ZmHINT基因在花發(fā)育中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種ZmHINT基因在花發(fā)育中的應(yīng)用。本發(fā)明公開了如下任一物質(zhì)在促進(jìn)植物提早開花中的應(yīng)用：（1）SEQ?ID?No.2所示的蛋白；（2）SEQ?ID?No.2所示蛋白的編碼基因；（3）含有（2）所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。本發(fā)明提供的ZmHINT基因在擬南芥中過表達(dá)能夠誘導(dǎo)擬南芥提前開花，說明ZmHINT基因在花發(fā)育中具有重要作用。
【專利說明】ZmH I NT基因在花發(fā)育中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種ZmHINT基因在花發(fā)育中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】 [0002]組氨酸三聚體蛋白超家族是一個(gè)具有核苷酸轉(zhuǎn)移酶和水解酶活性的家族，其中，組氨酸三聚體核苷結(jié)合蛋白(Histidine triad nucleotide binding protein,HINT)是組氨酸三聚體蛋白超家族成員中分布最為廣泛的一種蛋白，該蛋白在低等植物和高等動(dòng)物中均具有很高的結(jié)構(gòu)和功能相似性。晶體結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明，HINT是其他四種組氨酸三聚體蛋白超家族成員的祖先，結(jié)構(gòu)和功能的保守性，預(yù)示了 HINT發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。目前，有研究報(bào)道了關(guān)于哺乳動(dòng)物HINT在細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。相對(duì)動(dòng)物HINT的研究，植物HINT的功能研究較少，尤其是對(duì)玉米HINT的研究尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種ZmHINT基因在花發(fā)育中的應(yīng)用。
[0004]本發(fā)明提供了如下任一物質(zhì)在促進(jìn)植物提早開花中的應(yīng)用:
[0005](I) SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0006](2) SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因；
[0007](3)含有(2)所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
[0008]上述應(yīng)用中，所述編碼基因如SEQ ID N0.1所示。
[0009]上述任一所述的應(yīng)用中，所述植物為擬南芥。
[0010]一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，包括如下步驟:將SEQ IDN0.2所示蛋白的編碼基因?qū)氤霭l(fā)植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；與出發(fā)植物相比，轉(zhuǎn)基因植物的開花時(shí)間提前。
[0011]上述方法中，所述編碼基因是通過重組表達(dá)載體導(dǎo)入的，所述重組表達(dá)載體是將所述編碼基因插入出發(fā)載體PCAMBIA-1304的多克隆位點(diǎn)得到的。
[0012]上述任一所述的方法中，所述編碼基因如SEQ ID N0.1所示；
[0013]所述植物具體為擬南芥。
[0014]一種蛋白也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，為如下(I)或(2)所示:
[0015](I)SEQ ID N0.2 所示的蛋白；
[0016](2)將SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白質(zhì)。
[0017]上述蛋白的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018]上述編碼基因中，所述編碼基因?yàn)槿缦轮兄辽僖环N:
[0019]I) SEQ ID N0.1 所示的 DNA 分子；
[0020]2)在嚴(yán)格條件下與I)限定的DNA分子雜交且編碼所述蛋白質(zhì)的DNA分子；
[0021]3)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼所述蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0022]含有上述任一所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023]本發(fā)明提供的ZmHINT基因在擬南芥中過表達(dá)能夠誘導(dǎo)擬南芥提前開花，說明ZmHINT基因在花發(fā)育中具有重要作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為重組農(nóng)桿菌和對(duì)照農(nóng)桿菌的PCR鑒定。
[0025]圖2為不同濃度的潮霉素對(duì)轉(zhuǎn)ZmHINT基因Tl代擬南芥的篩選。
[0026]圖3為轉(zhuǎn)ZmHINT基因的T2代擬南芥以及轉(zhuǎn)空載體pCAMBIA_1304的T2代擬南芥的潮霉素抗性篩選。
[0027]圖4為轉(zhuǎn)ZmHINT基因的T2代擬南芥、轉(zhuǎn)空載體pCAMBIA_1304的T2代擬南芥以及野生型擬南芥的PCR鑒定。
[0028]圖5為擬南芥表型分析。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0030]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0031]GC Buffer購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為9154。
[0032]B73 玉米自交系(Zea m`ays ssp.mays L.)在文獻(xiàn) “PatrickS.Schnable,et al.The B73Maize Genome: Complexity, Diversity,and Dynamics.Science326, 1112-1115(2009) ”中公開過，公眾可從河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得。
