利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，首先雞糞降解，取雞糞稀釋液在40rpm～60rpm的轉(zhuǎn)速下降解得到低氮降解液，另取雞糞稀釋液在240rpm～260rpm的轉(zhuǎn)速下降解得到高氮降解液；然后將搖床上培養(yǎng)后得到的微藻液接種到培養(yǎng)罐中，微藻異養(yǎng)培養(yǎng)180～220h后完成微藻的異養(yǎng)培養(yǎng)；其中異養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中，前期向培養(yǎng)體系添加高氮降解液，后期向培養(yǎng)體系添加低氮降解液。在整個(gè)微藻培養(yǎng)過(guò)程中，向培養(yǎng)液中直接加入雞糞高、低氮降解液即可，無(wú)需另外加入氮源，因而整個(gè)過(guò)程效率高、節(jié)省能源和成本。
【專利說(shuō)明】利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種微藻的培養(yǎng)方法，具體涉及一種利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 世界原油產(chǎn)量持續(xù)減少，預(yù)計(jì)到2018年將下降至75億桶/年，僅相當(dāng)于1950年 原油產(chǎn)量。生物柴油是指由植物油、動(dòng)物脂肪以及微生物胞內(nèi)油脂與短鏈醇，經(jīng)酯交換反應(yīng) 得到的有機(jī)脂肪酸酯類物質(zhì)，作為可再生替代能源，環(huán)境友好性和可再生性使其具有很強(qiáng) 的競(jìng)爭(zhēng)力。微藻具有生長(zhǎng)周期短、速度快等特點(diǎn)，因而通過(guò)微藻培養(yǎng)合成生物油脂進(jìn)而制備 生物柴油是最有效途徑之一。
[0003] 微藻能夠利用自然界中的光能和無(wú)機(jī)碳源進(jìn)行光合培養(yǎng)，但是光合培養(yǎng)存在著生 長(zhǎng)速度慢、最終生物量低、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)的缺點(diǎn)。另外，微藻在不需要光照的條件下能夠利用 有機(jī)物作為碳源和氮源進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)，異養(yǎng)培養(yǎng)具有生長(zhǎng)速度快、最終生物量高的優(yōu)點(diǎn)，能 夠縮短周期。
[0004] 微藻生物柴油生產(chǎn)的最終目的是用最低的成本獲得最大的脂質(zhì)生產(chǎn)。與光合培養(yǎng) 相比，異養(yǎng)培養(yǎng)微藻主要考慮的是碳和氮來(lái)源的成本。
[0005] 例如中國(guó)專利文獻(xiàn)CN 102746992 A (申請(qǐng)?zhí)?01210244511. 9)公開了一種利用 污泥水解液異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，先取生活污水處理廠的剩余污泥，濃縮后超聲處理；將 超聲處理后的污泥在轉(zhuǎn)速為180r/min，溫度為35°C的條件下，進(jìn)行厭氧水解2至3天；向得 到的污泥水解液中加入微量元素和其他營(yíng)養(yǎng)元素，高壓蒸汽滅菌后得培養(yǎng)液；將培養(yǎng)液冷 卻至室溫后，將小球藻接種至培養(yǎng)液中，置于振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)150h?180h，完成小球藻 的培養(yǎng)。但是污泥降解液的含氮量不高，而且降解液中含有大量重金屬，抑制微藻生長(zhǎng)。
[0006] 家禽糞便（PM)富含營(yíng)養(yǎng)鹽，特別是氮，其容量可通過(guò)組合達(dá)到55. 7g/L。此外，除 了豐富的氮、鉀、磷外，微量元素如鎂、鈣、鐵、銅、鋅等也存于PM降解液中。因此PM是一種 有價(jià)值的主要營(yíng)養(yǎng)素的來(lái)源，如果營(yíng)養(yǎng)鹽能被高效率的吸收，那么對(duì)于微藻培養(yǎng)，PM絕對(duì)是 一個(gè)可開發(fā)的有效資源。
