一種判斷nsclc患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒，該試劑盒包括能夠用于檢測STAT3基因中rs9912773和/或rs1294991位點的基因型的試劑。發(fā)明人通過對患者進行基因分型，分析STAT3基因SNP位點和吉非替尼對晚期非小細胞肺癌治療反應(yīng)性的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)根據(jù)rs9912773和/或rs1294991位點的基因型，可以判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼的治療反應(yīng)性。本發(fā)明的試劑盒的開發(fā)為晚期非小細胞肺癌患者治療方案的確定提供了一種可靠、靈敏的方式。
【專利說明】一種判斷NSCLC患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種判斷晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒以及SNP在制備該試劑盒中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]肺癌是最常見、死亡率最高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率與死亡率還在逐年增加。其中非小細胞肺癌(NSCLC)占整個肺癌的80%以上，并且大部分患者在診斷時已經(jīng)是晚期?；熢?jīng)是晚期非小細胞肺癌最主要的治療手段，但即便是最好的化療方案，目前治療的總有效率也不足50%，I年生存率僅40%左右。
[0003]靶向治療藥物的出現(xiàn)改變了非小細胞肺癌的治療現(xiàn)狀，顯著地提高了患者的生存期。其中吉非替尼(Gefitinib，ZD1839)是最早上市、目前臨床應(yīng)用最為廣泛的非小細胞肺癌靶向治療藥物，屬于一種選擇性、可逆性EGFR(表皮生長因子受體)酪氨酸激酶抑制劑，目前在包括中國在內(nèi)的許多國家已經(jīng)上市，商品名為易瑞沙(Iressa)。
[0004]吉非替尼治療非小細胞肺癌的客觀有效率差異很大，文獻報道從8.9-69%不等。其中在IDEALl臨床研究中，日本人的有效率為27%，而美國人則僅為12%。而在EAP研究中，中國人的有效率約為30%。以上均提示吉非替尼治療非小細胞肺癌的臨床療效存在著顯著的個體差異。由于晚期非小細胞肺癌患者生存期很有限，因此盡早選擇最可能有效的藥物治療對延長患者生存尤為重要。加之吉非替尼為代表的靶向治療藥物比較昂貴，價格是普通化療的數(shù)十倍，從衛(wèi)生經(jīng)濟學(xué)的角度也要求選擇最可能獲益的患者接受靶向治療。因此，尋找吉非替尼療效預(yù)測指標(biāo)，指導(dǎo)個體化靶向治療，是目前亟待解決的關(guān)鍵性臨床問題。
[0005]目前最常用于預(yù)測吉非替尼療效的生物標(biāo)記物為EGFR基因的突變，主要為外顯子19的堿基缺失(G2235-A2249缺失)和外顯子21的點突變(L858R)。一項針對ISEL國際多中心III期臨床研究的生物標(biāo)記物回顧性分析發(fā)現(xiàn)，存在EGFR基因突變的16例NSCLC患者接受吉非替尼治療后的有效率為37.5%，而EGFR基因野生型的116例患者吉非替尼的有效率僅為2.6%。但是EGFR基因突變作為吉非替尼療效預(yù)測的生物標(biāo)記物，存在一定的不足:①突變的檢測需要腫瘤組織，而大部分肺癌在初次診斷時已經(jīng)是晚期，失去手術(shù)獲得腫瘤標(biāo)本的機會，即便是少部分患者有可能活檢取得標(biāo)本，也會因為檢出率有限和活檢標(biāo)本量限制，難以進行突變檢測，目前臨床上能夠滿足突變檢測要求的患者比例少于20%(ISEL研究中約為17% );②基因突變受腫瘤異質(zhì)性的影響，同一患者在不同部位或者疾病不同階段獲得的腫瘤標(biāo)本，其突變檢測結(jié)果可能存在差異，因此檢測到的結(jié)果可能不能代表全身和全程的腫瘤特點突變檢測的流程復(fù)雜，儀器設(shè)備的要求高，一般實驗室難以開展，同時檢測成本也高，影響了其廣泛的臨床應(yīng)用。
[0006]基于以上EGFR基因突變的不足之處，開發(fā)更理想的療效預(yù)測生物標(biāo)記物及其檢測方法的臨床需求顯得更為迫切。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了 rs9912773和rsl294991位點與晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的相關(guān)性，并據(jù)此開發(fā)了能夠判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒，和rs9912773和/或rsl294991位點在制備晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的判斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0008]一方面，本發(fā)明提供了用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的兩個SNP位點，所述的SNP位點是rs9912773和rsl294991位點，當(dāng)rs9912773位點基因型為GG或GC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)rs9912773位點基因型為CC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好，患者治愈率高。當(dāng)rsl294991位點基因型為CC或CT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)rsl294991位點基因型為TT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好，患者治愈率高。
