優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中e1和e2組分比例的方法
【專利摘要】優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中E1和E2組分比例的方法，步驟如下：a、斜面培養(yǎng)；b、種子液培養(yǎng)；c、發(fā)酵培養(yǎng)；d、發(fā)酵液中E1和E2組分檢測。本發(fā)明解決了多粘菌素E發(fā)酵液中E1和E2組分比例不穩(wěn)定性和不可控性的問題。
【專利說明】優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中E1和E2組分比例的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多粘菌素E是由多粘類芽胞桿菌產(chǎn)生的，由多種氨基酸和脂肪酸組成的一種堿性多肽類抗生素，多粘菌素E對革蘭氏陰性菌的作用最強，無論生長期還是靜止期的細胞均能很快被殺死，它可以治療由志賀氏痢疾菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌屬和普通變形桿菌引起的感染，并對霍亂弧菌、鼠疫桿菌等也有很好的作用。由于多粘菌素E具有良好的抗菌活力和高效，低毒，殘留少的特性，可用于飼料添加劑，促進禽畜生長和提高飼料利用率，并且可以防止飼料大規(guī)模生產(chǎn)中常出現(xiàn)的由大腸埃希氏菌和沙門氏菌污染引起的疾病。
[0003]多粘菌素E主要成分為多粘菌素El和E2，多粘菌素E主要的獲得方法就是發(fā)酵法，而多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分比例的不穩(wěn)定性和不可控性一直是困擾多粘菌素E發(fā)酵行業(yè)的一個問題，因此有必要發(fā)明一種實施簡單，工藝可行的方法來解決這一問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是解決多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分比例的不穩(wěn)定性和不可控性的問題。
[0005]本發(fā)明為實現(xiàn)其目的采用的技術(shù)方案是:
[0006]優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，包括以下操作步驟:
[0007]a、斜面培養(yǎng):將多粘菌素生產(chǎn)菌株砂土孢子接種于斜面培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%的條件下培養(yǎng)48_72h ；
[0008]b、種子液培養(yǎng):挖取2-5cm2步驟a制備的斜面孢子接種于種瓶培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)24_26h ；
[0009]c、發(fā)酵培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)成熟的種子液按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)48_72h ;在發(fā)酵培養(yǎng)24h-32h按不同配比加入纈氨酸和異亮氨酸繼續(xù)培養(yǎng)；
[0010]d、發(fā)酵液中El和E2組分檢測:將步驟c培養(yǎng)48_72h后得到的多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分的含量進行檢測。
[0011]步驟a中所用的斜面培養(yǎng)基成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，葡萄糖1% -1.5 %、硫酸銨1% -1.5 %、檸檬酸鈉1% -1.5 %、磷酸二氫鉀1% -1.5 %、硫酸鎂0.12% -1.13%、瓊脂 2% -2.5%o
[0012]步驟b中所用的種子液培養(yǎng)基成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，葡萄糖
2.0% -2.5 %、蛋白胨 1.5% -2.0 %、氯化鈉 0.2% -0.3 %、碳酸鈣 0.4 % -0.5 %、泡敵0.04% -0.05%。[0013]步驟c中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，玉米淀粉
6.0-8.0 %、葡萄糖 1.0% -1.5 %、蛋白胨 1.5% -2.0 %、碳酸鈣 0.4 % -0.5 %、氯化鈉
0.1% -0.2%、硫酸銨 0.1% -0.2%、磷酸二氫鉀 1% -1.5%、泡敵 0.04% -0.05%。
[0014]步驟c中不同纈氨酸和異亮氨酸的配比包括以下三種情況:
[0015]1、E2組分:E1組分≥2:1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.8mg/mL-Ι.6mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0mg/mL-0.lmg/mL。
[0016]IK2:1>E2組分:E1組分>1: 1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.3mg/mL-0.8mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.lmg/mL-Ο.3mg/mL。
[0017]II1、E2組分:E1組分≤1:1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0mg/mL-Ι.2mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.3mg/mL-l.5mg/mL。
[0018]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明研究的這種優(yōu)化多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分的方法解決了多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分比例不穩(wěn)定性和不可控性的問題，而且本發(fā)明具有方法簡單、實用性強、重現(xiàn)性好的優(yōu)點?！揪唧w實施方式】
