一種免疫磁珠凈化-酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)莫能菌素的方法及其專用單克隆抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種免疫磁珠凈化-酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)莫能菌素的方法及其專用單克隆抗體。本發(fā)明提供的莫能菌素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MON（簡(jiǎn)稱雜交瘤細(xì)胞株MON），保藏號(hào)為CGMCC?No.8952。雜交瘤細(xì)胞株MON分泌的單克隆抗體也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述單克隆抗體與磁珠偶聯(lián)得到的免疫磁珠也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。在本發(fā)明中，免疫磁珠的作用是富集凈化樣品中的MON分子，最后通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)濃縮后的樣品，推算出待檢MON含量。此法實(shí)現(xiàn)了對(duì)超出常規(guī)免疫檢測(cè)方法檢測(cè)限（1ng/mL）的MON樣品進(jìn)行檢測(cè)，有效提高了檢測(cè)靈敏度。
【專利說(shuō)明】一種免疫磁珠凈化-酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)莫能菌素的方法及其專用單克隆抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種免疫磁珠凈化-酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)莫能菌素的方法及其專用單克隆抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]莫能菌素(monensin,M0N)別名瘤胃素、莫能菌酸、欲可胖,于1967年首先由Haney等人從肉桂鏈霉菌(Streptomyces cinnamonensis)的發(fā)酵液中分離得到，莫能菌素抗球蟲譜廣，對(duì)各種艾美耳球蟲均有較強(qiáng)的抑殺作用，是二十世紀(jì)后期使用的主導(dǎo)抗球蟲藥物。另外莫能菌素還可用作牛和豬的促生長(zhǎng)劑，提高飼料利用率與增重速度。由于莫能菌素的毒性較大，對(duì)人畜具有潛在危害性，其在動(dòng)物組織中的殘留問(wèn)題日漸受到重視。我國(guó)已批準(zhǔn)的動(dòng)物性食品中莫能菌素最高殘留限量為:牛羊可食用組織0.05μ g/mL、雞火雞肌肉
1.5 μ g/mL、雞皮加脂肪 3.0 μ g/mL、雞肝臟 4.5 μ g/mL。
[0003]目前莫能菌素的檢測(cè)方法很多。微生物法經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單，但是靈敏度有限。因?yàn)槟芫厝狈ψ贤狻晒夂碗娀瘜W(xué)特征，因此基于HPLC都要對(duì)其衍生化引入發(fā)色團(tuán)，盡管靈敏度高，但是前處理過(guò)程繁瑣。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)，避免了前處理中衍生化的過(guò)程，且靈敏度進(jìn)一步提高，是各種獸藥殘留檢測(cè)的確征方法，其檢測(cè)限達(dá)0.05~0.2 μ g/kg，但儀器化程度高且價(jià)格昂貴，同時(shí)要求有專業(yè)的操作人員，不利于在基層推廣及大量樣本的篩選。
[0004]免疫磁珠(immunomagnctic beads, IMB)是免疫學(xué)與磁性載體技術(shù)結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一類新型材料。免疫磁珠是帶有活 性基團(tuán)的磁性微球，與單克隆抗體偶聯(lián)后，與相應(yīng)的抗原靶物質(zhì)特異地結(jié)合形成復(fù)合物。在沒(méi)有外加磁場(chǎng)的情況下，免疫磁珠可以發(fā)生反應(yīng)并將特異地吸附在其表面的靶物質(zhì)穩(wěn)定的懸浮在溶液中；在有外加磁場(chǎng)的情況下，可以迅速的分離免疫復(fù)合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種免疫磁珠凈化-酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)莫能菌素的方法及其專用單克隆抗體。
[0006]本發(fā)明提供的莫能菌素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MON(簡(jiǎn)稱雜交瘤細(xì)胞株Μ0Ν)，已于2014年3月13日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào))，保藏號(hào)為CGMCC N0.8952。
[0007]雜交瘤細(xì)胞株MON分泌的單克隆抗體也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0008]所述單克隆抗體與磁珠偶聯(lián)得到的免疫磁珠也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述磁珠具體可為羧基磁珠。
[0009]本發(fā)明還保護(hù)雜交瘤細(xì)胞株MON或所述單克隆抗體在制備用于檢測(cè)莫能菌素的試劑盒中的應(yīng)用。[0010]本發(fā)明還保護(hù)所述單克隆抗體在檢測(cè)莫能菌素中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明還保護(hù)所述免疫磁珠在制備用于富集莫能菌素的試劑盒中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明還保護(hù)所述免疫磁珠在富集莫能菌素中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明還保護(hù)式(I )所示化合物；
[0014]
【權(quán)利要求】
1.莫能菌素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MON，其保藏編號(hào)為CGMCCN0.8952。
2.權(quán)利要求1所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體。
3.將權(quán)利要求2所述單克隆抗體與磁珠偶聯(lián)得到的免疫磁珠。
4.權(quán)利要求1所述雜交瘤細(xì)胞株MON或權(quán)利要求2所述單克隆抗體在制備用于檢測(cè)莫能菌素的試劑盒中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求2所述單克隆抗體在檢測(cè)莫能菌素中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求3所述免疫磁珠在制備用于富集莫能菌素的試劑盒中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求3所述免疫磁珠再富集莫能菌素中的應(yīng)用。
8.式(I)所示化合物；
9.一種用于檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有莫能菌素的試劑盒，包括權(quán)利要求3或4所述免疫磁珠和權(quán)利要求2所述單克隆抗體。
10.一種檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有莫能菌素的方法，依次包括如下步驟: (1)采用所述免疫磁珠富集待測(cè)樣本中的莫能菌素，得到富集物； (2)采用式(I)所示化合物為包被原，采用所述單克隆抗體為一抗，通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)富集物中是否含有莫能菌素。
【文檔編號(hào)】C12R1/91GK104031886SQ201410103273
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】沈建忠, 李建成, 張?bào)泱? 郭燕, 劉爽 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)