[0009]另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測SNP位點基因型的試劑，所述試劑可以為采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測SNP所需的試劑，只要其能夠檢測樣本中rs9912773和/或rs 1294991位點的基因型即可。
[0010]本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，可以用多種技術(shù)在DNA水平上體外檢測CETP基因序列的多態(tài)性位點。可以經(jīng)與用放射性標(biāo)記的反義RNA或DNA探針與擴增后的DNA序列雜交，以鑒別位點多態(tài)性。也可以基于已知的核苷酸順序的改變，合成正常的和具有特定多態(tài)性的PCR引物，在聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR反應(yīng))的底物中加入熒光標(biāo)記的核苷酸，根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物中有無熒光出現(xiàn)，確定在擴增所用的引物中有無堿基變化，從而檢測特定多態(tài)性。通過DNA直接測序可以直接揭示對照基因和攜帶具有特定多態(tài)性基因之間的序列差異。當(dāng)與PCR結(jié)合使用時，這種方法的靈敏性大大提高。各種DNA及DNA片段的核苷酸序列的測定也可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法。此外，核苷酸序列測定也可用商業(yè)測序試劑盒或自動測序儀等。常規(guī)的自動測序法用放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記來確定核酸序列。也可以采用限制性片段多態(tài)性分析(RFLP)來體外檢測CETP基因序列的多態(tài)性位點。
[0011]本發(fā)明提供的用于檢測SNP位點基因型的試劑，包括用于擴增SNP位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測SNP位點基因型的單堿基延伸引物。對于rs9912773來說，用于擴增rs9912773位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物 5’ -ACGTTGGATGCAGTTGATTGTTAAAGCTGCC-3’ ；反向引物 5’ -ACGTTGGATGGGTCTGTTTTGTGGGTTTTC-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’。對于rsl294991來說，用于擴增rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ -ACGTTGGATGATCATGGGCTATCCCCAACA-3 ’ ；反向引物 5 ’ -ACGTTGGATGGAGAATACACGCTTAGAGAG-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5’ -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3’。
[0012]又一方面，本發(fā)明提供了用于檢測SNP位點基因型的試劑盒，該試劑盒包括采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測SNP所需的試劑，只要其能夠檢測樣本中rs9912773和/或rs 1294991位點的基因型。
[0013] 本發(fā)明提供的用于檢測SNP位點基因型的試劑盒包括用于擴增SNP位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測SNP位點基因型的單堿基延伸引物。對于rs9912773來說，用于擴增rs9912773位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物 5’ -ACGTTGGATGCAGTTGATTGTTAAAGCTGCC-3’ ；反向引物 5’ -ACGTTGGATGGGTCTGTTTTGTGGGTTTTC-3’;所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’。對于rsl294991來說，用于擴增rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ -ACGTTGGATGATCATGGGCTATCCCCAACA-3 ’ ；反向引物 5 ’ -ACGTTGGATGGAGAATACACGCTTAGAGAG-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5’ -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3’。
