專利名稱：一種對新鮮及冷凍組織樣本egfr外顯子基因突變檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種對新鮮及冷凍組織樣本EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
EGFR是一種蛋白酪氨酸激酶受體(RTK)，位于第7號染色體pl3 q22區(qū)，全長200kb，由28個外顯子組成，編碼1186個氨基酸，其糖蛋白分子量約170kDa。EGFR家族有4 個結(jié)構(gòu)相似的受體分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbB4 (HER4)。EGFR誘導(dǎo)癌癥至少通過3種機制EGFR配體的過表達(dá)，EGFR的擴增或EGFR的突變活化。在這3種機制中，EGFR的突變活化是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞異常生物學(xué)行為的最主要因素。 基于EGFR在腫瘤細(xì)胞過表達(dá)的特點，目前已開發(fā)出多種EGFR靶向藥物。按照作用機制，可將其分為5種1)作用于EGFR激酶區(qū)的小分子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)，如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib) ；2)作用于EGFR胞外域部分的單克隆抗體(mAb),如西妥昔單抗(Cetuximab)、帕尼單抗(Vectibix) ；3)利用RNAi作用機理,特異性降解EGFR ；4)與EGFR單克隆抗體偶聯(lián)的細(xì)胞毒素、細(xì)胞殺傷因子、放射性粒子等，選擇性殺死富含EGFR的腫瘤細(xì)胞；5)阻礙EGFR的二聚化/寡聚化進(jìn)而抑制EGFR的激活。其中EGFRTKI藥物在治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)臨床療效明顯，已被推薦為晚期患者的一線藥物。常用的EGFR-TKI包括吉非替尼和厄洛替尼，是目前NSCLC患者最有效的靶向藥物。但EGFR-TKI并非對所有患者都有效。EGFR外顯子18、19或21發(fā)生突變的患者，吉非替尼有效率可高達(dá)80%，而野生型患者基本無效。EGFR敏感突變是藥物有效的前提1-4。但部分EGFR-TKI初始治療有效的患者后期會發(fā)生耐藥，與EGFR E20突變密切相關(guān)5。以NSCLC為例，EGFR E20突變發(fā)生率為I. 6%，約占EGFR突變9%，50%的EGFR-TKI耐藥由EGFR E20的T790M點突變所致。因此通過檢測EGFR基因有沒有突變，可以篩選出抗EGFR (表皮生長因子受體)靶向藥物治療有效的腫瘤患者，實現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療，從而延長患者生存期。對于有突變的患者，則能減少不必要的治療費用和毒副作用。目前臨床檢測EGFR基因突變的檢測試劑原料需多方配備，實驗過程分步進(jìn)行，耗時較長，容易污染，準(zhǔn)確性不高，所以探索一種檢測EGFR基因突變快速可靠的方法已經(jīng)成為臨床實驗研究的熱點問題。

實用新型內(nèi)容為了解決上述技術(shù)問題，本實用新型提供一種對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2，盒體I內(nèi)設(shè)置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19弓丨物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、裝酶混合物的試劑瓶8、加樣器吸頭9、電泳分離檢測試劑瓶10。[0007]進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括去離子水瓶11、醋酸鈉溶液瓶12。所述EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6和EGFR21引物瓶7分別盛放特異性擴增EGFR外顯子18、19、20和21的引物，引物濃度為5 μ mo I/L。所述EGFR18、EGFR19、EGFR20 和 EGFR21 的引物分別為
引物序列片段大小
EGFR18-F5'-AGCATGGTGAGGGCTGAGGTGAC-3'262bp
EGFR18-R5 '-ATATACAGCTTGCAAGGACTCTGGy
EGFR19-F5'-CCAGATCACTGGGCAGCATGTGGCACC-3' 265bp
EGFR19-R5'-AGCAGGGTCTAGAGCAGAGCAGCTGCC-3'
EGFR20-F5'-GATCGCATTCATGCGTCTTCACC-Y362bp
EGFR2O-R5'-TTGCTATCCCAGGAGCGCAGACC-3,
EGFR21-F5 ^TCAGAGCCTGGCATGAACATGACCCTG-37 296bp
EGFR21-R5'-GGTCCCTGGTGTCAGGAAAATGCTGG-3'所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 μ I 的 HsTaq0所述電泳分離檢測試劑是Hi-DiFormamide試劑。本實用新型與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、包含了實驗所需的大部分試劑使得檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。

圖I為本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖和實施例對本實用新型進(jìn)行進(jìn)一步說明。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，一種對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2，盒體I內(nèi)設(shè)置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、裝酶混合物的試劑瓶8、加樣器吸頭9、電泳分離檢測試劑瓶10、去離子水瓶11、醋酸鈉溶液瓶12。所述EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6和EGFR21引物瓶7分別盛放特異性擴增EGFR外顯子18、19、20和21的引物，引物濃度為5 μ mo I/L。所述EGFR18、EGFR19、EGFR20 和 EGFR21 的引物分別為
權(quán)利要求1.一種對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，其特征在于，包括盒體(I)、盒蓋(2)，盒體(I)內(nèi)設(shè)置有PCR管(3)、EGFR18引物瓶⑷、EGFR19引物瓶(5)、EGFR20引物瓶(6)、EGFR21引物瓶(7)、裝酶混合物的試劑瓶(8)、加樣器吸頭(9)、電泳分離檢測試劑瓶(10)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括去離子水瓶(11)、醋酸鈉溶液瓶(12)。
專利摘要本實用新型公開了一種對新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2，盒體1內(nèi)設(shè)置有PCR管3、EGFR18引物瓶4、EGFR19引物瓶5、EGFR20引物瓶6、EGFR21引物瓶7、裝酶混合物的試劑瓶8、加樣器吸頭9、電泳分離檢測試劑瓶10。本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、包含了實驗所需的大部分試劑使得檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測新鮮及冷凍組織樣本的EGFR基因突變時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。
文檔編號C12Q1/68GK202519267SQ201220164678

公開日2012年11月7日 申請日期2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月17日
發(fā)明者井昶雯, 馮繼鋒, 吳建中, 曹海霞, 馬蓉 申請人:井昶雯, 馮繼鋒, 吳建中, 曹海霞, 馬蓉