[0033]擬南芥(Arabidopsisthaliana)哥倫比亞型(Columbia-0)在文獻(xiàn)“Xiao Luoj XiBai，Xiaoli Sun, Dan Zhu，Baohui Liu, Wei Jij Hua Caij Lei Cao，Jing Wuj Mengran Hu，XinLiu,Lili Tang and Yanming Zhu.Expression of wild soybean WRKY20in Arabidopsisenhances drought tolerance and regulates ABA signaling.Journal of ExperimentalBotany.2013.”中公開過，公眾可從河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得。
[0034]MS鹽購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，貨號(hào)為M5524-50L。
[0035]MS鹽溶液按照如下方法配制:該溶液由溶劑和溶質(zhì)組成；溶質(zhì)為MS鹽，蔗糖和Silwet L-77，溶劑為蒸餾水。MS鹽在MS鹽溶液中的濃度為2.15g/L，Silwet L-77在MS鹽溶液中的濃度為200iil/L，蔗糖在MS鹽溶液中的濃度為5g/100ml，調(diào)pH=5.8。
[0036]YEP液體培養(yǎng)基按照如下方法制備:
[0037]牛肉膏5.0g/L,蛋白胨5.0g/L,酵母提取物1.0g/L,蔗糖5.0g/L,MgSO4 ? 7H200.5g/L，余量為水，調(diào)pH=7.0后滅菌保存。
[0038]根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV3101 在文獻(xiàn)“Wei Tang, RonSederoff, Ross Whetten.Regeneration of transgenic loblolly pine (Pinustaeda L.) from zygotic embryos transformed with Agrobacterium tumefaciens.Planta (2001) 213:981-989.”中公開過，公眾可從河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得。
[0039]pMD18-T Simple載體購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為6011。[0040]載體pCAMBIA-1304 在文獻(xiàn) “Ruchi Pandey, Avinash Mishra, G.K.Garg.Plantpromoter driven heterologous expression of HMff glutenin gene(s)subunit inE.col1.Mol Biol Rep (2008) 35:153 - 162.”中公開過，公眾可從河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得。
[0041]實(shí)施例1、ZmHINT基因過表達(dá)載體及重組農(nóng)桿菌的構(gòu)建
[0042]一、引物設(shè)計(jì)
[0043](一)根據(jù)ZmHINT基因編碼區(qū)全長(zhǎng)cDNA序列，設(shè)計(jì)并合成如下引物:
[0044]
【權(quán)利要求】
1.如下任一物質(zhì)在促進(jìn)植物提早開花中的應(yīng)用: (1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因； (3)含有(2)所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述編碼基因如SEQID N0.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述植物為擬南芥。
4.一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟:將SEQ ID N0.2所示蛋白的編碼基因?qū)氤霭l(fā)植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；與出發(fā)植物相比，轉(zhuǎn)基因植物的開花時(shí)間提前。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述編碼基因是通過重組表達(dá)載體導(dǎo)入的，所述重組表達(dá)載體是將所述編碼基因插入出發(fā)載體PCAMBIA-1304的多克隆位點(diǎn)得到的。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于:所述編碼基因如SEQID N0.1所示； 所述植物具體為擬南芥。
7.一種蛋白，為如下(I)或(2)所示:
(1)SEQ ID N0.2所示的蛋白； (2)將SEQID N0.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白質(zhì)。
8.權(quán)利要求7所述蛋白的編碼基因。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的編碼基因，其特征在于:所述編碼基因?yàn)槿缦轮兄辽僖环N: 1)SEQ ID N0.1所示的DNA分子； 2)在嚴(yán)格條件下與I)限定的DNA分子雜交且編碼權(quán)利要求7所述蛋白質(zhì)的DNA分子； 3)與I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼權(quán)利要求7所述蛋白質(zhì)的DNA分子。
10.含有權(quán)利要求8或9所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
【文檔編號(hào)】C12N5/10GK103695436SQ201310651445
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】吳劉記, 陳彥惠, 祖小峰, 唐海濤, 王順喜 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)