L-氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的微生物及利用其產(chǎn)生l-氨基酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種L-氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的埃希氏菌屬微生物及利用所述埃希氏菌屬微生物生產(chǎn)L-氨基酸的方法，其中將所述微生物轉(zhuǎn)化為具有增強(qiáng)的NAD激酶活性和tehB基因編碼的具有SEQ?ID?NO.2氨基酸序列的酶失活。
【專利說明】L-氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的微生物及利用其產(chǎn)生L-氨基酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種有用氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的微生物及利用其產(chǎn)生L-氨基酸的方法，由于還原力增加致使細(xì)胞活性提高并縮短細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。
【背景技術(shù)】
[0002]已知微生物通過發(fā)酵作用產(chǎn)生有用產(chǎn)物，需要大量的能量，如ATP (5’ -三磷酸腺苷)或還原力，如NADPH(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)，以增強(qiáng)其生物合成途徑。
[0003]在微生物的代謝過程中，分解反應(yīng)所用的NADH(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)和合成反應(yīng)所用的NADPH(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)二者在細(xì)胞內(nèi)的平衡是非常重要的。該平衡通過下式所示的NAD磷酸化或NADP的去磷酸化進(jìn)行控制。
[0004]NAD++ATP — NADP++ADP
[0005]NADP+ — NAD++ 磷酸鹽
[0006]在大腸桿菌(E.coll)中，已知NAD的磷酸化被nadK (或yf jB)基因編碼的NAD激酶(EC2.7.1.23)催化。NAD激酶利用Mg2+作為酶反應(yīng)的輔助因子，并被NADPH和NADH別構(gòu)抑制?，F(xiàn)已知 NAD+ 的 Km 值是 2000 μ Μ, ATP 的 Km 值是 2500 μ M (Eur.J.Biochem.，(2001)268:4359-4365)。
[0007]盡管其在代謝途徑中具有明顯的重要性，然而，對NADP的去磷酸化的研究卻很少。雖然古生菌詹氏甲燒球菌(Methanococcus jannaschii)的NAD激酶同系物，經(jīng)證明具有NADP磷酸酶活性 ，然而在真核生物和真細(xì)菌中仍然未鑒定到編碼具有這類活性的酶的基因。在大腸桿菌中，cysQ基因的產(chǎn)物顯示出高NADP和NADPH磷酸酶活性，但純化的酶的動(dòng)力學(xué)研究表明，它不是所述有機(jī)體真正的NADP磷酸酶(BiochemJ., (2007)402:205-218, Biosc1.Biotechnol.Biochem., (2008)72:919-930)。
[0008]在許多微生物中發(fā)現(xiàn)了 NAD激酶活性，對催化活性具有重要意義的NAD-結(jié)合位點(diǎn)和NAD激酶的活性位點(diǎn)顯示了物種之間高度保守的氨基酸序列。例如，各種微生物，包括革蘭氏陽性菌，都顯示在螺旋2、4和5 (其各自以H2、H4和H5表示)的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測中顯示出高度的同源性(Appl Microbiol Biotechnol (2010) 87:583-593)。
[0009]NAD激酶產(chǎn)生的NADP最后提供還原力，特別是在大腸桿菌中大量產(chǎn)生有用產(chǎn)物所需的NADP+/NADPH是合成代謝反應(yīng)的必需元素(Biochem J.，(2007)402:205-218)。在大腸桿菌中，NADPH主要通過以下方式產(chǎn)生:1)氧化磷酸戊糖途徑，2)TCA循環(huán)中的NADP依賴性異檸檬酸脫氫酶(icd基因)，以及3)轉(zhuǎn)氫酶(pntAB基因)(J BiolChem., (2004)279:6613-6619)。
