紅假單胞菌菌株及其在抑制黃瓜霜霉病菌、促進黃瓜生長中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種兼性厭氧的紅假單胞菌菌株，其為保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心、且保藏號為CCTCC?NO：M2012366的菌株。該紅假單胞菌菌株可抑制黃瓜霜霉病菌且促進黃瓜生長，應用時可將光合細菌菌液直接噴施施用或?qū)⒕褐苽涑砂l(fā)酵液后再進行噴施應用，其中光合細菌菌液和光合細菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟：先將紅假單胞菌菌株活化；再將活化培養(yǎng)得到的單菌落接入至血清瓶進行種子培養(yǎng)；然后進行生產(chǎn)培養(yǎng)，獲得光合細菌菌液；將光合細菌菌液進行離心，收集上清液，再經(jīng)細菌過濾器過濾后得到光合細菌發(fā)酵液。本發(fā)明具有生產(chǎn)成本低、拮抗效果好、高效、無毒、環(huán)保等優(yōu)點。
【專利說明】紅假單胞菌菌株及其在抑制黃瓜霜霉病菌、促進黃瓜生長
中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種光合細菌及其應用，尤其涉及一種紅假單胞菌菌株及其在抑制黃瓜霜霉病菌以及促進黃瓜生長中的應用。
【背景技術】
[0002]黃瓜霜霉病是影響黃瓜種植的最重要的病害之一，在整個黃瓜生育期，如遇適宜發(fā)病條件，無論是露天還是保護地栽培，其浸染、傳播流行速度極快，均能對黃瓜的產(chǎn)量造成嚴重損失。目前，防治黃瓜霜霉病最主要和最有效的措施是采用殺菌劑，然而，由于化學藥劑選擇壓力，單一藥劑或單一類型殺菌劑地不合理使用，極易造成病原菌的抗藥性快速上升，進而導致殺菌劑用量上升，從而可能引起農(nóng)產(chǎn)品中殺菌劑的超標，過量殺菌劑的投放，其一旦滲透進土壤或地下水層也將污染生態(tài)環(huán)境。
[0003]隨著全社會環(huán)境保護意識的增強，農(nóng)藥殘留帶來的農(nóng)產(chǎn)品安全以及環(huán)境污染問題愈來愈受到關注。然而，從目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)現(xiàn)狀以及農(nóng)業(yè)技術水平來看，殺菌劑仍將繼續(xù)使用且使用量還會繼續(xù)上升。殺菌劑作為控制作物病害的有效手段，是目前及今后相對較長時期內(nèi)最主要的技術措施之一。因此，尋找殺菌劑的替代技術和方法，是目前最具有實際應用前景的研究方向。
[0004]生物防治特別是微生物防治研究，是國內(nèi)外研究作物病害防治的熱點。微生物防治作物病害具有無毒、無污染的特 點，而且微生物菌劑生產(chǎn)簡便、田間操作與殺菌劑一樣方便。光合細菌是地球上最早出現(xiàn)的具有原始光能合成體系的原核生物，分布廣泛，遍及江河、沼澤、湖泊和海洋等，具有固氮、制氫、固碳、脫硫等作用。光合細菌生命力強，容易培養(yǎng)，生長速度繁殖快，本身無毒，富含蛋白質(zhì)、維他命、類胡蘿卜素等。目前已經(jīng)被廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)光合細菌在種植、養(yǎng)殖、新能源開發(fā)利用以及醫(yī)藥方面具有十分廣闊的前景。目前在黃瓜霜霉病防治方面，已有一些較好的微生物資源被挖掘，然而，尚無光合細菌應用于黃瓜霜霉病的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種生產(chǎn)成本低、拮抗效果好、高效、無毒、環(huán)保的紅假單胞菌菌株，還提供該菌株在抑制黃瓜霜霉病菌、促進黃瓜生長中的應用，使其能以環(huán)保、高效、低成本、方便快捷的操作實現(xiàn)抑制黃瓜病害的危害，促進黃瓜等蔬菜的生長。
[0006]為解決上述技術問題，本發(fā)明提出的技術方案為一種兼性厭氧的紅假單胞菌菌株，所述紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.)菌株為保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)、且保藏號為CCTCC NO:M2012366的菌株(以下簡稱紅假單胞菌CCTCCM2012366)。紅假單胞菌CCTCC M2012366的保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏單位的地址位于中國武漢大學，保藏日期為2012年9月20日，該紅假單胞菌CCTCCM2012366 被命名為紅假單胞菌 S_1 (Rhodopseudomonas sp.S-1)。
[0007]經(jīng)過我們的檢測，本發(fā)明的紅假單胞菌CCTCC M2012366具有以下主要特征:
[0008]G-，個體形態(tài)為桿狀，V-P反應陽性，甲基紅反應陽性，不能利用淀粉，H2S反應陽性，明膠液化陽性，吲哚反應陽性，檸檬酸鹽實驗陰性，脲酶實驗陰性，過氧化氫酶實驗陽性，3%NaCl中能生長，最適生長溫度為30°C~35°C，最適生長pH值為6.5~7.5，菌體的特征吸收峰為375nm、805nm和865nm,測定的16S rDNA序列長度為1389bp,在Genbank中的登錄號為KC491187。
