青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法
【專利摘要】青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，具體為：取青稞面粉溶解于緩沖溶液，避光酶解，酶解液趁熱離心，沉淀為青稞中不可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物(IDF-PC)，收集后低溫凍結(jié)，真空冷凍干燥，-20℃儲(chǔ)藏；離心后的上清液，加入乙醇，靜置自然冷卻至室溫，低溫沉淀過夜，取下層渾濁部分離心，沉淀為青稞中可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物(SDF-PC)，收集后低溫凍結(jié)，真空冷凍干燥，-20℃儲(chǔ)藏。本研究利用酶重量法對(duì)青稞中可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物、不可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物進(jìn)行分離制備，為青稞的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，也為青稞的精深加工提供新思路，促進(jìn)青稞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
【專利說明】青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體涉及青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]全谷物食品可有效預(yù)防代謝綜合癥，預(yù)防和降低心血管疾病、II型糖尿病、肥胖和某些癌癥的發(fā)病率。谷物食品作為世界上主要的食物來源，提供了 50%人體攝入的膳食纖維。研究發(fā)現(xiàn)，攝入膳食纖維能夠調(diào)節(jié)人體饑餓狀態(tài)、血糖生成指數(shù)、脂肪代謝和炎癥，起到益生元作用，可有效預(yù)防慢性心臟病和消化系統(tǒng)疾病。許多研究者對(duì)于谷物中的多糖組分進(jìn)行了研究，但是至今未闡明其有益健康的生化機(jī)制。因谷物多糖組分包含了大量的多酚化合物，95%的谷物多酚和細(xì)胞壁多糖緊密結(jié)合，研究者提出了“膳食纖維抗氧化劑(dietary fibre-ant1xidants)，，和“膳食纖維-多酌.復(fù)合物(dietary fibre-phenoliccompounds, DF-PC) ”的概念，認(rèn)為谷物膳食纖維是體內(nèi)傳送多酹化合物的天然功能成分。谷物中膳食纖維包括可溶性膳食纖維(soluble dietary fibre, SDF)和不可溶膳食纖維(insoluble dietary fibre, IDF)，二者在谷物中的例與谷物種類關(guān)系很大；谷物中的酚酸主要是羥基肉桂酸，其中阿魏酸含量最為豐富，被視為谷物抗氧化活性最主要的多酚化合物。膳食纖維和多酚化合物通過酯鍵共價(jià)結(jié)合在一起，形成DF-PC復(fù)合物。一般認(rèn)為，谷物中SDF/IDF比例越高，DF-PC復(fù)合物抗氧化效果越好。
[0003]青稞作為云南省迪慶藏族自治州的傳統(tǒng)種植作物，含有豐富的膳食纖維、多酚化合物和微量元素等功能成分，具有較好的開發(fā)價(jià)值。但是目前青稞深加工程度不深，限制了農(nóng)民增收，制約了青稞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本技術(shù)通過研究青稞DF-PC復(fù)合物的制備方法，并通過研究其中多酚化合物、類黃酮含量以及其抗氧化活性，為闡明膳食纖維和多酚相互作用對(duì)多酚生物利用度的作用機(jī)制，提高多酚化合物的生物有效性和生物利用度，持續(xù)發(fā)揮抗氧化作用，預(yù)防疾病，維持機(jī)體健康提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為青稞開發(fā)利用提供思路，促進(jìn)云南省青稞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物制備方法，本法采用酶重量法，制備純度高、性能好、成本低的青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物制備方法。
[0005]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0006]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0007]1)將青稞除雜后粉碎，過50目篩，篩下青稞面粉備用；
[0008]2)稱取篩下青稞面粉，用pH6.25、濃度0.05mol/L的MES-TRIS緩沖溶液溶解青稞面粉，磁力攪拌直至樣品完全分散在緩沖溶液中；
[0009]3)避光加入耐高溫α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高溫α -淀粉酶)溶液，置于95°C恒溫振蕩水浴鍋中持續(xù)攪拌，當(dāng)溶液的溫度升高至95°C開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min ；
[0010]4)反應(yīng)完成后，待溶液冷卻至45°C，調(diào)節(jié)溶液pH:用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10.5，在溶液中加入堿性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加堿性蛋白酶)溶液，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)溶液溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌,反應(yīng)30min ；
[0011]5)反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)溶液pH:用HC1溶液調(diào)節(jié)pH至4.25，往溶液中邊攪拌邊加入糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)，持續(xù)攪拌，當(dāng)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min ；
[0012]6)將酶解液趁熱于4000r/min離心15min，沉淀為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存；
[0013]7)上清液中加入4倍體積的60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0_4°C冰箱中沉淀12小時(shí)以上；
[0014]8)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存。
[0015]本發(fā)明制備方法步驟(3)耐高溫α-淀粉酶酶解時(shí)，加入的耐高溫α-淀粉酶通過現(xiàn)用現(xiàn)稱取耐高溫α -淀粉酶，用pH = 6.25、濃度0.05mol/L的MES-TRIS緩沖溶液溶解制得。
[0016]本發(fā)明制備方法步驟(4)冷卻時(shí)，直接將燒杯放入低溫水中進(jìn)行冷卻。
[0017]本發(fā)明制備方法步驟(5)堿性蛋白酶酶解時(shí)，加入的堿性蛋白酶溶液通過現(xiàn)用現(xiàn)稱取的堿性蛋白酶用pH = 10.5、濃度0.05mol/L的MES-TRIS緩沖溶液溶解制得。
[0018]本發(fā)明制備方法步驟(8)保證乙醇溶液溫度為60°C，當(dāng)溫度達(dá)不到時(shí)，沉淀不完全，且上清液較渾濁，待溫度冷卻至室溫再放入冰箱。
