一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，包括：制作平板計(jì)數(shù)瓊脂(plate count agar，PCA)培養(yǎng)基，制作磷酸鹽緩沖液，將待測樣品加入到磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行稀釋，制備樣品平板，將平板置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，對平板上的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，對菌落總數(shù)進(jìn)行計(jì)算，對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告等步驟；本發(fā)明的檢測方法解決了GB/T4789中黃原膠無法溶解的缺點(diǎn)，簡單易行，且更適合于企業(yè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際操作，在黃原膠膠體檢測方面具有較大的價(jià)值與進(jìn)步意義。
【專利說明】一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，屬于膠體微生物的檢測方法領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，在食品安全越來越受到重視的大背景下，食品添加劑及添加劑內(nèi)微生物的含量是食品行業(yè)里一個非常重要的檢測對象，作為一種無毒的食品添加劑黃原膠及同類膠體來說，其在食品中扮演著乳化劑、穩(wěn)定劑、增稠劑等非常重要的角色。但黃原膠及同類膠體在出廠時(shí)微生物指標(biāo)應(yīng)達(dá)到食品添加劑黃原膠國標(biāo)-GB13886-2007的標(biāo)準(zhǔn)。黃原膠的微生物指標(biāo)在國標(biāo)中的檢測方法是按照GB/T 4789中規(guī)定的方法檢測的，此方法對于黃原膠這種增稠效果特別明顯的增稠劑不適用，如果按照GB/T 4789中規(guī)定的方法，在實(shí)際操作中，因?yàn)辄S原膠雖然易溶于水，但其有極其卓越的增稠性，百分之一的水溶液其粘度已達(dá)1500cp左右。而如果按照GB/T 4789的方法中規(guī)定的25g樣品加入至225ml緩沖液中，根本無法溶解，后續(xù)的一系列操作也就無法進(jìn)行。因此，常規(guī)方法中檢測膠體微生物的做法對于黃原膠這一特列來說是行不通的，針對這種情況，本發(fā)明研究出了一種新的、針對工廠和檢測機(jī)構(gòu)都實(shí)用的檢測方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述檢測方法如下:
[0004](I)制作平板計(jì)數(shù)瓊脂(plate count agar, PCA)培養(yǎng)基:將成分為胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g的培養(yǎng)基原料加入到100ml的蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2，然后分裝到錐形瓶，在121°C下高壓滅菌25min，然后冷卻到460C _48°C后放置于恒溫干燥箱中保溫；
[0005](2)制作磷酸鹽緩沖液:稱取34.0g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于500mL蒸餾水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至100mL后貯存于冰箱，為貯存液；取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至100mL,分裝10ml于250ml錐形瓶和9ml于玻璃試管中，121°C高壓滅菌25min，為稀釋液；
[0006](3)將待測樣品加入到磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行稀釋:稱取1.0Og黃原膠成品(或0.25g黃原膠半成品)，加入盛有10mL磷酸鹽稀釋液的已滅菌的250mL錐形瓶中，封口，靜置浸泡1-4小時(shí)(如浸泡時(shí)間超過2小時(shí)必須放入2-5°C冰箱中)，置于搖床上震蕩搖勻(成品約30min，半成品約30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的樣品勻液；
[0007](4)制備樣品平板:分別吸取2ml樣品勻液加入到兩個無菌平皿中，從恒溫保溫箱中取46-48°C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基15ml-20ml傾注到平皿中，并轉(zhuǎn)動兩平皿使其混合均勻。同時(shí)做兩個空白平板進(jìn)行對照；
[0008](5)將平板置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng):瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，置于36 °C ±1V恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h 土 2h ；
[0009](6)對平板上的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù):以菌落形成單位(colony-forming unites, CFU)進(jìn)行表示兩平板的菌落數(shù)NI和N2，菌落計(jì)數(shù)時(shí)采用兩個平板的平均數(shù)；
[0010](7)對菌落總數(shù)進(jìn)行計(jì)算:菌落總數(shù)的計(jì)算方法為TPC = (N1+N2)*稀釋倍數(shù)/2 ；[0011 ] (8)對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告。
[0012]所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，選取菌落數(shù)在30CFU-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)，低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的記錄為多不可計(jì)。
[0013]所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，其中一個平板上有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。
[0014]所述步驟￠)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個菌落計(jì)數(shù)。
[0015]所述步驟(8)中，在對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告時(shí)，按照以下方法形成報(bào)告:
[0016]a.菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告；
[0017]b.大于或等于100時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面用O代替?zhèn)€位數(shù)；
[0018]c.平板無菌落生長，則以小于I乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算；
[0019]d.若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延，進(jìn)行復(fù)檢；
[0020]e.若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效，進(jìn)行復(fù)檢；
[0021]f.以CFU/g為單位報(bào)告。

【具體實(shí)施方式】
[0022]以下為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，并不因此而限定了本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023]一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述檢測方法如下；
[0024](I)制作平板計(jì)數(shù)瓊脂(plate count agar, PCA)培養(yǎng)基:將成分為胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g的培養(yǎng)基原料加入到1000ml的蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2，然后分裝到錐形瓶，在121°C下高壓滅菌25min，然后冷卻到460C _48°C后放置于恒溫干燥箱中保溫；
[0025](2)制作磷酸鹽緩沖液:稱取34.0g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于500mL蒸餾水中，用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至100mL后貯存于冰箱，為貯存液；取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至100mL,分裝10ml于250ml錐形瓶和9ml于玻璃試管中，121°C高壓滅菌25min，為稀釋液；