[0009]滿足上述特征描述的紅假單胞菌CCTCC M2012366在下述應用中的效果更好。
[0010]作為一個總的技術構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的紅假單胞菌CCTCC M2012366在抑制黃瓜霜霉病菌中的應用。
[0011]作為一個總的技術構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的紅假單胞菌CCTCC M2012366在促進黃瓜生長中的應用。
[0012]上述的應用中，優(yōu)選的，將所述紅假單胞菌CCTCC M2012366制備成光合細菌菌液直接噴施應用或?qū)⒃摷t假單胞菌菌株制備成光合細菌發(fā)酵液后再進行噴施應用。所述光合細菌菌液及光合細菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟:
[0013](I)活化:將所述 紅假單胞菌CCTCC M2012366的保存種按雙層平板培養(yǎng)法進行培養(yǎng)，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)；
[0014](2)種子培養(yǎng):將步驟(1)中培養(yǎng)得到的單菌落接入至血清瓶，用紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期；
[0015](3)生產(chǎn)培養(yǎng):將步驟(2)培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶(例如5L的生產(chǎn)瓶，該瓶可以為透明玻璃瓶)中，用紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期得到光合細菌菌液，所述培養(yǎng)液的接入量不少于紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1% ;
[0016](4)光合細菌發(fā)酵液制備:將步驟(3)培養(yǎng)得到的光合細菌菌液進行離心，收集離心后的上清液，再經(jīng)細菌過濾器過濾后得到光合細菌發(fā)酵液。
[0017]上述的應用中，所述雙層平板培養(yǎng)法優(yōu)選是采用雙層PSB固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，所述雙層PSB固體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g、酵母提取粉 L 5g 和瓊脂粉(agar) 13g/18g (雙層平板培養(yǎng)基上層培養(yǎng)基瓊脂粉18g/L、下層培養(yǎng)基瓊脂粉13g/L)、蒸餾水 1L，pH7.0 ~7.2。
[0018]上述的應用中，所述紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基、紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基均優(yōu)選用PSB液體培養(yǎng)基，所述PSB液體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g 和酵母提取粉(yeast extract) 1.5g、蒸懼水IL ;所述PSB液體培養(yǎng)基的pH值為7.0~7.2。
[0019]上述的應用中，所述活化、種子培養(yǎng)和生產(chǎn)培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)溫度均控制在30°C~
350C，培養(yǎng)pH值為7.0~7.2，光照條件均控制為2000Lx~3000Lx。
[0020]上述的應用中，所述步驟(3)中，培養(yǎng)液的接入量優(yōu)選為紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1%~3%。
[0021]上述的應用中，所述步驟(4)中，離心時的轉(zhuǎn)速優(yōu)選控制在4000rpm~6000rpm,離心時間優(yōu)選控制在5min~8min。[0022]通過對上述制備方法進行優(yōu)化，包括對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及培養(yǎng)工藝參數(shù)的優(yōu)化，能使本發(fā)明的紅假單胞菌CCTCC M2012366生長更加迅速，從而縮短生產(chǎn)時間(全流程時間一般僅需24天左右)；工藝成本及產(chǎn)品價格更為低廉，便于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應用中進行推廣；應用方法更為簡便，易于操作，培養(yǎng)結(jié)束后，菌體數(shù)量可以達到2.0X IO9個/mL以上，培養(yǎng)完成后出瓶可以直接分裝成液體菌劑。
