要成員， hnRNPA2/Bl能與單鏈端粒酶重復(fù)序列特異性結(jié)合，起到保護(hù)端粒酶防止核酸酶使其降解， 并活化端粒酶的作用。
[0003] AXL 是一種受體酪氨酸激酶 receptor tyrosine kinases (RTKs)，AXL 與其他兩種 RTKs :Tyr〇3和Mer共同稱作TAM酪氨酸受體亞家族，研宄證明TAM的活化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在細(xì) 胞的諸多生物學(xué)行為方面起作用，包括細(xì)胞存活、增殖、迀移、粘附等方面。有研宄顯示在多 種腫瘤中存在AXL的高表達(dá)，包括急性白血病、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌及前列腺癌。
[0004] RNA干擾（SiRNA)是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種雙鏈RNA介導(dǎo)的序列特異性基因沉默 現(xiàn)象[Fire A.，et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.Nature 1998;391:806-811]，因其具有沉默效率高、 特異性強(qiáng)以及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)于傳統(tǒng)基因敲除手段的優(yōu)點(diǎn)而得到迅速發(fā)展，現(xiàn)成為生命科 學(xué)領(lǐng)域中重要的研宄工具[Arziman Z.，et al.E_RNAi:a web application to design optimized RNAi constructs. Nucleic Acids Res2005;33:W582_W588]。siRNA 與蛋白質(zhì) 結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA-induced silencing complex，RISC)。該復(fù)合物能夠 結(jié)合到同源的mRNA上并誘導(dǎo)其降解。
[0005] Y. He在其2009年的研宄中通過高通量基因芯片篩查技術(shù)檢測(cè)到在Colol6鱗 癌細(xì)胞系中通過RNA干擾技術(shù)人為降低hnRNPA2/Bl的表達(dá)，引起下游123個(gè)目標(biāo)基因 的差異表達(dá)，其中就包括 AXL[He Y，et al·，Downstream targets of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2 mediate cell proliferation, Molecular carcinogenes is，2009, 48 (2) : 167-179]，初步提示我們二者存在相互作用的可能性。但關(guān)于二者相關(guān)性 更深入的研宄目前未見報(bào)道。
[0006] 為了研宄肺癌細(xì)胞中hnRNPA2/Bl基因與AXL基因、癌癥細(xì)胞增殖和生長的關(guān)系， 申請(qǐng)人:在肺癌細(xì)胞中干擾hnRNPA2/Bl基因的表達(dá)，檢測(cè)其對(duì)AXL基因表達(dá)的影響以及檢測(cè) 其對(duì)癌癥細(xì)胞增殖和生長的影響。在研宄的過程中需要進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染、細(xì)胞裂解、RNA提 取、QPCR等實(shí)驗(yàn)，因此需要使用大量的試劑，每一實(shí)驗(yàn)步驟中使用的試劑分散放置給操作人 員帶來諸多不便，如需要大量的時(shí)間尋找上述試劑，因此將上述試劑分類放置在同一個(gè)地 方能夠節(jié)省操作人員的不少時(shí)間，并且方便日后進(jìn)行同一實(shí)驗(yàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型的目的在于提供一種多功能試劑盒。所述 試劑盒中含有細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞裂解、QPCR實(shí)驗(yàn)用的試劑，方便實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行連續(xù)實(shí)驗(yàn)，節(jié)省 尋找試劑的時(shí)間。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，使用方便、不易受污染。