[0019]本發(fā)明的目的是解決多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分的不穩(wěn)定性和比例的不可控性的問題，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。 [0020]具體實施例1，E2組分:E1組分≥2:1的情況
[0021]a、斜面培養(yǎng):將多粘菌素生產(chǎn)菌株砂土孢子接種于斜面培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%的條件下培養(yǎng)60h ；
[0022]b、種子液培養(yǎng):挖取2-5cm2步驟a制備的斜面孢子接種于種瓶培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)25h ；
[0023]c、發(fā)酵培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)成熟的種子液按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，每個種子做4個平行樣，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)60h ;發(fā)酵25h后加入纈氨酸使其在發(fā)酵培養(yǎng)基中的終濃度為0.954mg/mL,同時加入異亮氨酸使其在發(fā)酵培養(yǎng)基中的終濃度為0.015mg/mL繼續(xù)震蕩培養(yǎng)；
[0024]d、發(fā)酵液中El和E2組分檢測:將步驟c培養(yǎng)60h后得到的多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分的含量進行檢測。
[0025]檢測結(jié)果見表1
[0026]表1 60h發(fā)酵樣品檢測結(jié)果
[0027]
【權(quán)利要求】
1.優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，其特征在于，包括以下操作步驟: a、 斜面培養(yǎng):將多粘菌素生產(chǎn)菌株砂土孢子接種于斜面培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%的條件下培養(yǎng)48-72h ； b、種子液培養(yǎng):挖取2-5cm2步驟a制備的斜面孢子接種于種瓶培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)24_26h ； C、發(fā)酵培養(yǎng):將步驟b培養(yǎng)成熟的種子液按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于溫度28-30°C、濕度30% -60%、轉(zhuǎn)速180_220rpm的條件下震蕩培養(yǎng)48_72h ;在發(fā)酵培養(yǎng)24h-32h按不同配比加入纈氨酸和異亮氨酸繼續(xù)培養(yǎng)； d、發(fā)酵液中El和E2組分檢測:將步驟c培養(yǎng)48-72h后得到的多粘菌素E發(fā)酵液中El和E2組分的含量進行檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，其特征在于，步驟a中所用的斜面培養(yǎng)基成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，葡萄糖I % -1.5 %、硫酸銨1% -1.5%、檸檬酸鈉1% -1.5%、磷酸二氫鉀1% -1.5%、硫酸鎂0.12% -1.13%,瓊脂 2% -2.5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，其特征在于，步驟b中所用的種子液培養(yǎng)基成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，葡萄糖2.0% -2.5 %、蛋白胨 1.5% -2.0 %、氯化鈉 0.2% -0.3 %、碳酸鈣 0.4% -0.5 %、泡敵0.04% -0.05%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，其特征在于，步驟c中所用的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分及其含量為:以質(zhì)量百分比計，玉米淀粉6.0-8.0%、葡萄糖L0% -1.5%、蛋白胨L 5% -2.0 %、碳酸鈣0.4 % _0.5%、氯化鈉0.1% -0.2%、硫酸銨 0.1% -0.2%、磷酸二氫鉀 1% -1.5%、泡敵 0.04% -0.05%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的優(yōu)化多粘芽孢桿菌發(fā)酵液中El和E2組分比例的方法，其特征在于，步驟c中纈氨酸和異亮氨酸的配比包括以下三種情況: I、E2組分:E1組分≥2:1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.8mg/mL-l.6mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0mg/mL-0.lmg/mL。 Π、2:1>Ε2組分:E1組分>1:1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.3mg/mL-Ο.8mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.lmg/mL-Ο.3mg/mL。 II1、E2組分:E1組分≤1:1，添加纈氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0mg/mL-l.2mg/mL,同時添加異亮氨酸使其在發(fā)酵液中的終濃度為:0.3mg/mL-l.5mg/mL。
【文檔編號】C12P21/04GK103993059SQ201410230742
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月28日
【發(fā)明者】賈曉樂 申請人:河北圣雪大成制藥有限責任公司