[0007] 雞糞（CM)作為一種典型的PM，富含有機(jī)氮、磷等元素。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN 103756908 (申請(qǐng)?zhí)?01410014303. 9)公開了一種微藻有機(jī)培養(yǎng)液的配制方法，將從養(yǎng)雞場(chǎng) 運(yùn)輸?shù)碾u糞，放置在操場(chǎng)上，在溫度為20°C?28°C的條件下曝曬8天，然后用篩子除去雞糞 中的石、沙、羽毛；將曝曬干燥后的雞糞與l〇〇°C的廢水按照1 : 10的比例混合，并充分?jǐn)?拌；將攪拌后得到的溶液浸泡3h，浸泡過(guò)程中對(duì)其進(jìn)行充分?jǐn)嚢?；浸泡后得到的培養(yǎng)液通 過(guò)24目的篩網(wǎng)過(guò)濾，濾網(wǎng)上方的溶質(zhì)與其他進(jìn)行浸泡的雞糞混合使用，得到的溶液為小球 藻培養(yǎng)液的原液；將過(guò)濾得到的培養(yǎng)液原液進(jìn)行稀釋，得到小球藻培養(yǎng)液；將10%?20%的 小球藻藻種與80%?90%小球藻培養(yǎng)液混合，進(jìn)行小球藻培養(yǎng)。雞糞中的碳、氮等營(yíng)養(yǎng)兀素 均以有機(jī)物的形式存在，上述對(duì)雞糞的處理方法不能將有機(jī)氮分解為無(wú)機(jī)氮如氨態(tài)氮和硝 態(tài)氮從而被微藻所吸收，因而雞糞的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率較低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻從而促進(jìn) 微藻合成生物油脂的方法。
[0009] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，包括以 下步驟： ①雞糞降解； 取養(yǎng)雞場(chǎng)的新鮮雞糞，用蒸餾水稀釋、攪勻得到雞糞稀釋液。
[0010] 取雞糞稀釋液轉(zhuǎn)移入三角瓶中，在三角瓶的瓶口用紗布封住瓶口，然后將三角瓶 分別轉(zhuǎn)移至搖床中，在40rpm?60rpm的轉(zhuǎn)速下降解4?6天后獲得降解后的物料，過(guò)濾得 到低氮降解液，低氮降解液殺菌后轉(zhuǎn)移至冰箱保存待用。
[0011] 另取雞糞稀釋液轉(zhuǎn)移入三角瓶中，在三角瓶的瓶口用紗布封住瓶口，然后將三角 瓶分別轉(zhuǎn)移至搖床中，在240rpm?260rpm的轉(zhuǎn)速下降解4?6天后獲得降解后的物料，過(guò) 濾得到高氮降解液，高氮降解液殺菌后轉(zhuǎn)移至冰箱保存待用。
[0012] ②微藻異養(yǎng)培養(yǎng)； 先對(duì)微藻種子進(jìn)行搖床培養(yǎng)，在三角瓶中裝入微藻培養(yǎng)液，從保貯斜面上取微藻細(xì)胞 接種到三角瓶中的對(duì)應(yīng)微藻的培養(yǎng)液中，然后將三角瓶放在搖床上，設(shè)置轉(zhuǎn)速140?160轉(zhuǎn) /分鐘，培養(yǎng)溫度28 °C?32 °C，培養(yǎng)65?75 h。
[0013] 然后將搖床上培養(yǎng)后得到的微藻液以8%?12%(v/v)接種量接種到培養(yǎng)罐中，培 養(yǎng)罐中已加入對(duì)應(yīng)微藻的培養(yǎng)液，微藻異養(yǎng)培養(yǎng)180?220h后完成微藻的異養(yǎng)培養(yǎng)；其 中異養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中，在異養(yǎng)培養(yǎng)開始至第1〇〇?120小時(shí)內(nèi)，以14?16 mL/L/Day向培養(yǎng) 體系添加步驟①準(zhǔn)備的高氮降解液，然后從第100?120小時(shí)直至培養(yǎng)期結(jié)束，以14?16 mL/L/Day向培養(yǎng)體系添加步驟①準(zhǔn)備的低氮降解液。
[0014] 上述步驟①的低氮降解液的總氮、硝氮、氨氮含量分別為0. 50?0. 8g/L、130? 260mg/L、300?360mg/L ;高氮降解液的總氮、硝氮、氨氮含量分別為1. 05?1. 5g/L、780? 910mg/L、70 ?120mg/L。
[0015] 上述步驟②微藻異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)體系的pH控制在5. 0?7. 0,溫度28?32 °C， 通氣速率〇· 8?L 2vvm，攪拌轉(zhuǎn)速180?220rpm。
[0016] 作為優(yōu)選的，培養(yǎng)體系的pH調(diào)節(jié)劑為硫酸或NaOH水溶液。
[0017] 作為優(yōu)選的，步驟①得到的低氮降解液在115°C?121°C下殺菌15?25分鐘，轉(zhuǎn) 移至冰箱：TC?6°C下保存待用；步驟①得到的高氮降解液在115°C?121°C下殺菌15? 25分鐘，轉(zhuǎn)移至冰箱3 °C?6 °C下保存待用。