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案：一種多功能試劑盒，所述試劑 盒包括盒蓋1、盒體2、襯墊3、擋板4、裝有5XPrimeScript RT Master Mix的容器5、裝有 hnRNPA2/Bl基因 QPCR上游引物的容器6和下游引物的容器7、裝有AXL基因 QPCR上游引 物的容器8和下游引物的容器9、裝有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器10和下游引物的容 器11、裝有SYBR染料的容器12、裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13、裝有陰性對(duì) 照siRNA的容器14、裝有Lipofcctaminc? 2000的容器15、裝有PMSF的容器16、裝有RNAiso Plus的容器17、裝有RIPA裂解液的試劑瓶18 ;所述襯墊3放置于所述盒體2內(nèi)，所述襯墊 3上設(shè)有容器孔31和凹槽32 ;2個(gè)所述擋板4將3個(gè)所述襯墊3隔開并固定于所述盒體2 上，最左側(cè)所述襯墊3上只設(shè)有所述容器孔31，中間所述襯墊3上只設(shè)有所述容器孔31，最 右側(cè)襯墊3上設(shè)有所述凹槽32和所述容器孔31 ;所述容器孔31的大小與各容器的大小相 匹配；所述凹槽32的大小與所述試劑瓶18的大小相匹配；所述裝有RIPA裂解液的試劑瓶 18和所述裝有PMSF的容器16及所述裝有RNAiso Plus的容器17放置于最右側(cè)所述襯墊 3上，裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13和裝有陰性對(duì)照siRNA的容器14以及 裝有Lipoil'clamine? 2000的容器15放置于中間所述襯墊3上，其他容器放置于最左側(cè)所述 襯墊3上。
[0009] 優(yōu)選地，所述容器是1. 5ml的EP管。
[0010] 優(yōu)選地，所述容器孔31是貫穿襯墊3的。更優(yōu)選地，所述容器孔31是上端開口、 下端封閉的。
[0011] 優(yōu)選地，所述容器孔31在襯墊上平行排列。
[0012] 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0013] (1)本實(shí)用新型含有細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞裂解、QPCR實(shí)驗(yàn)用的試劑，方便實(shí)驗(yàn)人員拿取 試劑，進(jìn)行連續(xù)實(shí)驗(yàn)，節(jié)省時(shí)間。
[0014] (2)本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理，使用方便、不易受污染。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1為本實(shí)用新型的構(gòu)造圖；
[0016] 其中，1.盒蓋；2.盒體；3.襯墊；31.容器孔；32.凹槽；4.擋板；5.裝有 5XPrimeScript RT Master Mix的容器；6.裝有hnRNPA2/Bl基因 QPCR上游引物的容器； 7.裝有hnRNPA2/Bl基因 QPCR下游引物的容器；8.裝有AXL基因 QPCR上游引物的容器； 9.裝有AXL基因 QPCR下游引物的容器；10.裝有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器；11.裝 有GAPDH基因 QPCR下游引物的容器；12.裝有SYBR染料的容器；13.裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl 基因的siRNA的容器；14.裝有陰性對(duì)照siRNA的容器；15.裝有Lipoibctamine? 2000的容 器；16.裝有PMSF的容器；17.裝有RNAiso Plus的容器；18.裝有RIPA裂解液的試劑瓶。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn) 和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本實(shí)用新型的范圍 構(gòu)成任何限制。
[0018] 實(shí)施例1多功能試劑盒
