專利名稱：一種地衣芽孢桿菌的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及發(fā)酵工程領域，具體涉及一種地衣芽孢桿菌的制備方法。
背景技術：
地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)具有促進腸道內正常生理性厭氧菌的生長，調整腸道菌群失調，恢復腸道功能的作用，同時對腸道細菌感染具有特效。現(xiàn)有地衣芽孢桿菌的制備方法產物單一，目前的工藝仍有待改進。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種既能制備優(yōu)良地衣芽孢桿菌，又能制備大量其他有益代謝產物的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術解決方案是:提供一種地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:
液態(tài)發(fā)酵:8%接種地衣芽孢桿菌于發(fā)酵罐中，邊加邊攪拌，添加結束后，控制一定的攪拌轉速，好氧培養(yǎng)，保持一定溫度，發(fā)酵過程pH值不低于6.5 ；
所述液體培養(yǎng)基成分為:淀粉0.5重量％,尿素0.5重量％,豆柏粉I重量％,磷酸氫二鉀0.6重量％，磷酸二氫鉀0.3重量％，酵母膏0.05重量％，硫酸鎂0.1重量％，硫酸錳0.02重量% ；
固體發(fā)酵:50%接種 液態(tài)發(fā)酵所得到的發(fā)酵液于固體培養(yǎng)基中，進行封閉式厭氧發(fā)酵一定時間，保持一定溫度，發(fā)酵過程pH值不低于6-6.5 ；
所述固體培養(yǎng)基成分為:紅糖I重量％，玉米粉50重量％，麩皮37.35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸鎂0.6重量％，硫酸銨0.5重量％，磷酸氫二鉀0.5重量％，吐溫-80 0.05體積％ ;
烘干和檢測。所述地衣芽孢桿菌為保藏號為CGMCC N0.2876的地衣芽孢桿。所述液態(tài)發(fā)酵為8%接種保藏號為CGMCC N0.2876的地衣芽孢桿菌于所述發(fā)酵罐中，邊加邊攪拌，攪拌速度60-80rpm,添加結束后,控制轉速230_270rpm的條件下好氧培養(yǎng)48小時，保持溫度37°C，發(fā)酵過程的初始通氣量為1:0.5，pH值不低于6-6.5 ;發(fā)酵過程中灌壓為 0.04—0.06Mpa ；
所述固體發(fā)酵為50%接種液態(tài)發(fā)酵所得到的發(fā)酵液于固體培養(yǎng)基中，進行封閉式厭氧發(fā)酵80-110小時，72小時之前35— 38°C，72-96小時升溫至55_60°C。所述烘干采用氣流干燥方式烘干，所述烘干溫度不高于85°C，優(yōu)選為80— 85°C。所述檢測為NY1461-2007方法檢測活菌總數(shù)；顯微鏡計數(shù)法檢測芽孢數(shù)；液相色譜儀檢測有機酸；碘-淀粉比色法檢測淀粉酶；福林-酚試劑法檢測蛋白酶。本發(fā)明還保護所述方法制備的地衣芽孢桿菌和或其他成分，所述其他成分為有機酸和或消化酶；優(yōu)選的，所述有機酸為3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，軟脂酸，亞油中的至少一種；所述消化酶為淀粉酶和蛋白酶中的至少一種。本發(fā)明與現(xiàn)有方法相比，增加了固體、厭氧式發(fā)酵階段，在這個階段中，地衣芽孢桿菌數(shù)量不再增加，但產生大量代謝產物，使得最終產品既含有益生菌-地衣芽孢桿菌，又含有益生元-代謝產物，這兩類物質的綜合作用，能顯著改善動物的胃腸道功能，促進動物健康生長，效果優(yōu)于單一的活菌。同時本發(fā)明的方法簡單，成本低廉。便于工業(yè)化實施。
具體實施例方式下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產品。實施例1:液態(tài)發(fā)酵
1、培養(yǎng)基組份:淀粉0.5重量％，尿素0.5重量％，豆柏粉I重量％，磷酸氫二鉀0.6重量％，磷酸二氫鉀0.3重量％，酵母膏0.05重量％，硫酸鎂0.1重量％，硫酸錳0.02重量％。2、接種量:8%地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis),來自廈門大學化學化工學院，保藏于CGMCC，保藏號CGMCC N0.2876，保藏日期2009年01月14日，專利號:ZL201010269454，
公開日期是2010年12月01日。3、溫度:37°C
4、初始通氣量:1:0.5
5、發(fā)酵過程pH值:不低于6.5
6、攪拌轉速:250rpm
7、發(fā)酵過程溶氧量相對值:不低于25%
8、發(fā)酵過程中灌壓:0.04—0.06Mpa
9、發(fā)酵時間:好氧培養(yǎng)48小時。以1000升發(fā)酵罐為例:8%接種量接種地衣芽孢桿菌CGMCC N0.2876于800升培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基加入在1000升發(fā)酵罐(江蘇科海生物工程設備有限公司，KRH-CPJ1000L)中，邊加邊攪拌(攪拌速度:70rpm)，添加結束后，在轉速250rpm的條件下好氧培養(yǎng)48小時。實施例2:固體發(fā)酵
1、培養(yǎng)基組份:紅糖I重量％，玉米粉50重量％，麩皮37.35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸鎂0.6重量％，硫酸銨0.5重量％，磷酸氫二鉀0.5重量％，吐溫-80 0.05體積％
2、接種量:50%(使用實施例1所得到的發(fā)酵液)