[0018] 本發(fā)明具有積極的效果：（1)本發(fā)明在利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻時(shí)，首先在 不同條件下對(duì)雞糞進(jìn)行降解，獲得含氮量高的降解液和含氮量低的降解液；然后將微藻種 子接種到其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)液中后，在培養(yǎng)期前段即前1〇〇?120h向培養(yǎng)體系中添加高氮降解 液，此階段微藻細(xì)胞增長(zhǎng)迅速；在培養(yǎng)期的后段向培養(yǎng)體系中添加低氮降解液，此時(shí)的培養(yǎng) 體系利于微藻油脂合成；培養(yǎng)結(jié)束后微藻藻體量較高，并且培養(yǎng)得到的微藻的油脂含量高。
[0019] (2)由于本發(fā)明的雞糞降解液中除了豐富的氮、鉀、磷外，還含有微量元素如鎂、 鈣、鐵、銅、鋅等，在整個(gè)微藻培養(yǎng)過(guò)程中，向培養(yǎng)液中直接加入雞糞高、低氮降解液即可，無(wú) 需另外加入氮源，因而整個(gè)過(guò)程效率高、節(jié)省能源和成本。
[0020] (3)本發(fā)明培養(yǎng)微藻的方法工藝簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保，符合循環(huán)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的需要，具有 良好的工業(yè)應(yīng)用前景。

【具體實(shí)施方式】
[0021] (實(shí)施例1) 本實(shí)施例異養(yǎng)培養(yǎng)的微藻是小球藻/TroioiAecoiofes)，購(gòu)買自中國(guó)科學(xué)院 典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)淡水藻種庫(kù)，保藏編號(hào)為FACHB-3。
[0022] 本實(shí)施例的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法包括以下步驟： ①雞糞降解。
[0023] 首選對(duì)雞糞降解的條件進(jìn)行篩選。
[0024] 取養(yǎng)雞場(chǎng)的新鮮雞糞300mL，該雞糞的含水率為70%?75%，向其中加入同體積即 300mL的蒸餾水稀釋，攪勻后的雞糞稀釋液分別裝入6個(gè)三角瓶中，每個(gè)三角瓶中所裝的稀 釋后的雞糞體積為30mL?50mL，本實(shí)施例中每瓶所裝物料的體積為30mL。
[0025] 在每個(gè)三角瓶的瓶口用紗布封住瓶口，然后將各個(gè)三角瓶分別轉(zhuǎn)移至搖床中，分 別在50印111、100印111、150印111、200印111、250印111、及300印1]1的轉(zhuǎn)速下降解4?6天(本實(shí)施例中 為5天)后獲得6份降解后的物料，過(guò)濾得到6份降解液，每份降解液在121°C下殺菌20分 鐘，轉(zhuǎn)移至冰箱4°C下保存。
[0026] 分別測(cè)定上述6份降解液中氨氮（NH4-N)、硝氮（Ν03-Ν)和總氮（TN)含量，選擇其 中總氮含量最高的降解液和總氮含量最低的降解液作為本實(shí)施例微藻培養(yǎng)使用的降解液。
[0027] 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)搖床轉(zhuǎn)速為50rpm的條件下獲得的降解液的總氮含量最低，其總氮、硝 氮、氨氮含量分別為〇· 56?0· 64g/L、140?180mg/L、330?360mg/L，將搖床轉(zhuǎn)速50rpm作 為低氮雞糞降解液的降解條件。
[0028] 搖床轉(zhuǎn)速為250rpm的條件下獲得的降解液的總氮含量最高，其總氮、硝氮、氨氮 含量分別為1. 18?1. 34g/L、830?860mg/L、110?120mg/L，將搖床轉(zhuǎn)速250rpm作為高 氮雞糞降解液的降解條件。
[0029] 確定上述降解條件后，雞糞降解時(shí)： 取養(yǎng)雞場(chǎng)的新鮮雞糞600mL，向其中加入同體積即600mL的蒸餾水稀釋，攪勻后分別裝 入2個(gè)三角瓶中，每個(gè)三角瓶中所裝的稀釋后的雞糞體積為100mL ;在每個(gè)三角瓶的瓶口用 紗布封住瓶口，然后將各個(gè)三角瓶分別轉(zhuǎn)移至搖床中，分別在50rpm和250rpm的轉(zhuǎn)速下降 解5天后獲得2份降解后的物料，過(guò)濾得到2份降解液，每份降解液在121°C下殺菌20分 鐘，轉(zhuǎn)移至冰箱4°C下保存待用。