[0010]這些反應(yīng)使用NADP作為底物產(chǎn)生NADPH，從而通過增加NADP的細(xì)胞內(nèi)水平來增加NADPH的水平。因此，為了各種代謝物質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)，在增加NADP的細(xì)胞內(nèi)水平上做了許多嘗試，如，I)通過在大腸桿菌中超表達(dá)nadK增加NADPH和胸苷產(chǎn)量(BiotechnolLett.，(2009) 31:19291936)，2)通過在大腸桿菌中超表達(dá)nadK增加NADPH和PHB (聚羥基丁酸酯)的產(chǎn)量(Appl Microbiol Biotechnol., (2009) 83:939947)，以及 3)與在大腸桿菌中超表達(dá)nadK相似,通過在棒狀桿菌(Corynebacterium)中超表達(dá)ppnK增加賴氨酸產(chǎn)量。以上嘗試的關(guān)鍵點(diǎn)在于增加nadK基因的表達(dá)。然而，在上述每種情況下，還必須增加諸如ATP的磷酸源，以通過增加NADPH的水平來增加還原力，其源于通過NAD激酶的高表達(dá)而增加的NADP水平。
[0011]在微生物中，ATP主要通過電子傳遞系統(tǒng)或底物水平磷酸化產(chǎn)生。產(chǎn)生的ATP通過分解為細(xì)胞提供能量，也通過糖酵解反應(yīng)或氧化磷酸化反應(yīng)重新生成?；谶@一事實(shí)，已經(jīng)對將細(xì)菌ATP再生系統(tǒng)應(yīng)用到生產(chǎn)過程中進(jìn)行了研究，以便在有用產(chǎn)物的大量生產(chǎn)過程中提供能量(Biosci Biotechnol Biochem., (1997)61:840-845)。然而，如上所述，有關(guān)增加磷酸源方法的研究很少，而增加磷酸源是通過NAD激酶的高表達(dá)來增加還原力以及隨后增加生物合成產(chǎn)物所需的。此外，在向細(xì)胞供應(yīng)能量方面，對通過大量產(chǎn)生ATP來增加能量供應(yīng)的研究很少，并且相關(guān)技術(shù)中也沒有進(jìn)行利用ATP作為磷酸源的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]技術(shù)問題
[0013]因此，為了研發(fā)產(chǎn)生高濃度L-氨基酸的微生物，本發(fā)明人已經(jīng)研究了參與各種能量和還原力代謝的基因。結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了一種能夠有效產(chǎn)生高濃度的L-氨基酸的微生物，其具有增強(qiáng)的nadK編碼的NAD激酶的表達(dá)，并且tehB基因編碼的氨基酸序列如SEQID N0.2的酶失活，并在此基礎(chǔ)上，能夠有效地增加磷酸源ATP，從而完成了本發(fā)明。
[0014]換而言之，本發(fā)明涉及通過在微生物中有效增加還原力來增加所需氨基酸產(chǎn)量的方法，其中，額外供應(yīng)在NADP生物合成過程中待還原的ATP，以增加具有L-氨基酸生產(chǎn)力的埃希氏菌屬(Escherichia)的還原力。
[0015]因此，本發(fā)明的目的在于提供一種L-氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的埃希氏菌屬微生物，其中所述微生物經(jīng)轉(zhuǎn)化而具有增強(qiáng)的NAD激酶活性并且tehB基因編碼的具有SEQ ID N0.2氨基酸序列的酶失活，從 而具有增強(qiáng)的還原力。
[0016]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種利用所述埃希氏菌屬微生物產(chǎn)生L-氨基酸的方法。
[0017]技術(shù)方案
[0018]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供了具有增強(qiáng)的L-氨基酸生產(chǎn)力的埃希氏菌屬微生物，其中所述微生物經(jīng)轉(zhuǎn)化具有增強(qiáng)的NAD激酶活性且tehB基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID N0.2的酶失活。本發(fā)明的另一目的是，提供利用所述埃希氏菌屬微生物產(chǎn)生L-氨基酸的方法。
