Sco6974基因缺失天藍色鏈霉菌及其在提高抗生素產(chǎn)量的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明SCO6974基因缺失天藍色鏈霉菌及其在提高抗生素產(chǎn)量的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種構(gòu)建重組菌的方法，包括如下步驟：敲除天藍色鏈霉菌基因組中的SCO6974基因，得到重組菌；所述SCO6974基因的核苷酸序列為序列表中的序列1。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明利用PCR-Targeting技術(shù)構(gòu)建了SCO6974基因敲除工程菌株，檢測其與抗生素產(chǎn)生關(guān)系，結(jié)果為與未敲除的野生型菌株相比，SCO6974基因敲除工程菌株產(chǎn)生放線紫紅素（ACT）和鈣依賴抗生素（CDA）的量大。說明該基因與抗生素產(chǎn)生有關(guān)。
【專利說明】SC06974基因缺失天藍色鏈霉菌及其在提高抗生素產(chǎn)量的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及SC06974基因缺失天藍色鏈霉菌及其在提高抗生素產(chǎn)量的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]鏈霉菌(Streptomyces)是一種極具應(yīng)用價值的微生物。據(jù)目前所知,約三分之二用于醫(yī)藥的天然抗生素以及共9000余種具生物活性物質(zhì)都由鏈霉菌產(chǎn)生，它們在抗腫瘤、抗真菌、抗寄生蟲、免疫抑制等方面具有重要作用。天藍色鏈霉菌作為鏈霉菌研究的模式菌株，其研究價值及應(yīng)用價值極高。作為抗生素代謝調(diào)控研究的模式菌株，對天藍色鏈霉菌的研究較為深入，它能產(chǎn)生放線紫紅素(ACT)、十一烷基靈菌紅素(RED)、鈣依賴抗生素(CDA)、次甲霉素(Mmy)。ACT屬于聚酮中的苯并異色燒醌(benzoisochromanequinone, BIQ)類的抗生素，具有抗菌活性，在不同pH條件下培養(yǎng)，ACT會顯現(xiàn)出不同的顏色，有助于研究和直接觀察天藍色鏈霉菌次級代謝過程的多效調(diào)控。CDA是一種脂肽類的抗生素，具有抗菌活性。
[0003]ACT化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式I所示:
[0004]
【權(quán)利要求】
1.一種構(gòu)建重組菌的方法，包括如下步驟:敲除天藍色鏈霉菌基因組中的SC06974基因，得到重組菌； 所述SC06974基因的核苷酸序列為序列表中的序列1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述敲除天藍色鏈霉菌基因組中的SC06974基因通過同源重組的方法實現(xiàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:所述同源重組的方法包括如下步驟: 1)將含有預(yù)敲除SC06974基因的片段導(dǎo)入含有SC06974基因cosmid的出發(fā)菌中，得到中間菌，提取所述中間菌的質(zhì)粒，得到SC06974基因缺失的cosmid ； 2)將SC06974基因缺失的cosmid接合轉(zhuǎn)移到天藍色鏈霉菌中，得到SC06974基因缺失的重組菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于: 所述出發(fā)菌按照包括如下步驟的方法制備:將含有SC06974基因的cosmid導(dǎo)入大腸桿菌 E.coli BW25113/pIJ790 中，得到出發(fā)菌； 所述SC06974基因缺失的cosmid通過E.coli ET12567 (pUZ8002)接合轉(zhuǎn)移到天藍色鏈霉囷中。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于: 所述含有預(yù)敲除SC06974基因的片段的核苷酸序列為序列表中的序列3 ； 所述天藍色鏈霉菌為天藍色鏈霉菌M145。
6.由權(quán)利要求1-5所述方法制備的重組菌。
7.失活SC06974基因的物質(zhì)或權(quán)利要求6所述的重組菌在提高抗生素產(chǎn)量中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述失活SC06974基因的物質(zhì)為含有預(yù)敲除SC06974基因的片段，所述片段的核苷酸序列為序列表中的序列3 ； 所述抗生素具體為放線紫紅素和/或鈣依賴抗生素。
9.SC06974基因在調(diào)控抗生素產(chǎn)量中的應(yīng)用，所述SC06974基因的核苷酸序列為序列表中的序列1 ;所述抗生素具體為放線紫紅素和/或鈣依賴抗生素。
10.一種DNA片段，其核苷酸序列為序列表中的序列3。
【文檔編號】C12N15/11GK103881951SQ201410116480
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月26日
【發(fā)明者】劉鋼, 李淑賢, 俞靈軍 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所