[0030] 在50rpm的轉(zhuǎn)速下降解獲得的降解液為低氮降解液，在250rpm的轉(zhuǎn)速下降解獲得 的降解液為高氮降解液。
[0031] ②微藻異養(yǎng)培養(yǎng)。
[0032] 先對(duì)小球藻種子進(jìn)行搖床培養(yǎng)：準(zhǔn)備5至10個(gè)250mL的三角瓶，在每個(gè)250mL的 三角瓶中裝入50mL小球藻培養(yǎng)液，從保貯斜面上取一定量小球藻細(xì)胞接種到各個(gè)三角瓶 中的培養(yǎng)液中，然后將各個(gè)三角瓶放在搖床上，設(shè)置轉(zhuǎn)速140?160rpm，培養(yǎng)溫度28°C? 32°C，培養(yǎng) 65h ?75 h。
[0033] 所述小球藻培養(yǎng)液中除Bold' s basal media (BBM)培養(yǎng)基外，還包括下列物質(zhì) (g/L):葡萄糖10.0,酵母粉2.0,甘氨酸1.0。
[0034] BBM 培養(yǎng)基中的主要物質(zhì)為（g/L) : NaN03 0· 25，MgS04. 7H20 0.075, NaCl 0· 025，Κ2ΗΡ04· 3H20 0· 075，ΚΗ2Ρ04 0· 175，CaCl2. 2H20 0· 025，微量物質(zhì)為（l(T3g/L): ZnS04.7H20 8.82，MnCl2.4H20 1.44, M〇03 0.71，CuS04.5H201. 57，C〇(N03)2.6H20 0.49， H3B03 11. 42, EDTA 50.0, KOH 31.0，F(xiàn)eS04.7H20 4.98。
[0035] 然后將搖床上培養(yǎng)后得到的小球藻液以8%?12%(v/v)接種量接種到5L的培養(yǎng) 罐中，培養(yǎng)罐中小球藻培養(yǎng)液體積為2. 5?3. 5L,微藻異養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)體系的pH控制 在5. 0?7. 0,溫度28?32°C，通氣速率0. 8?1. 2vvm，攪拌轉(zhuǎn)速180?220rpm，培養(yǎng)時(shí)間 180?220h (本實(shí)施例為200h)。
[0036] 異養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中，在異養(yǎng)培養(yǎng)開始至第100?120小時(shí)內(nèi)，以14?16 mL/L/Day 向培養(yǎng)體系添加高氮降解液，即每天按照培養(yǎng)罐中每1L液體體積添加14?16 mL降解液 的量添加；然后從第100?120小時(shí)直至培養(yǎng)期結(jié)束，以14?16 mL/L/Day向培養(yǎng)體系添 加低氮降解液。
[0037] 培養(yǎng)體系的pH調(diào)節(jié)劑為4M?6M (本實(shí)施例中為5M)的硫酸或NaOH水溶液。
[0038] 培養(yǎng)結(jié)束檢測(cè)小球藻的藻體量為7. 47?7. 68g/L，油脂濃度為4. 56?4. 73 g/ L〇
[0039] 若不向培養(yǎng)體系加入雞糞降解液，僅使用小球藻培養(yǎng)液進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)，按照本實(shí) 施例步驟②的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)結(jié)束獲得的小球藻的藻體量為5. 73?6. 12g/L，油脂濃度為 2. 83 ?3. 09 g/L。
[0040] 可見(jiàn)本實(shí)施例通過(guò)向培養(yǎng)體系添加雞糞降解液，并且在不同的培養(yǎng)階段添加不同 含氮量的降解液，使得培養(yǎng)結(jié)束后微藻藻體量較高，并且培養(yǎng)得到的微藻的油脂含量高。
[0041] (實(shí)施例2) 本實(shí)施例的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法其余與實(shí)施例1相同，不同之處在 于： 步驟②中所培養(yǎng)的微藻為角刺藻(CXaeiocerios· gracilis)。培養(yǎng)時(shí)所用的培養(yǎng)液為角 刺藻培養(yǎng)液。異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間220h。
[0042] 培養(yǎng)結(jié)束后檢測(cè)角刺藻（CXaeiocerias graci/is)的藻體量為3. 34?3. 67g/L, 油脂濃度為1. 13?1. 25 g/L。