[0023]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于:本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)成本低、高效、無毒、環(huán)保的紅假單胞菌CCTCC M2012366，該菌株可通過簡單、快捷、低成本的操作方法制備得到光合細菌菌液和光合細菌發(fā)酵液，該菌株菌液和發(fā)酵液可促進黃瓜生長，發(fā)酵液可高效抑制黃瓜霜霉病菌，應用時不僅操作簡單、方便、工藝成本低，而且具有明顯的防治黃瓜霜霉病效果和促生長效果，為今后黃瓜等蔬菜的種植創(chuàng)造了更加優(yōu)異的生長環(huán)境。
[0024]一種紅假單胞菌菌株(Rhodopseudomonas sp S-1),其保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，地址為中國武漢大學，保藏號為CCTCC NO:M2012366，保藏日期為2012年9月24日。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明應用實施例1中各處理組對黃瓜幼苗的累積生物量的影響。
[0026]圖2為本發(fā)明應用實施例1中各處理組對黃瓜幼苗根活力的影響。
[0027]圖3為本發(fā)明應用實施例1中各處理組對黃瓜幼苗生長素(IAA)含量的影響。
[0028]圖4為本發(fā)明應用實施例1中各處理組對黃瓜幼苗過氧化物酶活性的影響。
[0029]圖5為本發(fā)明應用實施例1中各處理組對黃瓜幼苗過氧化氫酶活性的影響。
`[0030]圖6為本發(fā)明應用實施例2中各組光合細菌發(fā)酵液菌劑對黃瓜霜霉病菌的抑制率曲線。
【具體實施方式】
[0031]以下結(jié)合說明書附圖和具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護范圍。
[0032]實施例:
[0033]一種本發(fā)明的兼性厭氧的紅假單胞菌菌株，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M2012366的菌株。該紅假單胞菌CCTCC M2012366被命名為紅假單胞菌 S_1 (Rhodopseudomonas sp.S-1)。
[0034]經(jīng)過我們的檢測，本實施例的紅假單胞菌CCTCC M2012366具有以下主要特征:
[0035]G-，個體形態(tài)為桿狀，V-P反應陽性，甲基紅反應陽性，不能利用淀粉，H2S反應陽性，明膠液化陽性，吲哚反應陽性，檸檬酸鹽實驗陰性，脲酶實驗陰性，過氧化氫酶實驗陽性，3%NaCl中能生長，最適生長溫度為30°C~35°C，最適生長pH值為6.5~7.5，菌體的特征吸收峰為375nm、805nm和865nm,測定的16S rDNA序列長度為1389bp,在Genbank中的登錄號為KC491187。
[0036]上述本實施例的紅假單胞菌M2012366主要通過以下方法篩選得到:將采自湖南省植物保護研究所水塘的水樣5.0mL加入到120mL PSB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5d~7d后得到深紅色混合菌液，用接種環(huán)挑取適量的菌液劃線于PSB雙層平板培養(yǎng)基中，30°C ±2°C，約3000Lx，光照培養(yǎng)5d~7d后，獲得大量深紅色的單菌落；用滅菌牙簽挑取外形規(guī)整、光滑且較大的單菌落至PSB液體培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)5d~7d獲得深紅色菌液，劃線、挑取單胞富集獲得菌液、重復3次；梯度稀釋法稀釋平板培養(yǎng)法測定最終富集獲得的菌液中菌株的生物量，后續(xù)試驗中菌液濃度調(diào)整至約2X 109cfu/mL。
[0037]本實施例的紅假單胞菌CCTCC M2012366可用于抑制黃瓜霜霉病菌，還可用于促進黃瓜生長。應用時，先將紅假單胞菌CCTCC M2012366制備成光合細菌發(fā)酵液，再進行噴施應用，該光合細菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟:[0038](I)活化:將本實施例的紅假單胞菌CCTCC M2012366的超低溫保存種按雙層平板培養(yǎng)法進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在30°C~35°C，培養(yǎng)pH值為7.0~7.2，光照條件控制為2000Lx~3000Lx，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)；該雙層平板培養(yǎng)法是采用雙層PSB固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，雙層PSB固體培養(yǎng)基包含以下成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2Η200.lg、NaMo04.2Η200.0033g、FeS04.7Η200.005g、酵母提取粉 1.5g和瓊脂 13g/18g(雙層平板培養(yǎng)基上層培養(yǎng)基瓊脂粉18g/L、下層培養(yǎng)基瓊脂粉13g/L)、蒸餾水lL，pH7.0~
7.2 ；
