專(zhuān)利名稱(chēng)：收集流體中微生物的設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及環(huán)境微生物學(xué)，具體地，本實(shí)用新型涉及收集流體中微生物的設(shè)備。
背景技術(shù)：
空氣是人類(lèi)賴(lài)以生存的環(huán)境，也是微生物擴(kuò)散與傳播疾病的介質(zhì)，空氣中微生物主要包括細(xì)菌、真菌、病毒和放線(xiàn)菌等多種微生物，這是空氣污染的主要組成部分，這些微生物的產(chǎn)生與人類(lèi)活動(dòng)有密切的關(guān)系?？諝庵形⑸镏饕獊?lái)源于自然界的水體、土壤、動(dòng)植物和人類(lèi)，農(nóng)業(yè)活動(dòng)、動(dòng)物飼養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)、污水處理、發(fā)酵過(guò)程和食品生產(chǎn)廠(chǎng)等，空氣中微生物的多少是空氣質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。要了解空氣中的微生物就必須將微生物富集，以便觀察和分析，這就需要特殊設(shè)計(jì)的空氣微生物采樣器。空氣微生物采樣方法主要分為自然沉降法和機(jī)器采樣法。自然沉降法是利用空氣微生物粒子的重力作用，在一定的時(shí)間內(nèi)，讓所處區(qū)域的空氣中微生物顆粒逐步沉降到帶有培養(yǎng)介質(zhì)的平皿內(nèi)的一種采樣方法。由于此方法是被動(dòng)取樣，采樣條件難以控制，微生物粒子的漂移、擴(kuò)散和沉降會(huì)受到風(fēng)力、電力、磁力、熱力、浮力和擴(kuò)散力等各種力的干擾，因此這種采樣方法會(huì)造成很大的誤差。機(jī)器采樣法是用采樣器來(lái)采樣，根據(jù)采樣原理，采樣器可分為沉降式、撞擊式、離心撞擊式、過(guò)濾式、靜電式、氣旋式等。此外，還有溫差迫降類(lèi)和生物類(lèi)。各種采樣器的研制和使用大大推動(dòng)了空氣微生物學(xué)的發(fā)展，但仍無(wú)一種采樣器是十全十美的。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問(wèn)題之一或至少提供一種有用的商業(yè)選擇。為此，本實(shí)用新型的一個(gè)目的在于提出一種能夠有效地從流體中收集微生物樣本的設(shè)備。為此，本實(shí)用新型提出了從一種收集流體中微生物的設(shè)備，包括:本體，所述本體內(nèi)限定有負(fù)壓腔；負(fù)壓發(fā)生組件，所述負(fù)壓發(fā)生組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔內(nèi)；以及過(guò)濾收集組件，所述過(guò)濾收集組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔的至少一側(cè)。利用該設(shè)備，能夠有效地從流體中收集微生物。根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的用于收集流體中微生物的設(shè)備采用了非自然沉降的富集方式，可以克服被動(dòng)取樣，防止微生物的漂移、擴(kuò)散和受到風(fēng)力、電力、磁力、熱力、浮力和擴(kuò)散力等各種里的干擾。尤其是，通過(guò)采用主動(dòng)式的直接吸入過(guò)濾收集方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)全部微生物，包括細(xì)菌、真菌、病毒等在內(nèi)的一次性同步收集，這克服了現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)基采樣方法的缺陷，從而有效地收集流體中微生物樣本。在現(xiàn)有的培養(yǎng)基采樣方法，由于營(yíng)養(yǎng)條件及培養(yǎng)方式差異，會(huì)造成空氣微生物收集的局限性。另外，根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的設(shè)備可用于收集各種不同開(kāi)放環(huán)境的空氣樣本，不僅覆蓋面廣而且操作簡(jiǎn)便。另外，本實(shí)用新型中提供的提取空氣樣本核酸的方法非常有效。[0007]本實(shí)用新型的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本實(shí)用新型的實(shí)踐了解到。

本實(shí)用新型的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:圖1顯示了根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的收集流體中微生物的設(shè)備結(jié)構(gòu)示意圖，其中A、B和C分別顯示了根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的收集流體中微生物的設(shè)備結(jié)構(gòu)示意圖；圖2顯示了根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的收集流體中微生物的設(shè)備的過(guò)濾收集組件的立體分解示意圖；圖3顯示了根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的從空氣樣本中提取RNA后用2100芯片檢測(cè)的結(jié)果圖；以及圖4顯示了根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的只采用溶菌酶提取空氣樣本IRNA提取后用2100芯片檢測(cè)的結(jié)果圖。