[0043] 若不向培養(yǎng)體系加入雞糞降解液，按照本實(shí)施例步驟②的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)結(jié)束獲 得的角刺藻的藻體量為2. 34?2. 56g/L，油脂濃度為0. 61?0. 72 g/L。
[0044] (實(shí)施例3) 本實(shí)施例的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法其余與實(shí)施例1相同，不同之處在 于： 步驟②中所培養(yǎng)的微藻為微藻琴式菱形藻（Psammodictyon panduriforme)。培養(yǎng)時(shí)所 用的培養(yǎng)液為微藻琴式菱形藻培養(yǎng)液。異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間190h。
[0045] 培養(yǎng)結(jié)束后檢測(cè)微藻琴式菱形藻的藻體量為0.82 g/L?0.96g/L，油脂濃度為 0· 46 ?0· 52 g/L。
[0046] 若不向培養(yǎng)體系加入雞糞降解液，按照本實(shí)施例步驟②的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)結(jié)束獲 得的微藻琴式菱形藻的藻體量為0. 55?0. 62g/L，油脂濃度為0. 23?0. 28g/L。
[0047] (實(shí)施例4) 本實(shí)施例的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法其余與實(shí)施例1相同，不同之處在 于： 步驟①中將6個(gè)三角瓶分別在40rpm、90rpm、140rpm、190rpm、240rpm、及290rpm的轉(zhuǎn)速 下降解4?6天(本實(shí)施例中為5天）后獲得6份降解后的物料，過(guò)濾得到6份降解液。分 別測(cè)定上述6份降解液中氨氮（NH4-N)、硝氮（Ν0 3-Ν)和總氮（TN)含量，40rpm的條件下獲 得的降解液的總氮含量最低，將搖床轉(zhuǎn)速40rpm作為低氮雞糞降解液的降解條件；240rpm 的條件下獲得的降解液的總氮含量最高，將搖床轉(zhuǎn)速240rpm作為高氮雞糞降解液的降解 條件。
[0048] 然后分別在40rpm和240rpm的轉(zhuǎn)速下降解6天后獲得2份降解液，在40rpm的 轉(zhuǎn)速下降解獲得的降解液為低氮降解液，其總氮、硝氮、氨氮含量分別為〇. 51?0. 57g/L、 132 ?148mg/L、305 ?313mg/L。
[0049] 在240rpm的轉(zhuǎn)速下降解獲得的降解液為高氮降解液，其總氮、硝氮、氨氮含量分 別為 1. 09 ?1. 21g/L、780 ?820mg/L、90 ?100mg/L。
[0050] 步驟②培養(yǎng)結(jié)束后檢測(cè)小球藻的藻體量為7. 32?7. 53g/L，油脂濃度為4. 28? 4.49 g/L〇
[0051] 若不向培養(yǎng)體系加入雞糞降解液，按照本實(shí)施例步驟②的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)結(jié)束獲 得的小球藻的藻體量為5. 73?6. 12g/L，油脂濃度為2. 83?3. 09 g/L。
[0052] (實(shí)施例5) 本實(shí)施例的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法其余與實(shí)施例1相同，不同之處在 于： 步驟@中將6個(gè)三角瓶分別在60印111、110印111、160印111、210印111、260印111、及310印1]1的轉(zhuǎn) 速下降解4?6天(本實(shí)施例中為5天)后獲得6份降解后的物料，過(guò)濾得到6份降解液。分 別測(cè)定上述6份降解液中氨氮（NH 4-N)、硝氮（Ν03-Ν)和總氮（TN)含量，60rpm的條件下獲 得的降解液的總氮含量最低，將搖床轉(zhuǎn)速60rpm作為低氮雞糞降解液的降解條件；260rpm 的條件下獲得的降解液的總氮含量最高，將搖床轉(zhuǎn)速260rpm作為高氮雞糞降解液的降解 條件。
[0053] 然后分別在60rpm和260rpm的轉(zhuǎn)速下降解6天后獲得2份降解液，在60rpm的 轉(zhuǎn)速下降解獲得的降解液為低氮降解液，其總氮、硝氮、氨氮含量分別為〇. 65?0. 76g/L、 240 ?260mg/L、320 ?350mg/L。