[0019] -種多功能試劑盒，該試劑盒包括盒蓋1、盒體2、襯墊3、擋板4、裝有 5XPrimeScript RT Master Mix 的容器 5、裝有 hnRNPA2/Bl 基因 QPCR 上游引物的容 器6和下游引物的容器7、裝有AXL基因 QPCR上游引物的容器8和下游引物的容器9、 裝有GAPDH基因 QPCR上游引物的容器10和下游引物的容器11、裝有SYBR染料的容器 12、裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13、裝有陰性對(duì)照siRNA的容器14、裝有 Lipofcctamiiic? 2000的容器15、裝有PMSF的容器16、裝有RNAiso Plus的容器17、裝有 RIPA裂解液的試劑瓶18 ;襯墊3放置于所述盒體2內(nèi)，襯墊3上設(shè)有容器孔31和凹槽32 ; 2個(gè)擋板4將3個(gè)襯墊3隔開并固定于盒體2上，最左側(cè)襯墊3上只設(shè)有容器孔31，中間 襯墊3上只設(shè)有容器孔31，最右側(cè)襯墊3上設(shè)有凹槽32和容器孔31 ;容器孔31的大小 與各容器的大小相匹配；凹槽32的大小與試劑瓶18的大小相匹配；裝有RIPA裂解液的 試劑瓶18和裝有PMSF的容器16及裝有RNAiso Plus的容器17放置于最右側(cè)襯墊3上， 裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器13和裝有陰性對(duì)照siRNA的容器14以及裝有 Li.p〇rectaminc? 2000的容器15放置于中間襯墊3上，其他容器放置于最左偵Ij襯墊3上。
[0020] 其中，容器是I. 5ml的EP管；容器孔31是貫穿襯墊3的，且容器孔31是上端開 口、下端封閉的；容器孔31在襯墊上平行排列。
[0021] 綜上所述，本實(shí)用新型的實(shí)施方式僅提供最佳的實(shí)施方式，本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi) 容及技術(shù)特點(diǎn)已揭示如上，然而熟悉本項(xiàng)技術(shù)的人士仍可能基于本實(shí)用新型所揭示的內(nèi)容 而作各種不背離本實(shí)用新型創(chuàng)作精神的替換及修飾；因此，本實(shí)用新型的保護(hù)范圍不限于 實(shí)施例所揭示的技術(shù)內(nèi)容，故凡依本實(shí)用新型的形狀、構(gòu)造及原理所做的等效變化，均涵蓋 在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種多功能試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括盒蓋（1)、盒體（2)、襯墊（3)、擋板 (4)、裝有5XPrimeScriptRTMasterMix的容器（5)、裝有hnRNPA2/Bl基因QPCR上游引物 的容器（6)和下游引物的容器（7)、裝有AXL基因QPCR上游引物的容器（8)和下游引物的 容器（9)、裝有GAPDH基因QPCR上游引物的容器（10)和下游引物的容器（11)、裝有SYBR染 料的容器（12)、裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的siRNA的容器（13)、裝有陰性對(duì)照siRNA的容 器（14)、裝有Liporcctaminc? 2000 的容器（15)、裝有PMSF的容器（16)、裝有RNAisoPlus 的容器（17)、裝有RIPA裂解液的試劑瓶（18);所述襯墊（3)放置于所述盒體（2)內(nèi)，所述 襯墊（3)上設(shè)有容器孔（31)和凹槽（32) ;2個(gè)所述擋板（4)將3個(gè)所述襯墊（3)隔開并固 定于所述盒體（2)上，最左側(cè)所述襯墊（3)上只設(shè)有所述容器孔（31)，中間所述襯墊（3)上 只設(shè)有所述容器孔（31)，最右側(cè)所述襯墊（3)上設(shè)有所述凹槽（32)和所述容器孔（31);所 述容器孔（31)的大小與各容器的大小相匹配；所述凹槽（32)的大小與所述試劑瓶（18)的 大小相匹配；所述裝有RIPA裂解液的試劑瓶（18)和所述裝有PMSF的容器（16)及所述裝有 RNAisoPlus的容器（18)放置于最右側(cè)所述襯墊（3)上，所述裝有針對(duì)hnRNPA2/Bl基因的 siRNA的容器（13)和所述裝有陰性對(duì)照siRNA的容器（14)以及所述裝有Lipolbctamine? 2000的容器（15)放置于中間所述襯墊（3)上，其他容器放置于最左側(cè)所述襯墊（3)上。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多功能試劑盒，其特征在于，所述容器孔（31)貫穿所述襯墊 (3)〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多功能試劑盒，其特征在于，所述容器孔（31)上端開口，下端 封閉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多功能試劑盒，其特征在于，所述容器孔（31)平行排列于所 述襯墊（3)上。
【文檔編號(hào)】C12M1/34GK204198741SQ201420653901
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】金國賢, 劉瑩, 金碩 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第四六三醫(yī)院