一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，該方法將中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis，編號10066)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis，編號10103)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus，編號6075)、產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis，編號31272)、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrsosporium，編號40719)，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑。該復(fù)合菌劑接種于污泥好氧堆肥初期，使堆體到達高溫期的時間提前4‐6天，堆肥周期縮短11‐14天，堆料含水率下降18％‐25％，堆體中總含氮量提高15％‐20％，提高了堆肥效果。
【專利說明】—種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑，特別涉及一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著我國城鎮(zhèn)化進程的加快，城市污水處理量不斷提高，污水處理技術(shù)已日漸成熟，伴隨而來的問題是如何處理處置污水處理廠處理污水時所產(chǎn)生的大量剩余污泥。目前我國剩余污泥的處理處置方法主要有干化焚燒、衛(wèi)生填埋、堆肥等。其中污泥堆肥技術(shù)通常是與城市垃圾、畜禽糞便、秸桿、木屑、粉煤灰等輔料混合后進行好氧堆肥，是一種積極有效的污泥資源化和無害化處理處置方式。傳統(tǒng)的污泥堆肥法均是單純利用堆料中土著的微生物進行自然發(fā)酵來完成，由于堆肥初期土著微生物量少，繁殖較慢，往往容易造成堆肥發(fā)酵周期長、產(chǎn)生臭味、肥效低等問題。因此，研究者們開始使用向污泥堆肥接種微生物功能菌劑來縮短發(fā)酵周期、促進堆肥快速腐熟和提高堆肥產(chǎn)品質(zhì)量。
[0003]如中國專利申請?zhí)枮?01010514582.7的說明書中公開了“利用堆肥復(fù)合菌劑進行污泥好氧堆肥的方法”，其中復(fù)合菌劑包含同復(fù)合菌劑A和復(fù)合菌劑B，在堆肥初期接種復(fù)合菌劑A能促進堆料中蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉等快速分解，使堆肥溫度提前達到發(fā)酵高溫期，在高溫期以覆蓋的形式在堆體表面接種一層厚度為0.1m的復(fù)合菌種B降解纖維素和半纖維素來達到堆肥效果，但是這種采用不同時期用不同的方式進行接種，需要把握好接種時機，而且操作要求嚴格精細。
[0004]中國專利申請?zhí)枮?00910113229.5的說明書公開了 “一種堆肥發(fā)酵復(fù)合菌劑的制備方法”，其利用了產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳酸菌、枯草芽孢桿菌三種菌種組成的復(fù)合菌種，接種堆肥后能夠強化堆肥中纖維素的降解，使降解質(zhì)量提升，但是堆肥需經(jīng)常翻堆，容易遭成堆體臭氣散發(fā)，氮元素損失嚴重，有機物喪失，且堆肥周期長達6周，肥效效果不盡理想等。因此，污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的研究開發(fā)還需要進行不斷的探索，以使污泥好氧堆肥中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟，縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的損失從而達到更好的堆肥處理效果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，將該方法得到復(fù)合菌劑應(yīng)用于污泥好氧堆肥，可使污泥好氧堆肥中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟，縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的損失從而達到更好的堆肥處理效果。
[0006]本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題:
[0007]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，采用中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis，編號10066)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis,編號 10103)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus,編號6075)、產(chǎn)I元假絲酵母(Candida utilis,編號31272)、黃抱原毛平革菌(Phanerochaetechrsosporium,編號40719),經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)
[0008]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，在配制復(fù)合菌劑時，將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序以菌液體積比為0.2 -1:0.2 -1:0.1 -1:0.2 -1:0.1 - 1.2混合后，接種至高溫滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的4% - 12%，靜置培養(yǎng)8 - 12d，培養(yǎng)溫度為30 - 35°C，當總活體微生物菌數(shù)達到lX109cuf/ml以上時，完成復(fù)合菌劑的制備。
[0009]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序優(yōu)選菌液體積比為0.8:0.5:0.5:0.6:0.2。
[0010]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述發(fā)酵培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:紅糖15g - 25g、蛋白胨0.5g - 2g、豆餅粉Ig - 3g、磷酸二氫鉀0.1g - 0.5g、氯化鈣0.1g - 0.5g、硫酸銨0.5g - 1.5g、硫酸鎂0.1g - 0.3g、硫酸亞鐵0.0lg - 0.02g、乙酸鈉0.3g - lg、碳酸氫鈉0.5g - 1.5g、蒸餾水1000ml，其pH值為7.0，發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0011]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述枯草芽孢桿菌菌液的制備是:
[0012]挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為18 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml, pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，pH值7.0 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0013]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述地衣芽孢桿菌菌液的制備是:
[0014]挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為18 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml,pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，其pH值7.0 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0015]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述嗜酸乳桿菌菌液的制備是:
[0016]挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為24 - 36h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為48 - 72小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、朽1檬酸氫二銨2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.lg、硫酸猛0.05g、碳酸I丐10g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8 - 6.8 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、朽1檬酸氫二銨2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.lg、硫酸猛0.05g、碳酸I丐10g、蒸懼水1000ml，其pH值5.8-6.8 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0017]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述產(chǎn)朊假絲酵母菌液的制備是:
[0018]挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為16 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 - 48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:12brx1.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g、瓊脂15g，其pH值為自然；所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:12brx1.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g,其pH值為自然；固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0019]本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述黃孢原毛平革菌菌液的制備是:
[0020]挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 56h，然后將長出的斜面菌絲接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 72h，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，其pH值5.0 -6.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖158，其？!1值5.0-6.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 °C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0021]上述涉及的酵母提取物是指標準的提取物。
[0022]本發(fā)明所用的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌能促進堆肥中纖維素快速降解，同時地衣芽孢桿菌能促進復(fù)合菌劑中嗜酸乳桿菌的生長繁殖；嗜酸乳桿菌能產(chǎn)生小分子有機酸中和堆體中的氨氣等堿性物質(zhì)，減少堆體臭味；黃孢原毛平革菌產(chǎn)生木質(zhì)素過氧化物酶、錳過氧化物酶從而能加快木質(zhì)素結(jié)構(gòu)分解。因此，在污泥好氧堆肥初期接種該復(fù)合菌劑，可使污泥好氧堆肥中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟，縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的損失從而達到更好的堆肥處理效果。
[0023]本發(fā)明方法制備的復(fù)合菌劑不僅限用于污泥好氧堆肥，還可用于餐廚垃圾、畜禽糞便、農(nóng)業(yè)廢棄物等堆肥。

【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明方法使用中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis,編號 10066)、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis,編號 10103)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus,編號6075)、產(chǎn)I元假絲酵母(Candida utilis,編號31272)、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrsosporium,編號40719)，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑。
[0025]所述復(fù)合菌劑中各菌種的制備方法如下:
[0026](I)枯草芽孢桿菌菌液的制備
[0027]挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為18 - 24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成。所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml,pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 °C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0028](2)地衣芽孢桿菌菌液的制備
[0029]挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 -30°C，培養(yǎng)時間為18-24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成。所述地衣芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml, pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 °C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0030](3)嗜酸乳桿菌菌液的制備
[0031]挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35 _40°C，培養(yǎng)時間為24 -36h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為48 -72小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成。所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、朽1檬酸氫二銨2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.lg、硫酸猛0.05g、碳酸I丐10g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8 -6.8 ;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0032](4)產(chǎn)朊假絲酵母菌液的制備
[0033]挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為16 - 24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成。所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混合制成:12brx1.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化隹丐0.02g、瓊脂15g，pH值為自然；所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0034](5)黃孢原毛平革菌菌液的制備
[0035]挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 56h。然后將長出的斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 72h，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成。所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混合制成:馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，pH值5.0 -6.0 ;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
[0036]以下是本發(fā)明產(chǎn)品復(fù)合菌劑的制備實例:
[0037]實施例1:
[0038]將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌液按體積比為0.2:0.2:0.1:0.2:0.1混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的12%，在30°C靜置培養(yǎng)12d，當發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物活體數(shù)能達到I X 19CUf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:紅糖15g、蛋白胨lg、豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.lg、氯化I丐0.lg、硫酸銨0.5g、硫酸鎂0.lg、硫酸亞鐵0.0lg、乙酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0039]實施例2:
[0040]將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌液按體積比0.4:0.3:0.1:0.4:0.4混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10%，在35°C靜置培養(yǎng)10d，當發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物活體數(shù)能達到I X 19CUf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:紅糖20g、蛋白胨1.5g、豆餅粉2g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鈣0.2g、硫酸銨0.5g、硫酸鎂0.2g、硫酸亞鐵0.02g、乙酸鈉0.5g、碳酸氫鈉lg、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0041]實施例3:
[0042]將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌液按體積比0.8:0.5:0.5:0.6:0.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的8%，在30°C靜置培養(yǎng)10d，當發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物活體數(shù)能達到I X 19CUf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:紅糖20g、蛋白胨1.5g、豆餅粉2g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈣0.lg、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.lg、硫酸亞鐵0.0lg、乙酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0043]此實施例為最優(yōu)實施例。
[0044]實施例4:
[0045]將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌液按體積比0.6:1:1:0.8:1.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的8%，在30°C靜置培養(yǎng)8d，當發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物活體數(shù)能達到I X 19CUf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:紅糖20g、蛋白胨1.5、豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.3g、氯化鈣0.3g、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.2g、硫酸亞鐵0.02g、乙酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0046]實施例5:
[0047]將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌液按體積比1:0.8:1:1:1.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的12%，在30°C靜置培養(yǎng)10d，當發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物活體數(shù)能達到I X 19CUf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:紅糖25g、蛋白胨2g、豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈣0.3g、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.3g、硫酸亞鐵0.02g、乙酸鈉lg、碳酸氫鈉1.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121°C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
[0048]上述實例產(chǎn)品復(fù)合菌劑在污泥好氧堆肥中的使用情況:
[0049]按上述實施例1 -5制備得到的復(fù)合菌劑，使用時以直接噴灑的方式按1:100 -200接入污泥堆肥中，當堆體經(jīng)過發(fā)酵升溫后降溫，最后溫度與環(huán)境溫度相同時，完成污泥好氧堆肥。污泥堆肥前與輔料混拌均勻，調(diào)節(jié)污泥含水率為50% -60%，堆肥的長寬高度比為2m: lm:1m0所述輔料為城市垃圾、畜禽糞便、秸桿、木屑、粉煤灰中的兩種或兩種以上混合物。經(jīng)過與未接種復(fù)合菌劑的污泥好氧堆肥對比，堆體到達高溫期的時間提前了 4 - 6天，堆肥周期縮短了 11 -14天，堆料含水率下降了 18%-25%，堆體臭氣排放減少，堆料中總含氮量提高了 15% - 20%，污泥好氧堆肥得到了較好的效果。
【權(quán)利要求】
1.一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于:該方法將枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis, CICC 保藏，編號 10066、地衣芽抱桿菌 Bacillus licheniformis,CICC 保藏，編號 10103、嗜酸乳桿菌 Lactobacillus acidophilus, CICC 保藏，編號 6075、產(chǎn)朊假絲酵母Candida utilis, CICC保藏，編號31272、黃孢原毛平革菌Phanerochaetechrsosporium, CICC保藏,編號40719,經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于:配制復(fù)合菌劑時，將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序以菌液體積比為0.2 -1:0.2 -1:0.1 -1:0.2 -1:0.1 - 1.2混合后，接種至高溫滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的4% - 12%，靜置培養(yǎng)8 - 12d，培養(yǎng)溫度為30 - 35°C，當總活體微生物菌數(shù)達到lX109cuf/ml以上時，完成復(fù)合菌劑的制備。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于:所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序優(yōu)選菌液體積比為 0.8:0.5:0.5:0.6:0.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:紅糖15g _25g、蛋白胨0.5g _2g、豆餅粉Ig -3g、磷酸二氫鉀0.1g - 0.5g、氯化鈣0.1g - 0.5g、硫酸銨0.5g - 1.5g、硫酸鎂0.1g - 0.3g、硫酸亞鐵0.0lg - 0.02g、乙酸鈉0.3g - lg、碳酸氫鈉0.5g - 1.5g、蒸懼水1000ml,其pH值為7.0，發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121 °C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌菌液的制備是: 挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為.35 - 40°C，培養(yǎng)時間為18 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml, pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨.10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，pH值7.0 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述地衣芽孢桿菌菌液的制備是: 挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為18 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 -48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸懼水1000ml,pH值7.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖5g、牛肉膏l(xiāng)g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，其pH值7.0 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述嗜酸乳桿菌菌液的制備是: 挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為24 - 36h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35 - 40°C，培養(yǎng)時間為48 - 72小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、朽1檬酸氫二銨2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.lg、硫酸猛0.05g、碳酸I丐10g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8 - 6.8 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、朽1檬酸氫二銨2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.lg、硫酸猛0.05g、碳酸I丐10g、蒸懼水.1000ml，其pH值5.8 - 6.8 ;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻才使用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述產(chǎn)朊假絲酵母菌液的制備是: 挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為.25 - 30°C，培養(yǎng)時間為16 - 24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25 - 30°C，培養(yǎng)時間為24 - 48小時，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:12brx1.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g、瓊脂15g，其pH值為自然；所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:.12brx1.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g,其pH值為自然；固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121°C高溫滅菌30min后冷卻使用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述黃孢原毛平革菌菌液的制備是: 挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為.28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 56h，然后將長出的斜面菌絲接種到液體培養(yǎng)基中進行搖床振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28 - 32°C，培養(yǎng)時間為48 - 72h，當菌落數(shù)達到lX109cuf/ml時，菌液制備完成；所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，其pH值5.0 -6.0 ;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成:馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖158，其？!1值5.0-6.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 °C高溫滅菌30min后冷卻使用。
【文檔編號】C12R1/72GK104293694SQ201410444505
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月3日
【發(fā)明者】周永信, 張健, 宋海農(nóng), 徐國濤, 朱琦, 夏興良, 羅劍云, 蘇麗梅 申請人:廣西博世科環(huán)保科技股份有限公司