專利名稱：Ema與pcr結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及ー種用于檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，具體涉及ー種EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒。
背景技術(shù)：
畜禽飼用含有沙門氏菌的飼料，如果菌量達到一定數(shù)目，就可引起疾病或帶菌，因此準確、快速地檢測飼料中的沙門氏菌，對于防止畜禽和人類沙門氏菌污染具有十分重要 的意義。傳統(tǒng)的PCR檢測方法可以對沙門氏菌等特定微生物DNA的單條基因片段進行放大，放大后，特定的DNA片段被成千上萬倍的復制，運用可視技術(shù)按照細菌基因序列探測和識別復制后細菌的遺傳物質(zhì)可以更加容易。然而，目前的PCR檢測方法容易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，這造成了巨大的浪費和不必要的召回事件的發(fā)生。出現(xiàn)這種結(jié)果的原因是，PCR技術(shù)跟其它的DNA法一祥，均不能將活的跟死的沙門氏菌區(qū)分開，因此這導致PCR技術(shù)提供了錯誤的結(jié)果。

實用新型內(nèi)容由鑒于此，本實用新型的目的是提供ー種EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，可用于快速檢測檢測飼料樣品中沙門氏菌活細胞，制作簡單，使用方便。為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用以下技術(shù)方案ー種EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，包括箱體，其中，所述箱體底部的內(nèi)壁上均勻設(shè)置有六個與離心管相配合的凹槽，所述凹槽內(nèi)設(shè)有分別放入沙門氏菌陽性對照、沙門氏菌陰性對照、Taq預混酶、Taq預混酶引物混合物、DL Marker 2000,EMA溶液的六個離心管。本實用新型的有益效果為利用本實用新型可采用EMA與PCR結(jié)合技術(shù)用疊氮溴化こ錠染料對飼料樣品的菌懸液進行處理，疊氮溴化こ錠在強光照的環(huán)境下進入死的細菌體內(nèi)后與DNA分子進行結(jié)合，使得細菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活細胞，這種改進的PCR技術(shù)很容易區(qū)分飼料樣品中死的沙門氏菌及活的沙門氏菌，從而為飼料中沙門氏菌的快速、準確檢測提供有效手段。本實用新型在EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞檢測中使用，制作簡單，攜帯方便，節(jié)省了檢測時臨時準備檢測用品的時間，提高了工作效率。本實用新型的其他優(yōu)點、目標和特征在某種程度上將在隨后的說明書中進行闡述，并且在某種程度上，基于對下文的考察研究對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的，或者可以從本實用新型的實踐中得到教導。本實用新型的目標和其他優(yōu)點可以通過下面的說明書或者附圖中所特別指出的結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)和獲得。

[0009]圖I為本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實用新型的底部凹槽的示意圖。
具體實施方式
如圖I、圖2所示，本實用新型的箱體I底部均勻設(shè)置有六個凹槽，分別為沙門氏菌陽性對照離心管凹槽21、沙門氏菌陰性對照離心管凹槽31、Taq預 混酶離心管凹槽41、Taq預混酶弓I物混合物離心管凹槽51、DL Marker 2000離心管凹槽61、EMA溶液離心管凹槽71，在沙門氏菌陽性對照離心管凹槽21、沙門氏菌陰性對照離心管凹槽31、Taq預混酶離心管凹槽41、Taq預混酶引物混合物離心管凹槽51、DL Marker 2000離心管凹槽61、EMA溶液離心管凹槽71內(nèi)分別放入相應的沙門氏菌陽性對照離心管2、沙門氏菌陰性對照離心管3、Taq預混酶離心管4、Taq預混酶引物混合物離心管5、DL Marker 2000離心管6、EMA溶液離心管7。Taq預混酶及引物混合物，其預混酶為20 u/mL，引物濃度為IOOpmol/mL ,其保存條件為-20 ° C。引物其序列為GTGAAATTATCGCCACGTTCGGG，SE-2:CATCGCACCGTCAAAGGAAC。EMA 溶液，其濃度為 O. 5mg/mL。本實用新型用于EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試驗，采用EMA與PCR結(jié)合技術(shù)用疊氮溴化こ錠染料對飼料樣品的菌懸液進行處理，疊氮溴化こ錠在強光照的環(huán)境下進入死的細菌體內(nèi)后與DNA分子進行結(jié)合，使得細菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活細胞，這種改進的PCR技術(shù)很容易區(qū)分飼料樣品中死的沙門氏菌及活的沙門氏菌，從而為飼料中沙門氏菌的快速、準確檢測提供有效手段。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本實用新型的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本實用新型的技術(shù)方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本實用新型技術(shù)方案的精神和范圍，均應涵蓋在本實用新型的權(quán)利要求范圍中。
權(quán)利要求1. 一種EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，包括箱體，其特征在于所述箱體底部的內(nèi)壁上均勻設(shè)置有六個與離心管相配合的凹槽，所述凹槽內(nèi)設(shè)有分別放入沙門氏菌陽性對照、沙門氏菌陰性對照、Taq預混酶、Taq預混酶引物混合物、DL Marker 2000、EMA溶液的六個離心管。
專利摘要本實用新型公開了一種EMA與PCR結(jié)合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，包括箱體，其中，所述箱體底部的內(nèi)壁上均勻設(shè)置有六個與離心管相配合的凹槽，所述凹槽內(nèi)設(shè)有分別放入沙門氏菌陽性對照、沙門氏菌陰性對照、Taq預混酶、Taq預混酶引物混合物、DLMarker2000、EMA溶液的六個離心管。本實用新型克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，可用于快速檢測檢測飼料樣品中沙門氏菌活細胞，制作簡單，使用方便。
文檔編號C12Q1/68GK202610240SQ20122022810
公開日2012年12月19日 申請日期2012年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月21日
發(fā)明者班付國, 高延玲, 周紅霞, 劉宏偉, 張發(fā)旺, 梁軍, 侯文宏, 趙全成, 曲登峰, 王世山, 趙瑜, 張影, 雷東風, 彭峰, 徐品, 宋志超, 姚德新, 常守海, 陳陽, 董鵬, 李金磊, 狄元冉, 張磊 申請人:河南省獸藥監(jiān)察所