[0019]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明技術(shù)用酶重量法對(duì)青稞中可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物、不可溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物進(jìn)行分離制備，為青稞的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，也為青稞的精深加工提供新思路，促進(jìn)青稞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0021]以下實(shí)施例中所使用的膳食纖維原料為青稞，其他含膳食纖維的原料，如大麥、小麥等也都可以通過本發(fā)明的方法制備。
[0022]實(shí)施例1
[0023]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0024]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0025]2)稱篩下物青稞面粉 10g，置于 500mL 中，加入 400mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液，水浴加熱至95°C，加入330u/mL耐高溫α -淀粉酶5mL ；
[0026]3)加入耐高溫α -淀粉酶后溫度升高至95°C開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min，并不斷攪拌；
[0027]4)將燒杯取出，冷卻至45°C ;
[0028]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)緩沖溶液配置的7500U/mL堿性蛋白酶溶液lmL，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí),持續(xù)攪拌反應(yīng)30min ；
[0029]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)30 μ L，持續(xù)攪拌，當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min ；
[0030]7)將酶解液置于布氏漏斗，濾紙為快速定量濾紙(9cm)，0.08MP抽濾，過濾速度較慢，無法進(jìn)行大量提取，將酶解液于4000r/min條件下離心15min,結(jié)果可充分分離不溶性膳食纖維-多酚復(fù)合物(IDF-PC)；
[0031]8)收集沉淀IDF-PC，后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，_18°C避光儲(chǔ)存；
[0032]9)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的95%乙醇溶液，靜置，于0 — 4°C冰箱中沉淀12小時(shí)以上；
[0033]10)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存。
[0034]實(shí)施例2
[0035]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0036]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0037]2)稱篩下物青稞面粉5g，置于500mL中，加入200mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)緩沖溶液；
[0038]3)水浴加熱至95°C，加入330u/mL的耐高溫α -淀粉酶2.5mL,當(dāng)燒杯中溫度達(dá)95°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min,并不斷攪拌；
[0039]4)將燒杯取出，冷卻至45 °C ;
[0040]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)緩沖溶液配置的7500U/mL堿性蛋白酶溶液0.5mL,置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45 °C時(shí)開始計(jì)時(shí),持續(xù)攪拌,反應(yīng)30min ；
[0041]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)15 μ L，持續(xù)攪拌，當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min ；
[0042]7)將酶解液置于4000r/min離心15min，沉淀部分為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存；
[0043]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的預(yù)熱60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀過夜；
[0044]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀部分為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存。
[0045]實(shí)施例3
[0046]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0047]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0048]2)稱篩下物青稞面粉100g，置于5L塑料桶中，加入2L MES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液；
[0049]3)水浴加熱至95°C，加入330u/mL的耐高溫α -淀粉酶50mL，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)95°C時(shí)開始計(jì)時(shí),并不斷攪拌,反應(yīng)30min ；
[0050]4)將塑料桶取出，冷水浴冷卻至45°C ；
[0051]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入MES-TRIS (pH=10.5,0.05mol/L)緩沖溶液配置的7500U/mL堿性蛋白酶溶液10mL，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45 °C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0052]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至
4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)600 μ L，當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0053]7)將酶解液趁熱置于4000r/min離心15min，沉淀為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存；
[0054]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的預(yù)熱到60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀過夜；
[0055]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存；
[0056]實(shí)施例4
