基于DNABarcoding 的黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生物制品鑒別試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于DNABarcoding的黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生肉制品的一種鑒別方法。通過對(duì)編輯好的堿基序列長(zhǎng)度進(jìn)行比較來鑒別這3種魚類及其生肉制品，該方法是基于DNABarcoding建立的，不受被鑒定材料的形態(tài)限制，即便是個(gè)體的組織碎片，也能得出準(zhǔn)確的結(jié)論，因此可廣泛用于魚類及其生肉制品的準(zhǔn)確鑒定。
【專利說明】基于DNABarcoding的黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生物制 品鑒別試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了一種魚類的鑒別方法，尤其涉及到一種基于DNA Barcoding的黃顙 魚、云斑鮰和鱸魚鑒別方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 魚類作為水生環(huán)境的指標(biāo)生物，不僅可做為水體凈化指標(biāo)，還可以作為外來物種 入侵檢驗(yàn)指標(biāo)，同時(shí)魚類多樣性指標(biāo)也可以反映其生境狀態(tài)。近年來，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的高速 發(fā)展，生態(tài)問題日益突出，為外來物種的入侵提供了便利條件，給當(dāng)?shù)佤~類開發(fā)和保護(hù)帶來 隱憂。如何快速有效的識(shí)別魚類成為迫切需要解決的問題。但是，由于傳統(tǒng)的形態(tài)分類學(xué) 目前得不到足夠的重視，形態(tài)分類的專業(yè)人員逐步減少，影響了魚類資源保護(hù)以及生境研 究等工作。
[0003] 近年來廣泛發(fā)展的一種由四川大學(xué)研發(fā)出的魚類分子生物學(xué)快速鑒別方法 CN200510022323. 1，是通過編碼魚類RNA的核DNA序列的保守性及其轉(zhuǎn)錄間隔子的種間差 異結(jié)合傳統(tǒng)的電泳技術(shù)鑒別魚類，這種方法耗時(shí)較長(zhǎng)，成本較高，更關(guān)鍵的是這種方法無法 用于篩選和鑒定特定的魚類。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明公開了一種黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生肉制品的 鑒別方法，通過對(duì)編輯好的堿基序列長(zhǎng)度進(jìn)行比較來鑒別多種魚類中是否有這3種魚類中 的某種，該方法是基于DNA Barcoding建立的，不受被鑒定材料的形態(tài)限制，即便是個(gè)體的 組織碎片，也能得出準(zhǔn)確的結(jié)論，因此可廣泛用于這3種常見魚類及其生肉制品的準(zhǔn)確鑒 定。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 1、根據(jù)已知魚類的DNA條形碼數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)計(jì)和合成多組引物。
[0006] 2、從包含這3種魚的多種魚類中提取DNA，利用引物對(duì)每個(gè)待測(cè)對(duì)象的DNA進(jìn)行擴(kuò) 增，根據(jù)擴(kuò)增的結(jié)果，選出最佳引物和反應(yīng)條件。
[0007] 3、利用步驟（2)篩選出的引物對(duì)每個(gè)待測(cè)對(duì)象的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增后的序列進(jìn) 行測(cè)序，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，從而得到針對(duì)常見魚類DNA Barcoding數(shù)據(jù)庫(kù)。
[0008] 4、在建立DNA Barcoding數(shù)據(jù)庫(kù)后，對(duì)新的待測(cè)對(duì)象采用步驟（2)篩選出的引物 進(jìn)行檢測(cè)，將其與步驟（3)的DNA Barcoding數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列長(zhǎng)度進(jìn)行比對(duì)，從而確定其是 否為這3種魚類中的某種。
[0009] 通過上述方法，先建立對(duì)應(yīng)特定引物的準(zhǔn)確的含有常見魚類C0I序列長(zhǎng)度的DNA Barcoding數(shù)據(jù)庫(kù)，在后續(xù)檢測(cè)新的待測(cè)樣品是否為該3種魚時(shí)只需進(jìn)行序列長(zhǎng)度比對(duì)即 可進(jìn)行鑒定得到準(zhǔn)確結(jié)果。
[0010] 其中，在上述方法中，采用酚氯仿抽提法提取DNA。
[0011] 具體的說，通過上述方法篩選得到了 一對(duì)具有良好PCR擴(kuò)增性能的引物 (F-BaL1733/F-BaH2364 :GTGGGCCTAAAAGCAGCC/AAGCTCCAAAGGGTCTTCTCGT)。
[0012] 通過上述引物，得到的這3種魚類DNABarcoding數(shù)據(jù)庫(kù)如下表1所示 表 1:DNABarcoding數(shù)據(jù)庫(kù)
[0013] 【具體實(shí)施方式】

【權(quán)利要求】
1. 基于DNABarcoding的黃顙魚、云斑鮰和S盧魚及其生肉制品鑒別試劑盒，其特征在 于它是通過對(duì)試驗(yàn)所得的堿基序列長(zhǎng)度進(jìn)行比較從而準(zhǔn)確鑒別這3種魚類及其生肉制品 的方法，簡(jiǎn)便易行，操作容易；基于DNABarcoding的黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生肉制品 的鑒別方法，包括下述步驟：（1)根據(jù)已知魚類的DNA條形碼數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)計(jì)和合成多組引 物；（2)從包含這3種魚的多種魚類中提取DNA，利用引物對(duì)每個(gè)待測(cè)對(duì)象的DNA進(jìn)行擴(kuò)增， 根據(jù)擴(kuò)增的結(jié)果，選出最佳引物和反應(yīng)條件；（3)利用步驟（2)篩選出的引物對(duì)每個(gè)待測(cè)對(duì) 象的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增后的序列進(jìn)行測(cè)序，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，從而得到針對(duì)這3種魚類 DNABarcoding數(shù)據(jù)庫(kù)；（4)在建立DNABarcoding數(shù)據(jù)庫(kù)后，對(duì)新的待測(cè)對(duì)象采用步驟 (2)篩選出的引物進(jìn)行檢測(cè)，將其與步驟（3)的DNABarcoding數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列長(zhǎng)度進(jìn)行 比對(duì)，從而確定其是否為這3種魚類中的某種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的鑒定方法，其特征在于采用酚氯仿抽提法提取DNA。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的鑒定方法，其特征在于篩選出一組特異引物，該引物為： F-BaL1733/F-BaH2364 ：GTGGGCCTAAAAGCAGCC/AAGCTCCAAAGGGTCTTCTCGT〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的鑒定方法，其特征在于基于這一組引物建立的3種魚類DNA Barcoding數(shù)據(jù)庫(kù)如下所示：
一種黃顙魚、云斑鮰和鱸魚及其生肉制品的鑒別試劑盒，其特征在于包含權(quán)利要求3 中的引物。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104450882SQ201410561559
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月22日
【發(fā)明者】趙生國(guó), 邊琳鶴, 汪文強(qiáng), 李永青, 郭永博, 鄭王山, 權(quán)金強(qiáng), 車攏杰 申請(qǐng)人:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)