管狀蠕蟲半乳糖凝集素及其制備方法
【專利摘要】管狀蠕蟲半乳糖凝集素及其制備方法，涉及管狀蠕蟲半乳糖凝集素基因的核苷酸序列以及其所編碼的氨基酸序列。通過提取管狀蠕蟲Ridgeia?piscesae的總RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，通過引物擴(kuò)增和鑒定了半乳糖凝集素基因rpgal。通過pET-His構(gòu)建了重組原核表達(dá)載體，在大腸桿菌BL21中進(jìn)行重組蛋白表達(dá)，純化后的蛋白純度高、活力好，為該蛋白的實(shí)際應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。通過同源重組表達(dá)半乳糖凝集素，可以克服分離純化過程復(fù)雜繁瑣、產(chǎn)量低等不足，為該蛋白能廣泛應(yīng)用于生物、食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等研究領(lǐng)域奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】管狀蠕蟲半乳糖凝集素及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及管狀蠕蟲(Ridgeia piscesae)半乳糖凝集素基因的核苷酸序列以及其所編碼的氨基酸序列，尤其是涉及管狀蠕蟲(Ridgeia piscesae)半乳糖凝集素及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]凝集素是自然界廣泛存在的一類選擇性識(shí)別糖結(jié)構(gòu)并與其非共價(jià)結(jié)合的蛋白質(zhì)，根據(jù)來源可分為動(dòng)物凝集素、植物凝集素和微生物凝集素。半乳糖凝集素(Galectin)是動(dòng)物凝集素家族中的一員，存在于多種動(dòng)物體內(nèi)，參與細(xì)胞粘附、生長調(diào)節(jié)和免疫反應(yīng)等多種生物學(xué)過程。到目前為止，已在多種脊椎、無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)多個(gè)半乳糖凝集素家族成員。從哺乳動(dòng)物體內(nèi)克隆得到的共14個(gè)成員，按結(jié)構(gòu)不同分為3類:單一型、串聯(lián)重復(fù)型、嵌合型。這些成員在結(jié)構(gòu)上均具有保守的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(CRD)，并對(duì)(6-半乳糖苷有特殊親和力，在機(jī)體的多種生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，從海洋無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的多種凝集素，它們不僅作為一種非特異性識(shí)別因子，識(shí)別自身和異己成分；還具有凝集細(xì)胞，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，抑制血小板凝集，細(xì)胞毒性，催化活性等作用。
[0003]深海熱液區(qū)的環(huán)境特征是:黑暗、高壓、氧濃度低、寡營養(yǎng)以及溫度、鹽度、pH值等急劇變化。在如此惡劣的生活環(huán)境下，使得以管狀蠕蟲為代表的熱液區(qū)生物具備了適應(yīng)極端環(huán)境的特殊機(jī)制(如耐鹽性、耐高溫、耐高壓和高滲透性等)。獨(dú)特的適應(yīng)性機(jī)制，使其在生理代謝過程中形成了各種生物活性物質(zhì)，與陸地資源相比更具特殊性，是極具潛在應(yīng)用價(jià)值的資源。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素基因；
[0005]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素蛋白序列；
[0006]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素；
[0007]本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素的制備方法。
[0008]本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素RpGal在生物學(xué)活性分析中的應(yīng)用。
[0009]所述管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素基因，其編碼管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的核苷酸序列，記作rpgal。
[0010]所述管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素基因rpgal的分子類型為DNA,序列特征:長度為1092bp，類型為核酸，鏈性為雙鏈，拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)為線性，所述管狀蠕蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因rpgal的序列如下所示,記為SEQ ID N0.1:
[0011]I ATGATGAACG CACCAGGAAT GGCTGTCAGA CCAGAAACCG TTATCATAAA CCCACCAATT
【權(quán)利要求】
1.管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因,其特征在于編碼管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的核苷酸序列，記作rpgal。
2.如權(quán)利要求1所述管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因,其特征在于所述管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素基因rpgal的分子類型為DNA,序列特征:長度為1092bp，類型為核酸，鏈性為雙鏈，拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)為線性，所述管狀蠕蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素基因rpgal的序列如下所示，記為SEQ ID N0.1:

3.如權(quán)利要求1所述管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因,其特征在于其核苷酸序列采用以下方法獲得:提取管狀螺蟲Ridgeia piscesae的RNA,并將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)一步以cDNA為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增得到SEQ ID N0.1的序列；相關(guān)的核苷酸序列通過預(yù)測(cè)獲得基因編碼的多肽SEQ ID N0.2，然后進(jìn)行原核表達(dá)載體構(gòu)建獲得重組表達(dá)蛋白。
4.管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素,其特征在于包括具有凝集活性的管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素RPGAL。
5.如權(quán)利要求4所述管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素,其特征在于所述管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素RPGAL的分子類型為蛋白質(zhì),序列特征:長度為363aa,類型為氨基酸,所述管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素RPGAL的序列如下所示，記為 SEQ ID N0.2:
6.如權(quán)利要求5所述管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素,其特征在于所述蛋白具有SEQ ID N0.2所示氨基酸序列的多肽；或?qū)EQ ID N0.2氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有與SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列相似功能的多肽。
7.如權(quán)利要求4所述管狀螺蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的制備方法,其特征在于包括以下步驟: 一個(gè)管狀螺蟲Ridgeia piscesae總RNA的提取的步驟； 一個(gè)管狀螺蟲Ridgeia piscesae cDNA反轉(zhuǎn)錄的步驟； 一個(gè)管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素的PCR擴(kuò)增和序列分析的步驟； 一個(gè)管狀螺蟲Ridgeia piscesae半乳糖凝集素的重組表達(dá)的步驟。
8.如權(quán)利要求4所述管狀螺 蟲Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素RpGal在生物學(xué)活性分析中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/12GK103484470SQ201310425843
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】阮靈偉, 施泓, 徐洵, 徐海鵬 申請(qǐng)人:國家海洋局第三海洋研究所