堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法。步驟如下：首先準備高濃度的葡萄糖溶液，質(zhì)量分數(shù)不能少于百分之七十；融入無菌酒精水，然后搖晃均勻；將實現(xiàn)冷置過的菌液高速離心后加入上述混合液中，棄上清；加入等體積的氯丙烷；做酶切鑒定；以百分之八十五以上的乙醇反復清洗三到四次；冰浴，三到四小時后再放入冷藏室進行冷藏；離心去沉淀；再往溶液中加入氫氧化鈉溶液，質(zhì)量分數(shù)至少為百分之三十；所述DNA為高純DNA，無任何雜質(zhì)；所述提取方法，全程環(huán)境溫度都不能超過36攝氏度。本發(fā)明的有益效果是：操作簡單，成本較低，實驗條件要求不高，可以用于反復性操作，獲得預期效果。
【專利說明】堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生化實驗領(lǐng)域，具體涉及堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法。
【背景技術(shù)】
[0002]堿裂解法是提取質(zhì)粒的最常用也最有效的方法，是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異達到分離目的。其利用原理是:高pH使質(zhì)粒DNA和染色體DNA變性，同時沉淀蛋白質(zhì)。再將pH值調(diào)至中性，質(zhì)粒DNA較小，很容易復性成雙鏈。而染色體DNA較大，不會復性，纏結(jié)成網(wǎng)狀不溶物質(zhì)，從而可以通過離心除去。堿裂解法是較常用的提取的方法。其優(yōu)點是收獲率高，適于多數(shù)的菌株，所得產(chǎn)物經(jīng)純化后可滿足多數(shù)的DNA重組操作。十二烷基磺進行質(zhì)粒的小量制備。十二烷基磺酸鈉(SDS)是一種陰離子表面活性劑，它既能使細菌細胞裂解，又能使一些蛋白質(zhì)變性。用SDS處理細菌后，會導致細菌細胞破裂，釋放出質(zhì)粒DNA和染色體DNA，兩種DNA在強堿環(huán)境都會變性。由于質(zhì)粒和主染色體的拓撲結(jié)構(gòu)不同，變性時前者雖然兩條鏈分離，卻仍然纏繞在一起不分開；但后者完全變性分甚至出現(xiàn)斷裂，因此，當加入PH4.8的酸性乙酸鉀降低溶液pH值，使溶液pH值恢復較低的近中性水平時，質(zhì)粒的兩條小分子單鏈可迅速復性恢復雙鏈結(jié)構(gòu)，但是主染色體DNA則難以復性。在離心時，大部分主染色體與細胞碎片，雜質(zhì)等纏繞一起被沉淀，而可溶性的質(zhì)粒DNA留在上清夜中。再由異丙醇沉淀、乙醇洗滌，可得到純化的質(zhì)粒DNA。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決 的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種技術(shù)方案:
[0004]堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法，步驟如下:首先準備高濃度的葡萄糖溶液，質(zhì)量分數(shù)不能少于百分之七十；融入無菌酒精水，然后搖晃均勻；將實現(xiàn)冷置過的菌液高速離心后加入上述混合液中，棄上清；加入等體積的氯丙烷；做酶切鑒定；以百分之八十五以上的乙醇反復清洗三到四次；冰浴，三到四小時后再放入冷藏室進行冷藏；離心去沉淀；再往溶液中加入氫氧化鈉溶液，質(zhì)量分數(shù)至少為百分之三十。
[0005]本發(fā)明中，所述DNA為高純DNA，無任何雜質(zhì)。
[0006]本發(fā)明中，所述提取方法，全程環(huán)境溫度都不能超過36攝氏度。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:操作簡單，成本較低，實驗條件要求不高，可以用于反復性操作，獲得預期效果。
【具體實施方式】
[0008]堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法，步驟如下:首先準備高濃度的葡萄糖溶液，質(zhì)量分數(shù)不能少于百分之七十；融入無菌酒精水，然后搖晃均勻；將實現(xiàn)冷置過的菌液高速離心后加入上述混合液中，棄上清；加入等體積的氯丙烷；做酶切鑒定；以百分之八十五以上的乙醇反復清洗三到四次；冰浴，三到四小時后再放入冷藏室進行冷藏；離心去沉淀；再往溶液中加入氫氧化鈉溶液，質(zhì)量分數(shù)至少為百分之三十。[0009]所述DNA為高純DNA，無任何雜質(zhì)。
[0010]所述提取方法，全程環(huán)境溫度都不能超過36攝氏度。
[0011]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變 ，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法，其特征在于，步驟如下:首先準備高濃度的葡萄糖溶液，質(zhì)量分數(shù)不能少于百分之七十；融入無菌酒精水，然后搖晃均勻；將實現(xiàn)冷置過的菌液高速離心后加入上述混合液中，棄上清；加入等體積的氯丙烷；做酶切鑒定；以百分之八十五以上的乙醇反復清洗三到四次；冰浴，三到四小時后再放入冷藏室進行冷藏；離心去沉淀；再往溶液中加入氫氧化鈉溶液，質(zhì)量分數(shù)至少為百分之三十。
2.如權(quán)利要求1所述的堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法，其特征在于，所述DNA為高純DNA，無任何雜質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的堿裂解中提取質(zhì)粒的簡易方法，其特征在于，所述提取方法，全程環(huán)境溫度都不能超過36攝 氏度。
【文檔編號】C12N15/10GK103667260SQ201310673616
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月2日
【發(fā)明者】仲集華 申請人:仲集華