具有脂肪酶的用于表面處理的組合物和方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了用具有特定脂肪酶的組合物來處理紡織品和硬質(zhì)表面的方法和組合物。所述組合物具有增加的對氧化降解的穩(wěn)定性，具體地由于漂白催化劑。
【專利說明】具有脂肪酶的用于表面處理的組合物和方法[0001 ] 對序列表的te引
[0002]本專利申請包含計算機(jī)可讀格式的序列表，其以引用方式并入。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及組合物，其包含脂肪酶和漂白劑，以及制備和使用此類組合物的方法，所述組合物優(yōu)選地為織物以及家庭護(hù)理產(chǎn)品。

【背景技術(shù)】
[0004]洗滌劑制造商一直嘗試提供清潔組合物，尤其是織物和餐具清潔組合物，所述組合物提供最強(qiáng)力的清潔體系。就用脂肪酶清潔而言，它們可為特別容易氧化，特別是在儲存期間或在洗滌或處理步驟中此類酶與漂白劑接觸的情況下，或者同時在洗滌或處理步驟中摻入，或者來自預(yù)處理步驟(尤其例如來自預(yù)處理漂白步驟)遺留的一種或其它組分。這導(dǎo)致所述組合物作為一個整體損失活性或功效，并且具體地?fù)p失酶活性。某些漂白劑組分尤其成問題，如預(yù)成形的過酸和漂白催化劑或促進(jìn)劑。W02007/001262涉及清潔組合物，所述清潔組合物包含具有增強(qiáng)的酶相容性的有機(jī)催化劑，特別是針對淀粉酶增強(qiáng)了相容性。仍需要緩解該問題的組合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]根據(jù)本發(fā)明，提供了針對織物和/或家庭護(hù)理的清潔和/或處理紡織品、硬質(zhì)表面和/或其它表面的方法，包括以下步驟:
[0006]a)使紡織品、硬質(zhì)表面和/或織物和/或家庭護(hù)理的其它表面與水性溶液接觸，所述水性溶液包含⑴脂肪酶；和(ii)漂白劑組分和(iii)任選的洗滌劑助劑；
[0007]b)沖洗并干燥紡織品或硬質(zhì)表面；
[0008]其特征在于所述脂肪酶具有與SEQ ID NO:1的成熟多肽相比改善的對氧化降解的穩(wěn)定性以及脂肪酶活性，優(yōu)選地所述脂肪酶變體包括包含在以下位置中的一個或多個處的取代的脂肪酶變體，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID NO:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置。
[0009]本發(fā)明也提供了制備包含脂肪酶變體的洗滌劑組合物的方法，所述脂肪酶變體表現(xiàn)出與SEQ ID NO:1的脂肪酶變體相比改善的對氧化降解的穩(wěn)定性以及脂肪酶活性，所述方法包括將脂肪酶變體與洗滌劑助劑混合的步驟。優(yōu)選地所述脂肪酶變體為包含在以下位置中的一個或多個處的取代的SEQ ID NO:1的變體，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID NO:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的另外的方面，其提供了一種組合物，所述組合物包含脂肪酶變體和洗滌劑助劑，所述脂肪酶變體具有脂肪酶活性并表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性。本發(fā)明也提供了一種清潔和/或處理組合物，所述組合物包含脂肪酶變體和洗滌劑助劑，所述脂肪酶變體具有脂肪酶活性并包含在以下位置中的一個或多個處的取代，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID N0:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置?？蔀閮?yōu)選的是所述組合物還包含漂白劑組分。
[0011]根據(jù)本發(fā)明的另外的方面，提供了制備洗滌劑組合物的方法，所述洗滌劑組合物包含脂肪酶并表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性，所述方法包括將脂肪酶變體與洗滌劑助劑混合的步驟，所述脂肪酶變體包含在以下位置中的一個或多個處的取代，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID N0:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置，其中所述變體具有脂肪酶活性。
