一種改進(jìn)的氨芐西林的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，提供了一種制備氨芐西林的方法以及該方法獲得的產(chǎn)品，其包括：1)在0℃～30℃條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中,在pH值為5.5～7.5，溫度為10℃～30℃下進(jìn)行反應(yīng)；2)將步驟1)所得產(chǎn)物，用酸調(diào)至溶液澄清，保持pH值為0.5～2.0，溫度為10℃-30℃；3)將步驟2)所得溶液，降溫至12℃～15℃，然后調(diào)節(jié)pH至3.00～3.50，再降溫至5℃～6℃、pH值維持在3.50；然后調(diào)pH為4.9～5.0降溫到1℃～2℃保持，即得氨芐西林結(jié)晶。本發(fā)明大幅地提升了氨芐西林產(chǎn)品的收率和質(zhì)量，提高了生產(chǎn)效率、保證了氨芐西林產(chǎn)品的用藥安全。
【專利說(shuō)明】一種改進(jìn)的氨芐西林的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種氨芐西林的制備方法，具體涉及一種改進(jìn)的酶法制備氨芐西林的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]氨芐西林，化學(xué)名為(25，51?，61?)-3，3-二甲基-6-[00-2-氨基-2-苯乙氨基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-甲酸，其游離酸含3分子結(jié)晶水，它是一種常用的青霉素類廣譜β_內(nèi)酰胺類抗生素。
[0003]氨芐西林殺菌作用、穿透細(xì)胞壁的能力很強(qiáng)，是目前應(yīng)用較為廣泛的口服青霉素之一。氨芐西林的制備有化學(xué)合成法和酶法制備法，化學(xué)法相對(duì)反應(yīng)條件苛刻，反應(yīng)步驟復(fù)雜，而且對(duì)環(huán)境污染較大。而酶促合成方法可以顯著減少反應(yīng)步驟，反應(yīng)條件溫和，是生產(chǎn)氨芐西林的重要途徑之一。[0004]《氨芐西林酶促合成方法與介質(zhì)體系的研究》(潘繩彬，浙江大學(xué)理學(xué)院，碩士學(xué)位論文，20070901)報(bào)道了不同介質(zhì)體系下的氨芐西林酶促的合成方法，主要介紹了有機(jī)體系和兩項(xiàng)體系下合成氨芐西林的方法，由于對(duì)環(huán)境保護(hù)的要求，有機(jī)體系介質(zhì)中酶促合成氨芐西林，存在著對(duì)環(huán)境的污染的問(wèn)題；而水相體系中相對(duì)符合環(huán)保要求，但該文中記載的在研究水相體系下的酶促合成氨芐西林的產(chǎn)率并不是很高，即使最佳反應(yīng)條件下其產(chǎn)率也才為65.6%，而且該水相介質(zhì)中加入了有機(jī)溶劑，底物濃度的比例不適當(dāng)(例如1:2)，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽用量較大、不是最經(jīng)濟(jì)的和不是最適合大生產(chǎn)，而且實(shí)踐證明引入的側(cè)鏈越多、產(chǎn)品的質(zhì)量越差，側(cè)鏈不能反應(yīng)就是產(chǎn)品中的雜質(zhì)；現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)為了提高反應(yīng)效率而添加有機(jī)溶劑，與完全水相中反應(yīng)相比，不利于經(jīng)濟(jì)環(huán)保，低毒，過(guò)敏源減少；而如何提聞純水相體系下的氣節(jié)西林廣率，依然有待進(jìn)一步的研究，同時(shí)提聞氣節(jié)西林廣品的質(zhì)量、保證用藥安全、同樣是藥品研發(fā)領(lǐng)域進(jìn)一步追求的目標(biāo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)以上技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供了一種改進(jìn)的酶法制備氨芐西林的方法。所述方法包括以下步驟:
[0006]I)在O°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽于水中混合加入到氨芐西林合成酶中，在pH值為5.5~7.5，溫度為10°C~30°C下進(jìn)行反應(yīng)；
[0007]2)將步驟I)所得產(chǎn)物，用酸調(diào)至溶液澄清，保持pH值為0.5-2.0，溫度為IO0C -300C ；
[0008]3)將步驟2)所得溶液，降溫至12~15°C，然后調(diào)節(jié)pH至3.00~3.50，再降溫至5-6°C、pH值維持在3.50 ;然后調(diào)pH為4.9-5.0,降溫到1_2°C保持，即得氨芐西林結(jié)晶。
[0009]本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽與中混合加入到氨芐西林合成酶中的方式，包括但不限于:將6-APA固體與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽的固體于水中混合后攪拌直接加入到氨芐西林合成酶中；或?qū)?-APA固體先溶解然后加入到氨芐西林合成酶中，然后緩慢加入D-苯甘氨酸甲酯或其鹽液體；然后在pH值為5.5~7.5、溫度為10°C~30°C條件下進(jìn)行反應(yīng)；
[0010]本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，其中所述D-苯甘氨酸甲酯的鹽包括但不限于鹽酸鹽，還可以是本領(lǐng)域常用的D-苯甘氨酸甲酯的其他藥用鹽。
[0011]本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述pH值為5.5~7.5，pH值范圍包括但不限于5.5~7.0,6.0~7.5,6.6~7.5或6.0~7.0 ;同樣pH值可以為5.5,5.8、
6.0,6.3,6.5,6.8,7.0,7.2或7.5 ;本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述pH值為 6.2 ~6.5。
[0012]本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述反應(yīng)溫度10°C~30°C范圍包括但不限于:1(TC~25°C、1(TC~2(TC、15°C~2(TC、15°C~25°C、15°C~3(TC、2(TC~3(TC、25°C~30°C ；
[0013]作為實(shí)施 方式之一，所述溫度可以是10°C、11°C、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17。。、18。。、19。。、20。。;2rC、22°C、23t:、24t:、25t:、26t:、27t:、28t:、29t:*3(rC ;作為實(shí)施方式之一，所述反應(yīng)溫度優(yōu)選為10°C~15°C