[0054] 在260rpm的轉(zhuǎn)速下降解獲得的降解液為高氮降解液，其總氮、硝氮、氨氮含量分 別為 1. 21 ?1. 49g/L、870 ?910mg/L、70 ?90mg/L。
[0055] 步驟②培養(yǎng)結(jié)束后檢測(cè)小球藻的藻體量為7. 51?7. 72g/L，油脂濃度為4. 49? 4. 68 g/L〇
[0056] 若不向培養(yǎng)體系加入雞糞降解液，按照本實(shí)施例步驟②的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)結(jié)束獲 得的小球藻的藻體量為5. 73?6. 12g/L，油脂濃度為2. 83?3. 09 g/L。
【權(quán)利要求】
1. 一種利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，其特征在于包括以下步驟： ① 雞糞降解； 取養(yǎng)雞場(chǎng)的新鮮雞糞，用蒸餾水稀釋、攪勻得到雞糞稀釋液； 取雞糞稀釋液轉(zhuǎn)移入三角瓶中，在三角瓶的瓶口用紗布封住瓶口，然后將三角瓶分別 轉(zhuǎn)移至搖床中，在40rpm?60rpm的轉(zhuǎn)速下降解4?6天后獲得降解后的物料，過(guò)濾得到低 氮降解液，低氮降解液殺菌后轉(zhuǎn)移至冰箱保存待用； 另取雞糞稀釋液轉(zhuǎn)移入三角瓶中，在三角瓶的瓶口用紗布封住瓶口，然后將三角瓶分 別轉(zhuǎn)移至搖床中，在240rpm?260rpm的轉(zhuǎn)速下降解4?6天后獲得降解后的物料，過(guò)濾得 到高氮降解液，高氮降解液殺菌后轉(zhuǎn)移至冰箱保存待用； ② 微藻異養(yǎng)培養(yǎng)； 先對(duì)微藻種子進(jìn)行搖床培養(yǎng)，在三角瓶中裝入微藻培養(yǎng)液，從保貯斜面上取微藻細(xì)胞 接種到三角瓶中的對(duì)應(yīng)微藻的培養(yǎng)液中，然后將三角瓶放在搖床上，設(shè)置轉(zhuǎn)速140?160轉(zhuǎn) /分鐘，培養(yǎng)溫度28°C?32°C，培養(yǎng)65?75 h ; 然后將搖床上培養(yǎng)后得到的微藻液以8%?12%(v/v)接種量接種到培養(yǎng)罐中，培養(yǎng)罐 中已加入對(duì)應(yīng)微藻的培養(yǎng)液，微藻異養(yǎng)培養(yǎng)180?220h后完成微藻的異養(yǎng)培養(yǎng)；其中異養(yǎng) 培養(yǎng)過(guò)程中，在異養(yǎng)培養(yǎng)開始至第100?120小時(shí)內(nèi)，以14?16 mL/L/Day向培養(yǎng)體系添 加步驟①準(zhǔn)備的高氮降解液，然后從第100?120小時(shí)直至培養(yǎng)期結(jié)束，以14?16 mL/L/ Day向培養(yǎng)體系添加步驟①準(zhǔn)備的低氮降解液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，其特征在于：步驟① 的低氮降解液的總氮、硝氮、氨氮含量分別為〇. 50?0. 8g/L、130?260mg/L、300?360mg/ L ;高氮降解液的總氮、硝氮、氨氮含量分別為1. 05?1. 5g/L、780?910mg/L、70?120mg/ L〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，其特征在于：步驟 ②微藻異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)體系的pH控制在5. 0?7. 0,溫度28?32°C，通氣速率0. 8? 1. 2vvm，攬祥轉(zhuǎn)速 180 ?220rpm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，其特征在于：培養(yǎng)體 系的pH調(diào)節(jié)劑為硫酸或NaOH水溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用雞糞降解液異養(yǎng)培養(yǎng)微藻的方法，其特征在于：步驟① 得到的低氮降解液在115°C?121°C下殺菌15?25分鐘，轉(zhuǎn)移至冰箱3°C?6°C下保存待 用；步驟①得到的高氮降解液在115°C?121°C下殺菌15?25分鐘，轉(zhuǎn)移至冰箱3°C?6°C 下保存待用。
【文檔編號(hào)】C12P7/64GK104152356SQ201410366807
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】梁國(guó)斌, 汪斌, 劉維平 申請(qǐng)人:江蘇理工學(xué)院