[0012]可通過在實例I后的測試對表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性的脂肪酶變體進(jìn)行測定。表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性的脂肪酶變體具有至少1.01、或至少1.2或甚至至少1.5的RPwash。用于進(jìn)行比較的常規(guī)脂肪酶是SEQ ID NO:1的脂肪酶。

【具體實施方式】
[0013]定義
[0014]除非另外指明，所有組分或組合物含量參考該組分或組合物的活性物質(zhì)部分，并且不包括可能存在于此類組分或組合物的可商購獲得源中的雜質(zhì)，例如殘余溶劑或副產(chǎn)物。
[0015]所有的百分比和比率是(I)按重量計來計算的，除非另外指明，和(2)基于總體組合物計來計算的，除非另外指明。
[0016]如本文所用，當(dāng)用于權(quán)利要求書中時，冠詞諸如“一個”和“一種”被理解為是指一種或多種受權(quán)利要求書保護(hù)或描述的物質(zhì)。
[0017]如本文所用，術(shù)語“包括”、“包含”和“含有”旨在為非限制性的。
[0018]如本文所用，術(shù)語“固體”包括顆粒、粉末、條和片劑產(chǎn)品形式。
[0019]如本文所用，術(shù)語“流體”包括液體、凝膠、糊劑和氣體產(chǎn)品形式。
[0020]如本文所用，術(shù)語“脂肪酶”或“脂解酶”或“類脂酯酶”是由酶命名法定義的分類EC 3.1, I的酶。它可具有脂肪酶活性(三?；视椭久?，EC 3.1.1.3)、角質(zhì)酶活性(EC
3.1.1.74)、甾醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蠟-酯水解酶活性(EC 3.1.1.50)。就本發(fā)明的目的而言，根據(jù)實例中所述的步驟測定脂肪酶活性。在一個方面，本發(fā)明的所述變體具有SEQ ID NO:1的成熟多肽的脂肪酶活性的至少20%、例如，至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少100%。
[0021]如本文所用，術(shù)語“等位變體”是指占據(jù)相同染色體座位的基因的任何兩個或更多個的替代形式。等位變體天然來源于突變，并且可導(dǎo)致種群內(nèi)的多態(tài)性?；蛲蛔兛蔀槌聊蛔?不改變編碼的多肽)或者可編碼具有改變的氨基酸序列的多肽。多肽的等位變體為由基因等位變體編碼的多肽。
[0022]如本文所用，術(shù)語“cDNA”是指能夠通過逆轉(zhuǎn)錄從自真核或原核細(xì)胞獲得的成熟的、經(jīng)拼接的mRNA分子制備的DNA分子。cDNA缺少可存在于相應(yīng)的基因組DNA中的內(nèi)含子序列。最初的初始RNA轉(zhuǎn)錄物是mRNA的前體，其在作為成熟的經(jīng)拼接的mRNA出現(xiàn)之前，通過一系列步驟，包括拼接，被加工。
[0023] 如本文所用，術(shù)語“編碼序列”是指多核苷酸，其直接指定變體的氨基酸序列。編碼序列的邊界一般由開放閱讀框確定，它起始于起始密碼子諸如ATG、GTG或TTG，并終止于終止密碼子諸如TAA、TAG、和TGA。所述編碼序列可為基因組DNA、cDNA、合成DNA或它們的組合。
[0024]如本文所用，術(shù)語“對照序列”是指編碼本發(fā)明的變體的多核苷酸的表達(dá)所需的核酸序列。每個對照序列對于編碼所述變體的多核苷酸可為原生的(即，出自相同基因)或外源的(即，出自不同基因)，或彼此原生或外源的。此類對照序列包括但不限于前導(dǎo)序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、啟動子、信號肽序列、和轉(zhuǎn)錄終止子。最低限度，對照序列包括啟動子以及轉(zhuǎn)錄和翻譯停止信號。出于引入有助于對照序列與編碼變體的多核苷酸的編碼區(qū)的連接的特異性限制性位點的目的，對照序列可具有接頭。
[0025]如本文所用，術(shù)語“表達(dá)”包括變體的產(chǎn)生所涉及的任何步驟，包括但不限于轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾、和分泌。
[0026]如本文所用，術(shù)語“表達(dá)載體”是指線性或環(huán)狀DNA分子，其包含編碼變體的多核苷酸，并且所述多核苷酸可操作地連接至提供其表達(dá)的對照序列。
[0027]如本文所用，術(shù)語“片段”是指從成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失了一個或個(例如，若干個)氨基酸的多肽；其中所述片段具有脂肪酶活性。在一個方面，片段包含成熟多肽的氨基酸數(shù)量的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%，以及至少95%。