[0014]作為本發(fā)明實(shí)施方式之一，所述步驟I)中，混合及反應(yīng)過(guò)程中的溫度優(yōu)選為10°C~15°C ;反應(yīng)過(guò)程中的pH值為6.2~6.5;當(dāng)6-八卩八的殘留量低于211^/1111時(shí)，結(jié)束反應(yīng)。
[0015]當(dāng)本發(fā)明步驟I)的反應(yīng)過(guò)程中，為了保持上述pH值范圍，可選擇地使用包括但不限于3N的氨水溶液進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。
[0016]本發(fā)明的所述步驟I)中，作為實(shí)施方式之一，所述6-APA與對(duì)苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比為1.0:1.0~1.5，優(yōu)選1.0:1.0 ;所述氨芐西林合成酶的濃度為1.0KU/L-1.5U/L。
[0017]本發(fā)明的所述步驟2)中，作為實(shí)施方式之一，所述酸選自鹽酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液，草酸或檸檬酸；優(yōu)選酸的質(zhì)量濃度范圍為:10% -30%，其可以為12%~28%、15%~25%、18%~22%的濃度范圍，作為示例性的說(shuō)明，如質(zhì)量濃度為10%、11%、12%、13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28^^29^^30%的鹽酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液、草酸、檸檬酸；作為實(shí)施方式之一；優(yōu)選為鹽酸。
[0018]本發(fā)明方法中所述步驟2)中，作為實(shí)施方式之一，可選擇地加入適量的ETDA-2Na，其中所述“適量”可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物的量進(jìn)行確定，如可以為原料6-APA質(zhì)量的0.5%~2% ;示例性地為0.5%、1%、1.5%或2%的量。
[0019]本發(fā)明的所述步驟3)中，作為實(shí)施方式之一，所述堿包括但不限于氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀，氫氧化鋇或氫氧化鈣；所述堿的濃度為10-40% ;其可以為12%~38%、12% ~35 %、12% ~30 %、12% ~25 %、15% ~35 %、15% ~30 %、15% ~25 %、18% ~25 %、18% ~35 %、18% ~30 %、18% ~25% ; 10 %、11 %、12 %、13 %、14 %、15 %、16 %、17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,35%,40%質(zhì)量濃度的氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀，氫氧化鋇或氫氧化鈣溶液；優(yōu)選為20%質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液。
[0020]作為本發(fā)明實(shí)施方式之一，本發(fā)明方法還進(jìn)一步包括:[0021]4)析出晶體后，先后用水、可選擇地和70%~95%的甲醇、乙醇或異丙醇、80-98%的丙酮的有機(jī)溶劑洗滌，干燥，即得。
[0022]本發(fā)明方法中，作為實(shí)時(shí)方式之一、所述步驟4)中，水或有機(jī)溶劑與氨芐西林的重量比是2~3:1，優(yōu)選為1:1。
[0023]發(fā)明方法中，作為實(shí)時(shí)方式之一、所述步驟4)中，干燥條件為:抽真空攪拌干燥，真空度0.095MPa以下，溫度為45_65°C。
[0024]作為實(shí)施方式之一，本發(fā)明的所述6-APA、D-對(duì)苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽、氨芐西林合成酶和/或水均為本領(lǐng)域常規(guī)的原料，符合本領(lǐng)域常規(guī)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，優(yōu)選符合如下標(biāo)準(zhǔn)的、任意來(lái)源(市上購(gòu)買(mǎi)或制備)的原料或更高標(biāo)準(zhǔn)的原料。
[0025]作為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式之一，本發(fā)明氨芐西林的酶法制備方法優(yōu)選包括以下步驟:
[0026]加料及反應(yīng):
[0027]I) 10°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，氨芐西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L.濃度，控制PH值為5.5-7.5，溫度為10-30°C，當(dāng)6-APA的 殘留低于2mg/ml，結(jié)束反應(yīng)；可選擇地用3mol/L氨水調(diào)節(jié)反應(yīng)過(guò)程中的pH值
[0028]結(jié)晶:
[0029]2)將步驟I)所得產(chǎn)物，用鹽酸調(diào)至溶液澄清，保持pH值為0.5~2.0，溫度為10°C~30°C ;并可選擇地加入適量EDTA-Na ；
[0030]3)然后經(jīng)過(guò)濾進(jìn)入結(jié)晶罐，先降溫至12~15°C，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為
3.00~3.50，5~6°C條件下將pH維持在3.50 ;然后用氫氧化鈉溶液調(diào)pH為4.9~5.0，降溫到l°c~2°C養(yǎng)晶；其中氫氧化鈉溶液為15-30%質(zhì)量濃度；
[0031]精制、干燥:
[0032]4)養(yǎng)晶后進(jìn)行固液分離，分離全部母液后，先純化水洗滌，然后用70%~95%濃度的甲醇、80%~98%的丙酮、或70%~95%乙醇洗滌離心、邊攪拌邊抽真空、使真空度在0.095MPa以下，溫度保持45~65°C、干燥。
[0033]本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種采用本發(fā)明方法制備而得的氨芐西林產(chǎn)品，所述產(chǎn)品的氨芐西林含量大于或等于99.5% ;總雜的含量小于或等于為0.20% ;單雜的含量小于或等于0.10 % ο
[0034]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法顯著地提高了氨芐西林產(chǎn)品的收率，而且本發(fā)明所獲得的氨芐西林產(chǎn)品的質(zhì)量更高，總雜、單雜的含量顯著地降低。