具體實(shí)施方式
下面詳細(xì)描述本實(shí)用新型的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類(lèi)似的標(biāo)號(hào)表示相同或類(lèi)似的元件或具有相同或類(lèi)似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本實(shí)用新型，而不能理解為對(duì)本實(shí)用新型的限制。在本實(shí)用新型的第一方面，本實(shí)用新型提出了一種用于從流體尤其是空氣中收集微生物的設(shè)備。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，參考圖1A C，該設(shè)備1000實(shí)用新型的實(shí)施例，收集流體中微生物的設(shè)備1000包括:本體100、過(guò)濾收集組件200以及負(fù)壓發(fā)生組件300。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，本體100內(nèi)限定有負(fù)壓腔110，負(fù)壓發(fā)生組件300設(shè)置在負(fù)壓腔110內(nèi)，用于在負(fù)壓腔110內(nèi)形成負(fù)壓，過(guò)濾收集組件200設(shè)置在負(fù)壓腔110的至少一側(cè)，以便使得流體可以通過(guò)過(guò)濾收集組件200進(jìn)入負(fù)壓腔110。根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的用于收集流體中微生物的設(shè)備采用了非自然沉降的富集方式，可以克服被動(dòng)取樣，防止微生物的漂移、擴(kuò)散和受到風(fēng)力、電力、磁力、熱力、浮力和擴(kuò)散力等各種里的干擾。尤其是，通過(guò)采用主動(dòng)式的直接吸入過(guò)濾收集方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)全部微生物，包括細(xì)菌、真菌、病毒等在內(nèi)的一次性同步收集，這克服了現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)基采樣方法的缺陷，從而有效地收集流體中微生物樣本。在現(xiàn)有的培養(yǎng)基采樣方法，由于營(yíng)養(yǎng)條件及培養(yǎng)方式差異，會(huì)造成空氣微生物收集的局限性。需要說(shuō)明的是，雖然在附圖中所給出的設(shè)備是立式的，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，也可以采用其他形式，例如臥式。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，負(fù)壓發(fā)生組件300的類(lèi)型并不受特別限制，例如可以為抽真空裝置。另外，參考圖1B和C，負(fù)壓發(fā)生組件300進(jìn)一步包括葉片320 ;驅(qū)動(dòng)裝置310，所述驅(qū)動(dòng)裝置320與所述葉片310通過(guò)連接桿330相連，用于驅(qū)動(dòng)所述葉片轉(zhuǎn)動(dòng)。從而通過(guò)葉片310的轉(zhuǎn)動(dòng)，驅(qū)動(dòng)負(fù)壓腔110內(nèi)空氣的流動(dòng)，可以在負(fù)壓腔內(nèi)形成局部負(fù)壓，從而驅(qū)動(dòng)流體通過(guò)過(guò)濾收集組件200進(jìn)入負(fù)壓腔110。根據(jù)本實(shí)用新型的示例，在與所述過(guò)濾收集組件相對(duì)的側(cè)壁上形成有通孔120。由此，可以在葉片310的轉(zhuǎn)動(dòng)過(guò)程中，將負(fù)壓腔110中的氣體排出負(fù)壓腔110，從而可以在負(fù)壓腔110中形成持續(xù)穩(wěn)定的負(fù)壓，從而有效地提高了收集生物樣本尤其是微生物樣本的效率。根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)例，所述葉片310與過(guò)濾收集組件200相對(duì)設(shè)置，并且過(guò)濾收集組件可拆卸地與所述殼體相連。由此，可以進(jìn)一步有效地通過(guò)葉片旋轉(zhuǎn)帶動(dòng)空氣流動(dòng)，并從通孔120將空氣排出，從而在負(fù)壓腔110種形成負(fù)壓，簡(jiǎn)單方便地形成負(fù)壓。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，收集流體中微生物的設(shè)備1000進(jìn)一步包括:限位部件400，所述限位部件400設(shè)置在所述本體110上，用于對(duì)所述過(guò)濾收集組件200進(jìn)行限位。