[0028]如本文所用，術(shù)語“高嚴(yán)格條件”是指對于至少100個核苷酸長度的探針，按照標(biāo)準(zhǔn)Southern印跡法步驟，在42°C下、在5X SSPE、0.3%的SDS、200mg/ml經(jīng)過剪切和變性的鮭魚精DNA、以及50%的甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時。在65°C下，用2X SSC、0.2%的SDS最后清洗載體材料三次，每次15分鐘。
[0029]如本文所用，術(shù)語“宿主細(xì)胞”是指對用包含本發(fā)明的多核苷酸的核酸構(gòu)建體或表達(dá)載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)等敏感的任何細(xì)胞類型。術(shù)語“宿主細(xì)胞”包括了由于在復(fù)制過程中發(fā)生的突變而與親本細(xì)胞不相同的親本細(xì)胞的任何子代。
[0030]如本文所用，術(shù)語“改善的特性”是指與變體相關(guān)聯(lián)的與親本相比改善的特性。此類改善的特性包括在有機(jī)催化劑的存在下改善的性能。在一些優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明涉及組合物或方法，其中所述變體具有改善的對有機(jī)催化劑的穩(wěn)定性，所述有機(jī)催化劑選自具有以下公式的有機(jī)催化劑:

【權(quán)利要求】
1.一種清潔紡織品或硬質(zhì)表面或在織物和家庭護(hù)理中的其它表面的方法，包括以下步驟: a)使所述表面與水性溶液接觸，所述水性溶液包含(i)脂肪酶；和(ii)漂白劑組分以及(iii)任選的洗滌劑助劑； b)沖洗并干燥所述紡織品或硬質(zhì)表面； 其特征在于所述脂肪酶具有與SEQ ID NO:1的成熟多肽相比改善的對氧化降解的穩(wěn)定性以及脂肪酶活性。
2.一種清潔紡織品或硬質(zhì)表面或在織物和家庭護(hù)理中的其它表面的方法，包括以下步驟: a)使所述表面與水性溶液接觸，所述水性溶液包含(i)脂肪酶；和(ii)漂白劑組分以及(iii)任選的洗滌劑助劑； b)沖洗并干燥所述紡織品或硬質(zhì)表面； 其特征在于所述脂肪酶包含脂肪酶變體，所述脂肪酶變體包含在以下位置中的一個或多個處的取代，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID N0:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置，其中所述變體具有脂肪酶活性。
3.一種制備包含脂肪酶的洗滌劑組合物的方法，所述脂肪酶表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性，所述方法包括將脂肪酶變體與洗滌劑助劑混合的步驟，所述脂肪酶變體具有與SEQ ID NO:1的成熟多肽相比改善的對氧化降解的穩(wěn)定性，并且其中所述變體具有脂肪酶活性，優(yōu)選地包含在以下位置中的一個或多個處的取代，所述位置選自對應(yīng)于SEQ ID NO:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中根據(jù)本文實例I中定義的測試，所述脂肪酶在式2的化合物的存在下表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性:
式2 其中R1為2-丁基辛基。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的方法，其中所述脂肪酶與漂白劑組分混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或權(quán)利要求5所述的方法，其中所述漂白劑組分包含漂白催化劑，所述漂白催化劑能夠接受來自過氧酸的氧原子并將所述氧原子傳遞給可氧化底物和(ii)二?；?或四酰基過氧化物種類，優(yōu)選包含亞胺輸和/或羰基官能團(tuán)的漂白催化劑，最優(yōu)選”惡挫燒(oxazidinium)和/或雙環(huán)氧乙燒官能團(tuán)，和/或能夠在接受氧原子時形成過氧亞胺正離子和/或雙環(huán)氧乙烷官能團(tuán)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述漂白催化劑具有對應(yīng)于以下化學(xué)式的化學(xué)結(jié)構(gòu):