3、發(fā)酵方式:封閉式厭氧發(fā)酵
4、發(fā)酵過程溫度-J2小時之前35—38°C，72-96小時升溫至55_60°C
5、發(fā)酵時間:96小時
實施例3:烘干及檢測
采用低溫沸騰干燥，烘干溫度不高于85°C。實施例1使用1000升發(fā)酵罐，最終產量760千克(直接烘干后稱重)，得率94.6%。(得率=最終產物重量*100%/ (800+液體培養(yǎng)基干物質重))
檢測方法:1.地衣芽孢桿菌:活菌總數(shù)用NY1461-2007規(guī)定的方法檢測，芽孢數(shù)用顯微鏡計數(shù)法檢測，PH值用pH計進行檢測。地衣芽孢桿菌活菌總數(shù)大于或等于200億/克，其中芽孢數(shù)大于或等于180億；pH值5-6。2.有機酸:用高效液相色譜儀進行定性定量檢測，結果為含量0.50%，定性檢測確定有機酸為3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，軟脂酸，亞油酸；
3.消化酶(淀粉酶，蛋白酶):淀粉酶用碘-淀粉比色法進行定性、定量分析，蛋白酶用福林-酚試劑法進行定性、定量分析；結果為淀粉酶1000IU/克，蛋白酶500IU/克。盡管上面已經示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領域的普通技術人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內可以對上`述實施例進行變化、修改、替換和變型。
權利要求
1.一種地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 液態(tài)發(fā)酵8%接種地衣芽孢桿菌于發(fā)酵罐中，邊加邊攪拌，添加結束后，控制一定的攪拌轉速，好氧培養(yǎng)，保持一定溫度，發(fā)酵過程pH值不低于6. 5 ； 所述液體培養(yǎng)基成分為淀粉0. 5重量％,尿素0. 5重量％,豆柏粉I重量％,磷酸氫二鉀0. 6重量％，磷酸二氫鉀0. 3重量％，酵母膏0. 05重量％，硫酸鎂0. I重量％，硫酸錳0. 02重量% ； 固體發(fā)酵50%接種液態(tài)發(fā)酵所得到的發(fā)酵液于固體培養(yǎng)基中，進行封閉式厭氧發(fā)酵一定時間，保持一定溫度，發(fā)酵過程pH值不低于6-6. 5 ； 所述固體培養(yǎng)基成分為紅糖I重量％，玉米粉50重量％，麩皮37. 35重量％，豆柏粉10重量％，硫酸鎂0. 6重量％，硫酸銨0. 5重量％，磷酸氫二鉀0. 5重量％，吐溫-80 0. 05體積％ ; 烘干和檢測。
2.權利要求I的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述地衣芽孢桿菌為保藏號為CGMCC No. 2876的地衣芽孢桿。
3.權利要求I的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述液態(tài)發(fā)酵為8%接種保藏號為CGMCC No. 2876的地衣芽孢桿菌于所述發(fā)酵罐中，邊加邊攪拌，攪拌速度60-80rpm，添加結束后，控制轉速230-270rpm的條件下好氧培養(yǎng)48小時，保持溫度37°C，發(fā)酵過程的初始通氣量為1:0. 5，pH值不低于6-6. 5 ;發(fā)酵過程中灌壓為0. 04—0. 06Mpa。
4.權利要求I的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述固體發(fā)酵為50%接種液態(tài)發(fā)酵所得到的發(fā)酵液于固體培養(yǎng)基中，進行封閉式厭氧發(fā)酵80-110小時，72小時之前35—380C，72-96 小時升溫至 55-60°C。
5.權利要求I的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述烘干采用氣流干燥方式烘干。
6.權利要求5的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述烘干溫度為80—85°C。
7.權利要求I的地衣芽孢桿菌的制備方法，其特征在于，所述檢測為NY1461-2007方法檢測活菌總數(shù)；顯微鏡計數(shù)法檢測芽孢數(shù)；液相色譜儀檢測有機酸；碘-淀粉比色法檢測淀粉酶；福林-酚試劑法檢測蛋白酶。
8.權利要求1-7任一方法制備得到的地衣芽孢桿菌和或其他成分，其特征在于，所述其他成分為有機酸和或消化酶。
9.權利要求8制備得到的地衣芽孢桿菌和或其他成分，其特征在于，所述有機酸為·3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，軟脂酸，亞油中的至少一種；所述消化酶為淀粉酶和蛋白酶中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種地衣芽孢桿菌的制備方法。包括接種CGMCC No.2876的地衣芽孢桿菌進行液態(tài)發(fā)酵、固體發(fā)酵、烘干和檢測的步驟。本發(fā)明的方法所制備得到的地衣芽孢桿菌還伴有大量其他有益代謝產物3-甲基丁酸，2-甲基-丁酸，苯乙酸，十五烷酸，軟脂酸，亞油酸等有機酸和淀粉酶及蛋白酶等消化酶。使得最終產品既含有益生菌-地衣芽孢桿菌，又含有益生元-代謝產物，這兩類物質的綜合作用，能顯著改善動物的胃腸道功能，促進動物健康生長，效果優(yōu)于單一的活菌。同時本發(fā)明的方法簡單，成本低廉，便于工業(yè)化實施。
文檔編號C12P7/64GK103255094SQ20131018708
公開日2013年8月21日 申請日期2013年5月20日 優(yōu)先權日2013年5月20日
發(fā)明者廖莊旺 申請人:廈門六維生物科技有限公司