[0035]與文獻(xiàn)中記載現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明方法在以下幾方面進(jìn)行了顯著的提高或改進(jìn):從反應(yīng)PH值方面，PH值更接近中性，方便控制，避免強(qiáng)堿強(qiáng)酸的破壞，進(jìn)一步減少了雜質(zhì)的生成；從使用的原材料上:不適用有毒有害的原材料，例如:特戊酰氯，吡啶，三乙胺，二氯甲烷等等高致癌的化學(xué)原料，只是最后的洗滌環(huán)節(jié)適用二類溶解丙酮，對(duì)人體以及環(huán)節(jié)是高效低毒；從反應(yīng)溫度上，溫度相比較化學(xué)法來(lái)講更方便大生產(chǎn)的控制，因?yàn)榛瘜W(xué)法要在-40°C條件下反應(yīng)，本發(fā)明在10°C _15°C條件下反應(yīng)，更節(jié)能，更環(huán)保，更易操作；從結(jié)晶方法上，結(jié)晶過(guò)程全部在水相中進(jìn)行，無(wú)毒無(wú)味，健康環(huán)保，不加任何有機(jī)溶劑，結(jié)晶中不加入任何溶解后產(chǎn)品中將不會(huì)殘留在晶體內(nèi)部，使產(chǎn)品質(zhì)量更好，致敏原更少，工業(yè)生產(chǎn)更加高效易控；從精制方面，對(duì)于溶劑的選擇上，本發(fā)明70% -95%濃度的甲醇，80% -98%的丙酮，70%-95%乙醇洗滌，可以達(dá)到更好的效果、如水份好干燥，溶媒殘留更低。
[0036]本發(fā)明通過(guò)采用藥典(2010年第二版)所記載的穩(wěn)定性加速試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，本發(fā)明中各實(shí)施例中所得產(chǎn)品的氨芐西林質(zhì)量穩(wěn)定，進(jìn)一步提高了氨芐西林產(chǎn)品的用藥安全。
【具體實(shí)施方式】
[0037]本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但本發(fā)明并不受限于此。
[0038]實(shí)施例1
[0039]物料準(zhǔn)備:
[0040]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯29g ;氨芐西林合成酶1.0KU/L ;98 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ; 10 %鹽酸56ml ；3mol/L氨水2ml ;20 %氫氧化鈉水溶液38ml ；純化水585ml ο
[0041]制備過(guò)程:
[0042]在反應(yīng)器中 加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯29g攪拌均勻。
[0043]降溫至10°C，加入氨芐西林合成酶1.0KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.4~6.5，溫度10±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量2ml。
[0044]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0045]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至20°C，滴加10%鹽酸56ml后氨芐西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0046]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，滴加36ml20%氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C將pH保持在3.5，2ml20 %氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.9~
5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次,35ml丙酮洗滌I次后于45°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.84g，收率:86.9%。
[0047]實(shí)施例2
[0048]物料準(zhǔn)備:
[0049]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽35g;氨芐西林合成酶1.0KU/L ;80 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 55ml ;10%氫氧化鈉水溶液 78ml ;純化水 585ml。
[0050]制備過(guò)程:
[0051]在反應(yīng)器中加入純化水350ml，攪拌下加入6-APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽35g，攪拌均勻。
[0052]降溫至11 °C，加入氨芐西林合成酶1.3KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度11±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量55ml。
[0053]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0054]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至21°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.04加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0055]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，用10%氫氧化鈉水溶液74ml調(diào)節(jié)pH至
3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值3.5，然后10%氫氧化鈉水溶液4ml調(diào)節(jié)pH至4.9~
5.0，繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min、分離結(jié)晶液，濾餅用35ml純化水洗滌I次，35ml80%丙酮洗滌I次后于50°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.77g，收率:86.8%。
[0056]實(shí)施例3
[0057]物料準(zhǔn)備:
[0058]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液88ml (濃度400mg/ml);氨節(jié)西林合成酶 1.2KU/L ;70% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;20%鹽酸 28ml ;3mol/L 氨水 46ml ;15%氫氧化鈉水溶液51ml ;純化水497ml。