根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)例，限位部件400可移動(dòng)地設(shè)置在所述本體110上。由此，可以對(duì)過(guò)濾收集組件200的位置進(jìn)行限定。參考圖2根據(jù)本實(shí)用新型的示例，過(guò)濾收集組件200包括:濾膜22 ;膜前收集網(wǎng)格槽21 ;和膜后網(wǎng)式襯墊23，其中，所述濾膜22設(shè)置在所述膜前收集網(wǎng)格槽21和所述膜后網(wǎng)式襯墊23之間。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，濾膜22的孔徑大小并不受特別限制，根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以為0.1 10微米。所述濾膜的種類(lèi)也不受特別限制，根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以為選自尼龍膜濾膜、聚脂核孔膜、聚丙烯膜、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜和醋酸纖維膜的至少之一。根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)例，所述濾膜優(yōu)選為醋酸纖維膜。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，過(guò)濾收集組件200進(jìn)一步包括:密封框架24，所述密封框架24設(shè)置于膜前收集網(wǎng)格槽21和膜后網(wǎng)式襯墊23之間，用于對(duì)收集網(wǎng)格槽24與膜后網(wǎng)式襯墊22進(jìn)行密封。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，該密封框架24的材質(zhì)并不受特別限制，根據(jù)本實(shí)用新型的示例，所述框架可以為橡膠框架。由此，可進(jìn)一步有效地保證膜前收集網(wǎng)格槽24與膜后網(wǎng)式襯墊22的密封連接。為了方便理解，下面對(duì)可以從生物樣本提取核酸的方法，尤其是適合從利用本實(shí)用新型實(shí)施例的設(shè)備提取的生物樣本尤其是微生物樣本提取核酸的方法進(jìn)行描述。在本實(shí)用新型的第二方面，本實(shí)用新型提供了一種從生物樣本中提取核酸的方法。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，該提取核酸的方法包括以下步驟:裂解所述生物樣本，以便得到含有核酸的裂解產(chǎn)物；以及從所述裂解產(chǎn)物中分離所述核酸。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，裂解所述生物樣本進(jìn)一步包括:利用含有溶菌酶、蝸牛酶和溶壁酶的混合物，對(duì)所述生物樣本進(jìn)行消化；將消化產(chǎn)物離心，收集沉淀；以及利用裂解液，對(duì)所述沉淀進(jìn)行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解產(chǎn)物。根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)示例，優(yōu)選地，所述溶菌酶、蝸牛酶和溶壁酶的比例為1:1:1。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)采用溶菌酶、蝸牛酶和溶壁酶的組合，能夠有效地對(duì)生物樣本進(jìn)行消化，從而能夠以顯著高于現(xiàn)有技術(shù)的效率，從生物樣本尤其是從空氣中所收集的微生物中提取核酸。為此，根據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的從生物樣本提取核酸的方法，可以有效地從生物樣本中提取核酸，尤其是對(duì)微生物破壁的效果明顯，可以同時(shí)提取DNA和RNA，特別是RNA的完整性和純度都非常高，同時(shí)這種方法也適用于各種環(huán)境樣品例如空氣中微生物的核酸的提取。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以用于本實(shí)用新型的裂解液的類(lèi)型并不受特別限制根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，所述裂解液可以含有200mmol/LNaCl, 100mmol/LTris-HCl, pH8.0, 2.0%SDS, 50mmol/L EDTA, 0.5%Triton X-1OO0 根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)例，所述裂解液中可以進(jìn)一步含有蛋白酶K。根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，所述裂解是在50-55攝氏度下進(jìn)行的。