一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂及其應(yīng)用，所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、3.0g/L酵母粉、0.002g/L結(jié)晶紫、0.03g/L中性紅、15.0g/L瓊脂、3.0g/L磷酸氫二鉀、pH值為7.3-7.5；所述EC肉湯為每升EC肉湯中含有胰蛋白胨20.0g、乳糖5.0g、磷酸二氫鉀2.0g、氯化鈉5.0g、三號(hào)膽鹽1.5g、磷酸氫二鉀4.0g，其余為蒸餾水。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】-種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 世界上微生物間的多樣化和變異性及物種生境的生態(tài)復(fù)雜性，帶來了探討、了解 微生物的廣泛性、復(fù)雜性和長(zhǎng)久性。微生物的一個(gè)物種就是一個(gè)獨(dú)特的基因庫(kù)，微生物的新 陳代謝是錯(cuò)綜復(fù)雜的生命活動(dòng)，在長(zhǎng)期的生物進(jìn)化中，形成了一套完整統(tǒng)一的靈敏調(diào)節(jié)系 統(tǒng)，依靠這種調(diào)節(jié)系統(tǒng)，嚴(yán)格控制各種代謝活動(dòng)。有條不紊協(xié)調(diào)進(jìn)行并靈活適應(yīng)環(huán)境。不同 培養(yǎng)基，因培養(yǎng)基配方不同，影響其生長(zhǎng)和變異情況。
[0003] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培 養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在 均改制成粉末。
[0004] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。
[0005] 目前還不能完全從生化反應(yīng)的基本原理來推斷和計(jì)算出適合某一菌種的培養(yǎng)基 配方，只能用生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)等的基本理論，參照前人所使用的較適合某 一類菌種的經(jīng)驗(yàn)配方，再結(jié)合所用菌種和產(chǎn)品的特性，采用搖瓶、玻璃罐等小型發(fā)酵設(shè)備， 按照一定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)方法選擇出較為適合的培養(yǎng)基。
[0006] 培養(yǎng)基設(shè)計(jì)的基本步驟是：
[0007] 根據(jù)前人的經(jīng)驗(yàn)和培養(yǎng)基成分確定時(shí)一些必須考慮的問題，初步確定可能的培養(yǎng) 基成分
[0008] 通過單因子實(shí)驗(yàn)最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分
[0009] 當(dāng)培養(yǎng)基成分確定后，剩下的問題就是各成分最適的濃度，由于培養(yǎng)基成分很多， 為減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)常采用一些合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。這些實(shí)驗(yàn)往往基于多因子實(shí)驗(yàn)，包含均 勻設(shè)計(jì)、正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、響應(yīng)面分析等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂及其應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無(wú)機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對(duì)不 同的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽類、維生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑等諸類營(yíng)養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對(duì)培養(yǎng)基 的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0012] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0013] 一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、3. Og/L酵母粉、 0· 002g/L 結(jié)晶紫、0· 03g/L 中性紅、15. Og/L 瓊脂、3. Og/L 磷酸氫二鉀、pH 值為 7. 3-7. 5 ;
[0014] 在以上方案的基礎(chǔ)上所述EC肉湯為每升EC肉湯中含有胰蛋白胨20. 0g、乳糖 5. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、氯化鈉5. 0g、三號(hào)膽鹽1. 5g、磷酸氫二鉀4. 0g，其余為蒸餾水。
[0015] 本發(fā)明還公開了所述的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)。
[0016] 稱取本品41. 5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過2分鐘。取適宜稀釋 度樣品液lml，加入到無(wú)菌平皿中心，將冷至45±0. 5°C的VRBA10-15ml傾注于平皿中。小 心旋轉(zhuǎn)平皿將培養(yǎng)基與樣液充分混勻。凝固后，再加3-4mlVRBA覆蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)平板， 置于36±1°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過3小時(shí)。
[0017] 本發(fā)明的有益效果：
[0018] 1、培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；
[0019] 2、菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；
[0020] 3、便于觀察，分析。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 實(shí)施例1 :
[0022] -種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、3. 0g/L酵母粉、 0· 002g/L 結(jié)晶紫、0· 03g/L 中性紅、15. 0g/L 瓊脂、3. 0g/L 磷酸氫二鉀、pH 值為 7. 3-7. 5 ;
[0023] 在以上方案的基礎(chǔ)上所述EC肉湯為每升EC肉湯中含有胰蛋白胨20. 0g、乳糖 5. 0g、磷酸二氫鉀2. 0g、氯化鈉5. 0g、三號(hào)膽鹽1. 5g、磷酸氫二鉀4. 0g，其余為蒸餾水。
[0024] 本發(fā)明還公開了所述的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)。
[0025] 稱取本品41. 5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過2分鐘。取適宜稀釋 度樣品液lml，加入到無(wú)菌平皿中心，將冷至45±0. 5°C的VRBA10-15ml傾注于平皿中。小 心旋轉(zhuǎn)平皿將培養(yǎng)基與樣液充分混勻。凝固后，再加3-4mlVRBA覆蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)平板， 置于36±1°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過3小時(shí)。
[0026] 在 36 ±1°C 培養(yǎng) 18-24 小時(shí)
[0027]

【權(quán)利要求】
1. 一種結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括EC肉湯、3. Og/ L酵母粉、0. 002g/L結(jié)晶紫、0. 03g/L中性紅、15. Og/L瓊脂、3. Og/L磷酸氫二鉀、pH值為 7. 3-7. 5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，其特征在于所述EC肉湯為每升EC 肉湯中含有胰蛋白胨20. Og、乳糖5. Og、磷酸二氫鉀2. Og、氯化鈉5. Og、三號(hào)膽鹽1. 5g、磷酸 氫二鉀4. 0g，其余為蒸餾水。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂，其特征在于用于大腸菌群的固 體平板檢測(cè)。
【文檔編號(hào)】C12R1/19GK104232737SQ201410473026
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月16日
【發(fā)明者】丁兆年, 代立超 申請(qǐng)人:青島永通電梯工程有限公司