[0019]有益效果
[0020]根據(jù)本發(fā)明，通過增強(qiáng)NADP，在具有L-氨基酸生產(chǎn)力的微生物的細(xì)胞內(nèi)能量代謝中補(bǔ)充還原劑NADPH，并且通過使tehB基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID N0.2的酶失活，來供應(yīng)隨后缺乏的ATP，從而通過恢復(fù)能量代謝平衡、增加細(xì)胞活性及減少培養(yǎng)時(shí)間，來提高L-氨基酸生產(chǎn)力。
【專利附圖】

【附圖說明】[0021]圖1為所示為用于增加大腸桿菌nadK基因拷貝數(shù)的載體nadK_pINT17E。
[0022]最佳實(shí)施方式
[0023]本發(fā)明提供了具有增強(qiáng)的L-氨基酸生產(chǎn)力的微生物和利用所述微生物產(chǎn)生L-氨基酸的方法。
[0024]本發(fā)明的產(chǎn)生L-氨基酸的微生物包括任何原核或真核微生物，其實(shí)例包括屬于埃希氏菌屬、歐文氏菌屬(Erwinia)、沙雷氏菌屬(Serratia)、普羅威登斯菌屬(Providencia)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)和短桿菌屬(Brevibacterium)的菌株。本發(fā)明的微生物優(yōu)選是屬于埃希氏菌屬的微生物，更優(yōu)選為大腸桿菌。
[0025]在本發(fā)明中，L-氨基酸優(yōu)選為L-蘇氨酸或L-色氨酸。
[0026]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有增強(qiáng)的L-氨基酸生產(chǎn)力的埃希氏菌屬微生物，其中所述微生物經(jīng)轉(zhuǎn)化具有增強(qiáng)的NAD激酶活性且tehB基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID N0.2的酶失活，從而提高還原力。
[0027]本發(fā)明中，NAD激酶是指一種具有利用來自于ATP或其他化合物的磷酸基團(tuán)將NAD(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)轉(zhuǎn)換為NADP(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)活性的酶。
[0028]本發(fā)明具體公開的具有NAD激酶活性的蛋白質(zhì)序列為SEQ ID N0.4的氨基酸序列，并且編碼所述NAD激酶的nadK基因優(yōu)選為具有SEQ ID N0.3的堿基序列的多核苷酸。
[0029]在本發(fā)明中，可以通過本領(lǐng)域公知的各種方法增強(qiáng)具有L-氨基酸生產(chǎn)力的埃希氏菌屬的NAD激酶活性。例如，所述方法可以包括但并不限于:在染色體中插入編碼NAD激酶的堿基序列本身或包括外源表達(dá)調(diào)控區(qū)的多核苷酸的方法，通過將其導(dǎo)入載體系統(tǒng)增加拷貝數(shù)的方法，或者通過用其他調(diào)控序列取代基因表達(dá)調(diào)控區(qū)、修飾全部或部分的表達(dá)調(diào)節(jié)序列或基因本身突變 來增強(qiáng)酶活性的方法。
[0030]更優(yōu)選地，本發(fā)明可以利用通過將編碼NAD激酶的堿基序列導(dǎo)入菌株的染色體DNA上以增加拷貝數(shù)的方法來增強(qiáng)具有L-氨基酸生產(chǎn)力的屬于埃希氏菌屬微生物的NAD激酶活性。
[0031]本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，染色體DNA內(nèi)NAD激酶拷貝數(shù)增加，與通過染色體外載體增加NAD激酶拷貝數(shù)，具有相同的效果，或與通過在染色體內(nèi)或染色體外位點(diǎn)修飾編碼NAD激酶的nadK基因的表達(dá)調(diào)控區(qū)通過基因本身突變而增加表達(dá)水平，具有相同的效果。當(dāng)使用載體時(shí)，用導(dǎo)入堿基序列的重組載體轉(zhuǎn)化具有L-氨基酸生產(chǎn)力的埃希氏菌屬微生物，從而制備NAD激酶活性增強(qiáng)的埃希氏菌屬的微生物。
[0032]本發(fā)明所用的載體沒有特別的限定，可以使用任何已知的表達(dá)載體。優(yōu)選地，可以使用 pACYC177、pACYC184、pCL、pECCG117、pUC19、pBR322 或 pMW118 載體。