由此，可以進(jìn)一步提高裂解生物樣品尤其是從微生物樣品的效率，從而進(jìn)一步提高從生物樣品提取核酸的效率。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，從該裂解產(chǎn)物中分離核酸進(jìn)一步包括:對(duì)所述裂解產(chǎn)物進(jìn)行離心，收集第一上清液；將含有酚、氯仿和異戊醇的混合物與所述第一上清液按照等體積混合，進(jìn)行離心后，收集第二上清液，其中，所述含有酚、氯仿和異戊醇的混合物中酚、氯仿和異戊醇的體積比為25:24:1 ;將含有氯仿和異戊醇的混合物與所述第二上清液按照等體積混合，進(jìn)行離心后，收集第三上清液；以及將含有異丙醇和醋酸鈉的混合物與所述第三上清液按照0.7:1的體積比混合，進(jìn)行離心后，收集核酸沉淀。由此，可以進(jìn)一步顯著地提高所得到核酸樣品的純度。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以利用本實(shí)用新型的方法提取核酸的樣品來(lái)源并不受特別限制。根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，所采用的生物樣本是從流體收集的微生物樣本。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以通過(guò)下列方法從流體收集微生物樣本:在壓力差的作用下，使含有微生物的流體通過(guò)濾膜，其中，所述濾膜進(jìn)樣側(cè)的壓力高于所述濾膜出樣側(cè)的壓力，所述濾膜的孔徑使得所述微生物被截留在所述濾膜上。由此，可以有效地從流體中收集微生物樣本，從而進(jìn)一步提高從生物樣品提取核酸的效率。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以利用本實(shí)用新型的方法進(jìn)行處理的微生物樣本的類(lèi)型并不受特別限制，根據(jù)本實(shí)用新型的一些實(shí)例，所述微生物可以為選自細(xì)菌、真菌、病毒和放線(xiàn)菌的至少之一。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以采用的流體類(lèi)型并不受特別限制，根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施例，可以采用的流體為氣體，例如可以為空氣。由此，利用根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以有效地從氣體例如空氣中收集微生物樣品根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，壓力差是通過(guò)所述出樣側(cè)形成空氣的定向流動(dòng)形成的，其最佳壓力范圍是高于lOOOPa，并且不超過(guò)3000Pa。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)壓力差不超過(guò)IOOOPa時(shí)，流體尤其是空氣將難以有效地通過(guò)濾膜，從流體尤其是空氣中收集生物樣本尤其是微生物的效率將顯著降低，而當(dāng)壓力超過(guò)3000Pa時(shí)，生物樣本尤其是微生物樣本將難以停留在濾膜上，從而收集生物樣本尤其是微生物的效率也將顯著降低。根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)示例，所述濾膜的孔徑大小并不受特別限制，可以為0.1 10微米。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)例，所述濾膜的種類(lèi)也不受特別限制，可以為選自尼龍膜濾膜、聚脂核孔膜、聚丙烯膜、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜和醋酸纖維膜的至少之一。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，優(yōu)選醋酸纖維膜，因?yàn)榇姿崂w維膜具有很高的流速和熱穩(wěn)定性以及非常低的吸附，非常適合除菌過(guò)濾。根據(jù)本實(shí)用新型的實(shí)施例，所述醋酸纖維膜的孔徑可以為0.22微米。下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下面的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本實(shí)用新型，而不應(yīng)視為限定本實(shí)用新型的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，第三版，科學(xué)出版社)或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠(chǎng)商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品，例如可以采購(gòu)自Illumina 公司。實(shí)施例1[0034]1、樣本收集前準(zhǔn)備根據(jù)圖1C和圖2所示結(jié)構(gòu)，取一塊新的醋酸纖維素膜，將過(guò)濾收集組件與殼體連接，準(zhǔn)備好收集裝備。