[0059]制備過(guò)程:
[0060]在反應(yīng)器中加入純化水262ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液88ml，攪拌均勻。
[0061]降溫至12°C，加入氨芐西林合成酶1.2KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度12±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量46ml。
[0062]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0063]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至22°C，滴加20%鹽酸28ml后氨芐西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0064]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，然后用15%氫氧化鈉溶液48ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值在3.50，然后用15 %氫氧化鈉溶液3ml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml70%甲醇洗滌I次后，于55°C，真空度0.09MP下烘干，得氨芐西林:56.26g，收率:86.1%。
[0065]實(shí)施例4
[0066]物料準(zhǔn)備:
[0067]6-APA35g;D-苯甘氨酸甲酯37g;氨芐西林合成酶1.5KU/L ;95 %甲醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;30 %鹽酸19ml ;3mol/L氨水IOml ;25 %氫氧化鈉水溶液28ml ;純化水585ml ο
[0068]制備過(guò)程:
[0069]在反應(yīng)器中加入純化水350ml,攪拌下加入6_APA35g, D-苯甘氨酸甲酯37g,攪拌均勻。
[0070]降溫至13°C，加入氨芐西林合成酶1.5KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度13±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量10ml。
[0071]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0072]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至23°C，滴加30%鹽酸19ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0073]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，然后25%氫氧化鈉水溶液27ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6 °C保持pH在3.5，然后用25%氫氧化鈉水溶液Iml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml95%甲醇洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.42g，收率:86.3%。
[0074]實(shí)施例5
[0075]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽44g ;氨節(jié)西林合成酶1.4KU/L ；95 %乙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 65ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0076]制備過(guò)程:
[0077]在反應(yīng)器中加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯37g，攪拌均勻。
[0078]降溫至14 °C，加入氨芐西林合成酶1.4KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度14±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量65ml。[0079]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0080]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至23°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0081]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，用20%氫氧化鈉水溶液37ml調(diào)節(jié)pH至
3.0~3.5，降溫至5~6°C將pH值保持在3.50，然后用25%氫氧化鈉水溶液Iml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml的95%乙醇洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.59g，收率:86.6%。
[0082]實(shí)施例6
[0083]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液116ml (濃度380mg/ml);氨節(jié)西林合成酶 1.5KU/L ;80% 乙醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;15% 鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 60ml ;25%氫氧化鈉水溶液29ml ;純化水469ml。
[0084]制備過(guò)程:
[0085]在反應(yīng)器中加入純化水234ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液116ml，攪拌均勻。
[0086]降溫至15 °C,加入氨節(jié)西林合成酶1.5KU/L,反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度15±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量60ml。