[0014]本發(fā)明提供了用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒，該試劑盒的判斷原理是利用試劑盒中的試劑檢測rs9912773和/或rsl294991位點的基因型，根據(jù)所測患者的上述SNP位點的基因型判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性。當(dāng)rs9912773位點基因型為GG或GC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)rs9912773位點基因型為CC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好，患者治愈率高。當(dāng)rsl294991位點基因型為CC或CT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)rsl294991位點基因型為TT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好，患者治愈率高。
[0015]該試劑盒中包括采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測SNP基因型所需的試劑，只要其能夠檢測樣本中rs9912773和/或rsl294991位點的基因型即可。本發(fā)明提供的用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒包括用于擴增SNP位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測SNP位點基因型的單堿基延伸引物。對于rs9912773來說，用于擴增rs9912773位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物 5’ -ACGTTGGATGCAGTTGATTGTTAAAGCTGCC-3’ ；反向引物 5’ -ACGTTGGATGGGTCTGTTTTGTGGGTTTTC-3’;所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’。對于rsl294991來說，用于擴增rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ -ACGTTGGATGATCATGGGCTATCCCCAACA-3 ’ ；反向引物 5 ’ -ACGTTGGATGGAGAATACACGCTTAGAGAG-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5’ -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3’。
[0016]本發(fā)明還提供了 rs9912773和/或rsl294991位點在制備檢測SNP位點基因型的試劑中的應(yīng)用。所述試劑可以為采用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)檢測SNP基因型所需的試劑，只要其能夠檢測樣本中rs9912773和/或rsl294991位點的基因型即可。
[0017]本發(fā)明還提供了 rs9912773和/或rsl294991位點在制備檢測SNP位點基因型的試劑盒中的應(yīng)用。所述試劑盒中包括能夠檢測SNP位點基因型的試劑。在一個具體的實施方案中，所述試劑包括用于擴增SNP位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物和/或能夠使用MassARRAY Sequenom檢測SNP位點基因型的單堿基延伸引物。對于rs9912773來說，用于擴增rs9912773位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’-ACGTTGGATGCAGTTGATTGTTAAAGCTGCC-3’ ；反向引物 5’ -ACGTTGGATGGGTCTGTTTTGTGGGTTTTC-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’。對于 rsl294991 來說，用于擴增 rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ -ACGTTGGATGATCATGGGCTATCCCCAACA-3’ ；反向引物5’ -ACGTTGGATGGAGAATACACGCTTAGAGAG-3’ ；所述單堿基延伸引物序列為:5， -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3，。