2、樣本收集將空氣富集裝置開(kāi)關(guān)打開(kāi)，在1000Pa〈H彡3000Pa壓力下，分別在兩個(gè)釀酒廠(chǎng)的車(chē)間內(nèi)連續(xù)開(kāi)機(jī)抽氣3天，抽氣結(jié)束后，取出網(wǎng)格槽內(nèi)濾膜，在超凈臺(tái)內(nèi)，撕下濾膜收集菌體，收集得空氣樣本I和空氣樣本2。3、空氣樣本核酸提取將收集到的菌體與撕下來(lái)的表層濾膜一起置于50mL離心管中，向其中加入20mLΤΕ、200μ L10mg/mL溶菌酶、200 μ L10mg/mL蝸牛酶和200 μ L10mg/mL溶壁酶，吹吸混勻，37°C溫育過(guò)夜，消化同時(shí)用混勻儀混勻(過(guò)夜消化)；將所得消化液在4°C 9000r/min下離心IOmin,棄去上清液；向沉淀中加入6mL TENS裂解液(200mmol/L NaCl, IOOmmol/L Tris-HCl, pH8.0, 2.0%SDS, 50mmol/L EDTA, 0.5%Triton X-100)和 20mg/mL 蛋白酶K300 μ L，顛倒混勻，55°C溫浴lh，每隔15min顛倒混勻一次；將裂解后樣品在4°C IOOOOr/min條件下離心IOmin,留取上清液,棄去沉淀；向所得上清液中加入等體積的酹:氯仿:異戊醇(25:24:1)，充分混勻，然后在4°C 12000r/min下離心IOmin ;轉(zhuǎn)移所得上清液至新管，向其中加入等體積的氯仿:異戍醇(24:1),充分混勻,在4°C 12000r/min下離心IOmin ;將所得上清液轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中，向其中加入0.7倍體積異丙醇和100 μ L5M醋酸鈉，沉淀2h后,在4 13000rpm條件下離心30min ;棄去所得上清液,用冰預(yù)冷的75%乙醇漂洗沉淀二次，在4°C 13000rpm條件下離心5min ;棄去上清液,風(fēng)干,沉淀用30 μ L無(wú)菌水溶解,若只提取RNA，可加入I μ L無(wú)RNA酶的DNA酶I來(lái)溶解沉淀；然后采用Nanodrop儀器和2100芯片分別檢測(cè)所提取核酸的DNA和RNA濃度及純度。
4、空氣樣本提取結(jié)果圖3顯示了從空氣樣本中提取RNA后用2100芯片檢測(cè)的結(jié)果圖。圖3示出了:樣品2的整體結(jié)果:RNA 面積:169.7RNA 濃度:98ng/ 微升τ RNA 比例(23s/16s): 1.0RNA 完整性計(jì)數(shù)(RIN): 7.6 (B.02.07)樣品2的片段表:
名參起《大小終止大mm總*積的τ分比Cr.1)(nl)
S !.:V141. ⑴2 Λ IiJ
23S.>6^2f.1 16 1另外，重復(fù)上述從空氣中提取微生物核酸的方法，只是在提取核酸樣本時(shí)，僅采用溶菌酶。圖4顯示了只采用溶菌酶提取空氣樣本IRNA提取后用2100芯片檢測(cè)的結(jié)果圖。圖4示出了:樣品6的整體結(jié)果:RNA 面積:78.1[0053]RNA 濃度:58ng/ 微升T RNA 比例(28s/18s):0RNA 完整性計(jì)數(shù)(RIN): 2.5 (B.02.07)樣品2的片段表:名稱(chēng)起始大小(n I ) 終止大小(n I ) 面積總面積的百分比18s 1,6961,8910.4 0.5由圖3和圖4的結(jié)果可知，利用本實(shí)用新型的裝置和方法，能夠有效地從空氣中富集微生物，同時(shí)還可以有效地從所富集的微生物提取核酸樣本。另外，僅采用溶菌酶破碎微生物樣本的效果不如三種酶(溶菌酶+蝸牛酶+破壁酶)一起作用破碎的效果好,蝸牛酶和溶壁酶對(duì)真菌和革蘭氏陽(yáng)性菌破壁的效果要好，而且三種酶一起作用，能相互加強(qiáng)酶的作用，體現(xiàn)出協(xié)同作用效果，使酶發(fā)揮最佳效果。實(shí)施例2將收集到的牛瘤胃樣本0.5g置于2mL離心管中加入500mL TE和20 y LlOmg/mL溶菌酶和20 ii L10mg/mL蝸牛酶、20 y L10mg/mL溶壁酶，吹吸混勻，37 °C溫育過(guò)夜，消化同時(shí)用混勻儀混勻(過(guò)夜消化)；將所得的消化液在4°C 9000r/min條件下離心IOmin,去除上清液，留取沉淀；向沉淀中加入400 u LTENS裂解液(200mmol/L NaCl，IOOmmoI/L Tris-HCl, pH8..0,2.0%SDS,50mmol/L EDTA,0.5%Triton X-100)和 20mg/mL蛋白酶K300iiL，顛倒混勻，55°C溫浴lh，每隔15min顛倒混勻一次；將裂解后的樣品在40C 10000r/min條件下離心IOmin,留取上清，棄去沉淀；向上清液中加入等體積的酹:氯仿:異戍醇(25:24:1),充分混勻，并在4°C 12000r/min條件下離心IOmin ;轉(zhuǎn)移所得上清液至新管，向其中加入等體積 的氯仿:異戊醇(24:1)，充分混勻，在4°C 12000r/min下離心IOmin ;將所得上清液轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中，向其中加入0.7倍體積異丙醇和IOy L5M醋酸鈉，沉淀2h后,在4°C 13000rpm條件下離心30min ;棄去所得上清液,用冰預(yù)冷的75%乙醇漂洗沉淀二次，在4°C 13000rpm條件下離心5min ;棄去上清液,風(fēng)干,沉淀用30 y L無(wú)菌水溶解，溶解過(guò)程中加入I U L RNaseA，得到牛瘤胃樣本的DNA。