[0033]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案,通過轉(zhuǎn)化增強(qiáng)NAD激酶活性，增加了菌株的細(xì)胞內(nèi)NADP 和 NADPH 水平。
[0034]為了增加ATP的產(chǎn)生，本發(fā)明還應(yīng)用了使tehB基因編碼的酶活性失活的方法。
[0035]在本發(fā)明中，已知tehB基因(NCBI Gene ID:945979)為編碼碲酸鹽抗性蛋白或預(yù)測的S-腺苷-L-甲硫氨酸依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶的基因，但他的作用至今尚不清楚。
[0036]然而，最近的研究報(bào)告稱，大腸桿菌tehB基因的缺失，與親本菌株相比，表現(xiàn)出ATP產(chǎn)量增加150%，這意味著，該結(jié)果歸因于由甲硫氨酸生物合成S-腺苷甲硫氨酸所需的ATP 減少(FEMS Microbiol Lett., (2009)297:217-224)。[0037]具體而言，預(yù)測的S-腺苷-L-甲硫氨酸依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶的序列可能由SEQ IDN0.2的氨基酸序列所披露。另外，編碼所述酶的tehB基因來自于大腸桿菌，優(yōu)選地，具有SEQ ID N0.1的堿基序列的多核苷酸。
[0038]使tehB基因編碼的酶活性失活的方法，包括修飾相應(yīng)基因以防止產(chǎn)生具有SEQ IDN0.1的堿基序列的基因編碼的酶的所有方法。所述方法的示例為，通過同源重組的方法缺失全部或部分基因，或通過在相應(yīng)基因內(nèi)插入轉(zhuǎn)座子以抑制酶的表達(dá)，或通過插入抗生素抗性基因以抑制酶的表達(dá)，但并不限于此。
[0039]如本發(fā)明所用的術(shù)語“轉(zhuǎn)化”是指一種將基因?qū)氲剿拗骷?xì)胞中以在宿主細(xì)胞中表達(dá)的方法。如果轉(zhuǎn)化的基因在宿主細(xì)胞中處于表達(dá)的狀態(tài)，則所述轉(zhuǎn)化的基因包括插入到宿主染色體或位于該染色體其他部分上的任何基因。此外，所述基因包括DNA和RNA，作為能編碼多肽的多核苷酸。只要該基因可以被導(dǎo)入宿主細(xì)胞并在其中表達(dá)，則基因可以以任何形式被導(dǎo)入。例如，基因可以以表達(dá)盒的方式被導(dǎo)入宿主細(xì)胞，所述表達(dá)盒是自身包含用于表達(dá)該基因的全部元件的多核苷酸表達(dá)體(expressome)。表達(dá)盒包含與基因可操作地連接的啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止信號、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和翻譯終止信號。所述表達(dá)盒可以采用能夠自我克隆的表達(dá)載體類型。所述基因也可以通過自身或以待可操作地連接于在宿主細(xì)胞表達(dá)所需序列的多核苷酸表達(dá)體形式，導(dǎo)入宿主細(xì)胞。
[0040]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法轉(zhuǎn)化的微生物可以為大腸桿菌，優(yōu)選為大腸桿菌(E.coli)CA03-448(KCCM11167P)、CA03-449(KCCM11168P)或CA04-200 KKCCMl 1166P)。
[0041]本發(fā)明還提供了利用埃希氏菌屬微生物產(chǎn)生L-氨基酸的方法。
[0042]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)L-氨基酸的方法，其通過在包含蔗糖或葡萄糖作為主要碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)L-蘇氨酸或L-色氨酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的埃希氏菌屬的重組微生物，產(chǎn)生L-氨基酸。具體而言，本發(fā)明提供了產(chǎn)生L-氨基酸的方法，所述方法包括如下步驟:將埃希氏菌 屬的重組微生物接種和培養(yǎng)于全部或部分含有蔗糖或葡萄糖作為碳源的培養(yǎng)基中，以及從該培養(yǎng)基中分離L-氨基酸。