其中:η和m獨立地為O至4 ;每個R1獨立地選自取代或未取代的基團(tuán)，所述基團(tuán)選自氧、烷基、環(huán)烷基、芳基、桐合芳基、雜環(huán)、桐合雜環(huán)、硝基、鹵素、氛基、橫酸基、烷氧基、麗基、羧基，和烷氧羰基基團(tuán)，以及任何兩個相鄰R1取代基可組合以形成稠合芳基、稠合碳環(huán)或稠合雜環(huán)；每個R2獨立地選自取代或未取代的基團(tuán)，所述基團(tuán)獨立地選自氫、羥基、烷基、環(huán)烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、亞烷基、雜環(huán)、烷氧基、芳甲?；Ⅳ燃谆王０坊?；任何R2可與任何其它R2結(jié)合在一起以形成普通環(huán)的一部分；任何成對的R2可組合以形成羰基；并且其中任何兩個R2可組合以形成取代或未取代的稠合不飽和部分；R3為C1-C2tl取代或未取代的烷基；R4為氫或部分Qt_A，其中:Q為支化或非支化的亞烷基，t = O或1，并且A為陰離子基團(tuán)，所述陰離子基團(tuán)選自0S03_、S03_、C02_、0C02_、OPO廣、OPO3HlP 0P02_ ；R5為氫或部分-CR11R12-Y-Gb-Ye-[(CR9Riq)y-0]k-R8，其中:每個 Y 獨立地選自 0、S、N_H 或 N-R8 ;并且每個R8獨立地選自烷基、芳基和雜芳基，所述部分為取代的或未取代的，并且無論被取代或未取代，所述部分具有的碳都少于21個；每個G獨立地選自C0、S02、S0、P0和PO2 ；R9和Rki獨立地選自氫和C1-C4烷基；Rn和R12獨立地選自氫和烷基，或當(dāng)其合在一起時，可參與形成羰基；b = O或I ;c可等于O或I,但如果b等于O,則c必須等于O ;y為I至6的整數(shù)；k為O至20的整數(shù)；R6為H、或烷基、芳基或雜芳基部分；所述部分為取代或未取代的；并且當(dāng)X存在時，其為合適的電荷平衡抗衡離子，優(yōu)選地所述漂白催化劑具有對應(yīng)于以下化學(xué)式的化學(xué)結(jié)構(gòu):
其中R13為包含3至24個碳的支化烷基、或包含I至24個碳的直鏈烷基，最優(yōu)選地其中R13選自2- 丁基辛基、2-戊基壬基、2-十六烷基、異十三烷基和異十五烷基。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述親本脂肪酶包含與SEQID NO:1的成熟多肽具有至少60%的同一性的氨基酸序列；由SEQ ID NO:1的成熟多肽的氨基酸序列或其具有脂肪酶活性的片段組成。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述變體為: a.多肽，所述多肽包含與SEQID NO:1的成熟多肽具有至少60%的同一性的氨基酸序列； b.由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸在至少低嚴(yán)格條件下與以下雜交:(i)SEQIDNO:1的成熟多肽編碼序列；或(ii)⑴的全長互補(bǔ)鏈，或 c.由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含與所述SEQID NO:1的成熟多肽編碼序列具有至少60%的同一'丨生的核苷酸序列。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在所述脂肪酶變體中的取代選自T37A, D, E, F，G, H, I, L, N, P, Q, R, S，V, W, Y、N39A, C，D, E, F，G, I, K, L, M, P, Q, R, T, V, W, Y 和G91D, H, I, P, Q0
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述變體包含取代G91A。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述變體還包含在一個或多個位置處的取代，所述位置對應(yīng)于SEQ ID NO:1的成熟多肽的位置D96、T143、A150、E210、G225、T231、N233 和 P250，優(yōu)選地包含選自 D96G、T143A、A150G、E210Q、G225R、T231R、N233R 和P250R以及它們的混合的取代。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述變體具有以下取代:
14.一種清潔和/或處理組合物，包含脂肪酶變體和洗滌劑助劑，所述脂肪酸變體具有脂肪酶活性并表現(xiàn)出改善的對氧化降解的穩(wěn)定性。
15.一種清潔和/或處理組合物，包含脂肪酶變體和洗滌劑助劑，所述脂肪酶變體具有脂肪酶活性并包含在以下位置中的一個或多個處的取代，所述位置選自對應(yīng)于SEQ IDNO:1的成熟多肽的T37、N39和G91的位置。
【文檔編號】C12N9/20GK104080902SQ201380007788
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月3日
【發(fā)明者】N·J·蘭特, L·厄蘭德森, C·H·漢森, J·溫德, A·斯文森, C·P·宋克森 申請人:寶潔公司