[0018] 本發(fā)明還提供了 rs9912773和/或rsl294991位點在制備用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒中的應(yīng)用。所述試劑盒的判斷原理是利用試劑盒中的試劑檢測rs9912773和/或rsl294991位點的基因型，根據(jù)所測患者的上述SNP位點的基因型判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性。當(dāng)rs9912773位點基因型為GG或GC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)1^9912773位點基因型為CC時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好，患者治愈率高。當(dāng)rsl294991位點基因型為CC或CT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性差，患者治愈率低；當(dāng)rsl294991位點基因型為TT時，晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性好,患者治愈率高。
[0019]本發(fā)明還提供了用于檢測rs9912773和/或rsl294991位點基因型的試劑在制備用于檢測rs9912773和/或rsl294991位點基因型的試劑盒中的應(yīng)用。
[0020]本發(fā)明還提供了用于檢測rs9912773和/或rsl294991位點基因型的試劑在制備用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒中的應(yīng)用。
[0021]本發(fā)明優(yōu)點和有益效果如下:發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，STAT3基因單核苷酸多態(tài)(rs9912773和/或rsl294991)是一種可預(yù)測吉非替尼治療非小細胞肺癌療效的生物指標(biāo)。以STAT3 rs9912773和/或rsl294991基因多態(tài)檢測作為吉非替尼療效預(yù)測指標(biāo)，能在一定程度上克服現(xiàn)行預(yù)測指標(biāo)(EGFR基因突變)的部分缺點:①rs9912773和/或rsl294991檢測的標(biāo)本可以來源自任何正常或腫瘤組織的有核細胞，最簡便的方法是2ml外周血即可，因此幾乎所有患者均可以獲得檢測標(biāo)本；@rs9912773和/或rsl294991屬于遺傳變異，檢測結(jié)果不受腫瘤異質(zhì)性的影響，在患者一生中任何時候取得標(biāo)本，或者取自任何部位標(biāo)本，其檢測結(jié)果應(yīng)保持一致rs9912773和/或rsl294991檢測流程相對簡便、設(shè)備要求低、成本低廉，有利于臨床推廣。
[0022]具體的實施方式
[0023]下面通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明，應(yīng)注意，如無特別指出，本發(fā)明的實施例僅用于解釋本發(fā)明，并不意味著限定本發(fā)明的保護范圍。
[0024]1.研究對象:晚期非小細胞肺癌，86例。入選的患者(≥18歲)經(jīng)組織學(xué)或細胞學(xué)確證為晚期非小細胞肺癌，所有患者均提供了知情同意書。
[0025]2.用藥方法:吉非替尼250mg，每日一次，口服。用藥周期為I年。
[0026]3.STAT3基因SNP位點的選擇:在國際人類基因組單體型圖計劃提供的SNP公共數(shù)據(jù)庫(http://hapmap:ncb1.nlm.nih.gov/)中檢索STAT3基因，首先選取已知漢族人群中信息的SNP位點，再以其中的標(biāo)簽SNP作為進一步分型的候選多態(tài)位點，然后結(jié)合最小基因頻率(MAF)以及哈迪-溫伯格平衡P值(HWPval)等統(tǒng)計特征對候選標(biāo)簽SNP進行篩選以得出最佳的標(biāo)簽SNP。選取要求:MAF>0.1且HWPvalX).1。針對STAT3基因進行了基于標(biāo)簽SNP為主體的全面SNP位點選擇，并且將與之關(guān)聯(lián)的部分功能SNP替換進去，STAT3基因的候選SNP位點為rs9912773和rs 1294991。
[0027]4.實驗方法
[0028]4.1基因組DNA提取
[0029]采集病例研究對象2ml抗凝外周血標(biāo)本，采用酚-氯仿法提取基因組DNA。DNA標(biāo)本分離自外周血白細胞，簡述如下:
[0030](I)將收集的抗凝血標(biāo)本從_80°C取出后置于室溫，待溶化后將血轉(zhuǎn)入另一干凈的離心管，蓋嚴后于5，000 Xg離心15min ；
[0031](2)將離心后的血上層棄去，留血細胞,加入適量裂解緩沖液(含1mM pH為8.0的 Tri s-HCl, 0.1M EDTA、20y g/ml 胰 RNA 酶、0.5% SDS)，混勻，于 37°C 溫浴 lh，加蛋白酶Κ(100μ g/ml)混勻后37°C溫浴過夜；
[0032](3)溫浴結(jié)束后加入等體積經(jīng)Tris-HCl飽和過的平衡酚(pH7.4)充分混勻后于8, 000 X g 離心 15min ；
[0033](4)將上層水相移至另一離心管并加入等體積酚:氯仿(1:1)，充分混勻后8, 000 X g 離心 15min ；
[0034](5)將上層水相移入另一離心管中，加入10%體積的乙酸銨溶液(1M)，混勻后加入2倍體積的無水乙醇，混勻后放入-20°C。沉淀出的DNA經(jīng)75%乙醇洗滌兩次后，溶于適量TE緩沖液。使用分光光度計測定DNA濃度。
[0035]提取出的DNA通過分光光度法來測定其濃度，Sequenom技術(shù)要求DNA達以下標(biāo)準:濃度在lOng/μ I以上；0D260/280 = 1.8~2.0。DNA樣品置于1.5ml EP管中儲存于_80°C超低溫冰箱內(nèi)。進行SNP分型檢測時，樣品被編碼后分裝于96孔板內(nèi)。
[0036]4.2候選多態(tài)的基因分析