[0057]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0058]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0059]2)稱篩下物青稞面粉300g，置于5L塑料桶中，加入4.5LMES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液；
[0060]3)水浴加熱至 95°C，加入用 150mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的耐高溫α-淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高溫α-淀粉酶)12.375g，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)95°C時(shí)開始計(jì)時(shí),并不斷攪拌,反應(yīng)30min ；
[0061 ] 4)將塑料桶取出，冷水浴冷卻至45 °C ;
[0062]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入用30mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的堿性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加堿性蛋白酶)1.875g，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0063]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至
4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)1.8mL,當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0064]7)將酶解液趁熱置于4000r/min離心15min，沉淀為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存；
[0065]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的預(yù)熱到60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀過夜；
[0066]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存。
[0067]實(shí)施例5
[0068]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0069]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0070]2)稱篩下物青稞面粉500g，置于塑料桶中，加入7.5L MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液；
[0071]3)水浴加熱至 95°C，加入用 250mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的耐高溫α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高溫α -淀粉酶)20.625g，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)95°C時(shí)開始計(jì)時(shí),并不斷攪拌,反應(yīng)30min ；
[0072]4)將塑料桶取出，冷水浴冷卻至45 °C ;
[0073]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入用50mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的堿性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加堿性蛋白酶)3.125g，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0074]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至
4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)3mL，當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0075]7)將酶解液趁熱置于4000r/min離心15min，沉淀為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，得到IDF-PC133.75g，得率為26.75%，裝入自封袋中，_18°C避光儲(chǔ)存；
[0076]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的預(yù)熱到60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀過夜；
[0077]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，得到SDF-PC35.97g，得率為7.20%，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存。
[0078]實(shí)施例6
[0079]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0080]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0081]2)稱篩下物青稞面粉250g，置于塑料桶中，加入3.75L MES-TRIS(pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液；
[0082]3)水浴加熱至 95°C，加入用 125mL MES-TRIS (pH = 6.25,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的耐高溫α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高溫α -淀粉酶)10.3125g，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)95 °C時(shí)開始計(jì)時(shí)，并不斷攪拌，反應(yīng)30min ；
[0083]4)將塑料桶取出，冷水浴冷卻至45 °C ;
[0084]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L NaOH調(diào)節(jié)燒杯中的溶液pH至10.5，加入用25mLMES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的堿性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加堿性蛋白酶)1.5625g，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)燒杯中溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0085]6)反應(yīng)結(jié)束后，將燒杯至于61°C水浴中，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至
4.25，在燒杯中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)1.5mL,當(dāng)燒杯中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30min ；
