一步酶法制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得a-氨基己二酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備7-ACA并同時(shí)獲得α-氨基己二酸的方法，所述方法，經(jīng)過(guò)以下步驟：步驟1，頭孢菌素C發(fā)酵液的處理；步驟2，頭孢菌素C在頭孢菌素C?；D(zhuǎn)移酶的作用下進(jìn)行酶解反應(yīng)得到7-ACA；步驟3，對(duì)酶解后得到的7-ACA裂解液進(jìn)行處理；步驟4，分離出7-ACA；步驟5，從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸。
【專利說(shuō)明】一步酶法制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得a-氨基己二酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明涉及一種酶裂解法的應(yīng)用，具體而言是涉及一種獲制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得α-氨基己二酸的一步酶法應(yīng)用。
【背景技術(shù)】:
[0002]7-氨基頭抱霉焼酸(7—aminocephalosporanic acid，7-ACA),
[0003]
【權(quán)利要求】
1.一種制備7-ACA并同時(shí)獲得α-氨基己二酸的方法，所述方法，經(jīng)過(guò)以下步驟: 步驟1，頭孢菌素C發(fā)酵液的處理； 步驟2，頭孢菌素C在頭孢菌素C?；D(zhuǎn)移酶的作用下進(jìn)行酶解反應(yīng)得到7-ACA ； 步驟3，對(duì)酶解后得到的7-ACA裂解液進(jìn)行處理； 步驟4，分離出7-ACA ； 步驟5，從分離出7-ACA的裂解液中分離α -氨基己二酸。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟I中所述頭孢菌素C發(fā)酵液的處理是用堿調(diào)PH到堿性，并濃縮到適當(dāng)濃度及純度。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟2中酶解反應(yīng)過(guò)程要控制反應(yīng)PH、酶用量等參數(shù)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟3所述對(duì)酶解后得到的7-ACA裂解液進(jìn)行處理是對(duì)7-ACA裂解液采用濃縮，脫炭、過(guò)濾，使其達(dá)到結(jié)晶前的良好狀態(tài)。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟4所述分離出7-ACA采用析晶并分離的方法。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟5所述從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸是用等電點(diǎn)法將α-氨基己二酸從裂解液中結(jié)晶出來(lái)。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述的等電點(diǎn)法將α-氨基己二酸從裂解液中結(jié)晶出來(lái)的方法，經(jīng)過(guò)以下三個(gè)步驟: 步驟I，對(duì)一步酶法分離出7-ACA后的裂解液進(jìn)行處理； 步驟2，分離出α-氨基己二酸； 步驟3，精制α-氨基己二酸； 其中，步驟I所述對(duì)裂解液進(jìn)行處理，包括加堿并濃縮的步驟；步驟2所述分離α -氨基己二酸的方法選自樹(shù)脂吸附法或者等電點(diǎn)法；步驟3所述精制α-氨基己二酸是重結(jié)晶法。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述的等電點(diǎn)法將α-氨基己二酸從裂解液中結(jié)晶出來(lái)的方法，經(jīng)過(guò)以下三個(gè)步驟: 步驟1，裂解液加入氫氧化鈉溶液，調(diào)整PH值為6.0,隨后將裂解液濃縮到原來(lái)體積的30% ； 步驟2，把濃縮液用酸調(diào)節(jié)PH值到3.0，析出α-氨基己二酸； 步驟3，將過(guò)濾得到的α -氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重結(jié)晶一次，結(jié)晶用丙酮洗滌，干燥即得精品α-氨基己二酸； 其中，步驟I所述加入氫氧化鈉溶液為2mol/L的氫氧化鈉溶液2mol/L濃度的氫氧化鈉溶液，其配制方法如下:每500毫升水中溶解的氫氧化鈉質(zhì)量為40g，其中將裂解液濃縮采用的方法如下:把裂解液通過(guò)納濾裝置進(jìn)行濃縮；其中，步驟2所述用酸調(diào)節(jié)PH值是用鹽酸溶液調(diào)節(jié)，所述鹽酸溶液濃度為:2mol/L左右，其配制方法如下:36-38%濃鹽酸和水的配比1:5體積進(jìn)行混合；其中，步驟3所述的重結(jié)晶，是用無(wú)水乙醇和水1:1等量混合成為50%的乙醇溶液進(jìn)行重結(jié)晶。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟: 步驟1，取頭孢菌素C發(fā)酵濾液，調(diào)pH到9-10 ； 步驟2，頭孢菌素C?；D(zhuǎn)移酶(NRB103)和頭孢菌素C在室溫下反應(yīng)，直到用高效液相儀鑒測(cè)7-氨基頭孢霉烷酸完全生成，控制反應(yīng)pH在9-10 ； 步驟3，向上一步得到的7-氨基頭孢霉烷酸反應(yīng)液中加入Na2S2O4,調(diào)pH6-7，加吐溫80和二氯甲烷，分相，在水相中加入活性炭和EDTA，過(guò)濾得7-氨基頭孢霉烷酸液體； 步驟4，7_氨基頭孢霉烷酸液體調(diào)pH值使成為酸性，析出結(jié)晶后，濾出結(jié)晶，用丙酮洗漆，干燥； 步驟5，通過(guò)等電點(diǎn)法將α-氨基己二酸從裂解液中結(jié)晶出來(lái)，方法如下:裂解液加入氫氧化鈉溶液，調(diào)整PH值為6.0，隨后將裂解液濃縮到原來(lái)體積的30%，把濃縮液用酸調(diào)節(jié)PH值到3.0，析出α-氨基己二酸，將過(guò)濾得到的α-氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重結(jié)晶一次，結(jié)晶用丙酮洗滌，干燥即得精品α-氨基己二酸。10、如權(quán)利要求1所述的方法，經(jīng)過(guò)以下步驟: 取頭孢菌素C(CPC)發(fā)酵濾液10升(750mM，相當(dāng)于純CPC311克)，過(guò)I μ m膜濾，用氨水調(diào) PH IlJ 10 ； 向反應(yīng)器中加入(NRB-103)酶1800克，水洗二次，加入CPC液后，快速攪拌下，用氨水控制PH為8-10，反應(yīng)30分鐘，7-ACA轉(zhuǎn)化率98% ； 向得到的15升7-ACA液中加入100克Na2S2O4,用氨水調(diào)PH為7，加吐溫80，10毫升，加入二氯甲烷2000毫升，攪拌10分鐘， 分相，在水相中加入活性炭20克，加入EDTAlO克，攪拌15分鐘，過(guò)濾除炭得7-ACA處理液； 向7-ACA處理液中滴加3摩爾的 鹽酸，使PH為5，結(jié)晶完全后，濾出結(jié)晶，收集過(guò)濾母液，之后300毫升丙酮洗漆結(jié)晶,真空干燥至干,重量收率63.7%,純度99.5% ； 取經(jīng)過(guò)一步酶法制備7-ACA的廢液15升，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值到6，經(jīng)過(guò)納濾濃縮到5升，滴加3摩爾的鹽酸，使PH為3.0，使α-氨基己二酸結(jié)晶，過(guò)濾100毫升丙酮洗滌，真空干燥，烘干，干燥后α -氨基己二酸結(jié)晶加入水200毫升加入乙醇200毫升攪拌過(guò)濾得到純度99%淡黃色α -氨基己二酸大約100克。
【文檔編號(hào)】C12P13/04GK103555807SQ201310533202
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】朱彥民, 王喜軍, 劉治林 申請(qǐng)人:哈藥集團(tuán)制藥總廠