[0037]4.2.1 SNP 分型方法
[0038]根據(jù)NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫中相關(guān)的基因序列，設(shè)計PCR引物和單核苷酸擴展引物，采用高通量的MassARRAY時間飛行質(zhì)譜生物芯片系統(tǒng)(Sequenom)分析候選SNP的基因型。SNP分型由博淼生物科技(北京)有限公司協(xié)助完成。MassARRAY系統(tǒng)的工作原理是利用雜交探針與PCR產(chǎn)物結(jié)合后進行延伸反應(yīng)時不同等位基因延伸長度不同，通過質(zhì)譜飛行時間不同鑒別探針延伸長度來確定不同基因型，其基因分型準確率達到97%以上。MassARRAY系統(tǒng)是目前唯一采用質(zhì)譜法直接檢測SNP的設(shè)備，其反應(yīng)體系不依賴雜交，因此不受雜交錯配的干擾。該系統(tǒng)與TaqMan分型平臺不同，也不需要對引物或探針進行熒光標(biāo)記，避免了熒光物質(zhì)對基因分型過程的干擾。
[0039]為了質(zhì)量控制，基因分型檢測時均設(shè)平行重復(fù)樣品和陰性對照(不含DNA的空白)，平行樣品分析結(jié)果的重現(xiàn)率為100%。此外，每一樣品的疾病狀態(tài)對分型操作及分析人員保持盲態(tài)。
[0040]4.2.2 Sequenom 實驗操作步驟
[0041]4.2.2.1 引物設(shè)計
[0042]根據(jù)SNP位點序列信息,使用sequenom公司的引物設(shè)計軟件Assay design3.1,設(shè)計并合成PCR反應(yīng)和單堿基延伸引物(表1)。
[0043]表1各SNP位點PCR反應(yīng)弓丨物和延伸弓丨物
[0044]

【權(quán)利要求】
1.一種檢測用于判斷人晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的SNP marker基因型的試劑，其特征在于，所述SNP marker是rs9912773和/或rsl294991位點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑包括用于擴增所述rs9912773和/或rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑，其特征在于，所述用于擴增rs9912773位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ -ACGTTGGATGCAGTTGATTGTTAAAGCTGCC-3’;反向引物5’-ACGTTGGATGGGTCTGTTTTGTGGGTTTTC-3’;所述用于擴增rsl294991位點在內(nèi)的核苷酸序列的引物序列如下:正向引物5’ - ACGTTGGATGATCATGGGCTATCCCCAACA-3’；反向引物5’ -ACGTTGGATGGAGAATACACGCTTAGAGAG-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑，其特征在于，所述試劑還包括能夠使用MassARRAYSequenom檢測rs9912773和/或rsl294991位點基因型的單堿基延伸引物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑，其特征在于，對于rs9912773位點來說，所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’ ；對于rsl294991位點來說，所述單堿基延伸引物序列為:5’ -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3’。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑包括能夠使用MassARRAYSequenom檢測rs9912773和/或rsl294991位點基因型的單堿基延伸引物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑，其特征在于，對于rs9912773位點來說，所述單堿基延伸引物序列為:5’ -tttgTTGTAGAGCTCAGACCT-3’ ；對于rsl294991位點來說，所述單堿基延伸引物序列為:5’ -AGAGAGAATCTAGAAAGAAACA-3’。
8.—種檢測權(quán)利要求1所述的SNP marker基因型的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的試劑和/或權(quán)利要求6所述的試劑。
9.一種用于判斷晚期非小細胞肺癌患者對吉非替尼治療反應(yīng)性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的試劑和/或權(quán)利要求6所述的試劑。
10.權(quán)利要求1所述的S NPmarker在制備權(quán)利要求2所述的試劑和/或權(quán)利要求6所述的試劑、和/或權(quán)利要求8或9所述的試劑盒中的用途，權(quán)利要求2至7中任一項所述的試劑在制備權(quán)利要求8或9所述的試劑盒中的用途。
【文檔編號】C12Q1/68GK104131102SQ201410387024
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】馬飛, 寧力 申請人:馬飛