[0039](2)種子培養(yǎng):將步驟(1)中培養(yǎng)得到的單菌落接入至血清瓶，用紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期；紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基選用PSB液體培養(yǎng)基，PSB液體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2Η200.lg、NaMoO4.2Η200.0033g、FeSO4.7Η200.005g 和酵母提取粉 1.5g、蒸餾水 IL ;所述 PSB 液體培養(yǎng)基的PH值為7.0~7.2 ;培養(yǎng)溫度控制在30°C~35°C，培養(yǎng)pH值為7.0~7.2，光照條件控制為2000Lx~3000Lx ；
[0040](3)生產(chǎn)培養(yǎng):將步驟(2)培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶(例如5L的生產(chǎn)瓶，該瓶可以為透明玻璃瓶)中，用紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期，培養(yǎng)液的接入量為紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1% ;紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基選用PSB液體培養(yǎng)基，PSB液體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g 和酵母提取粉 1.5g、蒸餾 IL ;培養(yǎng)溫度控制在30°C~35°C，培養(yǎng)pH值為7.0~7.2，光照條件控制為2000Lx~3000Lx ；
[0041](4)光合細菌發(fā)酵液制備:將步驟(3)培養(yǎng)得到的光合細菌菌液進行離心，離心時的轉(zhuǎn)速控制在6000rpm,離心時間優(yōu)選控制在5min,收集離心后的上清液,再經(jīng)細菌過濾器過濾后得到光合細菌發(fā)酵液。
[0042]應用實施例1:光合細菌在促進黃瓜苗期生長發(fā)育中的應用。
[0043]選用直徑為9cm的滅菌培養(yǎng)皿中加墊6張滅菌濾紙，加入無菌水，無菌水的量以浸透濾紙且能浸沒1/2顆黃瓜種子為宜。將黃瓜種子平鋪于濕潤的紗布上4°C冷藏過夜，打破種子休眠后平鋪于上述培養(yǎng)皿中；置于光照培養(yǎng)箱，25°C, 16h光照，8h黑暗培養(yǎng)，直至種子萌發(fā)。種子發(fā)芽至幼苗并長至4cm左右時，移栽入水培盒中。水培盒中添入Hoagland 水培營養(yǎng)液，營養(yǎng)液的配方為:Ca(NO3)2945mg/L，KN0360 7mg/L, NH4NO3115mg/L,NH3H2PO3136mg/L, MgS0449 3mg/L,鐵鹽溶液 2.5mL (七水硫酸亞鐵 2.78g，EDTA-2Na3.73g，蒸餾水 500mL，pH5.5)，微量元素 5mL(K10.83mg/L，Η3Β036.2mg/L，MnS0422.3mg/L, ZnS048.6mg/L, NaMoO30.25mg/L, CuSO40.025mg/L, CuCl20.025mg/L), pH:6.0。
[0044]將實施例中制備的光合細菌發(fā)酵液加入水培營養(yǎng)液中作為處理C，光合細菌菌液加入水培營養(yǎng)液中作為d處理，另設不加光合細菌發(fā)酵液處理的空白水培營養(yǎng)液作為處理a,設PSB液體培養(yǎng)基加入到水培營養(yǎng)液中作為處理b對照，處理濃度為12.5mL/L (具體指的是12.5ml發(fā)酵液配IL的營養(yǎng)液，a, b兩個處理是對應C、d處理中發(fā)酵液或菌液加入的量添加)。在0d、3d、6d、9d、12d、15d分別測定a、b、c、d四個處理組中黃瓜幼苗的生物量(參見圖1)、根活(參見圖2)、生長素(IAA)(參見圖3)、過氧化物酶活力(參見圖4)、過氧化氫酶活力(參見圖5)等指標，各指標測定重復三次，測定結(jié)果分別如圖1~圖5所示。
[0045]由圖1可見，本實施例中的光合細菌發(fā)酵液及光合細菌菌液在施用于黃瓜幼苗時，能夠顯著提高黃瓜幼苗的累積生物量。由圖2可見，本實施例中的光合細菌發(fā)酵液及光合細菌菌液在施用于黃瓜幼苗時，能夠顯著提升黃瓜幼苗的根活力。由圖3可見，本實施例中的光合細菌發(fā)酵液及光合細菌菌液在施用于黃瓜幼苗時，能夠明顯提高黃瓜幼苗中生長素(IAA)的含量。由圖4可見，本實施例中的光合細菌發(fā)酵液及光合細菌菌液在施用于黃瓜幼苗時，能夠提高黃瓜幼苗過氧化物酶活性。由圖5可見，本實施例中的光合細菌發(fā)酵液及光合細菌菌液在施用于黃瓜幼苗時，能夠提高黃瓜幼苗過氧化氫酶活性。
[0046]應用實施例2:光合細菌發(fā)酵液在抑制黃瓜霜霉病中的應用。