[0043]本發(fā)明的培養(yǎng)過程，可以在本領(lǐng)域已知的合適培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下進(jìn)行。根據(jù)所用的菌株，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地對培養(yǎng)過程進(jìn)行調(diào)整。培養(yǎng)過程的實(shí)例包括分批式、連續(xù)式和補(bǔ)料分批型，但并不限于此。培養(yǎng)方法所用的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)優(yōu)選滿足特定菌株的要求。
[0044]本發(fā)明所用的培養(yǎng)基含有蔗糖或葡萄糖作為主要碳源。含有高濃度蔗糖的糖蜜也可作為碳源，培養(yǎng)基可以含有適量的各種碳源，并無限制。能夠使用的氮源的實(shí)例包括，有機(jī)氮源，如蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、麥芽提取物、玉米漿和大豆粗粉，以及無機(jī)氮源，如尿素、硫酸銨、氯化銨、磷酸銨、碳酸銨和硝酸銨，并且它們可以單個(gè)使用或組合使用。可以向培養(yǎng)基中添加磷源，如磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀或相應(yīng)的含鈉的鹽。此外，培養(yǎng)基還可含有金屬鹽如硫酸鎂和硫酸亞鐵。另外，培養(yǎng)基可以補(bǔ)充有氨基酸、維生素和適當(dāng)?shù)那绑w。這些培養(yǎng)基或前體可以通過分批式或連續(xù)式方法添加到培養(yǎng)物中。
[0045]在培養(yǎng)過程中，可以適當(dāng)添加化合物，如氫氧化銨、氫氧化鉀、氨水、磷酸和硫酸，以調(diào)節(jié)培養(yǎng)物的PH值。進(jìn)一步，在培養(yǎng)期間，可以適當(dāng)加入消泡劑，如脂肪酸聚乙二醇酯，以減少培養(yǎng)物中泡沫的形成。為了將培養(yǎng)物維持于有氧狀態(tài)，可以將氧氣或含氧氣體注入到培養(yǎng)物中。為了保持培養(yǎng)物處于厭氧及微需氧狀態(tài)，可以不注入氣體，或?qū)⒌獨(dú)狻錃饣蚨趸甲⑷氲脚囵B(yǎng)物中。
[0046]將培養(yǎng)物維持在27-37°C，優(yōu)選30-35°C。培養(yǎng)可以持續(xù)，直到獲得所需量的所需物質(zhì)，優(yōu)選培養(yǎng)時(shí)間為10-100小時(shí)。
[0047]可通過本領(lǐng)域已知的適當(dāng)方法，根據(jù)例如分批式、連續(xù)式或分批補(bǔ)料類型，實(shí)施收集和回收本發(fā)明的培養(yǎng)步驟產(chǎn)生的氨基酸的方法，以便從培養(yǎng)基中收集所需氨基酸。
【具體實(shí)施方式】
[0048]下文將參照實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述。然而，這些實(shí)施例僅供說明之用，并非意圖限制本發(fā)明的范圍。
[0049]實(shí)施例1.制備源自大腸桿菌(E.coli)的tehB基因編碼的酶失活的產(chǎn)L-蘇氨酸菌株
[0050]通過同源重組，使產(chǎn)L-蘇氨酸的菌株即大腸桿菌KCCM10541 (Korean PatentN0.10-0576342)的 tehB 基因缺失。
[0051]大腸桿菌KCCM10541菌株來源于產(chǎn)L-蘇氨酸的菌株大腸桿菌KFCC10718 (KoreanPatent Publication N0.10-1992-0008365)的菌株，其親本菌株大腸桿菌 KFCC10718 具有L-甲硫氨酸類似物抗性，甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型表型，L-蘇氨酸類似物抗性，滲漏異亮氨酸營養(yǎng)缺陷型表型，L-賴氨酸的類似物抗性，和α -氨基丁酸抗性，并能產(chǎn)生L-蘇氨酸。
[0052]待缺失的tehB基因(NCBI基因ID:945979)已知編碼預(yù)測的S-腺苷-L-甲硫氨酸依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶。當(dāng)基因缺失后，不再需要S-腺苷甲硫氨酸的產(chǎn)生中所用的ATP，因此為了減少能量消耗量，選擇tehB基因作為靶基因，并且其具有SEQ ID N0.1的堿基序列。