[0026](3)將待測樣品加入到磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行稀釋:稱取1.0Og黃原膠成品(或0.25g黃原膠半成品)，加入盛有10mL磷酸鹽稀釋液的已滅菌的250mL錐形瓶中，封口，靜置浸泡1-4小時(shí)(如浸泡時(shí)間超過2小時(shí)必須放入2-5°C冰箱中)，置于搖床上震蕩搖勻(成品約30min，半成品約30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的樣品勻液；
[0027](4)制備樣品平板:分別吸取2ml樣品勻液加入到兩個無菌平皿中，從恒溫保溫箱中取46-48°C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基15ml-20ml傾注到平皿中，并轉(zhuǎn)動兩平皿使其混合均勻。同時(shí)做兩個空白平板進(jìn)行對照；
[0028](5)將平板置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng):瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，置于36 °C ±1V恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h 土 2h ；
[0029](6)對平板上的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù):以菌落形成單位(colony-forming unites, CFU)進(jìn)行表示兩平板的菌落數(shù)NI和N2，菌落計(jì)數(shù)時(shí)采用兩個平板的平均數(shù)；
[0030](7)對菌落總數(shù)進(jìn)行計(jì)算:菌落總數(shù)的計(jì)算方法為TPC = (N1+N2) *稀釋倍數(shù)/2 ；
[0031](8)對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告。
[0032]所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，選取菌落數(shù)在30CFU-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)，低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的記錄為多不可計(jì)。
[0033]所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，其中一個平板上有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。
[0034]所述步驟￠)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個菌落計(jì)數(shù)。
[0035]所述步驟(8)中，在對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告時(shí)，按照以下方法形成報(bào)告:
[0036]a.菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告；
[0037]b.大于或等于100時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面用O代替?zhèn)€位數(shù)；
[0038]c.平板無菌落生長，則以小于I乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算；
[0039]d.若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延，進(jìn)行復(fù)檢；
[0040]e.若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效，進(jìn)行復(fù)檢；
[0041]f.以CFU/g為單位報(bào)告。
[0042]本發(fā)明的檢測方法解決了 GB/T 4789中黃原膠無法溶解的缺點(diǎn)，簡單易行，且更適合于企業(yè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際操作，在黃原膠膠體檢測方面具有較大的價(jià)值與進(jìn)步意義。
【權(quán)利要求】
1.一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述檢測方法如下: (1)制作平板計(jì)數(shù)瓊脂(platecount agar, PCA)培養(yǎng)基:將成分為胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖l.0g、瓊脂15.0g的培養(yǎng)基原料加入到100ml的蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)PH至7.0±0.2，然后分裝到錐形瓶，在121 °C下高壓滅菌25min，然后冷卻到460C _48°C后放置于恒溫干燥箱中保溫； (2)制作磷酸鹽緩沖液:稱取34.0g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于500mL蒸餾水中，用Imol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至100mL后貯存于冰箱，為貯存液；取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至100mL,分裝10ml于250ml錐形瓶和9ml于玻璃試管中，121 °C高壓滅菌25min，為稀釋液； (3)將待測樣品加入到磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行稀釋:稱取1.0Og黃原膠成品(或0.25g黃原膠半成品)，加入盛有10mL磷酸鹽稀釋液的已滅菌的250mL錐形瓶中，封口，靜置浸泡1-4小時(shí)(如浸泡時(shí)間超過2小時(shí)必須放入2-5°C冰箱中)，置于搖床上震蕩搖勻(成品約30min，半成品約30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的樣品勻液； (4)制備樣品平板:分別吸取2ml樣品勻液加入到兩個無菌平皿中，從恒溫保溫箱中取46-480C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基15ml-20ml傾注到平皿中，并轉(zhuǎn)動兩平皿使其混合均勻。同時(shí)做兩個空白平板進(jìn)行對照； (5)將平板置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng):瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，置于36°C土1°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h 土 2h ； (6)對平板上的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù):以菌落形成單位(colony-formingunites, CFU)進(jìn)行表示兩平板的菌落數(shù)NI和N2，菌落計(jì)數(shù)時(shí)采用兩個平板的平均數(shù)； (7)對菌落總數(shù)進(jìn)行計(jì)算:菌落總數(shù)的計(jì)算方法為TPC= (N1+N2)*稀釋倍數(shù)/2 ； (8)對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，選取菌落數(shù)在30CFU-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)，低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的記錄為多不可計(jì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，其中一個平板上有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述步驟(6)中，對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個菌落計(jì)數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃原膠及同類膠體微生物指標(biāo)的檢測方法，其特征是所述步驟(8)中，在對菌落總數(shù)進(jìn)行表達(dá)與形成報(bào)告時(shí)，按照以下方法形成報(bào)告: a.菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告； b.大于或等于100時(shí)，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面用O代替?zhèn)€位數(shù)； c.平板無菌落生長，則以小于I乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算； d.若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延，進(jìn)行復(fù)檢；e.若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效，進(jìn)行復(fù)檢；f.以CFU/g為單位報(bào)告。
【文檔編號】C12Q1/06GK104357540SQ201410504649
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】托建剛, 董金儒 申請人:鄂爾多斯市中軒生化有限公司