[0086]7)將酶解液趁熱置于4000r/min離心15min，沉淀為IDF-PC，收集后于_18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，得到IDF-PC51.41g，得率為20.56%，裝入自封袋中，_18°C避光儲(chǔ)存；
[0087]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的預(yù)熱到60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀過夜；
[0088]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾池部分于4000r/min離心15min,所得沉淀為SDF-PC，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，得到SDF-PC24.95g，得率為9.98%，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存。
[0089]實(shí)施例7
[0090]青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟:
[0091]1)將云黑青稞除雜后粉碎，過50目篩，取篩下物備用；
[0092]2)稱篩下物青稞面粉100g，置于28cm電磁爐適用平底蒸鍋中，在平底蒸鍋中加入1500mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液，磁力攪拌直至樣品完全分散在緩沖溶液中。
[0093]3)反應(yīng)結(jié)束后，加入用50mL MES-TRIS (pH = 6.25，0.05mol/L)緩沖溶液溶解的耐高溫α -淀粉酶(按165U/g青稞粉添加耐高溫α -淀粉酶)4.1498g，置于沸騰的40cm電磁爐適用平底湯鍋中持續(xù)攪拌，當(dāng)28cm電磁爐適用平底蒸鍋內(nèi)的溫度升高至95°C開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min ；
[0094]4)將28cm電磁爐適用平底蒸鍋取出，在冷水浴中冷卻至45 °C ；
[0095]5)調(diào)節(jié)溶液pH:用2mol/L NaOH調(diào)節(jié)28cm電磁爐適用平底蒸鍋中的溶液pH至10.5，加入用10mL MES-TRIS (pH = 10.5,0.05mol/L)緩沖溶液溶解的堿性蛋白酶(按750U/g青稞粉添加堿性蛋白酶)0.3882g，置于45°C的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)28cm電磁爐適用平底蒸鍋中溫度達(dá)45°C時(shí)開始計(jì)時(shí),持續(xù)振搖反應(yīng)30min ；
[0096]6)反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)溶液pH:用6mol/L HC1調(diào)節(jié)pH至4.25，在28cm電磁爐適用平底蒸鍋中的溶液中邊攪拌邊加入100000U/mL糖化酶(按600U/g青稞粉添加糖化酶)600 μ L，持續(xù)振搖，當(dāng)28cm電磁爐適用平底蒸鍋中的溶液內(nèi)溫度達(dá)61°C時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng) 30min ；
[0097]7)將酶解液趁熱于^OOiymin離心15min，沉淀為IDF-PC，IDF-PC重量為152.9467g，得率為1.53g/g (每克青稞面粉中可得到1.53g IDF-PC)，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18 °C避光儲(chǔ)存；
[0098]8)上清液轉(zhuǎn)移到另一燒杯中，加入等于上清4倍體積的60°C 95%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-4°C冰箱中沉淀12小時(shí)以上；
[0099]9)沉淀后輕輕倒出上清，取下層渾濁部分于4000r/min離心15min，所得沉淀為SDF-PC，SDF重量為34.5342g，得率為0.34g/g (每克青稞面粉中可得到0.34gSDF_PC)，收集后于-18°C下凍結(jié)，真空冷凍干燥4d，裝入自封袋中，-18°C避光儲(chǔ)存。
【權(quán)利要求】
1.青稞膳食纖維-多酚復(fù)合物的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)將青稞除雜后粉碎，過50目篩，篩下青稞面粉備用； 2)稱取篩下青稞面粉，用腿3-11？13緩沖溶液溶解青稞面粉，磁力攪拌直至樣品完全分散在緩沖溶液中； 3)避光加入耐高溫淀粉酶溶液，置于951恒溫振蕩水浴鍋中持續(xù)攪拌，當(dāng)溶液的溫度升高至951開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30111111 ； 4)反應(yīng)完成后，待溶液冷卻至451，調(diào)節(jié)溶液邱:用版10?溶液調(diào)節(jié)邱至10.5，在溶液中加入堿性蛋白酶溶液，置于451的恒溫振蕩水浴鍋中，當(dāng)溶液溫度達(dá)451時(shí)開始計(jì)時(shí)，持續(xù)攪拌，反應(yīng)30-11 ； 5)反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)溶液邱:用此1溶液調(diào)節(jié)邱至4.25，往溶液中邊攪拌邊加入糖化酶，持續(xù)攪拌，當(dāng)溫度達(dá)611時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)30111111 ； 6)將酶解液趁熱于400017111111離心15111111，沉淀為收集后于-181下凍結(jié)，真空冷凍干燥4(1，裝入自封袋中，-181避光儲(chǔ)存； 7)上清液中加入4倍體積的60195%乙醇溶液，靜置，自然冷卻至室溫，于0-41冰箱中沉淀12小時(shí)以上； 8)沉淀后輕輕倒出上清液，取下層渾濁部分于400017^111離心15-11，所得沉淀為
收集后于-181下凍結(jié)，真空冷凍干燥4山裝入自封袋中，-181避光儲(chǔ)存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)中耐高溫0-淀粉酶酶解時(shí)，力口入的耐高溫0 -淀粉酶通過現(xiàn)用現(xiàn)稱取耐高溫0 -淀粉酶用邱為6.25、濃度0.05001/1的
緩沖溶液溶解制得，且每克青稞粉添加1651耐高溫0 -淀粉酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)中冷卻時(shí)，直接將溶液放入低溫水中進(jìn)行冷卻。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)堿性蛋白酶酶解時(shí)，加入的堿性蛋白酶溶液通過現(xiàn)用現(xiàn)稱取的堿性蛋白酶用邱=10.5、濃度0.05001/1的123-1^13緩沖溶液溶解制得，且每克青稞粉添加7501堿性蛋白酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(5)添加糖化酶按每克青稞粉添加600口。
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK104382020SQ201410604115
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】李永強(qiáng), 楊士花, 吳國(guó)星, 高熹, 馮勵(lì), 高斌, 李海平, 張建平, 趙存朝, 黃勇樺, 馮志祥 申請(qǐng)人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)