[0087]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0088]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至24°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0089]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C然后用25%氫氧化鈉水溶液28ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH維持在3.5，然后用25%氫氧化鈉溶液Iml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%乙醇洗滌I次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.llg，收率:85.8%。
[0090]實(shí)施例7
[0091]物料準(zhǔn)備:
[0092]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽43g ;氨芐西林合成酶1.3KU/L ;80%異丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;10%鹽酸 55ml ；3mol/L 氨水 20ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0093]制備過(guò)程:
[0094]在反應(yīng)器中加入純化水350ml,攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯43g,攪拌均勻。
[0095]降溫至15°C，加入氨芐西林合成酶1.3KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度14±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量20ml。
[0096]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0097]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至24°C，滴加10%鹽酸55ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0098]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，然后用20%氫氧化鈉水溶液37ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值在3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液Iml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%異丙酮洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.34g，收率:
86.2%。
[0099]實(shí)施例8
[0100]物料準(zhǔn)備:
[0101]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽52.5g ;氨芐西林合成酶1.2KU/L ;90%異丙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 48ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0102]制備過(guò)程:
[0103]在反應(yīng)器中加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽52.5g，攪拌均勻。
[0104]降溫至14°C,加入氨節(jié)西林合成酶1.2KU/L,反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH值
6.4~6.5，溫度14±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量 70ml。
[0105]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0106]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至21°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0107]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，然后用20%氫氧化鈉水溶液37ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液Iml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml的90%異丙酮洗滌 I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.77g，收率:86.8%。[0108]實(shí)施例9
[0109]物料準(zhǔn)備:
[0110]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液125ml (濃度420mg/ml);氨節(jié)西林合成酶 1.4KU/L ;80% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ; 15%鹽酸溶液 37ml ;3mol/L 氨水 72ml ；20%氫氧化鈉水溶液38ml ;純化水460ml。
[0111]制備過(guò)程:
[0112]在反應(yīng)器中加入純化水225ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液125ml，攪拌均勻。
[0113]降溫至15°C，加入氨芐西林合成酶1.4KU/L，反應(yīng)全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度15±0.5°C，反應(yīng)至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時(shí)停止反應(yīng)，3mol/L氨水用量72ml。
[0114]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0115]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至22°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過(guò)濾得清液。