實(shí)施例3采用牙菌斑樣本，重復(fù)實(shí)施例2提取DNA。在本說(shuō)明書(shū)的描述中，參考術(shù)語(yǔ)“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本實(shí)用新型的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說(shuō)明書(shū)中，對(duì)上述術(shù)語(yǔ)的示意性表述不一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本實(shí)用新型的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本實(shí)用新型的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本實(shí)用新型的原理和宗旨的情況下在本實(shí)用新型的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
權(quán)利要求1.一種收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，包括: 本體，所述本體內(nèi)限定有負(fù)壓腔； 負(fù)壓發(fā)生組件，所述負(fù)壓發(fā)生組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔內(nèi)；以及 過(guò)濾收集組件，所述過(guò)濾收集組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔的至少一側(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述負(fù)壓發(fā)生組件包括: 葉片； 驅(qū)動(dòng)裝置，所述驅(qū)動(dòng)裝置與所述葉片相連，用于驅(qū)動(dòng)所述葉片轉(zhuǎn)動(dòng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，在與所述過(guò)濾收集組件相對(duì)的側(cè)壁上形成有通孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述葉片與所述過(guò)濾收集組件相對(duì)設(shè)置。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的收集流體中微生物的設(shè)備,其特征在于,所述過(guò)濾收集組件可拆卸地與所述殼體相連。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，進(jìn)一步包括: 限位部件，所述限位部件可移動(dòng)地設(shè)置在所述本體上。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述過(guò)濾收集組件包括: 濾膜； 膜前收集網(wǎng)格槽；和 膜后網(wǎng)式襯墊， 其中，所述濾膜設(shè)置在所述膜前收集網(wǎng)格槽和所述膜后網(wǎng)式襯墊之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述濾膜為選自尼龍膜濾膜、聚脂核孔膜、聚丙烯膜、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜和醋酸纖維膜的至少之一，所述濾膜的孔徑為0.1 10微米。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述過(guò)濾收集組件進(jìn)一步包括: 密封框架，設(shè)置于所述膜前收集網(wǎng)格槽和所述膜后網(wǎng)式襯墊之間。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的收集流體中微生物的設(shè)備，其特征在于，所述框架為橡膠框架。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型提出了一種收集流體中微生物的設(shè)備，包括本體，所述本體內(nèi)限定有負(fù)壓腔；負(fù)壓發(fā)生組件，所述負(fù)壓發(fā)生組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔內(nèi)；以及過(guò)濾收集組件，所述過(guò)濾收集組件設(shè)置在所述負(fù)壓腔的至少一側(cè)。利用該設(shè)備，能夠有效地從流體中收集微生物。
文檔編號(hào)C12M1/26GK203065483SQ20122052650
公開(kāi)日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月15日
發(fā)明者郭晶, 章文蔚, 肖亮, 李子華 申請(qǐng)人:深圳華大基因科技有限公司, 深圳華大基因研究院