[0047]取實施例制備的光合細菌發(fā)酵液，等比稀釋成以下梯度的菌劑:稀釋5倍、稀釋10倍、稀釋20倍、稀釋40倍、稀釋80倍。采用聯(lián)合國糧食與農(nóng)業(yè)組織FA0( 1982年)推薦的葉盤漂浮法，用移液器將稀釋后的光合細菌發(fā)酵液菌劑移至直徑6cm的培養(yǎng)皿中，每皿10mL，空白對照加去離子水；將黃瓜葉盤背面朝上漂浮在培養(yǎng)皿上，用移液器將黃瓜霜霉病的孢子囊懸浮液接種至葉盤中心，IOyL/葉盤，重復試驗3次。然后將各處理組置于20°C溫度下按每天16小時光照和8小時黑暗條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)IOd~14d，調(diào)查各葉盤的發(fā)病情況。
[0048]以DPS軟件(vl2.01)計算稀釋倍數(shù)對數(shù)值與相對防效概率值之間的線性回歸方程及IC5tl等，結(jié)果如表1和圖6所示。
[0049]表1:不同稀釋倍數(shù)光合細菌發(fā)酵液對理黃瓜霜霉病病的抑制率
【權利要求】
1.一種兼性厭氧的紅假單胞菌菌株，其特征在于:所述紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.)菌株為保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心、且保藏號為CCTCC NO:M2012366的菌株。
2.一種如權利要求1所述的紅假單胞菌菌株在抑制黃瓜霜霉病菌中的應用。
3.—種如權利要求1所述的紅假單胞菌菌株在促進黃瓜生長中的應用。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的應用，其特征在于，將所述紅假單胞菌菌株制成光合細菌菌液直接噴施應用或?qū)⒃摷t假單胞菌菌株制備成光合細菌發(fā)酵液后再進行噴施應用，所述光合細菌菌液及光合細菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟: (1)活化:將所述紅假單胞菌菌株的保存種按雙層平板培養(yǎng)法進行培養(yǎng)，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)； (2)種子培養(yǎng):將步驟(1)中培養(yǎng)得到的單菌落接入至血清瓶，用紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期； (3)生產(chǎn)培養(yǎng):將步驟(2)培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶中，用紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期得到光合細菌菌液，所述培養(yǎng)液的接入量不少于紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1% ； (4)光合細菌發(fā)酵液制備:將步驟(3)培養(yǎng)得到的光合細菌菌液進行離心，收集離心后的上清液，再經(jīng)細菌過濾器過濾后得到光合細菌發(fā)酵液。
5.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于:所述雙層平板培養(yǎng)法是采用雙層PSB固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，所述雙層PSB固體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g、酵母提取粉1.5g、瓊脂粉13g/18g、蒸餾水1L，pH7.0~7.2。
6.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于:所述紅假單胞菌菌株種子培養(yǎng)基、紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基均選用PSB液體培養(yǎng)基，所述PSB液體培養(yǎng)基包含以下質(zhì)量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2Η200.lg、NaMoO4.2Η200.0033g、FeSO4.7Η200.005g、酵母提取粉1.5g、蒸餾水IL ;所述PSB液體培養(yǎng)基的pH值為7.0~7.2。
7.根據(jù)權利要求4所述應用，其特征在于:所述活化、種子培養(yǎng)和生產(chǎn)培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)溫度均控制在30°C~35°C，光照條件均控制為2000Lx~3000Lx。
8.根據(jù)權利要求4所述應用，其特征在于:所述步驟(3)中，培養(yǎng)液的接入量為紅假單胞菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1%~3%。
9.根據(jù)權利要求4所述應用，其特征在于:所述步驟(4)中，離心時的轉(zhuǎn)速控制在4000rpm~6000rpm,離心時間控制在5min~8min。
【文檔編號】C12R1/01GK103602622SQ201310660114
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年12月9日 優(yōu)先權日:2013年12月9日
【發(fā)明者】劉勇, 張德詠, 彭靜, 張松柏, 高陽, 張卓, 程菊娥, 譚新球, 成飛雪, 朱春暉, 楊春曉 申請人:湖南省植物保護研究所