[0116]將清液轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，降溫至12~15°C，滴加20%氫氧化鈉水溶液38ml調(diào)節(jié)pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液2ml調(diào)節(jié)pH至4.9~5.0,繼續(xù)降溫至I~2°C養(yǎng)晶30min,分離結(jié)晶液，濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%甲醇洗滌I 次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.69g，收率:
86.7%。
[0117]實(shí)驗(yàn)例I加速穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0118]實(shí)驗(yàn)儀器:高效液相色譜儀、氣相色譜儀、聚合物測(cè)定儀、卡氏水分測(cè)定儀、旋光儀
坐寸ο
[0119]高效液相的條件:波長(zhǎng):225nm,紫外檢測(cè)器,流速:1.0ml/minl,流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液:乙腈=95:5，
[0120]高效液相色譜儀:島津LC-20A，氣相色譜儀:島津GC-2010，卡氏水分測(cè)定儀:瑞士萬(wàn)通870型，旋光儀:數(shù)字自動(dòng)旋光儀WZZ-2S
[0121]實(shí)驗(yàn)方法:在各時(shí)間點(diǎn)取樣，按藥典2010版記載的關(guān)于加速穩(wěn)定性的方法檢測(cè)。分取采用實(shí)施例6，實(shí)施例7，實(shí)施例8，實(shí)施例9的方法制備的樣品60g，密封袋兩層密封，放置于溫度為40°C、濕度75% ±5%的加速試驗(yàn)箱。
[0122]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0123]實(shí)施例6所得氨芐西林產(chǎn)品的加速試驗(yàn)結(jié)果
[0124](400C ±2°C、RH75% ±5% )
[0125][0126]
【權(quán)利要求】
1.一種酶法制備氨芐西林的方法，所述方法包括: 1)在0°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，在pH值為5.5~7.5，溫度為10°C~30°C下進(jìn)行反應(yīng)； 2)將步驟I)所得產(chǎn)物，用酸調(diào)至溶液澄清，保持pH值為0.5~2.0，溫度為10°C~30 0C ； 3)將步驟2)所得溶液，降溫至12~15°C，然后堿調(diào)節(jié)pH值至3.00~3.50，再降溫至5°C~6°C、維持pH值在3.50 ;然后調(diào)堿pH值為4.9~5.0，降溫到1°C~2°C保持，即得氨節(jié)西林結(jié)晶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，6-APA與對(duì)苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽的質(zhì)量比為1.0:1.0~1.5，優(yōu)選1.0: 1.0 ;所述氨芐西林合成酶的濃度為1.0KU/L-1.5U/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，反應(yīng)過(guò)程的溫度優(yōu)選為10°C~15°C ;反應(yīng)過(guò)程中的pH值為6.2~6.5 ;可選擇地當(dāng)6-APA的殘留量低于2mg/ml時(shí)，結(jié)束反應(yīng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的溫度為20°C~24°C;可選擇地加入適量EDTA-2Na。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的酸選自鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸溶液、草酸或檸檬酸；優(yōu)選酸的質(zhì)量濃度范圍為10%~30%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中的堿選自氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀、氫氧化鋇或氫氧化鈣；優(yōu)選堿的質(zhì)量濃度為10~40%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括: 4)步驟3)析出晶體后，用水、可選擇地和70%~95%的甲醇、乙醇或異丙醇、或80-98%的丙酮的有機(jī)溶劑洗滌，干燥，即得；優(yōu)選所述水或有機(jī)溶劑與氨芐西林的重量比為 1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟4)中，干燥條件為:抽真空攪拌干燥，真空度0.095MPa以下，溫度為45_65°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括: 1)10°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，氨芐西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L濃度，在PH值為5.5-7.5，溫度為10-30°C下進(jìn)行反應(yīng)，當(dāng)6-APA的殘留低于2mg/ml，結(jié)束反應(yīng)；可選擇地用3mol/L氨水調(diào)節(jié)反應(yīng)過(guò)程中的pH值； 2)將步驟I)所得產(chǎn)物用鹽酸調(diào)至溶液澄清， 3)保持pH值為0.5-2.0，溫度為10°C-3(TC ;然后經(jīng)過(guò)濾進(jìn)入結(jié)晶罐，先降溫至12~15°C，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為3.00~3.50，5_6°C條件下將pH維持在3.50 ;然后用氫氧化鈉溶液調(diào)PH為4.9-5.0,降溫到1_2°C養(yǎng)晶；其中氫氧化鈉溶液為15-30%濃度； 4)養(yǎng)晶后進(jìn)行固液分離，分離全部母液后，先進(jìn)行純化水洗滌，然后用70%-95%濃度的甲醇，80% -98%的丙酮，或70% -95%乙醇洗滌離心、邊攪拌邊抽真空、使真空度在0.095MPa以下，溫度保持45-65°C、干燥。
10.一種權(quán)利要求1-9任一所述的方法獲得的氨節(jié)西林產(chǎn)品,其特征在于,所述產(chǎn)品中氨芐西林含 量大于或等于99.5% ;總雜的含量小于或等于為0.20% ;單雜的含量小于或等于 0.10%。
【文檔編號(hào)】C12P37/04GK103937866SQ201410197856
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年5月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月12日
【發(fā)明者】劉紅池 申請(qǐng)人:聯(lián)邦制藥(內(nèi)蒙古)有限公司