[0053]對于失活，使用一步失活，其是采用Datsenko KA等(Datsenko KA et al., ProcNatl Acad Sci USA., (2000)97:66406645)開發(fā)的λ Red重組酶構(gòu)建突變體的技術(shù)。
[0054]為了確認(rèn)插入到基因中，使用氯霉素抗性基因作為標(biāo)記。為了除去氯霉素抗性基因，使用 Cre/loxP 位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)(BMC Biotechnology (2001) 1:7)。
[0055]聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(下文稱為PCR)通過利用pMloxCm載體為模板和具有部分tehB基因和部分氯霉素抗性基因序列的下述引物I和引物2，在以下反應(yīng)條件下實(shí)施:94°C變性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸I分鐘，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；從而擴(kuò)增約1200bp的基因片段。
[0056]表1
【權(quán)利要求】
1.一種L-氨基酸生產(chǎn)力增強(qiáng)的埃希氏菌屬(Escherichia)微生物,其中所述微生物經(jīng)轉(zhuǎn)化具有增強(qiáng)的NAD激酶活性且tehB基因編碼的具有SEQ ID N0.2的氨基酸序列的酶失活。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述NAD激酶為具有SEQID N0.4的氨基酸序列的蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中通過下述一種或多種方法增強(qiáng)所述NAD激酶的活性:通過染色體插入或載體導(dǎo)入增加拷貝數(shù)，取代或修飾表達(dá)調(diào)控區(qū)，以及基因突變。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述失活通過下述方法中的一種或多種進(jìn)行:通過同源重組缺失部分或全部基因，通過在相應(yīng)基因中插入轉(zhuǎn)座子抑制酶表達(dá)，以及通過插入抗生素抗性基因抑制酶表達(dá)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述埃希氏菌屬微生物為大腸桿菌(E.coli)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述L-氨基酸為L-蘇氨酸或L-色氨酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微生物，其中所述埃希氏菌屬微生物提供有蔗糖同化能力。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述埃希氏菌屬微生物是產(chǎn)L-蘇氨酸的大腸桿菌，保藏編號為KCCM11167P的CA03-448，或保藏編號為KCCM11168P的CA03-449。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物，其中所述埃希氏菌屬微生物是保藏編號為KCCMl 1166P的產(chǎn)L-色氨酸大腸桿菌CA04-2001。
10.產(chǎn)生L-氨基酸的方法，包括以下步驟:將權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的埃希氏菌屬微生物接種并培養(yǎng)于全部或部分含有蔗糖或葡萄糖作為碳源的培養(yǎng)基中；和從所述培養(yǎng)基中分離所述L-氨基酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述L-氨基酸為L-蘇氨酸或L-色氨酸。
【文檔編號】C12N15/69GK103443267SQ201280009090
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2012年1月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年1月18日
【發(fā)明者】李光鎬, 李根喆, 李錫明, 黃榮彬 申請人:Cj第一制糖株式會社